專利名稱：：檢測移植物抗宿主疾病易感性或移植相關(guān)死亡率的方法和試劑的制作方法才企測移一直物抗宿主疾病易感性或移一直相關(guān)死亡率的方法和試劑關(guān)于聯(lián)邦資助研究或開發(fā)的聲明本發(fā)明未使用任何政府基金。
背景技術(shù)：
：在移植中會發(fā)生移植物抗宿主疾病(GVHD)。在GVHD中，供者T-細胞通過對受體身體發(fā)動攻擊排斥受體組織和器官。許多其它疾病涉及擾亂宿主免疫系統(tǒng)。一些疾病最好采用藥物治療，一些采用生物制品治療，另一些采用例如體外光分離置換法，其余疾病的治療選擇非常有限?，F(xiàn)已證實體外光分離置換法(extracorporealphotopheresis，ECP)可有效治療一些T-細胞介導疾病。在GVHD中，光分離置換法用于與局部曲安西龍4欠膏、抗真菌藥、抗病毒藥、抗生素、免疫球蛋白和甲氨喋呤的聯(lián)合治療。ECP也可與免疫抑制劑例如麥考酚酸嗎乙酯、他克莫司、潑尼松、環(huán)孢霉素A、羥氯喹、類固醇、FK-506以及用于cGVHD和頑固性cGVHD的沙利度胺聯(lián)合使用。對實體(solid)器官移植，ECP可與免疫抑制劑聯(lián)合使用以降低與腎臟同種異體移植及心臟移植相關(guān)的急性同種異體移植物排斥反應(yīng)的數(shù)量。例如，ECP可與OKT3和/或免疫抑制劑潑尼松、硫唑嘌呤、環(huán)孢霉素A聯(lián)合使用以逆轉(zhuǎn)急性腎臟同種異體移植物排斥。ECP還可與環(huán)磷酰胺、分次全身照射、用于同種骨髓移植的依托泊苷聯(lián)合用于急性骨髓白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性骨髓白血病、非何杰金氏淋巴瘤或重度再生障礙性貧血。發(fā)明概述數(shù)種試驗性策略已鑒定出ECP的藥效學生物標記。pGvHD試驗中患者試樣的流式細胞計數(shù)分析表明特定樹突狀細胞亞型的相對豐度可預(yù)測GvHD發(fā)生傾向，也可反映ECP對該病變的影響。流式細胞計數(shù)數(shù)據(jù)與中心實驗室數(shù)據(jù)的相關(guān)性產(chǎn)生其它與DC細胞比例相關(guān)的候選生物標記，進而消除了對流式細胞計數(shù)研究的需求。4此外，已鑒定出與研究中DC細胞亞型相關(guān)的B細胞亞型。本發(fā)明提供一組易測定的并在共同分析時提供ECP作用和疾病進展的統(tǒng)計學上有力(statisticallyrobust)測定的標記。附圖簡述圖1顯示了臨床試驗和研究設(shè)計。圖2顯示了PBMC的細胞計數(shù)表型分析。圖3顯示了預(yù)測嚴重GvHD的DC譜(profiles)。DC亞型隨GvHD級別變化。DC豐度熱圖以及(B.)中顯示的CDllc+/CDllcDC曲線例證了之后患有GvHD的患者中這些DC亞型相對表達的差異。(C.)和(D.)顯示了細胞表面標對數(shù)(logistic)回歸分析的結(jié)果。此處，ROC反映了應(yīng)用該標記區(qū)分介于0或1級和嚴重GvHD人群。較好檢查的ROC接近l,最壞的檢查ROC為0.5。圖4顯示了預(yù)測TRM的DC譜。圖5顯示了用不同生物標記建;^莫并顯示了本研究發(fā)現(xiàn)的TRM的最佳預(yù)測因子是包4舌CD1lc+DC和NK細胞的才莫型。圖6顯示了A)預(yù)測GvHD的^t型。在59個結(jié)果中，只有單核細胞(ROC-0.66)和中性粒細胞計數(shù)(ROC=0.69)接近DC亞型對GvHD的預(yù)測能力。B)預(yù)測TRM的模型。實驗室數(shù)據(jù)與患者人口統(tǒng)計學聯(lián)合產(chǎn)生出對TRM有顯著預(yù)測能力的模型。結(jié)果以獨立方式(左下方)和聯(lián)合建模方式(右下方的ROC曲線)顯示。該模型的ROC曲線包括白蛋白、BUN/肌酸酐比例、供體匹配、匹配-親緣關(guān)系和白蛋白相互作用。C)相關(guān)細胞表面標記和實驗室數(shù)據(jù)。使用Pearson's相關(guān)性將細胞表面標記數(shù)據(jù)與實驗室結(jié)果進行比較以鑒別細胞譜和細胞計數(shù)分析中的相關(guān)變化。發(fā)明詳述本申請文件中引用的所有參考文獻均完整并入本說明書。術(shù)語"受試者，，或"患者，，可替換使用，并指動物，優(yōu)選哺乳動物且更優(yōu)選人類。"細胞群"一般包括血液中存在的細胞類型。該術(shù)語可包括一個或多個血細胞類型，尤其是紅細胞、血小板以及白細胞。細胞群可包含白細胞亞型，例如，T細胞、樹突狀細胞、B細胞等等。在一個實施方案中，細胞群可包含多種細胞類型的混合或集合?；蛘?，細胞群可包含基本上純化的細胞類型，例如，T細胞或樹突狀細胞。"ECP方法"或"ECP"指體外光分離置換法，也稱為體外光療法。它是使細胞群接受紫外光和光激活化合物的療法。優(yōu)選來自器官或組織的細胞群；更優(yōu)選血液部分的細胞群；最優(yōu)選血沉棕黃層細胞群。ECP有時用于指在DNA交聯(lián)劑例如補骨脂素(優(yōu)選8-MOP)存在下用紫外光對細胞群進行凋亡誘導的方法。在本發(fā)明最優(yōu)選的實施方案中，ECP用于誘導細胞凋亡。其涉及向細胞群體外的加入光活化化合物。在從受試者、受體或供體采集之后(如可能的情況)以及暴露于紫外線之前或同時可將光活化化合物給予包含血細胞的細胞群。如果目標血細胞或血液成分可接受光活化另一個實施方案中，可首先使用已知方法處理受試者血液、受體血液或供體血液的一部分以基本上去除紅細胞，然后將光活化化合物給予所得到的含有白細胞富集部分的細胞群。在另一種實施方案中，可體內(nèi)給予光活化化合物。當體內(nèi)給予包含受試者血液、受體血液或供體血液(如可能的情況)的細胞群時，感光化合物不僅可口服給藥，還可靜脈和/或其它常規(guī)給藥途徑給藥。感光化合物的口服劑量在約0.3至0.7mg/kg的范圍內(nèi)，更具體而言，約0.6mg/kg。在口服給藥時，可在光分離置換法治療之前至少約一小時且不超過光分離置換法治療之前約三小時給予感光化合物。4321919號和美國專利第5399719號所述如補骨脂素(或呋喃并香豆素)以及補骨脂素衍生物的化合物。優(yōu)選化合物包括8-甲氧基補骨脂素、4,5',8-三甲基補骨脂素、5-曱氧基補骨脂素、4-曱基補骨脂素、4,4-二曱基補骨脂素、4,5'-二甲基補骨脂素、4'-氨甲基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-羥曱基-4,5'，8-三甲基補骨脂素、4',8-曱氧基補骨脂素、以及4'-(co-氨基-2-氧雜(oxa))烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素，包括但不限于4'-(4-氨基-2-氧雜)丁基-4,5',8-三甲基補骨脂素。在一個實施方案中，所用感光化合物包含補骨脂素衍生物、amotosalen(S-59)(Cerus,Corp.,Concord,Calif.)。在另一個實施方案中，感光化合物包含8-曱氧基補骨脂素(86MOP)。用某一波長的光線處理已加入光活化化合物的細胞群以活化光活(UVA)進行，例如，波長在320至400nm的范圍內(nèi)。光分離置換法治療中暴露的紫外光優(yōu)選以給予足夠長的時間以向細胞群傳遞約l-2J/cm2?？捎糜诟鶕?jù)本發(fā)明方法的體外光分離置換法裝置包括Therakos,Inc(Exton,Pa.)生產(chǎn)的商品名UVARTm的裝置。該裝置的描述見美國專利第4683889號。該UVARTM系統(tǒng)^使用一種治療系統(tǒng)并由三個階l殳組成，包括1)收集血沉棕黃層(富集白細胞)，2)照射收集的血沉棕黃層，和3)再次輸注已處理的白細胞。收集階段包括六個循環(huán)的采血、離心和再輸注步驟。在每一個循環(huán)中，將全血在分離杯中離心并分離。從這一分離中開始，每個收集循環(huán)可獲得血漿(各循環(huán)的體積由UVARTM儀器操縱器測定)和40ml血沉棕黃層。在開始下一收集循環(huán)之前將紅細胞和所有其它的血漿輸注患者。最后總共分離得到240ml血沉椋黃層和300ml血漿，將其保存用于UVA照射。在第一個收集循環(huán)的血沉棕黃層收集過程中開始在輻射回路中對白細胞富集血液進行照射。將收集的血漿和血沉棕黃層與200ml肝素化生理鹽水和200mgUVADEX(水溶性8-甲氧補骨脂素)混合。該混合物以1.4mm厚層流過PHOTOCEPTOR光活化室，其插在PHOTOSETTETMUVA燈的兩個邊緣之間。PHOTOSETTETMUVA等照射該UVA透過性PHOTOCEPTOR室的兩邊，允許暴露于紫外A光線180分鐘，使得每個淋巴細胞的平均照射量為l-2J/cm2。終血沉棕黃層試樣預(yù)計包含20%至25%的全外周血單核細胞成分和約2.5%至7%的血細胞比容。光活化階段之后，在30至45分鐘內(nèi)將該體積輸注患者。美國專利申請第09/480893號(以參考形式并于本文)描述了用于給予ECP的另一種系統(tǒng)。美國專利第5951509、5985914、5984887、4464166、4428744、4398906、4321919號；PCT出版物W097/36634和W097/36581也包含對用于這一目的的設(shè)備和方法的描述。美國專利申請第09/556832號描述了可用于本發(fā)明方法的另一系統(tǒng)。該系統(tǒng)包括可在ECP中減少自受試者收集或去除的靜流體體積的裝置?？墒褂妹绹鴮＠?129584號描述的方法和系統(tǒng)測定傳遞至一種細胞群的光能有效量。在細胞群中誘導細胞凋亡的許多方法為本領(lǐng)域已知并可被采用于本發(fā)明中。一種該類治療包括將細胞群電離照射(Y射線、X射線等)和/或非電離電磁照射包括紫外線、加熱、冷卻、去血清、去生長因子、酸化、稀釋、堿化、離子強度變化、去血清、照射或其組合?；蛘呖赏ㄟ^將細胞群超聲誘導細胞凋亡。另一種誘導凋亡的方法包括對細胞群體外應(yīng)用氧化脅迫?？赏ㄟ^使用化學氧化劑例如過氧化氫，其它過氧化物和氫過氧化物、臭氧、高錳酸鹽、高碘酸鹽等處理混懸的細胞群完成。生物可接受氧化劑可用于減少與由此形成的凋亡誘導細胞群的殘留和污染物相關(guān)的潛在問題。在制備凋亡誘導細胞群時應(yīng)注意不應(yīng)用過量水平的氧化脅迫、照射、藥物處理等，因為否則會引起至少一些被治療的細胞壞死的顯著風險。壞死使細胞膜破裂并釋放細胞內(nèi)容物并帶來生物學有害結(jié)果，尤其是發(fā)炎，因此最好避免壞死細胞及其成分以及包含凋亡細胞的細胞群的存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員可輕松測定誘導凋亡的適當細胞群治療水平以及所選擇的治療類型。依據(jù)本發(fā)明的一種方法包括來自受試者或相容哺乳動物細胞系的細胞培養(yǎng)物。然后可體外處理這些培養(yǎng)的細胞以誘導凋亡并在其中產(chǎn)生細胞群。該體外處理可選自抗體、化療藥物、輻射、體外光分離置換法、超聲、蛋白質(zhì)和氧化劑。然后將懸浮于受試者的血漿中或另一種適當懸浮介質(zhì)(例如生理鹽水或平衡哺乳動物細胞培養(yǎng)基)中的細胞給予患者。用于檢測和定量凋亡的方法可用于測定給予本發(fā)明受試者的制劑中是否存在凋亡及其水平。在受試者中獲得需要的臨床作用所要求的細胞群中的凋亡細胞數(shù)量可隨細胞來源、受試者的病癥、受試者年齡和體重以及其它相關(guān)因子而變化，這些均可通過熟知的方法測定。給予病人的凋亡細胞數(shù)量優(yōu)選1-500億。更優(yōu)選10-100億，最優(yōu)選25至75億。在一個實施方案中，可通過在瓊脂糖凝膠電泳上觀察到的特征性梯狀條帶(由于DNA被斷裂成一系列的片段)鑒定發(fā)生凋亡的細胞。在另一個實施方案中，磷脂酰絲氨酸在細胞上的表面表達可用于鑒定和/或定量凋亡誘導細胞群。檢測線粒體膜電位的變化(可反應(yīng)線粒體膜滲透性的改變)為鑒定細胞群的另一公認方法。在科學文獻中還描述了其它許多鑒定發(fā)生凋亡的細胞和細胞群的方法，其中許多都使用細胞群特異性標記的單克隆抗體。由于免疫抑制劑的成功使用，急性實體器官抑制排斥發(fā)生在肺移植之后30%至60%的患者中，肝臟、腎臟和心臟的程度更低。對移植抗原的淋巴細胞(細胞)介導免疫反應(yīng)為急性排斥的主要機制。延遲或慢性排斥造成移植后數(shù)月至數(shù)年內(nèi)對移植物的破壞并以導致移植組織壞死的血管損害為特征。通過標準療法并不能較大幅度降低該排斥，因此對更持續(xù)的免疫耐受的需求是最顯著的未被滿足的需求。偶爾會出現(xiàn)晚期移植物退化，盡管增強免疫抑制療法但該慢性類型的排斥通常隱性發(fā)展。其病理圖與急性排斥不同。主要涉及動脈內(nèi)皮，其大量增殖可逐漸堵塞血管內(nèi)腔，引起缺血和移植物纖維化。目前廣泛使用免疫抑制劑控制排斥反應(yīng)并主要因此取得了移植成功。但是這些藥物抑制所有的免疫反應(yīng)，因此引起暴發(fā)性感染導致(移植物受體死亡的主要原因)?，F(xiàn)有免疫抑制療法根據(jù)移植物的不同類型而變化。肝同種異體移植物比其它同種異體移植物的排斥較小。例如，肝臟移植的超急性排斥反應(yīng)并不常常發(fā)生在對HLA抗原或ABO不相容性預(yù)先致敏的患者中。成人的典型免疫抑制療法包括使用環(huán)孢霉素A,—般從移植時間開始靜脈內(nèi)給藥4-6mg/kg/日，當對劑量耐受之后給予8-14mg/kg/日。如果出現(xiàn)腎功能不全可下調(diào)劑量，使用血藥濃度作為適當劑量的近似測量。在心臟移植中，免疫抑制療法與用于腎臟或肝臟移植的療法相似。但是在肺和心-肺移植物中>80%的患者出現(xiàn)急性排斥，但是可有效控制。用皮質(zhì)激素(以高劑量快速靜脈內(nèi)給藥)、ATG或OKT3治療患者。在移植后的前兩周也經(jīng)常給予預(yù)防性ALG或OKT3。在血管化器官移植物中胰臟移植與眾不同。它并不是用于拯救生命而是用于穩(wěn)定或防止I型糖尿病的破壞性粑器官并發(fā)癥。由于患者用胰島素注射的風險替換了免疫抑制的風險，所以胰臟移植一般被限制性用于已需要接受免疫抑制藥物的患者(即接受腎臟移植的腎衰竭患者)。急性骨髓或成淋巴細胞白血病患者可從骨髓移植(BMT)中獲益。9由于其治療患有遺傳疾病(例如，地中海貧血、鐮刀狀細胞性貧血、免疫缺陷、遺傳性代謝缺陷)兒童的潛能，兒科BMT已擴大應(yīng)用范圍。BMT的另一選擇為自體移植(當誘導了完全緩解時去除患者自身骨髓，然后消融治療患者寄希望于破壞任何殘留腫瘤并拯救患者自身骨髓)。由于使用了自身移植物，除了用于根除腫瘤和骨髓消融的短期高劑量化療外不必進行免疫抑制；GVHD的移植后問題最小。來自HLA相同供體的移植物在白血病患者中的排斥率<5%。對于患有再生障礙性貧血經(jīng)過多次輸血的患者，由于在移植物誘導過程中增強了免疫抑制所以該排斥率也會被顯著降低。但是可發(fā)生并發(fā)癥包括宿主對骨髓移植物的排斥、急性GVHD和感染。之后的并發(fā)癥包括慢性GVHD、長期免疫缺陷和疾病復發(fā)。本發(fā)明方法也可用于移植物手術(shù)，例如，普遍用于美容或非美容整形手術(shù)中的移植手術(shù)。該類移植物可包括牙齒、脂肪移植(例如面頰、嘴唇和臀部)、面部移植，包括用于鼻子、面頰、前額、下顎和顱骨者，臀部移植物、胸部移植物等。其它移植物包括但不限于角膜環(huán)、皮質(zhì)、眼眶、耳蝸、肌肉(所有的肌肉，包括胸部、臀部、腹部、腓腸肌、比目魚肌、二頭肌、三頭肌)、異體關(guān)節(jié)和骨置換、推發(fā)(vertebralhair)、胎細力包或干細力包移才直。樹突狀細胞(DCs)和強效抗原遞呈細胞(APCs)的造血發(fā)育不同并且沿行數(shù)種與單核細胞緊密聯(lián)系的前體途徑。DCs可衍生自淋巴樣前體。Thomas等，(1993)J.Immunol.150:821834。與血液中相似，存在于胸腺中的DCs有三個不同的亞型1)類漿細胞CD4+CDllcT)Cs;2)CD4+CDllc+DCs和3)指狀突DCs。最近通過與細胞因子一起體內(nèi)培養(yǎng)祖細胞可產(chǎn)生大量用于潛在臨床使用的DCs。采取多種方法將抗原導入樹突狀細胞這樣在共刺激環(huán)境下它們可以;故更有效地遞呈給T細力包。也顯示樹突狀細月包可影響對抗原的T細胞應(yīng)答以沿行體液途徑或全身途徑。DCs為起始初次免疫應(yīng)答和產(chǎn)生耐受必須的APC。DCs表達MHC,其對于激活初始T細胞群是必需的。DCs的造血發(fā)育不同，可沿行數(shù)種前體途徑，其中一些與單核細胞緊密相關(guān)。參見Avigan(1999)BloodRev,13:5164作為綜述。不同的DC亞型具有不同的發(fā)育途徑。日益形成的觀念為一種DC亞型具有可輔助誘導自身抗原耐受的調(diào)節(jié)功能。10Austyn(1998)Curr,Opin,Hematol.5:3-15。由于該類細胞的缺乏和DC-特異性細胞表面標記的缺乏阻礙了對血液中DC的研究。分離DC的方法基于經(jīng)過短期培養(yǎng)之后的成熟變化，例如獲得低浮力密度，或者DC活化/成熟抗原(CD83、CMRF-44和CMRF-56)的表達。Young等，(1988)CellImmunol.111:167;以及Voorhis等，(1982)I.Exp,Med.155:1172。過去從血液中分離DCs依賴于許多免疫表型標準，如缺乏一組白細胞譜系(lin)特異性抗原(例如CD3、CD4、CD19和CD56)和存在HLA-DR、CD4或CD33。Romani等，(1996)J.Immunol.Met.l96:137151。對于分離自非培養(yǎng)血液的DC的分析可明顯看出血液DC并不是同源細胞群而是至少兩個群的混合物。Thomas等，(1994)。第一個血液DC亞群為CD123brightCDllcT)C，其具有類漿細胞形態(tài)和強效T細胞激活功能。第二類DC亞群為CD123dimCDllCbright，其外表為單核細胞樣，即使在沒有外源細胞因子的條件下培養(yǎng)也表達CD45R0并同時發(fā)育成典型的成熟DCs。類漿細胞CD123brightCD11cTDC呈現(xiàn)出一些特點，例如表達前T細胞受體的a鏈，這表明它們可能來自淋巴樣前體。Bruno等，(1997)J.Exp.Med.185:875884。CD123dimCDllCbright呈現(xiàn)所有骨髓樣DCs的標準。在淋巴組織的T-細胞富集區(qū)檢測出類似于類漿細胞CD123bnghtCDllcX)C的DCs,由于它們的形態(tài)和表型最初被錯誤地認定為類漿細胞T細胞或類漿細胞單核細胞。Grouard等，(1997)J.Exp.Med.185:1101111。我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一種DC亞型及其法分析方法，可作為檢測GVHD易感性、進程和治療GVHD的方法以及作為ECP的生物標記。預(yù)防GVHD和臨床結(jié)果(至少部分由ECP引起)反映于外周血CD11c+與CD11c-的比例及其在ECP之后的變化。如其在臨床試一驗中的鑒定所示，該生物標記可浮皮可靠片企測，對醫(yī)生的要求不超過靜脈切開術(shù)的復雜程度。而且，流式細胞計數(shù)測量是一項復雜的技術(shù)并且需要比大多數(shù)應(yīng)用中所需要的更多的技術(shù)經(jīng)驗。來自pGvHA試驗的豐富數(shù)據(jù)組創(chuàng)造了數(shù)種機會鑒定與該DC亞型存在相關(guān)并更容易被檢測的其他生物標記(見下文)。生物標記為所指示標記基因表達水平的任何標記。該標記可為直接或間接標記并且在給定生理參數(shù)并與內(nèi)部對照、正常組織或另一中癌瘤對比時檢測該基因的過表達或失表達。生物標記包括但不限于核酸(過表達和失表達二者以及直接和間接)。使用核酸作為生物標記可包括本領(lǐng)域已知的任何方法，包括但不限于檢測DNA擴增、RNA、微小RNA、雜合現(xiàn)象(LOH)缺失、單核普酸多態(tài)性(SNPs,Brookes(1999))、微衛(wèi)星DNA、DNA低甲基化和高甲基化。使用蛋白質(zhì)作為生物標記包括本領(lǐng)域已知的任何方法，包括但不限于測定數(shù)量、活性、修飾例如糖基化、磷酸化ADP-核糖基化、泛素化等或免疫組織化學(IHC)。其他生物標記包括成〗象、細胞計數(shù)和凋亡標記。當其包含該序列時標記核酸對應(yīng)于SEQIDNO闡明的序列。當其包含所指序列的一部分或其補體足以區(qū)別其為該基因的序列時基因節(jié)l史或片l殳對應(yīng)于該基因的序列。當其RNA、mRNA、miRNA或cDNA與含有該序列(例如探針)的組合物雜交或在肽或蛋白質(zhì)情況下其由該mRNA編碼時基因表達產(chǎn)物對應(yīng)于該類序列。當其包含所指基因表達產(chǎn)物的一部分或其補體足以將其區(qū)分為該基因或基因表達產(chǎn)物的序列時基因表達產(chǎn)物節(jié)段或片段對應(yīng)于該類基因或基因表達產(chǎn)物的序列。本申請描述和要求的發(fā)明方法、組合物、組件(articles)和試劑盒包括一個或多個標記基因。本申請全文中使用的"標記，，或"標記基因，，的基因和基因表達-物。一^'《、、口土、本發(fā)明進一步提供實施本文所述方法的微陣列或基因芯片。本發(fā)明進一步提供診斷/預(yù)后組合物，其包含適用于檢測生物標記(例如本文所述基因組合的已分離核酸序列、它們的補體或其一部分，其中該組合物足以檢測或特性研究生物試樣中的基因表達)的試劑。本發(fā)明描述的任何方法可進一步包括檢測至少一個在試樣中組成型表達的基因。本發(fā)明進一步提供通過根據(jù)本文所述方法測定GvHD或TRM可能性并鑒定其適當治療方法而提供療法指導的方法。本發(fā)明進一步提供通過根據(jù)本文所述方法測定GvHD或TRM可能性并鑒定其相應(yīng)預(yù)后方法而提供預(yù)后方法。本發(fā)明進一步提供尋找生物標記的方法，其包括根據(jù)本文所述方法測定標記基因的表達水平、檢測標記基因的生物標記以測定其表達、分析該標記基因的表達并測定該標記基因是否對GvHD或TRM具有有效特異性。本發(fā)明進一步提供試劑盒、組件、微陣列或基因芯片、診斷/預(yù)后的病例報告。僅組織試樣中存在或不存在特定的核酸序列很少被發(fā)現(xiàn)具有診斷或預(yù)后價值。另一方面，各種蛋白質(zhì)、肽或mRNA表達的信息越來越受重視。在基因組中自身具有潛能表達蛋白質(zhì)、肽或mRNA(該類序列指"基因，，)的核酸序列的存在不能確定蛋白質(zhì)、肽或mRNA是否在給定細胞中表達。能夠表達蛋白質(zhì)、肽或RNA的給定基因是否進行了表達以及表達至何種程度(如果表達的話)取決于許多復雜因素。不考慮理解和分析這些因素的困難，分析基因表達可提供重要事件例如GvHD或TRM以及其他臨床相關(guān)現(xiàn)象的可用信息?？稍诨虮磉_譜中發(fā)現(xiàn)基因活性或非活性程度的相對指征。建立基因表達譜的優(yōu)選方法包括測定可編碼蛋白質(zhì)或肽的基因產(chǎn)生的RNA的量。可通過逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)、竟爭RT-PCR、實時RT-PCR、差異顯示RT-PCR、northern雜交分一斤和其他相關(guān)才企測完成。雖然可以使用單獨PCR反應(yīng)進行實施技術(shù)但是最好擴增由mRNA產(chǎn)生的互補DNA(cDNA)或互補RNA(cRNA)并通過孩i陣列進行分析。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知許多不同的陣列結(jié)構(gòu)和它們的生產(chǎn)方法，例如描述于5445934、5532128、5556752、5242974、5384261、5405783、5412087、5424186、5429807、5436327、5472672、5527681、5529756、5545531、5554501、5561071、5571639、5593839、5533695、5624711、5658734和5700637。微陣列技術(shù)允許同時檢測成千上萬個基因的穩(wěn)態(tài)mRNA或miRNA水平，提供了鑒定如GvHD發(fā)病或調(diào)節(jié)等作用的有力工具。目前有兩種微陣列技術(shù)被廣泛使用，cDNA和寡聚核苷酸陣列。雖然這些芯片的結(jié)構(gòu)存在差異，但是基本所有的下游數(shù)據(jù)分析和輸出都是相同的。這些分析的產(chǎn)物通常來自標記探針的信號強度的檢測，該探針用于檢測來自試樣中與陣列上已知位點的核酸序列雜交的cDNA序列。通常該信號強度與cDNA數(shù)量成比例，因此與相同細胞中表達的mRNA或miRNA成比例。優(yōu)選的方法見6271002、6218122、6218114、6004755，以及Keene等，(2006)RIP-芯片細胞提取物的核蛋白復合物的mRNA、microRNA和蛋白組分的分離和鑒定，NatureProtocols1:302-307。通過比較這些信號強度進行表達水平的分析。最好通過生成待測試樣基因表達強度與對照試樣基因表達強度的比值矩陣進行。例如，可將患病組織中的基因表達強度與相同類型的正常組織中的表達強度進行比較。這些表達強度的比值可表明待測和對照試樣中基因表達的改變卩咅數(shù)。篩選可基于統(tǒng)計學檢測，該檢測可產(chǎn)生與GvHD或TRM相關(guān)因子之間各基因差異表達的顯著性證據(jù)相關(guān)的等級列表。該類檢測的實例包括ANOVA和Kruskal-Wallis。該等級評分可用作凈皮設(shè)計用于解釋該類權(quán)重總和的模型的加權(quán)直至截斷，由于證據(jù)優(yōu)勢支持一個而非另一個類別。文獻中描述的先前證據(jù)也可用于調(diào)節(jié)該加權(quán)。可以數(shù)種方式呈現(xiàn)基因表達譜。最常用的方式為將原始熒光強度或比值矩陣排列在樹狀圖中，其中列代表代測試樣，行代表基因。將這些數(shù)據(jù)排列，這樣具有相似表達譜的基因相互接近。各基因的表達比值以一種顏色來表示。例如，小于1的比值(下調(diào))出現(xiàn)在該譜的藍色區(qū)域而大于1的比值(上調(diào))出現(xiàn)在該譜的紅色區(qū)域?？墒褂檬惺塾嬎銠C軟件程序顯示這些數(shù)據(jù)包括"GeneSpring"(SiliconGenetics,Ins)和"Discovery，，以及"Infer"(Partek.Inc)。在檢測蛋白質(zhì)水平測定基因表達時可使用本領(lǐng)域已知的任何方法只要它可得到足夠的特異性和靈敏度。例如，可通過與對該蛋白具有特異性的抗體或抗體片段結(jié)合并測定抗體-結(jié)合蛋白質(zhì)的量檢測蛋白質(zhì)水平?？捎梅派湫浴晒饣蚱渌?全測試劑標記抗體以輔助4全測。檢測方法包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELASA)和免疫印記技術(shù)。本發(fā)明的基因表達譜也可與其他非基因診斷方法聯(lián)合用于診斷、預(yù)防或治療監(jiān)控。例如，某些情況下將上述基于基因表達的診斷技術(shù)與來自傳統(tǒng)標記例如血清蛋白質(zhì)標記的數(shù)據(jù)結(jié)合是有利的。在一個該類方法中，周期性從患者采血然后對血清標記例如白蛋白進行酶免疫檢測。當標記濃度顯示GvHD或TRM可能性時，采集可進行基因表達14分析的試樣。當其他檢測方法產(chǎn)生不明確的結(jié)果時這一方法尤其有效。根據(jù)本發(fā)明制造的試劑盒包括用于測定生物標記表達的格式化檢測。這些可包括進行該檢測所需的一些或全部材料，例如試劑、使用說明以及檢測生物標記的介質(zhì)。本發(fā)明組件包括可用于治療、診斷、預(yù)后或者評價疾病的生物標記表達的描述。將這些譜圖(profilerepresentations)還原至可凈皮儀器自動識別的介質(zhì)，例如計算機可識別的介質(zhì)(磁性、光學等)。組件也可包括在該基質(zhì)中評價基因表達譜的使用說明。例如，該組件包含具有比較上述基因組合(portfolios)的基因表達譜的計算機使用說明的CDROM。該組件也可具有數(shù)字記錄于其中的基因表達譜，這樣可將它們與來自其他患者的基因表達數(shù)據(jù)比較?；蛘?，以不同的描述格式記錄該鐠。圖形記錄就是這樣一種才各式。上述Partek.Inc的"DISCOVERY"和"INFER"整合了合群集算法可最優(yōu)輔助這些數(shù)據(jù)的可視化。根據(jù)本發(fā)明的不同類型的生產(chǎn)組件為用于揭示基因表達鐠的介質(zhì)或格式化檢測。這些可包括，例如微陣列，其中序列補體或探針被固定于基質(zhì)上，指示相關(guān)基因的序列與其結(jié)合并產(chǎn)生可確定它們存在的可讀數(shù)據(jù)?；蛘吒鶕?jù)本發(fā)明的組件可做成試劑盒用于進行可指示相關(guān)基因表達水平的雜交、擴增和信號產(chǎn)生用于預(yù)測GvHD或TRM。以下實施例用于舉例說明并不限制已要求的發(fā)明。本文引用的所有參考文獻均以參考形式并于本文。實施例1l.候選生物標記1:外周血樹突狀細胞亞型(疾病預(yù)測生物標記、生物標記的作用才幾制(MOA)、治療功效的生物標記)對于來自GvHD預(yù)防試驗的亞組研究試樣的流式細胞計數(shù)分析表明未發(fā)展成為或僅為輕度GvHD("無GvHD",零級或一級)的患者與患有二、三或四級GvHD的患者相比外周血中CDllc+和CDllc-樹突狀細胞(lin-ZHLADR+單核細胞，以單核細胞組分表達)二者的比例存在統(tǒng)計學顯著差異。結(jié)果見表1和2。圖l列出該試驗，圖2顯示了PBMC的細胞計數(shù)表型分類。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>數(shù)據(jù)的模式表明了這一生物標記的粗放度(ruggedness)。雖然下面顯示的絕對計數(shù)在每毫升基礎(chǔ)上較小，但考慮相關(guān)CD123+/-細胞群的計數(shù)就絕對計數(shù)和比值而言該結(jié)果具可重現(xiàn)。這一比較顯示了標記(-)絕對計數(shù)的合理重現(xiàn)(duplication)以及CD123-和CDllc-群之間的緊密關(guān)系。確實，在ECP之前和之后二者的試樣中l(wèi)in-/HLADR+CDllc和liiWHLADR+CD123-高度相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r分別為0.95和0.985)，表明這些測量值可代表相同的細胞群。此外，這些絕對計數(shù)與之前報道的正常人群和GvHD人群的DC計數(shù)一致。我們研究的獨特性在于它檢驗了CD11-和CD123-群，而絕大多數(shù)研究檢測抗體陽性，更多成熟DC群。因此我們已鑒定出與臨床結(jié)果相關(guān)的一類新的DC群。表2ECP前DC絕對值GvHDHLA-HLA-HLA-HLA-淋巴等級DR+/CD123+DR+/CD123-DR+/CDllc+DR+/CDllc-吸光值白細胞07151012670330005129840124000183638312000215989473200041168847580003434252350003654462160005191661290230000211597300005537578530003171556724700151891498446001486658538001575794227001110344591643830027191115332220024341325492600023127750108527002214214284510900216521502350020267726012883700231149832330030211114037003141349952003273779410031487348517053500316325418724151150040202274119004129523611860040431281230042243234221500419383524000Cdllc+與Cdllc-的比值對GvHD等級的曲線顯示該比值與最終患者中GvHD嚴重性的關(guān)系。圖3、圖4-6顯示了預(yù)測TRM的DC曲線。其它模式包括該比值在ECP治療后向陽性偏移的傾向以及具有前-BMT比值的患者向死亡率更^氐的數(shù)值更靠近的傾向(0-1死亡2例比2-4組死亡5例)。測量值的差異性和供體與受體之間的關(guān)系均與GvHD等級無關(guān)，進一步表明受體-特異性特點驅(qū)動向GvHD的傾向。已提出在許多相關(guān)條件下包括塞扎里氏綜合征(Sezarysyndrome)、實體器官和骨髓移植包括GvHD、實體肺瘤、異位性皮炎、炎性腸病和全身病毒感染中DC1/DC2比值和未成熟DC的比例可作為疾病進展和治療結(jié)果的預(yù)后指標?？乖幮訢C的數(shù)量與活化B細胞群有很大相關(guān)性。在所有亞組研究參與者中DCllc-的數(shù)量和很可能CD123-DC的數(shù)量與CD19十/CD27+以及CD19+/CD40+(r分別為0.91和0.8)相關(guān)，而與總CD19+/CD20+B細胞計數(shù)(r=0.64)相關(guān)性較小。這些數(shù)據(jù)表明循環(huán)中CDllo/CD123-DC的絕對數(shù)量可反應(yīng)B細胞的活化程度(GvHD中的相關(guān)考慮因素)。18實施例2II候選生物標記2和3，血清GGT和LDH(用于疾病預(yù)測的生物標記、MOA、治療功效)使用DC11C+/DCllc-比值，檢測中心實驗室數(shù)據(jù)尋找DC亞型比例和GvHD嚴重性二者的相關(guān)物。在移植前試樣中出現(xiàn)了兩個新的相關(guān)物、升高的血清GGT和LDH。這些標記的升高以及顯著被抑制的血小板計數(shù)可以將之后患有高等級GvHD的個體和0級個體區(qū)分開來，基線和后-ECP試樣中均有一個GvHD。由于衍生自DCllc比例，這些中心實-驗室標記滿足流式細胞計數(shù)所需的所有標準，但是具有方便檢測和解釋的附加優(yōu)點。GGT被廣泛用作硬化癥肝損傷和其它肝病的標記，LDH通常纟皮認為是細胞溶解的量度。由于移植前患者中的這些標記升高并似乎與之前鑒定的GvHD風險因子(低血小板計數(shù))相關(guān)，它們可提供比上述流式細胞計數(shù)測量更多的優(yōu)點。GvHD診斷的實現(xiàn)這些觀察結(jié)果表現(xiàn)出用于急性GvHD發(fā)病或嚴重性的第一預(yù)測標記或標記組。有資質(zhì)的實驗室可容易地使用流式細胞計量法進行DC亞型的絕對或相對定量以預(yù)測發(fā)病?；蛘撸褂脝魏思毎蛑行粤＜毎嫈?shù)與其它易感性標記一起增強預(yù)測并指導骨髓移植后的治療。與其它診斷方法一起使用這些預(yù)測性細胞亞型可鑒定具有預(yù)測性協(xié)同變異被分析物(即血漿或血清成分或其它生物標記)或可增加DC亞型的預(yù)測能力。這一觀測和隨之而來的診斷學也相關(guān)并廣泛適用于接受骨髓移植的患者。實施例3對數(shù)回歸分析用于鑒定給予ECP的高危病人(移植引起死亡和II-IV級GvHD),使用基線標記、實驗室和人口統(tǒng)計變量預(yù)測結(jié)果。收集來自62個受試者的人口統(tǒng)計信息，其中13名受試者為移植相關(guān)死亡，22名受試者患有II/IV級的急性GvHD。缺失了一名受試者的ni/iv級急性GVHD,該受試者不屬于該標記亞組。由于缺失的數(shù)據(jù)引起受試者數(shù)量以及實驗室數(shù)值變化。收集標記數(shù)值的患者亞組的患者總數(shù)為23名，9名患者為移植相關(guān)死亡以及15名患者患有ni/IV級急性GVHD。標記數(shù)值n=32分析具有基線標記數(shù)值的患者亞組以測定該標記數(shù)值是否有助于預(yù)測各結(jié)果(移植引起的死亡和II-IV級GvHD)。表3和4提供的變量為所有收集的標記變量中的最佳預(yù)測因子。將這些標記變量置于模型中作為持續(xù)變量。表3_結(jié)果移植死亡預(yù)測因子標記模型n優(yōu)勢比估計值p值氺ROC**p一HLAmDRsCD123s321.070.07150.060.79p—HLAmDRsCDllcs321.060.05380.030.80p一HLAmDRsCD123m320.94-0.06390.080.76p一HLAmDRsCDllcm320.95-0.04920.030.79HLAmDRsCD123s321.760.56730.040.78HLAmDRsCD123cs321.900.63970.020.86*模型系數(shù)的Wald卡方p值R(X^受試者工作曲線(敏感度對l-特異性)下面積()表示反優(yōu)勢比表4_結(jié)果II-IV級GVHD預(yù)測因子標記模型n優(yōu)勢比估計值*p值*ROC**p—HLAmDRsCDllcs321.080.0740.010.83pHLAmDRsCD1lcm320.94-0.0670.010.80HLAmDRsCDllcs321.270.2410.050.75*模型系數(shù)的Wald卡方p值ROC-受試者工作曲線(敏感度對l-特異性)下面積()表示反優(yōu)勢比在該患者亞組中最佳的移植引起死亡預(yù)測因子為20HLAmDRsCD123cs的降低。II-IV級GvHD的最佳預(yù)測因子為p—HLAmDRsCDllcs的降低。實驗室和人口統(tǒng)計學數(shù)值N=62分析所有接受ECP的患者以測定基線實驗室數(shù)值或人口統(tǒng)計學數(shù)值是否有助于預(yù)測各結(jié)果?；陲柡湍Ｐ秃突A(chǔ)模型的-21og可能性數(shù)值的差異測定的顯著性水平篩選模型作為"最佳"模型。由最佳模型得到的結(jié)果見表5-10.預(yù)測移植引起死亡的最佳模型包含變量L—BUN—CREATININE—RATIO,L—ALBUMIN—G—DL—,以及未匹配與匹配比。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>*AUC=0.82,n=59"Wald卡方p值()表示反優(yōu)勢比_預(yù)測II-IV級GVDH的最佳模型僅含變量LNEUTROPHIL—。表6_結(jié)果II-IV級GVHD_最佳模型結(jié)果_模型中預(yù)測因子估計值優(yōu)勢比_p值氺NEUTROPHIL—_0.3861.039_0.03*AUC=0.69,n=60(缺一名受試者II-IV級GVHD的結(jié)果)"Wald卡方p值_結(jié)果實驗室和基線數(shù)值前述表格總結(jié)自以下數(shù)據(jù)表7和8<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>%46.212.219.4缺失n1.02.03.0%7.74.14.8L—ALBUMIN—G—DL—<=3.9n6.010.016.0%46.220.425.83.9-4.15n4.011.015.0%30.822.424.24.51-4.5n2.016.018.0%15.432.729.0>4.5n1.012.013.0%7.724.521.0匹酉己只于不匹酉己不匹酉己n11.022.033.0%84.644.953.2匹酉己n2.027.029.0%15.455.146.8結(jié)果2-4級GVHD值GVHDn=15無n=17總體n=32p—HLAmDRsC<=20.6n8.008Dllcs%53.302520.6-35.44n4.04.08%26.723.52535.44_46.67n1.07.08%6.741.225>46.67ii2.06.08%13.335.32523實驗室數(shù)值GVHDn=22無n=39總體n=61L—NEUTROPH<=42.1n7細04細011.0000IL一%31.800010.300018.000042.1-57.65n6遍09扁015.0000%27.300023.100024.600057.64-70.45n5.00009細014.0000%22.700023.100023.0000>70.45ii4扁016.000020.0000%18.200041.000032.8000缺失n01.00001.0000%02.60001.6000注缺失了1名受試者的GVHDY/N實施例4預(yù)測骨髓移植為有白血病患者或其它危及生命的遺傳疾病患者的普遍接受的治療方法。不幸地是，20-50%的同種造血干細胞移植受體都患有移植物抗宿主病，其為供體T-細胞介導的對受體組織的攻擊。目前，預(yù)防GvHD主要依靠針對T細胞的全身免疫抑制(CSA等)。去除供體群中的T細胞可顯著降低移植物抗宿主反應(yīng)但是會另外影響移植物移入、抑制根除受體中的惡性細胞以及影響供體免疫力的重建(使受體易復發(fā)白血病)。由于其免疫調(diào)節(jié)作用，ECP已顯示出可在數(shù)種炎性和自身免疫疾病中提供有利(拯救生命)保護，包括皮膚T細胞淋巴瘤、硬皮病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥、急性和慢性GvHD。用ECP預(yù)治療BMT患者被認為是通過調(diào)節(jié)抗原遞呈細胞區(qū)域發(fā)揮作用。更具體而言，移植物和受體二者中的樹突狀細胞(DCs)可能刺激了對同種BM移植物的排斥。DCs的成熟是通向移植排斥刺激的關(guān)鍵步驟。為了評價ECP是否對免疫細胞(T細胞、NK細胞和DCs)具有免疫調(diào)節(jié)作用，進行24該亞組分析以檢測免疫細胞區(qū)域的表型變化。在光分離置換法之前和之后但在全身照射(TBI)之前收集各病人的血樣。接受移植物一年之后收集第三個血樣。研究目的與單獨標準清髓性預(yù)處理療法對正進行同種同胞或非親緣骨髓移植或外周血干細胞移植(PBST)用于治療血液惡性腫瘤的患者的急性或慢性GvHD發(fā)病率的作用相比通過1^^^￡乂@研究ECP對之前接受標準清髓性預(yù)處理治療的患者的外周血樹突狀細胞和T細胞區(qū)域的免疫調(diào)節(jié)作用。研究涉及和樣本量該多中心亞組研究通過UVADEX⑧測定ECP對接受ECP后在骨髓移植前進行環(huán)磷酰胺和TBI標準清髓性預(yù)處理方案的患者外周血樹突狀細胞、T細胞和NK細胞區(qū)域的免疫調(diào)節(jié)作用。只包括符合GvHD試驗入選標準并給予知情同意的患者。因此樣本量取決于提供知情同意參加pGvHD試3全的患者數(shù)量。約5-6個中心參加了該預(yù)防GvHD研究。在參加預(yù)防GvHD研究的總共50-60名患者中每中心約IO名患者接受ECP,約20-30名患者預(yù)期給予知情同意參加該臨床亞組研究。患者參加該亞組研究365天。亞組研究操作的具體說明采樣時間為了進行該亞組研究，在以下時間點從每名患者中總共采集3個血液試樣令試樣PT1:ECP治療21至10天前采集令試樣PT2:接受移植后7天采集令試樣PT3:接受移植后365天采集將患者血液收集于肝素化真空采血管(vacutainer)中并標注患者編號、就診編號、日期和采血具體時間。將血樣連夜運輸至Esoterix,Inc.(Tennessee)。通過Ficoll梯度離心機從全血中分離白細胞。用對多個譜系、活化和分化標記具有特異性的熒光標記抗體與單核細胞反應(yīng)。用于患者血樣免疫表型分類的組包括但不限于T細胞、NK細胞和樹突狀細胞特異性抗體。在BectonDichinsonFACScan上通過流式細胞計數(shù)法進行抗原表達水平的分析。25技術(shù)操作在每一個采樣點，通過靜脈穿刺從前臂靜脈采集8ml血樣至含有肝素鈉的玻璃試管中。通過倒置混合試樣并在包裝至所提供的運輸容器之前于室溫下保存。統(tǒng)計方法對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學檢-瞼以測定是否可在DC、T細胞、或NK表型和疾病或治療結(jié)果之間建立聯(lián)系。實施例5miRNA表達譜如上所述獲得DCs,如之前所述獲得miRNA并進行分析。Keene等，(2006)RIP-芯片細胞提取物的核蛋白復合物的mRNA、microRNA和蛋白組分的分離和鑒定，NatureProtocols1:302-307。所得結(jié)果見表11。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>hsa—miR—130a3.965.227.815.66ambimiR—115414.775.476.784.50ambi—miR—39984.934.044.967.51hsa—miR—1435.023.743.917.25hsa—miR—4892.472.4710.603.04hsa—miR—1013.064.446.503.75hsa—miR—1512.254.996.064,242權(quán)利要求1.預(yù)測患者中移植物抗宿主疾病(GvHD)的發(fā)病和/或嚴重性的方法，其包括以下步驟a.從患者獲得含有樹突狀細胞(DCs)的試樣；b.檢測與DC表面CD11c相關(guān)的生物標記；以及c.測定CD11c+和CD11c-細胞之間的比例，其中比值小于約1表明存在GvHD。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在用自體凋亡細胞治療患者之后獲得所述試樣。3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中通過用體外光分離置換法(ECP)治療患者獲得所述細胞。4.預(yù)測患者中移植物抗宿主疾病(GvHD)的發(fā)病和/或嚴重性的方法，其包括以下步驟a.從患者獲得血清試樣；b.檢測與"谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)和乳酸脫氫酶(LDH)相關(guān)的生物才示i己；以及c.測定這些生物標記的水平是否升高，其中移植前這些生物標記的升高表明存在GvHD。5.預(yù)測患者中移植物抗宿主疾病(GvHD)的發(fā)病和/或嚴重性的方法，其包括以下步驟a.從患者獲得含有中性粒細胞的試樣；b.檢測已知體積中中性粒細胞的數(shù)量；其中移植前中性粒細胞數(shù)量減少表明存在GvHD。6.通過根據(jù)權(quán)利要求1、4或5測定GvHD存在的可能性并鑒定其適當療法而提供療法指導的方法。7.通過根據(jù)權(quán)利要求1、4或5測定GvHD存在的可能性并鑒定其相應(yīng)預(yù)后方法而進4于預(yù)后的方法。8.用于進行權(quán)利要求l、4或5的檢測方法的試劑盒，其包括生物才示j己才企觀'H式劑。9.用于進行權(quán)利要求l、4或5的方法的微陣列或基因芯片。10.預(yù)測患者中移植相關(guān)死亡(TRM)的發(fā)生和/或嚴重性的方法，其包括以下步驟a.從患者獲得含有樹突狀細胞(DCs)的試樣；b.檢測與類漿細胞DC表面lin、HLA-DR和CD123相關(guān)的生物標記；其中基線處lin-HLA-DR+CD123+類漿細胞DCs的較低絕對豐度表明存在TRM。11.預(yù)測患者中移植相關(guān)死亡(TRM)的發(fā)生和/或嚴重性的方法，其包括以下步驟a.獲得血清"谷氨酰轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶的基線測量值，其中移植前這些生物標記的升高表明存在TRM。12.通過根據(jù)權(quán)利要求10或11測定TRM存在的可能性并鑒定其適當療法而提供療法指導的方法。13.通過根據(jù)權(quán)利要求10或11測定TRM存在的可能性并鑒定其相應(yīng)預(yù)后方法而進4t預(yù)后的方法。14.用于進行根據(jù)權(quán)利要求10或11的檢測方法的試劑盒，其包括生4勿才示i己斗全測i式劑。15.用于進行權(quán)利要求10或11的方法的微陣列或基因芯片。全文摘要本發(fā)明提供測定GvHD可能性和/或嚴重性以及移植相關(guān)死亡率發(fā)生可能性的方法。文檔編號C12Q1/02GK101484586SQ200780025301公開日2009年7月15日申請日期2007年5月2日優(yōu)先權(quán)日2006年5月2日發(fā)明者P·J·奧布里恩申請人:特拉科斯有限公司