一種林蛙油水溶性蛋白口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于保健品領(lǐng)域，具體為一種林蛙油水溶性蛋白口服液及其制備方法，該 林蛙油口服液具有抗氧化的保健功效。
【背景技術(shù)】
[0002] 對機(jī)體而言，活性氧自由基是一把"雙刃劍"，其在生理濃度時廣泛參與細(xì)胞的信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)和生命過程，過量時又能引起線粒體氧化應(yīng)激，從而導(dǎo)致衰老及相關(guān)疾病的發(fā)生。如 何保持細(xì)胞內(nèi)的氧化與抗氧化平衡(氧化還原平衡），既不過度氧化損傷，也不過度抗氧化 而影響正常的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，運(yùn)對健康極為重要。大量研究已證實(shí)，人體本身就具有清除多余自 由基的能力，運(yùn)主要靠內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氨酶、谷 脫甘膚過氧化酶等一些酶和維生素C、維生素E、還原性谷脫甘膚等一些抗氧劑。酶類物質(zhì)可 W使體內(nèi)的活性氧自由基變?yōu)榛钚暂^低的物質(zhì)，從而削弱它們對機(jī)體的攻擊力。酶的防御 作用僅限于細(xì)胞內(nèi)，而抗氧化劑有些作用于細(xì)胞膜，有些則在細(xì)胞外就可起到防御作用。因 此，外源性補(bǔ)充抗氧化劑對于維持正常生理功能及相關(guān)疾病的輔助治療具有積極作用。
[0003] 基于化學(xué)合成的人工抗氧化劑存在毒性大、體內(nèi)蓄積、不宜長期服用等缺點(diǎn)，相比 之下，源于天然產(chǎn)物的抗氧化劑毒性輕微、效果顯著、更易耐受，已成為抗氧化市場的主流 產(chǎn)品。
[0004] 林蛙油(Oviductus rana)是我國名貴的中藥材，富含高達(dá)50% W上的蛋白質(zhì)，還 含有豐富的糖類、脂肪、憐脂、維生素、脂肪酸、礦物質(zhì)及激素等營養(yǎng)成分?！吨兴幋笤~典》記 載:林蛙油具有獨(dú)特的"補(bǔ)腎益精、潤肺養(yǎng)陰"之功效，用于治療"病后、產(chǎn)后虛弱、肺瘦、咳 嗽、吐血、盜汗"等癥;《中國藥物學(xué)》記載:始膜油是"潤肺、生津、補(bǔ)虛的身體增強(qiáng)劑，是身體 衰弱的滋補(bǔ)佳品"。我國林蛙資源豐富，現(xiàn)有技術(shù)中已有林蛙油食品制作或林蛙油酶水解膚 入藥的技術(shù)，但對于我國林蛙油資源仍然存在廣闊的開發(fā)空間，有著巨大的開發(fā)價值和市 場前景。對于林蛙油如何有效利用，如何開發(fā)其各種成分的最佳用途，探索出最佳服用劑 量，成為林蛙油產(chǎn)品研究的關(guān)鍵問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于提供一種林蛙油水溶性蛋白口服液及其制備方法，W林蛙油水溶 性蛋白為活性成分，降低脂溶性成分所引起的不良反應(yīng)，利于機(jī)體吸收，增強(qiáng)保健功能。本 發(fā)明的目的是由W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種林蛙油水溶性蛋白口服液，每1000 mL所述口服液含有W下重量的各組分:林蛙油 水溶性蛋白100~50g，矯味劑12.5~5g，防腐劑^2g。
[0006] 進(jìn)一步的，所述林蛙油水溶性蛋白的制備包括：1)林蛙油水溶性總蛋白的提取和 2)林蛙油水溶性蛋白的純化;所述步驟1)林蛙油水溶性總蛋白的提取的具體步驟為:取林 蛙油，加入pH 6.0~7.0的5~10倍量水溶液中攬拌提取3~5 h，壓濾，殘?jiān)貜?fù)提取，合并 多次提取液，進(jìn)行第一次離屯、處理，取上清液，經(jīng)中空纖維柱膜過濾，濾液用65~70%硫酸錠 沉淀6~12 h，對沉淀進(jìn)行第二次離屯、處理，將沉淀置O~10°C蒸饋水透析，至透析液沒有沉淀 產(chǎn)生，對透析液進(jìn)行第=次離屯、處理，得含有林蛙油水溶性總蛋白的上清液。
[0007] 進(jìn)一步的，所述步驟2)林蛙油水溶性蛋白的純化的具體步驟為:將步驟1)中所得 含有林蛙油水溶性總蛋白的上清液中加入Amberl ite CG50樹脂，于20~25°C攬拌吸附2~5 h，傾去上層液體，所述樹脂用蒸饋水洗涂后上柱，用0.2-0.4 mol/L憐酸氨二鐘-0.1-0.3 mol/L氯化鐘混合液洗脫，流速8 mL/10 min,洗脫液用蒸饋水透析去離子后真空冷凍干燥， 得純化后的林蛙油水溶性蛋白。
[0008] 進(jìn)一步的，所述矯味劑為薦糖、木糖醇、=氯薦糖、澄皮糖漿、構(gòu)祿糖漿、樓桃糖漿、 甘草糖漿、桂皮糖漿、甜菊巧其中一種或幾種的混合物。
[0009] 進(jìn)一步的，所述矯味劑為木糖醇或木糖醇與薦糖、=氯薦糖、澄皮糖漿、構(gòu)祿糖漿、 樓桃糖漿、甘草糖漿、桂皮糖漿、甜菊巧中其中一種或幾種混合物。
[0010] 進(jìn)一步的，所述矯味劑為甘草糖漿或甘草糖漿與木糖醇、薦糖、=氯薦糖、澄皮糖 漿、構(gòu)祿糖漿、樓桃糖漿、桂皮糖漿、甜菊巧中其中一種或幾種混合物。
[0011] 進(jìn)一步的，所述防腐劑為苯甲酸、苯甲酸鋼、山梨酸、山梨酸鐘、丙酸巧、尼泊金甲 醋、尼泊金乙醋中一種或兩種復(fù)配。
[001^ -種林蛙油水溶性蛋白口服液的制備方法，每1000 mL所述口服液含有W下重量的 各組分:林蛙油水溶性蛋白100~50g，矯味劑12.5~5g，防腐劑^2g; 具體制備步驟為:按上述組分的重量，取林蛙油水溶性蛋白加入到純化水中，180~220 r/min攬拌至溶解，控制溫度10~30°C，再分別加入矯味劑、防腐劑于180~220 r/min轉(zhuǎn)速下 攬拌均勻后，罐裝瞬時滅菌，裝瓶、封口。
[0013] 所述林蛙油水溶性蛋白口服液在制備抗氧化保健食品中的應(yīng)用。
[0014] 所述林蛙油水溶性蛋白口服液的使用方法，所述口服液的服用劑量為體重120kg 成人7mL/d。
[0015] 本發(fā)明的有益效果： 1)本發(fā)明提供的林蛙油口服液W抗氧化活性最強(qiáng)的水溶性蛋白為活性成分，不僅可提 高保健功效，同時能降低脂溶性成分所引起的不良反應(yīng)。
[0016] 2)簡化口服液配方，除林蛙油水溶性蛋白外，僅加入矯味劑和防腐劑，有效避免多 種活性成分配伍所引起的不良相互作用，更有利于單一組分功效的發(fā)揮。
[0017] 3)同時，由于活性成分水溶性良好，有利于口服液穩(wěn)定性的提高，便于制劑加工、 儲存、運(yùn)輸，具有產(chǎn)業(yè)化開發(fā)價值。
[0018] 4)在乙醇誘導(dǎo)氧化損傷模型小鼠體內(nèi)，本發(fā)明提供的林蛙油水溶性蛋白口服液能 顯著降低脂質(zhì)氧化產(chǎn)物丙二醒(MDA)和蛋白質(zhì)幾基(PC)的含量;升高抗氧化酶超氧化物歧 化酶(SOD)活力和谷脫甘膚化甜)含量，顯示較為理想的抗氧化作用。
【具體實(shí)施方式】 [0019]實(shí)施例1 一種林蛙油水溶性蛋白口服液，每1000 mL所述口服液含有W下重量的各組分:林蛙油 水溶性蛋白100~50g，矯味劑12.5~5g，防腐劑^2g。
[0020]其中的林蛙油可購買市售產(chǎn)品 林蛙油水溶性蛋白的制備包括:1)林蛙油水溶性總蛋白的提取和2)林蛙油水溶性蛋白 的純化;步驟1)林蛙油水溶性總蛋白的提取的具體步驟為:取干燥的林蛙油，加入pH 6.0 ~7.0的5~10倍量(重量比）水溶液中攬拌提取3~5 K優(yōu)選化），壓濾，殘?jiān)貜?fù)提取(2次）， 合并多次提取液，進(jìn)行第一次離屯、處理，4500 r/min離屯、5~10 min，取上清液，經(jīng)中空纖維 柱膜過濾，濾液用65~70%(優(yōu)選65%)硫酸錠沉淀6~12 K優(yōu)選化），沉淀進(jìn)行第二次離屯、處 理，4500 r/min離屯、5~10 min,將沉淀置0~10°C(優(yōu)選4°C)蒸饋水透析，用1% BaCb檢驗(yàn)透 析液，至透析液沒有沉淀產(chǎn)生，將透析液進(jìn)行第S次離屯、處理，4500 r/min離屯、5 min,得含 有林蛙油水溶性總蛋白的上清液。
[0021] 步驟2)林蛙油水溶性蛋白的純化的具體步驟為:將步驟1)中所得含有林蛙油水溶 性總蛋白的上清液中加入過處理的Amberlite CG50樹脂（上清液與樹脂質(zhì)量的質(zhì)量比值 為：1:10~1:15)，于20~25°C攬拌吸附2~5 h，傾去上層液體，所述樹脂用蒸饋水洗涂3次后上 柱，用0.2~0.4 mol/L憐酸氨二鐘-0.1~0.3 mol/L氯化鐘混合液洗脫，流速8 mL/10 min,洗 脫液用蒸饋水透析去離子后真空冷凍干燥，得純化后的林蛙油水溶性蛋白。考馬斯亮藍(lán)法 測定林蛙油水溶性蛋白質(zhì)含量為95~97 % ;凝膠層析法測定其分子量為20邸a~13 KDa。樹 脂處理方法為:取干AmoerIite CG50樹脂，水漂洗后加5倍體積1 mo 1/LNaOH攬拌化，水洗至 中性。加5倍體積1 mol/L HCl處理化，水洗至中性，再用抑4.5 O.lmol/L醋酸緩沖液平衡 過夜。
[0022] 矯味劑為薦糖、木糖醇、=氯薦糖、澄皮糖漿、構(gòu)祿糖漿、樓桃糖漿、甘草糖漿、桂皮 糖漿、甜菊巧其中一種或幾種的混合物。
[0023] 矯味劑的一種優(yōu)選方案為木糖醇或木糖醇與薦糖、=氯薦糖、澄皮糖漿、構(gòu)祿糖 漿、樓桃糖漿、甘草糖漿、桂皮糖漿、甜菊巧中其中一種或幾種混合物。木糖醇不但甜度高， 且不參與人體能量代謝，適合糖尿病患者食用，而且與本發(fā)明中的林蛙油水溶性蛋白結(jié)合 可W有效掩蓋其特有的腥味。=氯薦糖的甜度約是薦糖的600倍，W木糖醇混合少量=氯薦 糖做為矯味劑可W完全遮蓋林蛙油水溶性蛋白的腥味，口感更佳。推薦添加量重量比為林 蛙油水溶性蛋白：木糖醇:S氯薦糖=100~50:10~4.5:2.5~0.5。
[0024] 矯味劑的另一種優(yōu)選方案為甘草糖漿或甘草糖漿與木糖醇、薦糖、=氯薦糖、澄皮 糖漿、構(gòu)祿糖漿、樓桃糖漿、桂皮糖漿、甜菊巧中其中一種或幾種混合物。甘草糖漿中富含的 甘草次酸是一種植物源抗氧化劑，可與林蛙油水溶性蛋白發(fā)揮協(xié)同作用，其口感先甜后甘， 可彌補(bǔ)木糖醇單一的甜味，木糖醇和甘草糖漿復(fù)配使口服液口感更佳，其中優(yōu)選的添加重 量比為林蛙油水溶性蛋白：木糖醇:甘草糖漿=1