Dysidavarone A在制備治療急性痛風藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物DysidavaroneA的新用途，尤其涉及DysidavaroneA在制備 治療急性痛風藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]痛風（gouty)，又稱痛風性關(guān)節(jié)炎（goutyarthritis)，是體內(nèi)噪呤代謝紊亂所致 的疾病，表現(xiàn)為血中尿酸過多，易于使尿酸鹽（MSU)在關(guān)節(jié)等組織析出結(jié)晶。痛風的急性發(fā) 作是由于沉積在關(guān)節(jié)的MSU引起中性粒細胞局部浸潤和炎性反應(yīng)。
[0003] 本發(fā)明涉及的化合物DysidavaroneA是一個2013年發(fā)表（BjornSchmalzbauer， etal.,TotalSynthesisandAntibacterialActivityofDysidavaroneA.,Organic Letters，2013, 15(4) :964 - 967.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類型，目前的用 途僅僅涉及抗菌，(BjornSchmalzbauer，etal. ,TotalSynthesisandAntibacterial ActivityofDysidavaroneA.，OrganicLetters，2013, 15 (4) :964 - 967·)，本發(fā)明涉及的 DysidavaroneA在制備治療急性痛風藥物中的用途屬于首次公開。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明用MSU致人血管內(nèi)皮細胞（HUVEC)損傷的急性痛風模型評價顯示，對MSU 致HUVEC損傷具有保護作用，并抑制ICAM-1表達，可用于制備治療急性痛風炎癥藥物。本 發(fā)明的目的在于提供DysidavaroneA在醫(yī)學中的新用途，具體地說是涉及DysidavaroneA 在制備治療急性痛風藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
[0006] 本發(fā)明提出DysidavaroneA在制備治療急性痛風藥物中的應(yīng)用。從藥理實驗看 出，DysidavaroneA有較好的治療急性痛風的作用。由于本發(fā)明首次公開DysidavaroneA 在治療急性痛風方面的藥理作用。
[0007] 所述化合物DysidavaroneA結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0008]
[0009] 所述DysidavaroneA在治療急性痛風藥物中的應(yīng)用，DysidavaroneA對ICAM-1 的表達有抑制作用。
[0010]-種治療急性痛風藥物，由DysidavaroneA為活性成分添加輔料制備而成，制備 方法為取5克化合物DysidavaroneA，加入糊精195克，混勻，常規(guī)壓片機制成1000片。
[0011] -種治療急性痛風藥物，由DysidavaroneA為活性成分添加輔料制備而成，制備 方法為取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
[0012] 研究結(jié)果表明，用MSU致HUVEC損傷的急性痛風模型評價顯示，DysidavaroneA可 保護MSU致HUVEC損傷，減少細胞凋亡，提高細胞活性，抑制ICAM-1表達，具有抗急性痛風 炎癥的活性，DysidavaroneA可用于制備治療急性痛風炎癥藥物。
[0013] 本發(fā)明涉及的DysidavaroneA在制備治療急性痛風藥物中的用途屬于首次公開， 由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于急性痛風的防治活性強，具備突出的實質(zhì) 性特點，同時用于急性痛風的防治顯然具有顯著的進步。
【具體實施方式】
[0014] 本發(fā)明所涉及化合物DysidavaroneA的制備方法參見文獻（Bjorn Schmalzbauer，etal.，TotalSynthesisandAntibacterialActivityofDysidavarone A.，OrganicLetters，2013, 15 (4) :964 - 967.)
[0015] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0016] 實施例1 :本發(fā)明所涉及化合物DysidavaroneA片劑的制備：
[0017] 取5克化合物DysidavaroneA，加入糊精195克，混勻，常規(guī)壓片制成1000片。
[0018] 實施例2 :本發(fā)明所涉及化合物DysidavaroneA膠囊劑的制備：
[0019] 取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混勾，裝膠囊制成1000粒。
[0020] 下面通過藥效學實驗來進一步說明其藥物活性。
[0021] 實驗例1:DysidavaroneA抗急性痛風炎癥實驗：
[0022] 1:方法
[0023] ①溶液配制
[0024] 5g尿酸加1000ml蒸餾水煮沸，加5%NaOH溶液調(diào)PH7. 4,攪拌，冷卻析晶制成尿 酸鈉結(jié)晶（MSU)。將制好的MSU10mg高壓滅菌，加不含血清的DMEM培養(yǎng)液10ml，研磨配成 lmg/ml的DMEM溶液。實驗時，此溶液再加DMEM培養(yǎng)液配成不同濃度DMEM的MSU溶液。
[0025] DysidavaroneA2. 5mg，用二甲基亞砜（DMS0)溶解，DMS0終濃度〈0· 02%，再加無 血清的DMEM培養(yǎng)液，配制成濃度2. 5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。
[0026] 陽性藥吲噪美辛2.Omg，方法同DysidavaroneA，配制濃度20ug/ml。
[0027] ②血管內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)
[0028] 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞HUVEC株，由南京中醫(yī)藥大學基礎(chǔ)醫(yī)學院提供，細胞經(jīng)支 原體檢測，無支原體污染，細胞經(jīng)0. 25%胰蛋白酶消化，含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中 和，離心（1000r/minX6min)，去上清液，加含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，移入細胞培養(yǎng) 瓶中，放37°C、5 %C02培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。
[0029] ③對MSU刺激HUVEC活力的影響
[0030]HUVEC在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待生長至70 %~80 %融合時，以0. 25 %胰蛋白酶消化、離 心，10 %小牛血清DMEM培養(yǎng)液洗滌3次，用10 %小牛血清DMEM培養(yǎng)液調(diào)成4X104/ml細胞 懸液，植入96孔板（每孔200ul)，培養(yǎng)24小時后輕吸出原培養(yǎng)液，進行以下實驗，每組各 8孔，具體分組及加液如下：對照組（200ulDMEM培養(yǎng)液）、模型組（100ug/mlMSU溶液）、干 預(yù)A組（lOOug/mlMSU溶液+2.5ug/mlDysidavaroneA)、干預(yù)13組（10〇1^/1111MSU溶液 +25ug/mlDysidavaroneA)、干預(yù)0組（lOOug/mlMSU溶液+250ug/mlDysidavaroneA)， 加液后繼續(xù)放37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，收集上清液，剩余的HUVEC用于測定細 胞活性，每孔再加5mg/mlMTT液20ul，繼續(xù)放37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時后，棄MTT 液，加入二甲基亞砜200ul溶解，震蕩，于酶標儀讀取吸光度值，波長490nm。
[0031] 陽性藥組加液（100ug/mlMSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。
[0032] 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理，細胞活力（％)=實驗組吸光度值/對照組吸光度值X100%， 結(jié)果見表1。
[0033] 與對照組相比，模型組細胞活力顯著減小（P〈0. 01，P〈0. 05)，陽性藥吲哚美辛 及DysidavaroneA干預(yù)后細胞活力顯著提高（Ρ〈0·01，Ρ〈0·05)，并強于對照組，其中， DysidavaroneΑ各濃度組的細胞活力強于陽性藥Π引噪美辛。
[0034] 表1DysidavaroneA對MSU刺激的血管內(nèi)皮細胞活力的影響（X土s)
[0035]
[0037]與模型組比較，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,與對照組比較，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0038] ④對ICAM-1表達影響
[0039] 將處于對數(shù)生長期的HUVEC用0. 25%的胰蛋白酶消化，輕輕吹打，制成細胞懸液， 調(diào)整細胞密度為5X109/L，接種于細胞培養(yǎng)瓶中。待細胞長滿后（約24h)，棄去上清液， 分為下列組：對照組、模型組（l〇〇ug/mlMSU溶液）、DysidavaroneA組（100ug/mlMSU溶 液+25ug/mlDysidavaroneA)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，PBS收集細胞，離心去上清，加入0)54 單克隆抗體，30min后，PBS洗滌，重懸細胞，應(yīng)用流式細胞儀檢測其陽性細胞百分率（η= 10000)，重復(fù)3次，結(jié)果見表2。
[0040] 表2DysidavaroneΑ對MSU刺激的血管內(nèi)皮細胞ICAM-1表達的影響（X土s)
[0041]
[0042]與模型組比較，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,與對照組比較，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0043] 2、結(jié)果結(jié)果顯示，空白組HUVEC幾乎無ICAM-1表達，模型組ICAM-1的表達最高， 與模型組相比，DysidavaroneA對ICAM-1的表達有較強的抑制作用。
[0044] 結(jié)論：用MSU致HUVEC損傷的急性痛風模型評價顯示，DysidavaroneA可保護MSU 致HUVEC損傷，減少細胞凋亡，提高細胞活性，抑制ICAM-1表達，具有抗急性痛風炎癥的活 性，DysidavaroneA可用于制備治療急性痛風炎癥藥物。
【主權(quán)項】
1. DysidavaroneA在治療急性痛風藥物中的應(yīng)用，所述化合物DysidavaroneA結(jié)構(gòu)如 式（I)所示：式（I)。2. 如權(quán)利要求1所述DysidavaroneA在治療急性痛風藥物中的應(yīng)用，其特征在于 DysidavaroneA對ICAM-1的表達有抑制作用。3. -種治療急性痛風藥物，其特征在于由權(quán)利要求1所述的DysidavaroneA為活性成 分添加輔料制備而成，制備方法為取5克化合物DysidavaroneA,加入糊精195克，混勻， 常規(guī)壓片機制成1000片。4. 一種治療急性痛風藥物，其特征在于由權(quán)利要求1所述的DysidavaroneA為活性成 分添加輔料制備而成，制備方法為取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混勻，裝 膠囊制成1000粒。
【專利摘要】本發(fā)明提供Dysidavarone？A在制備治療急性痛風藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實驗研究結(jié)果表明Dysidavarone？A對尿酸鹽致人血管內(nèi)皮細胞損傷的急性痛風模型具有保護作用，并抑制ICAM-1表達，本發(fā)明涉及的Dysidavarone？A在制備治療急性痛風藥物中的用途屬于首次公開，而且其對于急性痛風的防治活性強，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于急性痛風的防治顯然具有顯著的進步。
【IPC分類】A61K9/48, A61P19/06, A61K9/20, A61K31/122
【公開號】CN105395529
【申請?zhí)枴緾N201510902385
【發(fā)明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月8日