性比率大于8為特征的表面活性劑、一 種水相組成。該水相可以包含其他表面活性劑、鹽和其他助劑。
[0101] 用于制備所述納米乳劑的制備方法已為本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)所知，可以包括擴(kuò)散、 超聲處理或均質(zhì)化過程（Prego et al.J.Nanosci.Nanotechnol. (2006)6:1 ;Tadros et al. Adv. Colloid Interface Sci. (2004) 109:303)。
[0102] 用于制備納米乳劑的一種特定方法（在實(shí)施例中稱為溶劑分散法）包括：
[0103] i)制備含有一種油、一種或多種以親水性-親脂性比率大于8為特征的表面活性 劑的有機(jī)溶液，所述表面活性劑不是磷脂；
[0104] ii)將步驟i制得溶液添加到可選地包含水溶性表面活性劑的水相中，并在攪拌 下形成納米乳劑；
[0105] iii)可選地，令有機(jī)溶劑全部蒸發(fā)或部分蒸發(fā)至恒定體積。
[0106] 用于制備納米乳劑的另一種特定方法（在實(shí)施例中稱為超聲處理法）包括：
[0107] i)制備含有一種油、一種或多種以親水性-親脂性比率大于8為特征的表面活性 劑的有機(jī)溶液，所述表面活性劑不是磷脂；
[0108] ii)將步驟i制得溶液添加到可選地包含水溶性表面活性劑的水相中，并進(jìn)行超 聲處理；
[0109] iii)用水稀釋步驟ii所得乳劑；
[0110] iv)可選地，令有機(jī)溶劑全部蒸發(fā)或部分蒸發(fā)至恒定體積。
[0111] 用于制備納米乳劑的另一種特定方法（在實(shí)施例中稱為均質(zhì)化法）包括：
[0112] i)制備含有一種油、一種或多種以親水性-親脂性比率大于8為特征的表面活性 劑的有機(jī)溶液，所述表面活性劑不是磷脂；
[0113] ii)將步驟i制得溶液添加到可選地包含水溶性表面活性劑的水相中，并進(jìn)行均 質(zhì)化處理；
[0114] iii)用水稀釋步驟ii所得乳劑，并進(jìn)行均質(zhì)化處理；
[0115] iv)可選地，令有機(jī)溶劑全部蒸發(fā)或部分蒸發(fā)至恒定體積。
[0116] 在前述方法的特定實(shí)施例中，若活性物質(zhì)是親脂性或兩親性的，則所述活性成分 添加到步驟b或步驟i的有機(jī)溶液中。在其他特定實(shí)施例中，若活性物質(zhì)是親水性的，則所 述活性物質(zhì)添加到步驟a或步驟ii的溶液中。所述親水性活性物質(zhì)優(yōu)選為添加溶解到水 溶液中。還可能在步驟d中通過吸附方式或在納米膠囊形成后的培養(yǎng)過程中，將所述親水 活性成分包含在所得納米膠囊懸浮液中。
[0117] 用于制備納米乳劑的另一種特定方法（在實(shí)施例中稱為溶劑擴(kuò)散法的變形（通過 滴注））包括：
[0118] i)制備含有魚精蛋白并可選地含有水溶性表面活性劑的水溶液；
[0119] ii)制備含有一種油、一種或多種以親水性-親脂性比率大于8為特征的表面活性 劑的有機(jī)溶液，所述表面活性劑不是磷脂；
[0120] iii)在指定時(shí)間間隔下，以小份將步驟ii制得溶液添加到步驟i制得的水溶液 中，或以小份將步
[0121] 驟i制得的水溶液添加到步驟ii制得溶液中；
[0122] iv)可選地，令有機(jī)溶劑全部蒸發(fā)或部分蒸發(fā)至恒定體積。
[0123] 在前述方法的特定實(shí)施例中，若活性物質(zhì)是親脂性或兩親性的，則所述活性成分 添加到步驟ii的有機(jī)溶液中。在其他特定實(shí)施例中，若活性物質(zhì)是親水性的，則所述活性 物質(zhì)添加到步驟i的溶液中。所述親水性活性物質(zhì)優(yōu)選為添加溶解到水溶液中。還可能通 過吸附方式或在納米膠囊形成后的培養(yǎng)過程中，將所述親水活性成分通過吸附方式包含在 所得納米膠囊懸浮液中。
[0124] 本發(fā)明的范圍中，親脂性理解為自身無法與水分子相互作用而主要溶解于非極性 溶劑的分子、物質(zhì)、活性物質(zhì)、結(jié)構(gòu)或其部分。
[0125] 本發(fā)明的范圍中，兩親性理解為同時(shí)具有疏水性和親水性的分子、物質(zhì)、活性物 質(zhì)、結(jié)構(gòu)或其部分。
[0126] 本發(fā)明的范圍中，親水性理解為被水吸引而能溶解于水或極性溶劑的分子、物質(zhì)、 活性物質(zhì)、結(jié)構(gòu)或其部分。
[0127] 混合含有納米乳劑的上述溶液和不同比率的涂層聚合物（改變涂層聚合物比率） 的水溶液，從而形成納米膠囊。
[0128] 所述有機(jī)溶液的溶劑優(yōu)選為極性溶劑（例如乙醇、異丙醇和丙酮）的混合物，還可 以包括非極性溶劑（例如二氯甲烷）。該油相中包含所述油和一種或多種以親水性-親脂 性比率大于8為特征的表面活性劑。所述活性成分類似地包含在特定組成成分中。
[0129] 根據(jù)上述第一種方法制備本發(fā)明的納米膠囊系統(tǒng)的一個(gè)特定實(shí)施例包括：
[0130] a)制備20ml溶解有濃度為0. 05w/v魚精蛋白的水溶液；
[0131] b)制備由乙醇/丙酮溶液、一種或多種表面活性劑（膽酸鈉和/或PEG硬脂酸酯） 組成的油相，并加入Miglyol? 812 ;
[0132] c)將步驟a和b制得的溶液在磁力攪拌下混合，自發(fā)生成納米膠囊；
[0133] d)可選地，蒸發(fā)上述步驟制得的混合物的有機(jī)溶劑至恒定體積。
[0134] 用于制備納米膠囊系統(tǒng)的制備方法可以包括額外的動感步驟，以儲藏保藏納米膠 囊系統(tǒng)，從而保護(hù)其初始特性。由于本發(fā)明的納米膠囊外殼的性質(zhì)及其特征，凍干期間無需 使用冷凍保護(hù)劑。另一項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)在于，凍干前無需稀釋該膠系統(tǒng)統(tǒng)，因?yàn)楸景l(fā)明的納米膠囊系 統(tǒng)不會在凍干重構(gòu)期間形成聚集體。
[0135] 可選地，可以添加一種或多種具有冷凍保護(hù)作用的糖，例如海藻糖、葡萄糖、蔗糖、 甘露糖、麥芽糖、聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。凍干形式下的所述納米膠囊可以長期儲存并易于 根據(jù)需要再生，只需添加最佳體積的水即可。
[0136] 在此額外步驟中，本發(fā)明還涉及含有凍干形式的魚精蛋白外殼的納米膠囊系統(tǒng)。
[0137] 在一個(gè)特定實(shí)施例中，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的納米膠囊系統(tǒng)在治療中的應(yīng)用。更 具體而言，其涉及含有本發(fā)明的納米膠囊系統(tǒng)的藥學(xué)組合物，且可選地包含一種或多種藥 學(xué)可接受的賦形劑。特別地，在本發(fā)明的納米膠囊中包含活性物質(zhì)得到的納米膠囊系統(tǒng)，在 其組成成分、性質(zhì)和形態(tài)方面具有用作優(yōu)秀備選治療劑的特征。將包含在本發(fā)明的系統(tǒng)中 的活性物質(zhì)是具有適合用于該制劑預(yù)期治療用途的醫(yī)療性質(zhì)的物質(zhì)。在一個(gè)特定實(shí)施例 中，該活性物質(zhì)選自多肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或親脂性化合物、多糖化合物、核酸或核苷酸化合物 (例如寡核苷酸、多核苷酸）或上述分子的組合。
[0138] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述親脂性活性物質(zhì)為多西紫杉醇。
[0139] 在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述活性物質(zhì)為疏水性、兩親性或親水性。疏水性或兩親 性活性物質(zhì)優(yōu)選為在用于制備本發(fā)明納米膠囊的制備方法中的步驟b中添加。親水性活性 物質(zhì)優(yōu)選為在本方法步驟a中或在步驟d之后的步驟中以培養(yǎng)的方式添加。但是，本發(fā)明還 構(gòu)思了其他實(shí)施例，例如在步驟b中添加溶解在少量水相中的疏水活性物質(zhì)。與封裝在納 米膠囊中的疏水活性物質(zhì)不同，親水活性物質(zhì)可以通過吸附的方式與納米膠囊表面結(jié)合。
[0140] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述親水活性物質(zhì)是重組乙肝表面抗原和流感（HlNl)抗 原。
[0141] 所述藥用組合物可以通過不同給藥途徑給藥，例如粘膜給藥、外用給藥或非消化 道給藥。
[0142] 包含在所述系統(tǒng)中的活性物質(zhì)在所述納米膠囊系統(tǒng)成分中的質(zhì)量比例可以是占 總干基重的最高約50%。但是，各種情況下的合適比例取決于需包含的活性成分、其應(yīng)用 的適應(yīng)癥和給藥效率。在一個(gè)特定實(shí)施例中，親脂性活性物質(zhì)的重量比例可以達(dá)到最高約 10%，優(yōu)選為最高約5%。
[0143] 如上所述，本發(fā)明所述的納米膠囊系統(tǒng)可能包含多種活性物質(zhì)，所述活性物質(zhì)可 以溶于或不同溶液中，取決于需包含的分子的性質(zhì)，以防止其相互之間發(fā)生任何種類的物 理或化學(xué)相互作用。
[0144] 如上所述，本發(fā)明涉及所述系統(tǒng)在制備醫(yī)用產(chǎn)品中的用途。在一個(gè)特定實(shí)施例中， 所述用途涉及疫苗或癌癥療法的用途。在此意義上，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明 的納米膠囊系統(tǒng)包含多西紫杉醇作為活性物質(zhì)，并用于治療癌癥，優(yōu)選為肺癌活胰腺癌?？?選地，本發(fā)明還涉及將本發(fā)明中包含多西紫杉醇作為活性物質(zhì)的納米膠囊系統(tǒng)用于制備治 療癌癥（優(yōu)選為肺癌活胰腺癌）的藥物的用途。
[0145] 本發(fā)明的又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的納米膠囊系統(tǒng)包含重組乙肝抗原（riffisAg) 作為活性物質(zhì)，并用于治療或預(yù)防乙肝?？蛇x地，本發(fā)明還涉及將本發(fā)明中包含重組乙肝抗 原（riffisAg)作為活性物質(zhì)的納米膠囊系統(tǒng)用于制備治療或預(yù)防乙肝的藥物的用途。
[0146] 本發(fā)明的又一優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的納米膠囊系統(tǒng)包含HlNl流感（HI)重組抗 原作為活性物質(zhì)，并用于治療或預(yù)防HlNl型流感。可選地，本發(fā)明還涉及將本發(fā)明中包含 HlNl流感（HI)重組抗原作為活性物質(zhì)的納米膠囊系統(tǒng)用于制備治療或預(yù)防HlNl型流感的 藥物的用途。
[0147] 為了更好地理解本發(fā)明的特征和有點(diǎn)，下面將引用一系列描述性的實(shí)施例，以完 善前述內(nèi)容，且前述內(nèi)容不受到所述實(shí)施例的任何限制。
[0148] 實(shí)施例
[0149] 以下是實(shí)施例中通用的簡寫的說明。
[0150] I. Pr :魚精蛋白；以下實(shí)施例中所用的相關(guān)鹽是魚精蛋白硫酸鹽（Yuki Gosei Kogyo Co, Ltd.)。另一種魚精蛋白鹽（SIGMA)也用于所有實(shí)施例，無顯著差異。
[0151] 2. PEG :聚乙二醇硬脂酸酯。Simulsol·? M52PEG_2000(S印pic)。
[0152] 3.納米乳劑（NE):為簡便起見，在實(shí)施例中使用該術(shù)語來指代含有油和一種或多 種HLB大于8的表面活性劑的納米系統(tǒng)；優(yōu)選地，所述一種或多種表面活性劑為：膽酸鈉、 PEG硬脂酸酯、Solutol HS〗5?、TPGS、吐溫20?、吐溫或其組合。其與納米膠囊之間的唯 一差別在于系統(tǒng)表面涂層中不含魚精蛋白。4. Pr納米膠囊（NCs):為簡便起見，在實(shí)施例中 使用該術(shù)語來指代其納米膠囊含有油和一種或多種HLB大于8的表面活性劑的納米系統(tǒng)； 優(yōu)選地，所述一種或多種表面活性劑為：膽酸鈉、PEG硬脂酸酯、Solutol HSLW_、TPGS、吐溫 20?、吐溫抑響或其組合。最后，其涂層為魚精蛋白。
[0153] 5. DCX :多西紫杉醇。
[0154] 6. rHBsAg:重組乙肝抗原。
[0155] 7. HI :H1N1 流感抗原。
[0156] 8. Miglyol⑧：Miglyol 812。
[0157] 實(shí)施例1 :
[0158] 實(shí)施例1. 1根據(jù)一步溶劑擴(kuò)散法制備由油性Miglyol?核心組成的魚精蛋白納米膠 囊
[0159] i)制備溶解有濃度為0. 05w/v的魚精蛋白水溶液（IOml);
[0160] ii)制備由乙醇/丙酮溶液（0· 25:4. 5ml)、62· 5 μ I Miglyol?和l5mg磷脂（卵磷 月旨、溶血卵磷脂、羥基化卵磷脂￥^_.，無油卵磷脂)組成的油相；
[0161] iii)將步驟i和ii制得的溶液在磁力攪拌下混合10分鐘，自發(fā)生成納米膠囊；
[0162] iv)蒸發(fā)有機(jī)溶劑至恒定體積。
[0163] 制得成品后，則測量其平均直徑、多散射指數(shù)（PI)和表面電荷（電動電位）。下表 1展示了測得的所述參數(shù)值。
[0164] 表 1
[0165]
[0166] 實(shí)施例1. 2根據(jù)兩步溶劑擴(kuò)散法制備由油性Miglyol?核心組成的魚精蛋白納米膠 囊
[0167] i)制備由乙醇/丙酮溶液（0· 25:4. 5ml)、62· 5 μ I Miglyol⑧和不同量的磷脂（卵 磷脂或溶血卵磷脂）組成的油相；
[0168] ii)將步驟i制得的溶液添加到IOml水溶液中，在磁力攪拌下混合10分鐘，自發(fā) 生成納米膠囊；
[0169] iii)蒸發(fā)有機(jī)溶劑至恒定體積；
[0170] iv)將步驟iii中的納米乳劑與由1或2mg/ml濃度的Pr組成的水溶液（Iml)以 1:1和1:2的比例（納米乳劑ml :魚精蛋白mg)共培養(yǎng)，從而涂覆所述納米乳劑，所述涂層 立即生成，無視溫度。
[0171] 制得成品后，則測量其平均直徑、多散射指數(shù)（PI)和表面電荷（電動電位）。下表 2展示了步驟iv中的磷脂量和不同魚精蛋白比率下測得的所述參數(shù)值。
[0174] 實(shí)施例1. 3根據(jù)一步溶劑擴(kuò)散法制備由油性Miglyol?核心組成的魚精蛋白納米膠 囊
[0175] i)制備溶解有濃度為0. 05w/v魚精蛋白的水溶液（IOml);
[0176] ii)制備由二氯甲烷/丙酮溶液（比例為0. 1:4. 5ml至0. 25:4. 5ml)、 62. 5 μ I Miglyol?和一定量的羥基化卵磷脂YeiMt1傷或無油卵磷脂uitralec?組成的油相；
[0177] iii)將步驟i和：Li制得的溶液在磁力攪拌下混合10分鐘，自發(fā)生成納米膠囊；
[0178] iv)蒸發(fā)有機(jī)溶劑至恒定體積。
[0179] 制得成品后，則測量其平均直徑、多散射指數(shù)（PI)和表面電荷（電動電位）。下表 1展示了測得的所述參數(shù)值。
[0182] 實(shí)施例1. 4根據(jù)兩步溶劑擴(kuò)散法制備由油性核心組成的魚精蛋白納米膠 囊
[0183] i)制備由乙醇 / 丙酮溶液（比例為 0· 1:4. 5ml 至 0· 25:4. 5ml)、62· 5 μ I Miglyol? 和不同量的磷脂（羥基化卵磷脂或無油卵磷脂）組成的油相；
[0184] ii)在磁力攪拌下將步驟i制得的溶