萆薢總皂苷在制備防治糖尿病腎病藥物中的應用
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術領域，具體涉及萆蘚總皂苷在制備防治糖尿病腎病藥物中的 應用。
【背景技術】：
[0002] 糖尿病腎病（diabetic nephropathy)是指糖尿病微血管病變導致的腎小球硬化， 又稱糖尿病腎小球硬化癥，糖尿病腎病是糖尿病微血管并發(fā)癥之一。糖尿病腎病是糖尿病 最常見的并發(fā)癥，其發(fā)病率隨著糖尿病的快速增長而逐年上升，我國2001年2型糖尿病并 發(fā)腎病患病率為34. 7%，且過去20年糖尿病腎病發(fā)病率一直在增加，糖尿病腎病已經(jīng)成為 引起終末期腎病的主要原因之一。目前，臨床上治療糖尿病腎病的藥物主要有降糖藥物、降 血壓藥物、降血脂藥物和降尿蛋白藥物，這些藥物治療糖尿病腎病的針對性不強，而且不能 修復已經(jīng)損傷的腎臟，因此藥效不明顯。中藥具有多成分、多靶點的優(yōu)勢，因此從中藥中開 發(fā)成分明確、安全有效的治療糖尿病腎病的藥物具有重要的社會意義和經(jīng)濟意義。
[0003] 萆蘚為薯截科植物綿萆蘚Dioscorea septemloba Thunb.、福州薯截 Dioscoreafutchauensis Uline exR.和粉背薯截 Dioscorea hypoglauca Palibin 的干燥 根莖。萆蘚始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其味苦、平，歸腎、胃經(jīng)。萆蘚具有利濕去濁之功效，傳統(tǒng) 上多用于治療膏淋、白濁。
[0004] 研究表明皂苷是萆蘚的主要成分之一，其具有降低尿酸、治療痛風的作用。目前， 未發(fā)現(xiàn)關于萆蘚總皂苷治療糖尿病腎病的文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于提供萆蘚總皂苷在制備防治糖尿病腎病藥物方面的應用。
[0006] 本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)：
[0007] 萆蘚總皂苷在制備降糖藥物中的應用。
[0008] 萆蘚總皂苷在制備防治糖尿病腎病藥物中的應用。
[0009] 所述的萆蘚總皂苷中原薯蕷皂苷、甲基原薯蕷皂苷、纖細皂苷、原纖細皂苷、薯蕷 皂苷和薯蕷皂苷元的含量之和大于50%。
[0010] 所述的萆蘚總皂苷是由如下方法制備得到的：取萆蘚藥材，加入萆蘚6-12倍量的 50% -80%的乙醇回流提取2-3小時，過濾，得到濾液；濾渣再用50% -80%的乙醇回流提 取1-2次，每次2-3小時，過濾，合并濾液，濾液減壓回收至無醇味，加水配制成含0. 1-0. 5g 藥材/ml的藥液，上AB-8大孔樹脂柱，依次用50%的乙醇和70%的乙醇洗脫，棄去50%的 乙醇洗脫液，合并70%的乙醇洗脫液，回收溶劑至近干，減壓干燥得到萆蘚總皂苷。
[0011] 所述的降糖藥物包括萆蘚總皂苷和藥學上可以接受的載體或常規(guī)食用輔料。
[0012] 所述的防治糖尿病腎病藥物包括萆蘚總皂苷和藥學上可以接受的載體或常規(guī)食 用輔料。
[0013] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明有以下有益的技術效果：
[0014] 萆蘚總皂苷具有明顯的降低血糖的作用；萆蘚總皂苷還能夠明顯降低高血糖導致 的腎臟肥大和腎臟纖維化程度。萆蘚總皂苷能夠減少糖尿病導致的尿蛋白排泄量增加，延 緩蛋白尿的形成。萆蘚總皂苷能夠降低糖尿病引起的血清肌酐和尿素氮的升高，改善腎功 能。萆蘚總皂苷能夠降低腎臟炎癥因子的表達，這是其防治糖尿病腎病的途徑之一。萆蘚 總皂苷在防治糖尿病腎病方面效果顯著，具有可觀的開發(fā)和應用價值。
【具體實施方式】：
[0015] 實施例1
[0016] 萆蘚總皂苷的制備方法：
[0017] 取Ikg萆蘚藥材，加入IOL 70%的乙醇回流提取2小時，過濾，得到濾液；濾渣再 用70%的乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，濾液減壓回收至無醇味，加水配 制成含〇. Ig藥材/ml的藥液，以2BV/h的流速上AB-8大孔樹脂柱，依次用50%的乙醇和 70 %的乙醇以2BV/h的流速洗脫，棄去50 %的乙醇洗脫液，收集70 %的乙醇洗脫液，回收溶 劑至近干，減壓干燥得到萆蘚總皂苷63g。
[0018] 實施例2
[0019] 萆蘚總皂苷治療糖尿病腎病的實驗研究
[0020] 1.實驗材料：
[0021] 1.1試藥：鹽酸二甲雙胍片（京豐制藥有限公司）；消渴丸（廣州白云山中一藥業(yè) 有限公司）；STZ(Sigma-Aldrich公司；批號：876232);尿蛋白測定試劑盒（南京建成生物 工程研究所）；尿素氮測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；肌酐測定試劑盒（南京建 成生物工程研究所）；葡萄糖測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；大鼠腫瘤壞死因 子-α (TNF-α)測定試劑盒（Merck Millipore Inc);大鼠白介素1β (IL-Ιβ)測定試劑 盒（Merck Millipore Inc);大鼠白介素 6(IL_6)測定試劑盒（Merck Millipore Inc)。
[0022] I. 2動物：成年雄性SD大鼠（180-220g，動物質(zhì)量證書編號SCKX2008-0010)，購于 南通大學實驗動物中心；喂養(yǎng)環(huán)境維持12h光/暗周期并保持恒定溫度23 ± 2°C，使其自由 飲食飲水。本研究所有程序均依照實驗動物保護原則進行。
[0023] 1. 3儀器：Multiskan FC型酶標儀（賽默飛世爾公司）；750-2型紫外可見分光光 度計（浙江菁華有限公司）；BSA124S型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；0neT 〇UCh UltraEasy型血糖儀及配套試紙（強生醫(yī)療器材有限公司）；PH_1型酸度計（賽多利斯科 學儀器有限公司）。
[0024] 2.實驗方法：
[0025] 2. 1糖尿病模型大鼠的制備
[0026] 大鼠適應性喂養(yǎng)一周后，將實驗大鼠隨機分為空白對照組和模型組?？瞻讓φ战M 大鼠進行正常喂養(yǎng)，模型組大鼠腹腔注射60mg/kg STZ (溶解于pH4. 4、0.0 lM的檸檬酸鈉緩 沖液中），空白對照組大鼠則腹腔注射檸檬酸鈉緩沖液。一周后測定大鼠的血糖值。血糖值 大于16. 7mmol/L者被認定為糖尿病大鼠，用于開展進一步的藥理研究。
[0026] 2. 2分組及給藥
[0027] 將糖尿病大鼠進行隨機分為6組，每組8只。糖尿病模型組：按20mL/kg給予生 理鹽水；二甲雙胍組：每天按200mg/kg的劑量給藥二甲雙胍治療糖尿病大鼠；消渴丸組組： 每天按800mg/kg的劑量給藥消渴丸治療糖尿病大鼠；萆蘚低劑量組：每天按40mg/kg的劑 量給藥萆蘚總皂苷治療糖尿病大鼠；萆蘚高劑量組：每天按80mg/kg的劑量給藥萆蘚總皂 苷治療糖尿病大鼠；萆蘚高劑量組：每天按160mg/kg的劑量給藥萆蘚總皂苷治療糖尿病大 鼠。另外選取8只正常大鼠，給予20mL/kg的生理鹽水作為空白對照組。所有藥物的給藥 方法均為灌胃給藥，給藥周期為12周。
[0027] 2. 3樣本的采集和處理
[0028] 給藥結束前1天將大鼠單獨置于代謝籠中，收集大鼠24h的尿液，測量體積， 以4000rmp離心10min，取上清液備用；最后一次給藥結束后，采用眼底靜脈叢法取血，以 4000rmp離心10min，取大鼠血清備用；取血后處死大鼠，分離大鼠腎臟，稱重，分離大鼠腎 臟皮質(zhì)部，加9倍量生理鹽水，勻漿，以4000rmp離心10min，取上清液備用。
[0028] 2. 4指標的測定
[0029] 血糖值的測定：取大鼠血清，采用葡糖糖氧化酶法，按照試劑盒說明書的要求測定 血糖值。
[0030] 腎臟系數(shù)的測定：稱量大鼠體重和腎臟重量，按如下公式計算腎臟系數(shù)。腎臟系數(shù) =腎臟重量+大鼠體重。
[0031] 血清尿素氮和肌酐含量的測定：取大鼠血清，采用脲酶法，按照試劑盒說明書的要 求測定血清尿素氮含量；采用苦味酸法，按照試劑盒說明書的要求測定血清肌酐含量。
[0032] 24h尿蛋白排泄量的測定：取大鼠尿樣，按照試劑盒說明書的要求測定尿液中蛋 白含量，按如下公式計算24h尿蛋白排泄量。24h尿蛋白排泄量=尿液中蛋白含量X24h尿 液