一種纖連蛋白類(lèi)滴眼液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥學(xué)或保健品領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種含蛋白類(lèi)滴眼液及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N)是一種高分子糖蛋白。纖連蛋白主要功能是介導(dǎo)細(xì) 胞粘著。通過(guò)粘著，纖連蛋白可以通過(guò)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的形狀和細(xì)胞骨架的組 織，促進(jìn)細(xì)胞鋪展。大量的研究和臨床應(yīng)用已證明，F(xiàn)N在傷口的修復(fù)和愈合中起著十分重 要的作用，是促進(jìn)傷口愈合的關(guān)鍵物質(zhì)。國(guó)外已進(jìn)行了人血漿FN在燒傷、創(chuàng)傷、敗血癥、感 染等方面的應(yīng)用研究。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所等單位的研究結(jié)果也證明：將FN 與一些介質(zhì)配合作為外用藥膏治療受機(jī)械創(chuàng)傷和燒傷的大鼠，傷口愈合時(shí)間比對(duì)照組減少 1/3-1/2,無(wú)感染、無(wú)疤痕、無(wú)任何副作用。在眼科方面也有不少研究：對(duì)患有營(yíng)養(yǎng)型角膜潰 瘍的病人，用一些介質(zhì)混合FN，以眼藥形式對(duì)病人進(jìn)行治療，用藥2天后，表皮便開(kāi)始大量 增生。三周后，潰瘍完全消失，未產(chǎn)生疤痕及副作用。將FN應(yīng)用于治療頑固性角膜上皮損 害、角膜炎等眼科疾病獲得顯著療效。成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院做的大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：實(shí)驗(yàn)組較 對(duì)照組再生表皮平均長(zhǎng)89. 27um，差異顯著。雖然FN在眼科上已有研究，但是真正形成滴眼 液的產(chǎn)品很少，不能滿足臨床需求。
[0003] 玻璃酸鈉又名透明質(zhì)酸鈉（SodiumHyaluronate,HA-Na)是由N-乙酰氨基葡萄糖 和葡萄糖醛酸鈉為雙糖單位聚合而成的直鏈大分子。玻璃酸鈉是廣泛存在于人體內(nèi)的生理 活性物質(zhì)，在眼玻璃體、房水、皮膚、關(guān)節(jié)滑液、臍帶等處均有分布。玻璃酸鈉高度親水，可形 成水膜覆蓋于眼表面上，與纖連蛋白結(jié)合，通過(guò)后者的作用促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞的連接和伸 展，從而促進(jìn)結(jié)膜創(chuàng)傷、角膜上皮細(xì)胞的修復(fù)，高濃度的玻璃酸鈉效果更顯著。另外玻璃酸 鈉對(duì)眼具有保濕和潤(rùn)滑作用。
[0004] 角膜損傷及角膜炎癥在人群發(fā)病率中較高，目前常見(jiàn)的治療方法為使用抗生素類(lèi) 滴眼液，包括氯霉素滴眼液、紅霉素滴眼液及以左氧氟沙星為代表的第4代喹諾酮類(lèi)滴眼， 但是濫用抗生素滴眼液的后果非常嚴(yán)重，首先使病原菌耐藥性增加，臨床療效降低，造成疾 病久治不愈，其次是抗生素本身及其輔助成分一定程度上會(huì)影響眼睛的正常生理環(huán)境，干 擾角膜上皮的正常代謝，甚至加重原有的病情，不能長(zhǎng)期使用。因此需要開(kāi)發(fā)一種生物安全 性高、效果明顯、使用方便的滴眼液。
[0005] 本發(fā)明目前做的纖連蛋白及玻璃酸鈉量效關(guān)系研究中，結(jié)果顯示，兩種藥物聯(lián)合 治療頑固性角膜上皮損傷、各種原因的角膜上皮病變、角膜炎可起到雙效用藥效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 1.上述背景材料指出纖連蛋白用于角膜損傷、角膜病變有顯著療效，生物安全性 高，但是目前此類(lèi)滴眼液較少，不能滿足臨床需求。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是創(chuàng)造性的將纖連蛋白和 玻璃酸鈉聯(lián)合使用，不僅能各自發(fā)揮療效，由于二者的協(xié)同作用，能使藥物長(zhǎng)時(shí)間停留于眼 角膜損傷表面，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，大大增強(qiáng)對(duì)眼角膜的修復(fù)、保護(hù)作用，提高療效，安全性 高，制備方法簡(jiǎn)單，不含防腐劑，能長(zhǎng)期使用，大大滿足目前臨床對(duì)此類(lèi)滴眼液的需求。
[0007] 2.本發(fā)明中的案例中，兩種物質(zhì)均可單獨(dú)作為滴眼液劑型，復(fù)方制劑為新型發(fā)明。
[0008] 3. -種復(fù)方制劑，主要成分為纖連蛋白和玻璃酸鈉。該復(fù)方制劑的pH值為6. 0~ 7. 5,優(yōu)選pH值為6. 0~7. 0,纖連蛋白的含量為50yg/ml~500yg/ml，玻璃酸鈉的含量 為0. 1% -0. 3%，所述助劑為等滲調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、注射水。其中pH調(diào)節(jié)劑優(yōu)先選擇磷 酸鹽緩沖液，等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉和氯化鉀，其含量為〇. 3% -0. 8% 1% -0. 3%。
[0009] 4.其制備過(guò)程為：
[0010] (1)量取處方量40% -60%的注射用水依次將磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉、氯化鈉、 氯化鉀倒入容器中，攪拌約15-30分鐘使完全溶解，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，濾液收集。
[0011] (2)準(zhǔn)確稱(chēng)取玻璃酸鈉加入上述濾液中，攪拌槳攪拌3-6小時(shí)，轉(zhuǎn)速100-200rpm， 溫度15-25°C，直至玻璃酸鈉完全溶解。
[0012] (3)加入處方量纖連蛋白，補(bǔ)足注射用水，搖勻，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)菌灌裝， 即得。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1為早期角膜上皮愈合與晚期角膜愈合率比較示意圖；
[0014] 圖2為上皮破損率比較示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但實(shí)施例并非是對(duì)本發(fā)明的限 定。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 纖連蛋白0.lg，玻璃酸鈉2g，磷酸氫二鈉0. 28g，磷酸二氫鈉1. 5g，氯化鈉5. 6g，氯 化鉀1.4g，注射用水1000ml。
[0018] 操作步驟：
[0019] (1)量取400ml的注射用水依次將磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀倒入 容器中，攪拌約15-30分鐘使完全溶解，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，濾液收集。
[0020] (2)準(zhǔn)確稱(chēng)取玻璃酸鈉加入上述濾液中，攪拌3-6小時(shí)，轉(zhuǎn)速100-150rpm，溫度 15-25°C，直至玻璃酸鈉完全溶解。
[0021] (3)加入處方量纖連蛋白，補(bǔ)足注射用水，搖勻，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)菌灌裝， 即得。實(shí)施例2
[0022] 纖連蛋白0. 25g，玻璃酸鈉lg，磷酸氫二鈉0. 5g，磷酸二氫鈉lg，氯化鈉6. 0g，氯化 鉀2g，注射用水1000ml。
[0023] 操作步驟：
[0024] (1)量取500ml的注射用水依次將磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀倒入 容器中，攪拌約15-30分鐘使完全溶解，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，濾液收集。
[0025](2)準(zhǔn)確稱(chēng)取玻璃酸鈉加入上述濾液中，攪拌3-6小時(shí)，轉(zhuǎn)速100-200rpm，溫度 20-25°C，直至玻璃酸鈉完全溶解。
[0026] (3)加入處方量纖連蛋白，補(bǔ)足注射用水，搖勻，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)菌灌裝， 即得。
[0027] 實(shí)施例3
[0028] 纖連蛋白0. 4g，玻璃酸鈉3g，磷酸氫二鈉0. 7g，磷酸二氫鈉0. 4g，氯化鈉7. 0g，氯 化鉀lg，注射用水l〇〇〇ml。
[0029] 操作步驟：
[0030] (1)量取600ml的注射用水依次將磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀倒入 容器中，攪拌約15-30分鐘使完全溶解，0. 2um濾膜過(guò)濾除菌，濾液收集。
[0031] (2)準(zhǔn)確稱(chēng)取玻璃酸鈉加入上述濾液中，攪拌4-6小時(shí)，轉(zhuǎn)速100-200rpm，溫度 20-25 °C，直至玻璃酸鈉完全溶解。
[0032] (3)加入處方量纖連蛋白，補(bǔ)足注射用水，搖勻，0? 2um濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)菌灌裝， 即得。
[0033] 實(shí)施例4穩(wěn)定性考察
[0034] 將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3產(chǎn)品于40°C±2°C、相對(duì)濕度40% ±5%條件下進(jìn) 行加速實(shí)驗(yàn)6個(gè)月，考察其關(guān)鍵指標(biāo)：外觀形狀、蛋白含量、玻璃酸鈉含量、pH值、滲透壓、 黏度的變化情況、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為中國(guó)藥典2010年版。其中，蛋白含量檢測(cè)方法按照中國(guó)藥典 2010年版三部附錄VIB第二法（lowry法）檢測(cè)，玻璃酸鈉含量按照"玻