多聚糖醛酸為載體的活體染色造影劑及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥學(xué)造影劑，具體設(shè)及一種W多聚糖醒酸為載體的活體染色造影劑 及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 淋己系統(tǒng)是由淋己結(jié)和淋己管組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其分布與毛細(xì)血管和靜脈血管大 致并行，遍布人體全身各部位。作為人體免疫系統(tǒng)重要組成部分，淋己系統(tǒng)在病菌的擴(kuò)散 和癌癥的轉(zhuǎn)移上起了關(guān)鍵作用。研究表明，乳腺癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)，前哨淋己結(jié) (SLN)首先發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的可能性最大。轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞將SLN作為蓄積地，沿淋己管擴(kuò)散侵 入周圍各級(jí)淋己結(jié)，最終完成整個(gè)身體的癌細(xì)胞擴(kuò)散。因此，淋己系統(tǒng)造影作為一種醫(yī)療檢 測(cè)手段，對(duì)于癌轉(zhuǎn)移的預(yù)防、診斷、各時(shí)期的評(píng)估界定和治療有著重要意義。
[0003] 近年來，淋己核磁共振成像（MRI)作為一種分辨率高的非創(chuàng)傷性技術(shù)獲得了廣泛 應(yīng)用。由于淋己系統(tǒng)的獨(dú)特的開放式結(jié)構(gòu)和淋己液的單向流動(dòng)，研制淋己系統(tǒng)的祀向性高 的造影劑從而獲得高靈敏度和清晰度的淋己系統(tǒng)MRI圖一直是醫(yī)學(xué)影像學(xué)的研究熱點(diǎn)。目 前臨床使用的常用造影劑主要為小分子含禮造影劑（如馬根維顯），它可W用于血管強(qiáng)化 顯影，但不能對(duì)前哨淋己結(jié)和淋己管特異顯影；臨床上使用另外一種組織特異性磁共振成 像造影劑是超小型超順磁性氧化鐵納米顆?？跾PI0)菲立磁（feridex)，主要用于肝脾磁 共振造影；所W至今，臨床上還沒有一種藥物特異性的用于淋己系統(tǒng)和前哨淋己結(jié)。一系列 新型淋己祀向性MR造影劑的研究可W提高淋己系統(tǒng)繪圖質(zhì)量，為淋己結(jié)的定位、轉(zhuǎn)移瘤分 期的評(píng)估、淋己管道功能性診斷如淋己水腫提供巨大幫助。
[0004] 近10年來，肝、腫瘤、腦部等特殊部位的磁共振造影劑的研究取得了長足的發(fā)展， 如CN101637612公開的一種脂質(zhì)-禮復(fù)合物作為呼吸道磁共振噴霧造影劑，CN101433726公 開的一種W碳納米管為載體的禮磁共振造影劑，CN1943791A公開的W1，4,7，10-四氮雜環(huán) 十二燒為核的樹形大分子為載體連接順磁性金屬制備的用于腫瘤祀向性大分子造影劑。 陽0化]在淋己祀向造影的造影機(jī)理研究方面，申請(qǐng)?zhí)?01010023087. 6公開了W二氧化 娃納米微球包載的禮磁共振造影劑，由于其粒徑范圍在50-200nm之間，可W被動(dòng)地被毛細(xì) 淋己管吸收而不透過毛細(xì)血管。另外，W多糖為載體的淋己祀向造影劑的研究也是此類造 影劑開發(fā)的重要方面，如W右旋糖?。雌暇厶牵檩d體共價(jià)連接含有禮的馨合物（郭 國平等，多糖類大分子順磁性金屬配合物及其合成方法，中國專利申請(qǐng)?zhí)枺?00910063629. X，江濤等，祀向淋己系統(tǒng)造影劑的制備及其動(dòng)物實(shí)驗(yàn).中國科學(xué)：化學(xué)，2011(11):第 1712-1718頁），大分子磁共振造影劑之所W沒有用于臨床，主要是因?yàn)槎趸藜{米微球 和右旋糖?。ㄆ暇厶牵?duì)淋己細(xì)胞和巨隧細(xì)胞都沒有特異性結(jié)合，它們是依據(jù)毛細(xì)淋己管 的上皮細(xì)胞裂隙大于毛細(xì)血管的上皮細(xì)胞裂隙，皮下注射后，通過淋己管內(nèi)外滲透壓的不 同，被動(dòng)的將含有禮馨合物的大分子壓到淋己管中，不具有主動(dòng)祀向性，從而導(dǎo)致該造影劑 在淋己系統(tǒng)內(nèi)的弛豫時(shí)間、信號(hào)強(qiáng)度和造影的持續(xù)時(shí)間不盡如意。甘露糖結(jié)合蛋白（MB巧 屬于外源凝集素類受體蛋白的一種。運(yùn)種高度存在于哺乳動(dòng)物肺吞隧細(xì)胞、肝薄壁細(xì)胞和 非薄壁細(xì)胞、血清和淋己組織中的受體可w結(jié)合末端為甘露糖的糖蛋白，在淋己祀向造影 劑中引入甘露糖基團(tuán)，可W使得造影劑具有主動(dòng)祀向淋己組織的功能，具有廣闊的應(yīng)用前 旦
[0006] 雖然淋己祀向核磁共振造影劑在臨床醫(yī)學(xué)上有重要需求，但近十年的研究，用右 旋糖巧、聚酷胺高分子、聚乙二醇高分子或多膚為載體的制備的淋己系統(tǒng)造影劑都沒有進(jìn) 入新藥審批階段，主要原因是上述使用的載體只能依靠材料的粒徑大小祀向進(jìn)入淋己系 統(tǒng)，卻不具備與淋己細(xì)胞受體的結(jié)合作用，還不能從淋己的特異性受體的角度獲得主動(dòng)祀 向、快速進(jìn)入、專一性強(qiáng)且停留時(shí)間長的造影劑。
[0007] 理想的淋己祀向性造影劑需要滿足=個(gè)條件，快的注射位點(diǎn)清除速率、長的淋己 駐留時(shí)間W及高的淋己結(jié)造影劑積累濃度。主動(dòng)祀向和被動(dòng)祀向兼具的淋己特異性造影劑 才能夠滿足W上特性。2013年美國FDA批準(zhǔn)用于臨床的lymphoseek是一種W淋己巨隧細(xì) 胞的甘露糖受體為主動(dòng)祀向的祀點(diǎn)蛋白，是在右旋糖酢的分子上接有甘露糖片段和含有放 射性同位素得Tc的淋己祀向閃爍核素造影劑，實(shí)現(xiàn)了淋己結(jié)和淋己管的繪圖與定位，該造 影劑特異性結(jié)合于淋己組織中，表明了造影劑中甘露糖基團(tuán)與淋己巨隧細(xì)胞中富含的甘露 糖結(jié)合蛋白（MB巧受體結(jié)合策略的成功應(yīng)用。但是，該核素造影劑雖然已應(yīng)用臨床，但與核 磁共振造影劑相比，仍然具有靈敏度低、放射性元素毒性大的缺點(diǎn)。雖然，CN101862461.B公 開了一種W透明質(zhì)酸為載體的含禮大分子造影劑，希望通過淋己管具有的淋己管透明質(zhì)燒 受體-1LYVE-1(Lymphaticvascularendothelialhyaluronanreceptor-1),達(dá)到主動(dòng)革己 向淋己系統(tǒng)的作用，但是，該專利僅僅公開的透明質(zhì)酸為載體的含禮大分子造影劑的制備 方法，并沒有數(shù)據(jù)支持該造影劑可W主動(dòng)祀向淋己系統(tǒng)，也沒有數(shù)據(jù)支持透明質(zhì)酸與淋己 管透明質(zhì)燒受體-ULYVE-1)特異性結(jié)合。青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院劉鳳桐（新型特異性 染料SW作為頭頸部淋己走行示蹤劑的實(shí)驗(yàn)研究，[碩±學(xué)位論文]:青島大學(xué)，2010.)于新 西蘭大白兔舌下粘膜分別注射甲苯胺藍(lán)（TB)及右旋糖酢（40kDa)結(jié)合甲苯胺藍(lán)的大分子 染料（SW)。解剖結(jié)果顯示，二者均可使雙側(cè)頸部淋己結(jié)和淋己管清晰染色，而SW的染色時(shí) 間更長。組織切片檢查顯示SW在一小時(shí)后大部分由淋己竇進(jìn)入巨隧細(xì)胞內(nèi)。運(yùn)種直觀精 確的活體染料檢查極大便利了淋己清掃術(shù)。但是該顯影劑依然有代謝清除速率過高，不具 有淋己主動(dòng)祀向性等缺點(diǎn)。
[0008] 已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)淋己細(xì)胞表面受體可W與多種酸性多糖結(jié)合（ParishCR，Cell Immunol. 1985Mar;91 (1) :201-14.)，海洋多糖、寡糖是不可多得的免疫活性分子，海洋多糖 來源的聚甘露糖醒酸和聚古羅糖醒酸具有強(qiáng)的提高免疫力和活性，而且，褐藻酸性多糖可 W通過免疫活性增強(qiáng)淋己巨隧細(xì)胞的吞隧能力（酸性憐酸酶ACP)。運(yùn)些海洋褐藻多糖能夠 增強(qiáng)甘露糖受體結(jié)合能力和巨隧細(xì)胞的吞隧能力，為研究發(fā)明主動(dòng)祀向淋己系統(tǒng)的核磁共 振造影劑提供了可能。
[0009] 本發(fā)明所述造影劑，同時(shí)具有甘露糖受體識(shí)別片段，順磁性金屬馨合劑W及活體 染劑基團(tuán)，具有淋己主動(dòng)祀向性，動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)說明，它能準(zhǔn)確確定腫瘤前哨淋己結(jié)狀況， 術(shù)前淋己結(jié)顯像，有助于術(shù)中前哨淋己結(jié)定位和腫瘤精細(xì)外科手術(shù)過程中的淋己清掃術(shù)， 可W廣泛用于乳腺癌、頭頸癌、黑素瘤等術(shù)前前哨淋己結(jié)定位上?？蒞同時(shí)滿足活體檢查W 及核磁共振造影的要求，是優(yōu)秀的雙功能淋己祀向造影劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在不能主動(dòng)祀向、進(jìn)入慢、轉(zhuǎn)移性不強(qiáng)W及停留時(shí)間過 長的問題，提供一種W多聚糖醒酸為載體的活體染色造影劑及其制備方法和應(yīng)用。
[0011] 淋己細(xì)胞表面受體可W與多種酸性多糖結(jié)合，海洋多糖、寡糖是不可多得的免疫 活性分子，海洋多糖來源的聚