病理學(xué)考察。
[0095] 4.結(jié)果
[0096] (1)本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影響
[0097] 表3本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影響（.? ± 、' )
[0098]
[0099]
[0100] 注：各組與模型組比較*P〈0. 05, #P〈0. 01
[0101] 結(jié)果表明：模型組大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平較正常對(duì)照組顯著升高 (?〈0.01)，表明造模成功。本發(fā)明藥物組大鼠血清11^-6、11^-8和了即-(1水平低于模型組 (P〈0. 05或P〈0. 01)，表明各給藥組在一定程度上均可以改善血清細(xì)胞因子水平。
[0102] (3)病理學(xué)檢查正常對(duì)照組大鼠腎小球輪廓、結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)正常；模型組大鼠腎 小管明顯腫脹，有充血，管腔變窄，部分可見蛋白管形，腎小球體積增大，可見炎細(xì)胞浸潤； 各給藥組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)未見明顯異常，腎小球毛細(xì)管有輕微腫脹，基底膜稍有增厚，炎細(xì) 胞浸潤不明顯。
[0103] 5.結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，各給藥組對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠均有較好地治療作用，具 體表現(xiàn)在降低血清炎癥因子水平和改善病理學(xué)特征方面。
[0104] 實(shí)驗(yàn)三、考察本發(fā)明藥物對(duì)高血壓腎病的治療作用
[0105] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自發(fā)性高血壓大鼠 300只，雌雄各半，體重180_220g，購自中國科學(xué)院 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；SD大鼠 10只，雌雄各半，體重180-220g，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心。
[0106] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明23組藥物組合物成分均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前均用〇. 5%羧甲基纖維鈉配成3mg/ml溶液（大黃酸、大黃素、黃芪多糖、黃芪甲 苷、丹參素、紅花苷組藥物濃度與組合物20相同）。
[0107] 3.實(shí)驗(yàn)方法
[0108] 待測得自發(fā)性高血壓大鼠尿微量白蛋白為20-200mg/L時(shí)為自發(fā)性高血壓腎病模 型復(fù)制成功，剔除不合格大鼠，隨機(jī)分為模型組和組合物一至二十三組，取10只SD大鼠做 為對(duì)照組。各給藥組灌胃給予相應(yīng)藥物〇.5ml/10g，模型組和對(duì)照組給予等體積的羧甲基纖 維鈉，每天給藥一次，連續(xù)給藥4周。
[0109] 4.檢測指標(biāo)
[0110] 4. 1測定血壓。給藥前，測定大鼠清醒狀態(tài)下的尾靜脈收縮壓，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，再次測 定大鼠尾靜脈的收縮壓，且每次測三次求平均值。
[0111] 4. 2測定各組大鼠尿液中尿微量白蛋白、尿02微球蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前收集12h尿 液，收集尿液期間禁食，不禁水。
[0112] 4. 3測定血液中血肌酐和尿素氮的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)心臟取血，用濟(jì)南漢方醫(yī)療器 械有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀測定血肌酐和尿素氮。
[0113] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0114] 5. 1組合物對(duì)自發(fā)性高血壓腎病大鼠血壓的影響，見表4。
[0115] 表4本發(fā)明組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)前后自發(fā)性高血壓腎病大鼠血壓的影響！ Γ 土S)
[0116]
[0117]
[0118] 注：與對(duì)照組比較*P < 0· 05#P < 0· 01
[0119] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，空白對(duì)照組與模型組比較，血壓明顯較低。各給藥組 大鼠血壓與模型組相比給藥后明顯降低，且有顯著性差異（p〈0. 01)。表明本發(fā)明藥物組合 物對(duì)原發(fā)性高血壓腎病大鼠的血壓有一定降低作用。
[0120] 5. 2本發(fā)明對(duì)原發(fā)性高血壓腎病大鼠尿液中尿微量白蛋白、尿@2微球蛋白含量的 影響，見表5。
[0121 ] 表5對(duì)高血壓腎病大鼠尿液尿微量白蛋白、尿β 2微球蛋白含量的影響（J 土S ) [0122]
[0123]
[0124] 注：與對(duì)照組比較 *P < 0· 05**P < 0· 01
[0125] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明藥物組合物可明顯減低高血壓腎病大鼠尿微量白蛋白和尿 β 2微球蛋白的含量，與模型組比較有顯著性差異（p〈0. 01)。表明本發(fā)明藥物組合物對(duì)原 發(fā)性高血壓腎病大鼠的腎臟有一定保護(hù)作用。
[0126] 5. 3本發(fā)明對(duì)原發(fā)性高血壓腎病大鼠血液中血肌酐和尿素氮的影響，見表6。
[0127] 表6本發(fā)明對(duì)原發(fā)性高血壓腎病大鼠血肌酐和尿素氮的影響（J 土S)
[0128]
CN 105012411 A ^ -n 1以1丫 貝
[0129]
[0130] 注：與模型組比較 *P < 0· 05**P < 0· 01
[0131] 結(jié)果表明：本發(fā)明藥物組合物可明顯減低高血壓腎病大鼠血肌酐和尿素氮的含 量，與模型組比較有顯著性差異（P〈〇. 01)。表明本發(fā)明藥物組合物對(duì)原發(fā)性高血壓腎病大 鼠的腎臟有一定保護(hù)作用。
[0132] 實(shí)驗(yàn)四、考察本發(fā)明藥物的抗腫瘤作用
[0133] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/C小白鼠340只，雌雄各半，體重18_22g，購自中國科學(xué)院上海 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0134] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明23組藥物組合物成分均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前均用〇. 5%羧甲基纖維鈉配成3mg/ml溶液（大黃酸、大黃素、黃芪多糖、黃芪甲 苷、丹參素、紅花苷組藥物濃度與組合物20相同）。鼠肝癌細(xì)胞株H22由陜西中醫(yī)學(xué)院藥理 學(xué)研究室惠贈(zèng)。
[0135] 3.實(shí)驗(yàn)方法
[0136] 建立腫瘤模型自種鼠腹腔內(nèi)小心抽出接種H22細(xì)胞株的腹水，轉(zhuǎn)移接種到另一只 小鼠腹腔，傳代三次。取接種H22細(xì)胞株并傳代三次的小鼠，無菌條件下用5ml注射器抽吸 出l-2ml牛奶狀、較粘稠的腹水，先用0. 4%苔盼藍(lán)染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)活細(xì)胞率>90%，然 后以滅菌D-Hanks液稀釋調(diào)整腫瘤細(xì)胞濃度為I. 0 X IO7個(gè)/ml。在其余小鼠右前肢腋窩和 皮下接種調(diào)好濃度的腫瘤細(xì)胞，注射量為〇. 15ml/只。
[0137] 給藥方法建立模型72小時(shí)后，將實(shí)體瘤小鼠隨機(jī)分為30組，即羧甲基纖維鈉對(duì)照 組、組合物一至二十三組，每組10只。各給藥組灌胃給于相應(yīng)藥物0. 5ml/10g，羧甲基纖維 鈉對(duì)照組給予等體積的羧甲基纖維鈉，每天一次，連續(xù)給藥2周。每天記錄小鼠死亡數(shù)，并 稱量不同給藥組小鼠體重。
[0138] 抗腫瘤活性評(píng)價(jià)給藥期間每天稱量動(dòng)物體重，末次給藥48h后處死動(dòng)物，剝離腫 瘤，稱重，置于10 %福爾馬林溶液固定后，進(jìn)行病理切片。
[0139] 按以下公式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤生長的抑制率。腫瘤生長抑制率=(對(duì)照組平均瘤 重一給藥組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重X 100%。
[0140] 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0141] 本發(fā)明藥物體內(nèi)抗腫瘤活性結(jié)果如下表。
[0142] 表7體內(nèi)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0143]
[0144]
[0145] 注：各組與對(duì)照組比較*P〈0. 05, #P〈0. 01
[0146] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：不同給藥組與對(duì)照組相比可明顯抑制腫瘤活性，均有顯著性差異 (P〈0. 05)，表明本發(fā)明藥物具有抗腫瘤的作用。
[0147] 5.結(jié)論本發(fā)明藥物對(duì)腫瘤有抑制作用，可用于腫瘤疾病的治療。
[0148] 實(shí)驗(yàn)五、本發(fā)明藥物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用
[0149] 1.實(shí)驗(yàn)材料人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株（內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304)購自上海拜力生物科 技有限公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清均購自Gibco公司。MDA、SOD試劑盒購自南京建 成生物有限公司；H 2O2購于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；胰酶、四氮唑蘭（MTT)購自美國 SIGMA公司。
[0150] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明23組藥物組合物成分均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前用二甲基亞砜配成3mg/ml溶液（大黃酸、大黃素、黃芪多糖、黃芪甲苷、丹參素、 紅花苷組藥物濃度與組合物20相同），備用。
[0151] 3.實(shí)驗(yàn)方法
[0152] 細(xì)胞培養(yǎng)將人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞置于混有2mmol/L L -谷氨酰胺、100μ g/ml 肝素、100U/ml青霉素、30 μ g/ml內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和10 %胎牛血清的1640培養(yǎng)液中，于 37°