毛木耳多糖提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及毛木耳多糖提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，對來自體內(nèi)和體外的許多非營養(yǎng)性物 質(zhì)如各種藥物、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物，具有生物轉(zhuǎn)化作用，通過新陳代謝將它們徹 底分解或以原形排出體外。進(jìn)入體內(nèi)的酒精90%在肝臟代謝，酒精對肝臟有直接損害作 用，其損傷機(jī)理是由酒精在肝細(xì)胞內(nèi)代謝引起的。如果長期過度飲酒，可使肝細(xì)胞反復(fù)發(fā) 生脂肪變性、壞死，最終發(fā)展為酒精性肝炎和酒精性肝硬化，嚴(yán)重者危及生命安全。對于預(yù) 防和治療酒精性肝損傷，除了戒酒之外，還應(yīng)多食用一些富含高蛋白、維生素和抗氧化的食 物，增加對肝臟的保護(hù)。
[0003] 毛木耳，學(xué)名（Auricularia Polytricha)又稱白背毛木耳，屬于擔(dān)子菌門、層菌 綱、木耳目、木耳科、木耳屬中的毛木耳種。毛木耳富含蛋白質(zhì)、多種礦物質(zhì)元素和維生素， 干品中氨基酸的總量為4. 68%，有多種人體必需的氨基酸，占所含氨基酸總量的42. 31%。 毛木耳含有豐富的多糖，有文獻(xiàn)報(bào)道，毛木耳多糖對心血管系統(tǒng)有一定的影響作用，同時(shí)具 有增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗氧化、抗衰老、保護(hù)機(jī)體細(xì)胞、改善心臟功能、抑制腫瘤、抗癌等廣泛的 藥理作用，在食療保健方面日益為人們所重視。開發(fā)毛木耳的深加工產(chǎn)品可以改善毛木耳 在目前市場上低廉的地位，增加產(chǎn)品的附加值，將農(nóng)業(yè)產(chǎn)品向保健食品方向發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何緩解酒精性肝損傷。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了下述A或B的應(yīng)用：
[0006] A、毛木耳多糖提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷廣品中的應(yīng)用；
[0007] B、毛木耳多糖提取物在制備緩解酒精性肝損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用；
[0008] 所述毛木耳多糖提取物由下述方法制備：用乙醇沉淀毛木耳子實(shí)體水提液，收集 沉淀，得到所述毛木耳多糖提取物；所述毛木耳子實(shí)體水提液是用水從毛木耳子實(shí)體中提 取出來的水溶性物質(zhì)。
[0009] 上述應(yīng)用中，所述乙醇可為無水乙醇。
[0010] 上述應(yīng)用中，所述收集沉淀可采用離心的方法進(jìn)行，所述離心的條件可為 6000g-15000g離心20-30分鐘，如6000g離心20分鐘。
[0011] 上述應(yīng)用中，所述沉淀經(jīng)干燥得到所述毛木耳多糖提取物。所述干燥可在60-70°C 進(jìn)行，具體可為60°C。
[0012] 上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體水提液按照包括如下步驟的方法制備：用水浸泡 粉碎后的毛木耳子實(shí)體8-12小時(shí)（如8小時(shí)），加熱至90-100°C (如90°C，或使水沸騰） 保持3-4小時(shí)（如4小時(shí)），收集水溶性物質(zhì)，該水溶性物質(zhì)即為所述毛木耳子實(shí)體水提液。
[0013] 上述應(yīng)用中，所述用水浸泡粉碎后的毛木耳子實(shí)體可采用4_25°C(如4°C)的水。
[0014] 上述應(yīng)用中，所述水可為去離子水。
[0015] 上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體可為新鮮的子實(shí)體也可為干燥的子實(shí)體。
[0016]上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體和水的質(zhì)量比可為I :(25-60)，如1 :25,所述毛木 耳子實(shí)體的質(zhì)量為干重。
[0017] 上述應(yīng)用中，粉碎后的毛木耳子實(shí)體的粒徑可為100目-1cm，如100目。
[0018] 上述毛木耳子實(shí)體可為新鮮的子實(shí)體也可為干燥的子實(shí)體。
[0019] 上述干燥的子實(shí)體是將新鮮的毛木耳子實(shí)體在常溫（如20-25°C)下干燥得到的。
[0020] 上述應(yīng)用中，所述收集水溶性物質(zhì)可采用離心的方法進(jìn)行，所述離心采用的離心 力可為6000g-15000g (如6000g)，離心時(shí)間可為20-30分鐘（如30分鐘）。
[0021] 上述應(yīng)用中，所述緩解酒精性肝細(xì)胞損傷為下述1)-5)中的至少一種：
[0022] 1)提高肝細(xì)胞的存活率；
[0023] 2)降低肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯含量；
[0024] 3)降低肝細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量；
[0025] 4)降低肝細(xì)胞對谷丙轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0026]5)降低肝細(xì)胞對谷草轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0027] 所述緩解酒精性肝損傷為下述1) -5)中的至少一種：
[0028] 1)提高肝細(xì)胞的存活率；
[0029] 2)降低肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯含量；
[0030] 3)降低肝細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量；
[0031] 4)降低肝細(xì)胞對谷丙轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0032]5)降低肝細(xì)胞對谷草轉(zhuǎn)氨酶的釋放量。
[0033] 上文中，所述酒精性肝細(xì)胞損傷具體可為人酒精性肝細(xì)胞損傷，所述酒精性肝損 傷具體可為人酒精性肝損傷。所述肝細(xì)胞具體可為L-02細(xì)胞。
[0034] 實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的方法制備的毛木耳多糖提取物中多糖濃度低于50 y g/mL 時(shí)對于L-02細(xì)胞無細(xì)胞毒性，能夠提升酒精性損傷L-02細(xì)胞的存活率，具有保肝的作用， 可用于緩解酒精性肝細(xì)胞損傷。當(dāng)培養(yǎng)液中毛木耳多糖提取物中多糖濃度為40 y g/mL時(shí)， 治療組L-02細(xì)胞存活率最高，可以達(dá)到84. 79%，比損傷模型組（細(xì)胞存活率為47. 39% ) 的細(xì)胞存活率提高37. 4%。毛木耳多糖提取物可以有效地降低L-02細(xì)胞內(nèi)TG和ROS的含 量，使治療組與損傷模型組能夠形成統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異（P〈〇. 05)。同時(shí)，毛木耳多糖提 取物還可以減少L-02細(xì)胞損傷，降低胞內(nèi)酶ALT和AST的釋放，保護(hù)L-02細(xì)胞的完整性， 具有保肝的作用。治療組L-02細(xì)胞內(nèi)的TG含量（617±52ymol/mg蛋白質(zhì)）比損傷模型 組（2627±11 ymol/mg蛋白質(zhì)）降低了 76. 51% ;治療組L-02細(xì)胞內(nèi)的ROS的平均熒光強(qiáng) 度（5258±582)比損傷模型組（10548±319)降低了 50. 15%;治療組L-02細(xì)胞釋放的ALT 含量（10628±437U/mg蛋白質(zhì)）比損傷模型組（16544±468U/mg蛋白質(zhì)）降低了 35. 76%; 治療組L-02細(xì)胞釋放的AST含量（6389±374U/mg蛋白質(zhì)）比損傷模型組（15072±579U/ mg蛋白質(zhì)）降低了 57. 61%。
【附圖說明】
[0035] 圖1為不同濃度乙醇對L-02細(xì)胞活性的影響。
[0036] 圖2為毛木耳多糖提取物的細(xì)胞毒性檢測。
[0037] 圖3為毛木耳多糖提取物保護(hù)酒精性損傷L-02細(xì)胞的效果圖。圖中損傷組為損 傷模型組，10、20、30、40、50分別為1-5號含乙醇和毛木耳多糖提取物的培養(yǎng)液的治療組。
[0038] 其中，圖2中的多糖濃度為毛木耳多糖提取物中的多糖在培養(yǎng)液中的終濃度。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0040] 下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0041] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0042]下述實(shí)施例中的毛木耳（Auricularia polytricha(Mont. ) Sacc. ) 3 號（趙爽 等.毛木耳菌絲體產(chǎn)多糖發(fā)酵條件的優(yōu)化.食品科技.2012年第37卷第4期）公眾可從 北京市農(nóng)林科學(xué)院獲得該菌種，以重復(fù)本申請實(shí)驗(yàn)。
[0043] 下述實(shí)施例中的L-02細(xì)胞株（人肝細(xì)胞）為中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫的產(chǎn)品。
[0044] 下述實(shí)施例中的RPMI 1640培養(yǎng)液為Invitrogen公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為 11875-093。
[0045] 下述實(shí)施例中的BCA蛋白定量試劑盒為北京博邁德生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品 目錄號為PP0103。
[0046] 下述實(shí)施例中的組織甘油三酯測定試劑盒為北京普利萊基因技術(shù)有限公司產(chǎn)品， 產(chǎn)品目錄號為E1013。
[0047] 下述實(shí)施例中的組織內(nèi)活性氧測定試劑盒為北京普利萊基因技術(shù)有限公司產(chǎn)品， 產(chǎn)品目錄號為C1300。
[0048] 下述實(shí)施例中