松茸高產(chǎn)菌株(t35)在抗氧化藥物中的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明提供了松茸高產(chǎn)菌株(T35)在抗氧化藥物中的醫(yī)藥用途，屬于中藥和保健品技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]抗氧化是指抗氧化自由基的簡(jiǎn)稱，英文Ant1-Oxidant。人體因?yàn)榕c外界的持續(xù)接觸，包括呼吸(氧化反應(yīng))、外界污染、放射線照射等因素不斷的在人體體內(nèi)產(chǎn)生自由基?？寡趸锞褪侨魏我缘蜐舛却嬖诰湍苡行б种谱杂苫难趸磻?yīng)的物質(zhì)，其作用機(jī)理可以是直接作用在自由基，或是間接消耗掉容易生成自由基的物質(zhì)，防止發(fā)生進(jìn)一步反應(yīng)。人體在不可避免地產(chǎn)生自由基的同時(shí)，也在自然產(chǎn)生著抵抗自由基的抗氧化物質(zhì)，以抵消自由基對(duì)人體細(xì)胞的氧化攻擊。研宄證明，人體的抗氧化系統(tǒng)是一個(gè)可與免疫系統(tǒng)相比擬的、具有完善和復(fù)雜功能的系統(tǒng)，機(jī)體抗氧化的能力越強(qiáng)，就越健康，生命也越長。科學(xué)研宄表明，癌癥、衰老或其它疾病大都與過量自由基的產(chǎn)生有關(guān)聯(lián)。研宄抗氧化可以有效克服其所帶來的危害，所以抗氧化被保健品、化妝品企業(yè)列為主要的研發(fā)方向之一，也是市場(chǎng)最重要的功能性訴求之一。
[0003]人體的抗氧化物質(zhì)有自身合成的，也有由食物供給的。酶和非酶抗氧化物質(zhì)在保護(hù)由于運(yùn)動(dòng)引起的過氧化損傷中起至關(guān)重要的作用。補(bǔ)充抗氧化物質(zhì)有利于運(yùn)動(dòng)機(jī)體減少自由基的產(chǎn)生或加速其清除，以對(duì)抗自由基的副作用，因而對(duì)一般人和運(yùn)動(dòng)員的健康都有益，可能延緩運(yùn)動(dòng)性疲勞發(fā)生和加快體能恢復(fù)，年齡大的體力活動(dòng)者比年輕者服用抗氧化劑效果更好。
[0004]松鸞(Tricholoma matsutake Sing.)屬擔(dān)子菌、擔(dān)子菌綱、傘菌目、口蘑科、口蘑屬，又名杉蕈、松菇、合菌、臺(tái)菌、松菌。松茸使用歷史悠久，全球分布廣泛，肉白嫩肥厚，質(zhì)地細(xì)密，有濃郁的特殊香氣，其營養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、多種維生素、碳水化合物和礦物質(zhì)等有效成分，是名貴的野生菌類。松茸的主要生物活性物質(zhì)是多糖、多肽和留醇等，藥理作用方面主要集中在松茸的抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)功能的研宄，對(duì)于松茸抗氧化功效仍處于研宄的空白。
[0005]目前松茸主要來自野生采摘，人工栽培十分困難，這就給松茸產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來很大的障礙。因此，采用現(xiàn)代生物工程發(fā)酵技術(shù)研宄松茸高產(chǎn)菌株(T35)在制備抗氧化功能性保健品及藥品的應(yīng)用具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明公開了一種松茸高產(chǎn)菌株(T35)在抗氧化藥物中的醫(yī)藥用途，提供了松茸高產(chǎn)菌株(T35)的新用途，具有明顯的醫(yī)療效果。
[0007]本發(fā)明所述的松茸高產(chǎn)菌株(T35)以松茸菌株(CGMCC5.793)為原始菌株，經(jīng)誘變篩選獲得，在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏地址:武漢大學(xué)，保藏日期:2014年12月26 日，保藏號(hào)為 CCTCC Ν0:Μ 2014671，分類命名為松茸 T35 Tricholoma matsutake T35。
[0008]本發(fā)明所述的松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉的制備方法如下:
將松茸高產(chǎn)菌株(T35)搖瓶培養(yǎng)液按5%~7%接種量接入60L液體發(fā)酵培養(yǎng)基中(葡萄糖 18~25g/L，酵母浸粉 15~25g/L，KH2P04 0.3-0.6g/L，MgS07.H20 0.3-0.6g/L，維生素 BI
0.05-0.3g/L，于10L發(fā)酵罐中進(jìn)行液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，26°C，150r/min，通氣量3_5L/min，初始PH為5.0，培養(yǎng)48~72h，即得松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液。
[0009]將松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液，以4°C 4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘，棄掉上清，保留沉淀。將沉淀經(jīng)過凍干或者噴霧干燥去除水分，再經(jīng)粉碎研磨制成粉末，即獲得松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉。
[0010]采用小鼠運(yùn)動(dòng)氧化模型對(duì)松茸高產(chǎn)菌株(T35)抗氧化活性進(jìn)行研宄，其中小鼠運(yùn)動(dòng)氧化模型是指給藥一定周期后小鼠強(qiáng)迫30min定時(shí)游泳，檢測(cè)小鼠定時(shí)游泳后各生理指標(biāo)(詳見試驗(yàn)例1~3)，本發(fā)明驗(yàn)證松茸高產(chǎn)菌株(T35)具有提高機(jī)體抗氧化的功效。主要的功效學(xué)作用包括以下部分:
顯著增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)后血液中的抗氧化物活性，降低血液中氧化物含量；
顯著增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)后肌肉中的抗氧化物活性，降低肌肉中氧化物含量；
顯著增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)后肝臟中的抗氧化物活性，降低肝臟中氧化物含量。
[0011]需要檢測(cè)的生理指標(biāo)為ATP含量、LDH (乳酸脫氫酶)活性、MDA (丙二醛)含量、GSH-Px (谷胱甘肽過氧化物酶)活性、SOD (超氧化物歧化酶)活性、糖原含量，其中LDH、GSH-Px,SOD為抗氧化物酶，ATP和糖原為供能物質(zhì)，MDA為自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，表示自由基破壞組織的強(qiáng)度。
[0012]本發(fā)明所述的松茸高產(chǎn)菌株(T35)可用于制備抗氧化保健食品和藥品。所述的保健食品包括日常食品加工工藝可以制成的各種食物形式，如:糕點(diǎn)、飲料、糖果等；藥物包括常規(guī)藥物制備工藝制成能夠在臨床上使用的藥物劑型，如:片劑、膠囊劑、口服液、丸劑、顆粒劑、散劑等各類長效制劑和復(fù)方制劑。
[0013]本發(fā)明的積極效果在于:對(duì)松茸菌進(jìn)行誘變獲得松茸高產(chǎn)菌株(T35)，并采用現(xiàn)代生物發(fā)酵技術(shù)獲得大量菌粉，方法簡(jiǎn)便可行，成本低廉，抗氧化效果顯著，無毒副作用，適用于抗氧化保健食品和藥物的研發(fā)和制備，打破松茸野生資源匱乏的發(fā)展屏障，具有巨大的市場(chǎng)前景。
【附圖說明】
[0014]圖1 (A)、(B)、(C)、(D)、(E):分別為小鼠定時(shí)游泳后血液中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性；
圖2(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分別為小鼠定時(shí)游泳后肌肉中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肌糖原含量；
圖3(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F):分別為小鼠定時(shí)游泳后肝臟中ATP含量、LDH活性、MDA含量、GSH-Px活性、SOD活性、肝糖原含量。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為了便于理解本發(fā)明，特例舉以下實(shí)施例。其作用被理解為是對(duì)本發(fā)明的闡釋而非對(duì)本發(fā)明的任何形式的限制。
[0016]實(shí)施例1
松茸高產(chǎn)菌株(T35)液體深層發(fā)酵制備松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液將松茸高產(chǎn)菌株(T35)培養(yǎng)液按7%接種量接入60L液體發(fā)酵培養(yǎng)基中(葡萄糖20g/L，酵母浸粉 15g/L，KH2P04 0.5g/L，MgS07.H20 0.5g/L，維生素 BI 0.2g/L)，于 100L 發(fā)酵罐中進(jìn)行液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，26°C，150r/min，通氣量4L/min，初始pH為5.0，培養(yǎng)48h，即得松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液。
[0017]實(shí)施例2
真空冷凍干燥制備松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉
將松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液，以4500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄上清，保留沉淀，采用真空冷凍干燥技術(shù)除去水分。將濕菌粉涂成10_厚度在_26°C進(jìn)行預(yù)凍8小時(shí)，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，分為四個(gè)階段:第一階段在_25°C干燥10 h，第二階段在-5°C干燥10 h，第三階段在15°C干燥12 h，第四階段在40°C干燥8 ho干燥后的松茸菌用粉碎機(jī)粉碎過300目篩得到松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉。
[0018]實(shí)施例3
噴霧干燥制備松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉
將松茸高產(chǎn)菌株(T35)發(fā)酵液，以4500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄上清，保留沉淀，采用噴霧干燥技術(shù)制備菌粉。首先對(duì)松茸菌進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)溫度為60°C，均質(zhì)壓力為20MPa，均質(zhì)后過300目過濾布。然后對(duì)松茸菌均質(zhì)液噴霧干燥，噴霧干燥參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度150°C，熱空氣流量為36m3/h，壓縮空氣流量為490L/h，進(jìn)料量4.0*180mL/h，出風(fēng)溫度預(yù)測(cè)值為60°C，出料口收集松菌粉，既得松茸松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉。
[0019]以下試驗(yàn)表明本發(fā)明松茸高產(chǎn)菌株(T35)抗氧化的醫(yī)用用途試驗(yàn)例1:小鼠定時(shí)游泳后血液中生理指標(biāo)檢測(cè)
用去離子水配制5%羧甲基纖維素鈉溶液，其中羧甲基纖維素鈉作為助溶劑并無實(shí)際藥理作用。將實(shí)施例1~實(shí)施例3制備的松茸高產(chǎn)菌株(T35)菌粉用5%羧甲基纖維素鈉溶液配成濃度為0.03g/L、0.1g/L、0.2g/L低劑量組、中劑量組、高劑量組菌液。受試小鼠井口灌胃給藥，劑量為20g體重受試小鼠經(jīng)口灌胃劑量為0