相體積大于有機相的體積，是為了進一 步得到可以在水環(huán)境中穩(wěn)定存在的納米粒子。
[0037] 在本發(fā)明所述兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子的制備方法中，步驟（4)所 述除去有機溶劑采用現(xiàn)有技術實現(xiàn)，例如用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機溶劑；步驟（4)所述分離 采用現(xiàn)有技術實現(xiàn)，例如利用離心分離的方法。
[0038] 本發(fā)明中所用原料，例如兩親性嵌段聚合物以及鐵鰲合劑、表面活性劑以及有機 溶劑等均可以商業(yè)購買到。
[0039] 另一方面，本發(fā)明提供了一種鐵螯合劑納米藥物，所述鐵螯合劑納米藥物包含本 發(fā)明所述的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子。
[0040] 另一方面，本發(fā)明提供了所述兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子在制備用于 治療鐵過載疾病的藥物中的應用。
[0041] 本發(fā)明的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子能夠?qū)㈣F螯合劑靶向性地運輸 到靶器官中，利用緩慢釋放的鐵螯合劑治療鐵過載疾病，尤其是繼發(fā)性鐵過載疾病，如輸血 性鐵過載及β型地中海貧血，載鐵螯合劑的納米顆?？梢灾苯影邢蛑饕闻K、脾臟等沉積 鐵元素的巨噬細胞，使治療有的放矢。
[0042] 相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0043] 本發(fā)明采用兩次乳化的方法制備了包載有鐵螯合劑的兩親性聚合物納米粒子，得 到10-300nm的納米粒子，粒度大小適合在臟器內(nèi)富集，性質(zhì)穩(wěn)定并且去鐵胺包載率較高， 該納米粒子將鐵螯合劑包裹在兩親性聚合物載體中，提高了鐵螯合劑在體內(nèi)血液循環(huán)中的 半衰期，使鐵螯合劑能夠靶向運輸至靶器官中，可以利用緩慢釋放的鐵螯合劑進行鐵過載 疾病的治療，減緩去鐵胺在人體內(nèi)的代謝速率，提高了藥物的療效，在DFO濃度為20-80 μ M 時，NPs-DFO組細胞的存活率均在70%以上，相對于游離的DFO,顯著降低了對細胞的毒性， 在DFO濃度為80 μΜ時，NPs-DFO使得小鼠單核巨噬細胞中總鐵含量降低至10 μ g/101Q個 細胞左右，相對于游離的DF0(280 μ g/101(l個細胞），顯著提高了 DFO對細胞內(nèi)鐵的祛除效 率，提高治療可行性，減輕醫(yī)患負擔。而且本發(fā)明的制備方法簡單，成本低，所采用的材料毒 性小，安全性高，可實驗室小規(guī)模生產(chǎn)，也可工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0044] 圖1是檢測實施例1制備的包載DFO的納米粒子中DFO時得到的紫外光譜掃描 圖；
[0045] 圖2是實施例1制備的包載DFO的納米粒子的粒徑分布圖；
[0046] 圖3是實施例1制備的包載DFO的納米粒子透射電鏡（TEM)圖；
[0047] 圖4是實施例1制備的包載DFO的納米粒子體系在不同pH值下放置0-3天的粒 徑隨時間的變化圖；
[0048] 圖5是在兩親性聚合物與DFO的不同質(zhì)量比下，納米粒子對DFO的包封率圖；
[0049] 圖6是在pH 4. 4與pH 7. 4條件下，實施例1制備的納米粒子中DFO的釋放曲線；
[0050] 圖7是在不同DFO濃度下，游離DFO與包載DFO的納米粒子（NPs-DFO)對細胞存 活率影響，其中*表示P〈〇. 05, η = 5 ;
[0051] 圖8是實施例6中用游離DFO與包載DFO的納米粒子（NPs-DFO)培養(yǎng)細胞后細胞 中總鐵含量的結(jié)果圖；
[0052] 圖9是實施例7中用蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞內(nèi)鐵水平相關鐵蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 1表達量變化的結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0053] 下面通過【具體實施方式】來進一步說明本發(fā)明的技術方案。本領域技術人員應該明 了，所述實施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應視為對本發(fā)明的具體限制。
[0054] 實施例1
[0055] 在本實施例中，通過以下方法制備包載去鐵胺的兩親性聚合物納米粒子 (NPs-DFO)，所述方法具體包括以下步驟：
[0056] (1)將20mg兩親性聚合物mPEG-PLGA(購自濟南岱罡生物工程有限公司， mPEG-PLGA分子中mPEG片段的分子量為5000, PLGA中乳酸和羥基乙酸的片段摩爾比為 75:25，mPEG和PLGA的質(zhì)量比為1:4)溶于2mL二氯甲烷中，向其中加入0. 5mL 2mg/mL去 鐵胺（DFO)的水溶液（兩親性聚合物與DFO的質(zhì)量比為20:1，有機溶劑與去鐵胺水溶液體 積比為4:1)，利用超聲波細胞破碎儀在250W功率下超聲5分鐘，形成第一乳液；
[0057] (2)將步驟⑴制備的第一乳液溶解在二氯甲烷中，緩慢加入4mL 2%的聚乙烯醇 (PVA)水溶液中，利用超聲波細胞破碎儀在200W功率下超聲5min，形成第二乳液；
[0058] (3)將步驟⑵形成的第二乳液緩慢加入IOmL的0. 6%的PVA的水溶液中，攪拌 IOmin ；
[0059] (4)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機溶劑二氯甲燒，得到納米粒子懸液，13000rpm離心分 離10分鐘，得到包載鐵螯合劑DFO的兩親性聚合物納米粒子。
[0060] 對比例1
[0061] 該對比例與實施例1不同的是在制備過程中不加入去鐵胺，除此之外其他條件與 實施例1相同，制備成空載的mPEG-PLGA納米粒子（NPs-B)。
[0062] 對實施例1制備的納米粒子是否成功包載DFO進行檢測，方法為用二氯甲烷溶解 制備得到的納米粒子，則包裹的DFO會從納米粒子中釋放出來，而后加入標準鐵進行紫外 光譜掃描，如果納米粒子中包裹了 DF0,則DFO會與鐵螯合從而在430nm處出現(xiàn)螯合物的吸 收峰。結(jié)果示于圖1中，由圖1可以得出，實施例1制備的兩親性聚合物納米粒子成功包載 了鐵螯合劑DFO。
[0063] 利用納米粒度及Zeta電位分析儀（Zetasizer Nano ZS，英國馬爾文儀器有限公 司）表征實施例1制備的納米粒子（NPs-DFO)的粒徑以及表面電荷，并利用200K六硼化鑭 透射電子顯微鏡（Tecnai G2 20S-TWIN，美國FEI公司）表征NPs-DFO的粒徑和形態(tài)，圖2 為動態(tài)光散射儀表征得到的粒徑結(jié)果，圖3為NPs-DFO的透射電鏡結(jié)果，表1中示出了實施 例1和對比例1制備的納米粒子的經(jīng)動態(tài)光散射儀表征得到的平均粒徑和表面電荷，由圖2 可以看出NPs-DFO的粒徑分布在60nm-300nm之間，圖3可以看出，實施例1制備的NPs-DFO 為核殼雙層結(jié)構(gòu)的納米粒子，小的粒徑為幾十納米，大的粒徑在160nm左右，這與動態(tài)光散 射的結(jié)果相符。表1中給出了 NPs-DFO的平均粒徑為158. 15±1. 62nm，相對于NPs-B，粒 徑稍有減小，但是變化不大，說明DFO的包載不會造成粒徑的增大；NPs-DFO的Zeta電位 為-17. 64±0. 74mV，因此，表明該溶液穩(wěn)定性較好。
[0064] 表1 (結(jié)果值為平均值土SD，η = 3)
[0065]
【主權項】
1. 一種兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子，其特征在于，所述納米粒子是以兩親 性聚合物為載體包載水溶性鐵螯合劑形成的納米粒子。
2. 根據(jù)權利要求1所述的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子，其特征在于，所述 兩親性聚合物為PEG-PLA、PEG-PCL或mPEG-PLGA中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為 mPEG-PLGA ； 優(yōu)選地，所述鐵螯合劑為去鐵胺。
3. 根據(jù)權利要求1或2所述的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子的制備方法，其 特征在于，所述方法以兩親性聚合物為載體，通過復乳法包載水溶性鐵螯合劑形成納米粒 子。
4. 根據(jù)權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： (1)將兩親性聚合物溶于有機溶劑中，向其中加入鐵螯合劑的水溶液，超聲，形成第一 乳液； ⑵將步驟⑴制備的第一乳液加入表面活性劑的水溶液中，超聲，形成第二乳液； (3) 將步驟（2)形成的第二乳液加入表面活性劑的水溶液中，攪拌； (4) 除去有機溶劑，得到納米粒子懸液，分離，得到所述兩親性聚合物包載鐵螯合劑的 納米粒子。
5. 根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述兩親性聚合物與鐵螯合 劑的質(zhì)量比為4:1-150:1，優(yōu)選為10:1-40:1 ; 優(yōu)選地，步驟（1)所述有機溶劑為二氯甲烷、二甲基亞砜、四氫呋喃或丙酮中的任意一 種或至少兩種的組合； 優(yōu)選地，步驟（1)所述有機溶劑與鐵螯合劑的水溶液的體積比為4:1-10:1 ; 優(yōu)選地，步驟（1)所述超聲利用超聲波細胞破碎儀來實現(xiàn)，功率為190W-380W，超聲時 間為 5-10min。
6. 根據(jù)權利要求4或5所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)和步驟（3)所述表面活 性劑為聚乙烯醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯醚嵌段共聚物、聚山梨酯、十二烷基磺酸鈉或十六烷 基三甲基氯化銨中的任意一種或至少兩種的組合； 優(yōu)選地，步驟（2)所述表面活性劑水溶液的濃度為1% -5% ; 優(yōu)選地，步驟（2)所述表面活性劑的水溶液與步驟（1)所述有機溶劑的體積比為 2:1-5:1〇
7. 根據(jù)權利要求4-6中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述超聲利用超 聲波細胞破碎儀來實現(xiàn)，功率為190W-285W，超聲時間為5-10min。
8. 根據(jù)權利要求4-7中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟（3)所述表面活性劑 水溶液的濃度為0.2% -1% ; 優(yōu)選地，步驟（3)所述表面活性劑水溶液與步驟⑴所述有機溶劑的體積比為 5:1-15:1 ； 優(yōu)選地，步驟（3)所述攪拌時間為10-40min。
9. 一種鐵螯合劑納米藥物，其特征在于，所述鐵螯合劑納米藥物包含根據(jù)權利要求1 或2所述的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子。
10. 根據(jù)權利要求1或2所述的兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子在制備用于治 療鐵過載疾病的藥物中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子及其制備方法和應用，所述納米粒子是以兩親性聚合物為載體包載水溶性鐵螯合劑形成的納米粒子。本發(fā)明以兩親性聚合物為載體，通過復乳法得到兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子。本發(fā)明得到的納米粒子較穩(wěn)定，提高了鐵螯合劑在體內(nèi)血液循環(huán)中的半衰期，使鐵螯合劑靶向運輸至靶器官，可應用包含本發(fā)明所述兩親性聚合物包載鐵螯合劑的納米粒子的納米藥物進行鐵過載疾病的治療，鐵螯合劑緩慢釋放，減緩去鐵胺在人體內(nèi)的代謝速率，增加鐵螯合劑在臟器內(nèi)的富集，提高藥物療效，降低對細胞的毒副反應，提高了鐵螯合劑對細胞內(nèi)鐵的祛除效率。
【IPC分類】A61K47-34, A61K31-16, A61P3-00, A61K9-14
【公開號】CN104856960
【申請?zhí)枴緾N201510205699
【發(fā)明人】聶廣軍, 郭珊珊, 劉罡
【申請人】國家納米科學中心
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年4月27日