具改善老年癡呆癥作用的多肽組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物活性成分提取利用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有生物活性的多 肽組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 老年癡呆癥是一種漸進(jìn)發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，其癥狀主要表現(xiàn)為記憶力 和認(rèn)知能力不斷減弱，日常生活能力障礙，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙，多起病于老 年期，潛隱起病，病程緩慢且不可逆。隨著我國(guó)進(jìn)入老齡社會(huì)，老年性癡呆癥的發(fā)病率也在 逐年增高。老年癡呆癥的病因及發(fā)病機(jī)制尚未闡明，特征性病理改變?yōu)樵诖竽X皮層和海馬 區(qū)出現(xiàn)β淀粉樣蛋白（Αβ)聚集形成老年斑，Tau蛋白異常聚集形成神經(jīng)纖維纏結(jié)以及腦 皮層和海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞減少。
[0003] 目前治療老年癡呆癥的藥物主要包括膽堿能藥物，防止神經(jīng)纖維纏結(jié)藥物，抗A β 蛋白沉積藥物，生長(zhǎng)因子促進(jìn)劑以及腦功能改善藥物等。但是，現(xiàn)有藥物具有治療效果不理 想，毒副作用大，特異性不強(qiáng)等缺點(diǎn)，而中草藥具有天然，多效，毒性小等特點(diǎn)。從中藥和天 然藥物中尋找能夠預(yù)防和/或治療老年癡呆癥的有效成分是迫切需要解決的課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于此，本發(fā)明提供一種具改善老年癡呆癥作用的多肽組合物，該多肽組合物對(duì) 神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)及營(yíng)養(yǎng)作用，能夠改善老年癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
[0005] -種具改善老年癡呆癥的多肽組合物，所述多肽組合物的有效成分主要由以下重 量份的原料，通過(guò)酶解制備而成：
[0006] 猴頭菇2-4份、北冬蟲夏草子實(shí)體1-3份、紫蘇籽1-3份、香菇0. 5-1. 5份、木耳 0· 5-1. 5 份。
[0007] 上述原料中，猴頭菇又叫猴頭菌，是齒菌科的菌類，菌傘表面長(zhǎng)有毛茸狀肉刺，長(zhǎng) 約1~3厘米，它的子實(shí)體圓而厚，新鮮時(shí)白色，干后由淺黃至淺褐色，基部狹窄或略有短 柄，上部膨大，直徑3. 5~10厘米，遠(yuǎn)遠(yuǎn)望去似金絲猴頭，故稱"猴頭菇"。猴頭菇性平味甘， 有利五臟、助消化、滋補(bǔ)身體等功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)陸續(xù)證明猴頭菌有良好的藥用價(jià)值，臨床應(yīng) 用表明，猴頭菇可治療神經(jīng)衰弱、消化不良、胃潰瘍、胃脹等疾病，還具有提高記憶力、抗衰 老、提高免疫力、抗癌等作用。
[0008] 北冬蟲夏草，也叫蛹蟲草或蛹草或北蟲草，是蟲與菌結(jié)合的藥用真菌，現(xiàn)代珍稀中 草藥。北冬蟲夏草屬于真菌門麥角菌科蟲草屬，主要生長(zhǎng)在我國(guó)的北方地區(qū)。北冬蟲夏草 不僅含有豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸，而且含有30多種人體所需的微量元素，是上等的滋補(bǔ)佳 品。研宄證實(shí)，北冬蟲夏草具有明顯的抗衰老作用，其能有效清除人體自由基，抑制過(guò)氧化 脂質(zhì)的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧化物的損害，延緩器官和整個(gè)集體的衰老，同樣能夠調(diào)節(jié)血 液粘稠度，擴(kuò)張心腦血管，保護(hù)心肌細(xì)胞，增強(qiáng)免疫力等。北冬蟲夏草多肽為北冬蟲夏草的 主要活性成分之一，是經(jīng)過(guò)酶解工藝直接制得的水解物，具有極強(qiáng)的藥理作用和生理功能 多樣性，但有關(guān)其預(yù)防或治療老年癡呆癥的報(bào)道較少。
[0009] 紫蘇籽，為唇形科植物紫蘇的干燥成熟果實(shí)。味辛，性溫。歸肺經(jīng)。功效降氣消痰、 止咳平喘、潤(rùn)腸。紫蘇種子中含大量油脂，出油率高達(dá)45%左右，油中含亞麻酸62. 73%、亞 油酸15. 43%、油酸12. 01%。種子中蛋白質(zhì)含量占25%，內(nèi)含18種氨基酸，其中賴安酸、 蛋氨酸的含量均高于高蛋白植物籽粒莧。此外還有谷維素、維生素E、維生素B1、緇醇、磷脂 等。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研宄證明紫蘇籽對(duì)視覺功能和學(xué)習(xí)行為活動(dòng)起促進(jìn)作用，還具有調(diào)節(jié)血壓、調(diào) 節(jié)血脂、抑制腫瘤、抑制血小板聚集、防止血栓形成的功效。
[0010] 香菇，為側(cè)耳科植物香蕈的子實(shí)體。是高蛋白、低脂肪的營(yíng)養(yǎng)保健食品。香菇富 含維生素B群、鐵、鉀、維生素D原，味甘，性平。主治食欲減退，少氣乏力。香菇中還含有30 多種酶和18種氨基酸。人體所必需的8中氨基酸中，香菇就含有7種，因此香菇又成為糾 正人體酶缺乏癥和補(bǔ)充氨基酸的首選食物?，F(xiàn)代研宄表明，香菇對(duì)提高機(jī)體適應(yīng)力有很大 作用，此外，香菇還對(duì)記憶力減退、神經(jīng)炎、消化不良、糖尿病等有一定治療作用。
[0011] 木耳，是木耳科真菌，含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖和鈣、磷、鐵等元素以及胡蘿卜素、維生 素B1、維生素B2、煙酸等，還含磷脂、固醇等營(yíng)養(yǎng)素。具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、潤(rùn)肺止咳、止血、降壓、 抗癌等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研宄表明，木耳具有延緩衰老、增強(qiáng)免疫力、治療心腦血管疾病、抗 癌、抗突變、降血糖等作用。
[0012] 本發(fā)明的多肽組合物，選用猴頭菇、北冬蟲夏草子實(shí)體、紫蘇籽、香菇、木耳作為原 料，經(jīng)過(guò)多次酶解得到的多肽組合物，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)及營(yíng)養(yǎng)作用，能夠改善老年癡呆 小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
[0013] 本發(fā)明還公開了上述多肽組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0014] (1)胃蛋白酶酶解：按重量份稱取猴頭菇、北冬蟲夏草子實(shí)體、紫蘇籽、香菇和木 耳，按照10-20ml水/Ig原料的量加入水，調(diào)節(jié)溶液pH值為1. 0-3. 0,按照原料重量百分比 2.0% -3.0%的量加入胃蛋白酶，酶解3-5h ;隨后將溶液煮沸，使其中的酶滅活，再將溶液 經(jīng)截留分子量為25000D-35000D的超濾柱過(guò)濾，得到酶解液1 ;
[0015] (2)胰蛋白酶酶解：取上述酶解液1，調(diào)節(jié)溶液pH值為7. 0-9. 0,按照原料質(zhì)量百 分比1. 0% -2. 0%的量加入胰蛋白酶，酶解3-5h ;隨后將溶液煮沸，使其中的酶滅活，再將 溶液經(jīng)截留分子量為8000D-12000D的超濾柱過(guò)濾，得到酶解液2 ;
[0016] (3)中性蛋白酶酶解：取上述酶解液2,調(diào)節(jié)溶液pH值為6. 5-7. 5,按照原料質(zhì)量 百分比0. 25% -0. 75%的量加入中性蛋白酶，酶解3-5h ;隨后將溶液煮沸，使其中的酶滅 活，將溶液經(jīng)截留分子量為3000D-7000D的超濾柱過(guò)濾，得到酶解液3,即得多肽組合物。
[0017] 上述多肽組合物的制備方法，按照特定的順序加入選定的酶，對(duì)猴頭菇、北冬蟲夏 草子實(shí)體、紫蘇籽、香菇、木耳等原料進(jìn)行酶解，并在每一步酶解之后以超濾柱進(jìn)行了超濾， 得到預(yù)定分子量大小的多肽后再進(jìn)行下一步的酶解，最終得到的多肽組合物的分子量主要 集中在1000D-3000D的范圍內(nèi)。以該多肽組合物作用于Αβ?lián)p傷PC12細(xì)胞，具有非常好的 抗凋亡作用；以該多肽組合物作用于老年癡呆模型小鼠，對(duì)其學(xué)習(xí)記憶作用具有非常好的 促進(jìn)作用。說(shuō)明以上述制備方法得到的多肽組合物具有預(yù)防和治療老年癡呆癥的效果。
[0018] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，在（1)胃蛋白酶酶解步驟之前，還包括預(yù)處理步驟，該預(yù)處 理步驟為：按重量份稱取猴頭菇、北冬蟲夏草子實(shí)體、紫蘇籽、香菇和木耳，加入石油醚浸 泡，過(guò)濾得濾渣，濾渣烘干，即得脫脂的原料。先對(duì)原料進(jìn)行脫脂，可獲得更干燥的原料粉 末，并可增加其親水性，酶解效果更好。
[0019] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述預(yù)處理步驟中，按重量份稱取猴頭菇、北冬蟲夏草子實(shí) 體、紫蘇籽、香菇和木耳，粉碎，以原料：石油醚為1:2-4的質(zhì)量體積比加入餾程為60_90°C 的石油醚，在50-60°C下振蕩浸泡2-4h，過(guò)濾得濾渣，濾渣于40-50°C下烘干，即得粉末狀脫 脂的原料。以上述條件進(jìn)行脫脂，具有非常好的脫脂效果。
[0020] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（1)胃蛋白酶酶解中，酶解溫度為37_45°C ;所述 步驟（2)胰蛋白酶酶解中，酶解溫度為37-45°C ;所述步驟（3)中性蛋白酶酶解中，酶解溫 度為37-45°C。將酶解溫度控制在上述范圍內(nèi)，能夠使酶發(fā)揮最佳功效，獲得較好的酶解效 果。
[0021] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（1)胃蛋白酶酶解中，超濾柱的截留分子量為 30000D ;所述步驟（2)胰蛋白酶酶解中，超濾柱的截留分子量為10000D ;所述步驟（3)中性 蛋白酶酶解中，超濾柱的截留分子量為5000D。上述截留分子量的超濾柱具有方便、易得的 優(yōu)點(diǎn)。
[0022] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（1)胃蛋白酶酶解中，使溶液中酶滅活后，先以 4000-5000r ^mirT1離心5-15min，再取上清液過(guò)超濾柱過(guò)濾。先離心除去固體物后再過(guò)濾， 既有利于超濾的進(jìn)行，也可避免超濾柱堵塞的問(wèn)題。
[0023] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（3)中性蛋白酶酶解后，得到的活性多肽組合物 中，分子量在1000D-3000D范圍內(nèi)的多肽占多肽總量的80% -90%，分子量在3000D-5000D 范圍內(nèi)的多肽占多肽總量的5%-8%。當(dāng)多肽組合物中多肽分子量按照上述范圍分布，具 有最佳的保護(hù)及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞作用，并有最佳的改善老年癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力效果。
[0024] 本發(fā)明還公開了上述的活性多肽組合物在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥的藥物中 的應(yīng)用。
[0025] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述藥物或保健食品的劑型為片劑、顆粒劑、硬膠囊、軟膠 囊、口服液、丸劑或滴丸。
[0026] 上述劑型可以采用本領(lǐng)