多價(jià)異多聚體支架設(shè)計(jì)和構(gòu)建體的制作方法
【專利說明】多價(jià)異多聚體支架設(shè)計(jì)和構(gòu)建體
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2012年7月13日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/671，640 ;2012年9月5日 提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/697, 245 ;2013年1月30日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/758, 701 ; 以及2013年7月12日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/845, 945的權(quán)益，所述申請(qǐng)?zhí)卮艘砸玫?方式整體并入。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明的領(lǐng)域是合理設(shè)計(jì)用于生物治療劑的定制開發(fā)的支架。
[0004] 相關(guān)技術(shù)說明
[0005] 在治療性蛋白領(lǐng)域中，具有其多價(jià)靶標(biāo)結(jié)合特征的抗體是用于設(shè)計(jì)藥物候選物的 優(yōu)異支架。進(jìn)一步推進(jìn)這些特征，設(shè)計(jì)的雙特異性抗體和其它特融合的多特異性治療劑表 現(xiàn)出雙重或多重靶標(biāo)特異性和產(chǎn)生具有新穎的作用模式的藥物的機(jī)會(huì)。這類具有有利的藥 物代謝動(dòng)力學(xué)和功能活性的多價(jià)和多特異性治療性蛋白的開發(fā)一直是挑戰(zhàn)。
[0006] 人血清白蛋白（HSA或HA)(呈其成熟形式的585個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)）負(fù)責(zé)大部分 的血清滲透壓并且還充當(dāng)內(nèi)源性和外源性配體的載體。白蛋白作為載體分子的作用及其穩(wěn) 定性質(zhì)是在體內(nèi)用作多肽的載體和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白所需的特性。
[0007] 人血清白蛋白具有許多合乎需要的特征。HSA遍布于體內(nèi)，但更具體的在間隙 空間和血液中，血清濃度為40g/L(相當(dāng)于0. 7mM) (Yeh等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，89 : 1904-1908(1992))。HSA被認(rèn)為是最豐富的血清蛋白并且負(fù)責(zé)維持摩爾滲透壓濃度。HSA具 有有利的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性并且通過肝和腎非常緩慢地清除，從而展示長(zhǎng)達(dá)幾周的體內(nèi) 半衰期（Yeh 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，89 :1904-1908(1992) ;Waldmann，T.A.，Albumin Structure，F(xiàn)unction and Uses，第 255-273 頁（1977) ;Sarav 等，J Am Soc Nephrol 20 : 1941-1952 (2009))。HSA缺乏酶活性和抗原性，從而消除潛在的不良副作用。HSA充當(dāng)內(nèi)源 性以及外源性配體的載體。HSA還已知滲透并保留在腫瘤間質(zhì)中（參見Elsadek和Kratz， J. Control. Release (2012) 157 :4-28)?？傊@些特征可以至少部分地?cái)U(kuò)展至基于白蛋白 的融合蛋白上。由治療性蛋白展示的較差藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性然后可被規(guī)避。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供多價(jià)異多聚體支架和設(shè)計(jì)所述多價(jià)異多聚體支架的方 法。在本發(fā)明的一方面，提供一種異多聚體，其包含：第一多肽構(gòu)建體，其包含（i)第一轉(zhuǎn)運(yùn) 蛋白多肽；以及第二多肽構(gòu)建體，其包含（ii)第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；其中所述第一和第二轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白多肽中的每個(gè)包含與白蛋白多肽的區(qū)段具有至少90%同一性的氨基酸序列；并且 其中所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過所述白蛋白多肽在節(jié)段化位點(diǎn)處的節(jié)段化獲得，以 使得所述節(jié)段化導(dǎo)致所述節(jié)段化位點(diǎn)處〇至3個(gè)氨基酸殘基的缺失，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多 肽自組裝以形成所述白蛋白多肽的單體形式的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。
[0010] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種異多聚體，其包含：第一多肽構(gòu)建體，其包含（i) 第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及第二多肽構(gòu)建體，其包含（ii)第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；其中所述第一 和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽中的每個(gè)包含與白蛋白多肽的區(qū)段具有至少90%同一性的氨基酸序 列；并且其中所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過所述白蛋白多肽在節(jié)段化位點(diǎn)處的節(jié)段化 獲得，并且其中所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽中的至少一個(gè)包含氨基酸殘基至半胱氨酸或 其類似物的至少一個(gè)突變，以使得所述半胱氨酸與另一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽形成二硫鍵，這樣使 得所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽自組裝以形成所述白蛋白多肽的單體形式的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。
[0011] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種異多聚體，其包含：第一多肽構(gòu)建體，其包含 (i)第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽和（ii)至少一個(gè)第一貨物多肽，其是結(jié)合⑶3、⑶19、⑶20、HER2 或HER3的抗原結(jié)合多肽構(gòu)建體；以及第二多肽構(gòu)建體，其包含（iii)第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽和 (iv)至少一個(gè)第二貨物多肽，其中所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽中的每個(gè)包含與白蛋白多 肽的區(qū)段具有至少90%同一性的氨基酸序列；并且其中所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通 過所述白蛋白多肽在節(jié)段化位點(diǎn)處的節(jié)段化獲得，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽自組裝以形成所 述白蛋白多肽的單體形式的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。
[0012] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種宿主細(xì)胞，其包含編碼本發(fā)明的異多聚體的核 酸。
[0013] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的異多聚體和佐劑。
[0014] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種治療癌癥的方法，所述方法包括向有需要的患 者提供有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
[0015] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括使所述腫 瘤與有效量的本發(fā)明的異多聚體相接觸。
[0016] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種縮小腫瘤的方法，所述方法包括使所述腫瘤與 有效量的本發(fā)明的異多聚體相接觸。
[0017] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種從目標(biāo)蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)自締合多肽的方法，所述方 法包括：使所述蛋白質(zhì)在至少一個(gè)節(jié)段化位點(diǎn)處節(jié)段化以獲得至少兩個(gè)多肽區(qū)段，以使得 所述多肽區(qū)段自組裝以形成異多聚體，其中所述異多聚體形成所述蛋白質(zhì)的準(zhǔn)天然單體結(jié) 構(gòu)，所述方法包括以下步驟：選擇所述目標(biāo)蛋白質(zhì)的至少一個(gè)環(huán)，所述至少一個(gè)環(huán)具有高溶 劑可及表面積和與所述蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)的剩余部分的有限接觸；以及每個(gè)選定環(huán)引入一個(gè)節(jié) 段化位點(diǎn)，從而在所述至少兩個(gè)多肽區(qū)段之間產(chǎn)生互補(bǔ)界面，其中所述界面是非極性的、廣 泛的和相互交叉的。
[0018] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種通過本發(fā)明的方法設(shè)計(jì)的異多聚體。
[0019] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種包含通過本發(fā)明的方法設(shè)計(jì)的異多聚體的治療 性支架。
[0020] 本文提供多功能異多聚體和設(shè)計(jì)所述多功能異多聚體的方法。在某些實(shí)施方案中 是異多聚體，每個(gè)異多聚體包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)貨物分子和第 一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及至少一個(gè)第二多肽構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)貨物分子和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白多肽；其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過一種蛋白質(zhì)的節(jié)段化獲得，以使得所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽 自組裝以形成所述蛋白質(zhì)或其類似物的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物分 子是藥物或治療劑。在某些實(shí)施方案中，具有相同性質(zhì)的多于一個(gè)貨物分子存在于所述轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白多肽上。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物分子是生物分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所 述至少一種生物分子是DNA、RNA、PNA或多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物分子是多 肽。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是不穩(wěn)定的，并且優(yōu)先與至少一個(gè)其它轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 多肽一起形成異多聚體。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是穩(wěn)定的，并且優(yōu)先與至少 一個(gè)其它轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽一起形成異多聚體。在某些實(shí)施方案中，所述異多聚化界面包含至 少一個(gè)二硫鍵。在某些實(shí)施方案中，所述異多聚化界面不包含二硫鍵。
[0021] 在某些實(shí)施方案中是一種異多聚體，其包含：至少兩個(gè)多肽構(gòu)建體，每個(gè)多肽構(gòu)建 體包含連接至轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽的至少一個(gè)貨物多肽，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過一種蛋白質(zhì) 的節(jié)段化而源自所述蛋白質(zhì)，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽包含與所述蛋白質(zhì)的區(qū)段具有至少90 %同 一性的氨基酸序列，并且其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽自組裝以形成所述蛋白質(zhì)或其類似物的準(zhǔn) 天然單體結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方案中，所述異多聚體是異二聚體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異 多聚體是雙特異性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異多聚體是多特異性的。在某些實(shí)施方案 中，所述異多聚體是二價(jià)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異多聚體是多價(jià)的。在一個(gè)實(shí)施方案 中，所述異多聚體是多功能性的。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽不是源自抗 體。在某些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽不是源自抗體。在某些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白多肽是白蛋白的衍生物。在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多 肽源自SEQ ID No. 1的人血清白蛋白（HSA或HA)。在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方 案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自異白蛋白（HAA)。在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案 中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自與SEQ ID No. 1的人血清白蛋白（HSA或HA)同源的序列。在某 些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自人血清白蛋白（HSA或HA)的片段，其中所述HAS包 含如SEQ ID No. 1中所示的序列。
[0022] 在本文所描述的異多聚體的一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是膜聯(lián)蛋白 (annexin)的衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自不同的膜聯(lián)蛋白。在某些 實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自相同的膜聯(lián)蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白多肽源自膜聯(lián)蛋白Al或脂皮質(zhì)蛋白（lip 〇C〇rtin)I。在所述異多聚體的某些實(shí)施方案 中，所有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自SEQ ID NO :14的膜聯(lián)蛋白A1。在所述異多聚體的某些實(shí)施方 案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自與SEQ ID NO :14同源的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少 一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自膜聯(lián)蛋白A2或膜聯(lián)蛋白II。在所述異多聚體的某些實(shí)施方案中，所 有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自膜聯(lián)蛋白A2或脂皮質(zhì)蛋白II。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 多肽源自膜聯(lián)蛋白樣蛋白質(zhì)。在所述異多聚體的某些實(shí)施方案中，所有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自 膜聯(lián)蛋白樣蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自包括膜聯(lián)蛋白Al-膜 聯(lián)蛋白A7的組。在本文所描述的異多聚體的一個(gè)實(shí)施方案中，所有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自包括 膜聯(lián)蛋白Al-膜聯(lián)蛋白A7的組。SEQ ID No.-14。在某些實(shí)施方案中，基于第一膜聯(lián)蛋白 的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含SEQ ID NO :15的序列，并且基于第二膜聯(lián)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具 有包含SEQ ID NO : 16的序列。
[0023] 在本文所描述的異多聚體的一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是轉(zhuǎn)鐵蛋白的衍 生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自轉(zhuǎn)鐵蛋白。在所述異多聚體的某些 實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自SEQ ID NO : 19的轉(zhuǎn)鐵蛋白或其類似物。在所述異 多聚體的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自與所述轉(zhuǎn)鐵蛋白同源的多肽序列。 在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白 (apo-transferrin)。在某些實(shí)施方案中，基于第一轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含SEQ ID NO :15的序列，并且基于第二轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含SEQ ID NO :16的序列。
[0024] 在所述異多聚體的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物分子是貨物多肽。在本文所描 述的異多聚體的一個(gè)實(shí)施方案中，所有貨物分子是貨物多肽。在某些實(shí)施方案中，所述貨物 多肽是治療性蛋白或其片段或變體。在某些實(shí)施方案中，所述貨物多肽是抗原或其片段或 變體。在某些實(shí)施方案中，所述貨物多肽是抗原受體或其片段或變體。在一些實(shí)施方案中， 所述貨物多肽是結(jié)合靶多肽的抗體、抗體結(jié)構(gòu)域、配體或受體。在一些實(shí)施方案中，至少一 個(gè)貨物多肽與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽融合。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽連接至轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 多肽的N末端。在一些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽連接至轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽的C末端。在 一些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽化學(xué)連接至轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽。在本文所描述的異多聚體 的一些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽包含GLP-I或其片段或變體。在一些實(shí)施方案中，至 少一個(gè)貨物多肽包含胰高血糖素或其片段或變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽 包含EGF-A樣結(jié)構(gòu)域。
[0025] 本文提供異多聚體，每個(gè)異多聚體包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其包含至少一 個(gè)貨物多肽和第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及至少一個(gè)第二多肽構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)貨物多 肽和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽。在某些實(shí)施方案中，所述異多聚體是異二聚體。在一個(gè)實(shí)施方案 中，所述異多聚體是多特異性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異多聚體是雙特異性的。在所述 異多聚體的某些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是相同蛋白質(zhì)的衍生物。在某些實(shí)施方案 中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是白蛋白的衍生物。在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案中，所 述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自SEQ ID No. 1的人血清白蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多 肽是膜聯(lián)蛋白的衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是膜聯(lián)蛋白A2的衍生物。 在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是轉(zhuǎn)鐵蛋白的衍生物。
[0026] 在某些實(shí)施方案中是異多聚體，每個(gè)異多聚體包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其 包含至少一個(gè)貨物多肽和含有人血清白蛋白的第一區(qū)段的第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及至少一 個(gè)第二多肽構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)貨物多肽和含有人血清白蛋白的第二區(qū)段的第二轉(zhuǎn)運(yùn) 蛋白多肽；其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽自組裝以形成白蛋白或其類似物的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。在某些 實(shí)施方案中，人血清白蛋白的所述第一區(qū)段和第二區(qū)段是來自所述蛋白質(zhì)的非重疊區(qū)。在 某些實(shí)施方案中，在人血清白蛋白的所述第一區(qū)段和第二區(qū)段的序列之間存在重疊。在一 些實(shí)施方案中，所述重疊是5 %重疊。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述重疊是10 %重疊。在某些實(shí) 施方案中，人血清白蛋白的所述第一區(qū)段包含SEQ ID NO :2的序列，并且人血清白蛋白的所 述第二區(qū)段包含SEQ ID NO :3的序列。在某些實(shí)施方案中，人血清白蛋白的所述第一區(qū)段 包含SEQ ID NO :8的序列，并且人血清白蛋白的所述第二區(qū)段包含SEQ ID NO: 10的序列。
[0027] 在某些實(shí)施方案中是異多聚體，每個(gè)異多聚體包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其 包含至少一個(gè)貨物多肽和含有SEQ ID NO :2的序列的第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及至少一個(gè)第 二多肽構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)貨物多肽和含有SEQ ID NO :3的序列的第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽。 在某些實(shí)施方案中是異多聚體，每個(gè)異多聚體包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其包含至少 一個(gè)貨物多肽和含有SEQ ID NO :8的序列的第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽；以及至少一個(gè)第二多肽構(gòu) 建體，其包含至少一個(gè)貨物多肽和含有SEQ ID NO :10的序列的第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽。在本文 所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽源自異白蛋白。在某些實(shí)施 方案中，兩個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽均源自異白蛋白。在某些實(shí)施方案中，所有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是相同 異白蛋白的衍生物。在一些其它實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是不同異白蛋白的衍生物。 在一些實(shí)施方案中，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是基于選自表2的異白蛋白的白蛋白衍生物。在某 些實(shí)施方案中，所述第一多肽構(gòu)建體包含兩個(gè)貨物多肽。在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽 構(gòu)建體包含兩個(gè)貨物多肽。在一些實(shí)施方案中，所述多肽構(gòu)建體中的至少一個(gè)通過引入突 變進(jìn)行工程化。在某些實(shí)施方案中，與所述多肽構(gòu)建體的非突變形式相比，所引入的突變改 進(jìn)所述構(gòu)建體的功能性。在某些實(shí)施方案中，所引入的突變改進(jìn)所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽的穩(wěn)定 性、半衰期和異多聚體形成中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。
[0028] 本文提供一種異多聚體，其包含：至少一個(gè)第一多肽構(gòu)建體，其包含（i)第一轉(zhuǎn)運(yùn) 蛋白多肽和（ii)至少一個(gè)貨物多肽；以及至少一個(gè)第二多肽構(gòu)建體，其包含（iii)第二轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白多肽和（iv)至少一個(gè)貨物多肽；其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過一種蛋白質(zhì)的節(jié)段化 而源自所述蛋白質(zhì)，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽包含與所述蛋白質(zhì)的區(qū)段具有至少90%同一性的氨 基酸序列，并且其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽自組裝以形成所述蛋白質(zhì)的準(zhǔn)天然結(jié)構(gòu)。
[0029] 在某些實(shí)施方案中是一種本文所描述的異多聚體，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過一 種蛋白質(zhì)的節(jié)段化而源自所述蛋白質(zhì)，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽包含與所述蛋白質(zhì)的區(qū)段具有至 少95 %同一性的氨基酸序列。
[0030] 在某些實(shí)施方案中是一種本文所描述的異多聚體，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽通過一 種蛋白質(zhì)的節(jié)段化而源自所述蛋白質(zhì)，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽包含與所述蛋白質(zhì)的區(qū)段具有至 少99 %同一性的氨基酸序列。
[0031] 在某些實(shí)施方案中，所述異多聚體是異二聚體。在一些實(shí)施方案中，至少一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn) 蛋白多肽不是源自抗體。在示例性實(shí)施方案中，每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是白蛋白衍生物。在一些 實(shí)施方案中，所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽中的至少一個(gè)包含氨基酸殘基至半胱氨酸的至 少一個(gè)突變，以使得所述半胱氨酸與另一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽上的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。 在某些實(shí)施方案中，所述第一和第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽中包含氨基酸殘基至半胱氨酸的至少一 個(gè)突變，以使得所述半胱氨酸與另一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽上的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。在一 些實(shí)施方案中提供異多聚體，其中每個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是白蛋白衍生物，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 多肽包含選自A194C、L198C、W214C、A217C、L331C以及A335C的至少一個(gè)突變。在一些實(shí) 施方案中，所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽是包含選自L331C、A335C、V343C、L346C、A350C、V455C以 及N458C的至少一個(gè)突變的白蛋白衍生物。
[0032] 在一些實(shí)施方案中提供本文所描述的異多聚體，其中所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :35的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :36的序列或其類似物或變體。在一些實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :37的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :38的序列或其類似物或變體。在某些實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :39的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :40的序列或其類似物或變體。在示例性實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具 有包含SEQ ID NO :41的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :42的序列或其類似物或變體。在某些實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :43的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :44的序列或其類似物或變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :45的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :46的序列或其類似物或變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :47的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :48的序列或其類似物或變體。在某些實(shí)施方案中，所述第一轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有 包含SEQ ID NO :49的序列或其類似物或變體，并且其中所述第二轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多肽具有包含 SEQ ID NO :50的序列或其類似物或變體。
[0033] 在本文所描述的異多聚體的某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)貨物多肽結(jié)合靶抗原，并 且其中所述靶抗原是IL-2R的a-鏈（⑶25)、淀粉樣蛋白β、抗-EpCAM、抗-⑶3、⑶16、⑶20、 CD22、CD23、CD3、CD4、CD52、CD80、CTL