清香桂總生物堿及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬藥物領(lǐng)域，涉及清香桂總生物堿及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的 用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 本領(lǐng)域知悉，惡性腫瘤仍然是目前危害人們健康的重大疾病之一，目前，腫瘤的治 療方案通常采用手術(shù)、放療和化療手段，其中化療作為腫瘤治療的三大傳統(tǒng)手段之一，在腫 瘤治療中占據(jù)著重要地位。而從天然藥物中尋找發(fā)現(xiàn)活性成分也一直是抗腫瘤藥物研究的 執(zhí)占。
[0003] 中藥材黃楊科野扇花屬植物清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)富含生物堿 成分，該植物是我國民間藥物，主要用于治療胃病、跌打勞傷、頭暈心悸、喉嚨腫痛等。多年 來，國內(nèi)外對相關(guān)留體生物堿的活性研究多集中在乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶活性抑制 方面。迄今，尚未見有關(guān)清香桂生物堿部位對多種腫瘤細胞具有非常好的抑制活性的報道。
[0004] 本申請的發(fā)明人，擬通過抗腫瘤天然產(chǎn)物篩選中，提供清香桂生物堿部位及其制 備方法和對抗腫瘤活性的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種清香桂總生物堿。
[0006] 本發(fā)明的進一步目的是提供所述清香桂總生物堿的制備方法。
[0007] 本發(fā)明的更進一步目的是提供所述清香桂總生物堿在制備抗腫瘤藥物中的用途。
[0008] 本發(fā)明通過抗腫瘤天然產(chǎn)物篩選，經(jīng)提取分離的方法從黃楊科野扇花屬植物清香 桂的生物堿部位分離制得清香桂總生物堿，進一步通過實驗證實，所述的香桂總生物堿對 多種腫瘤細胞具有顯著的抑制活性。
[0009] 本發(fā)明提供了所述清香桂總生物堿的制備方法，所述的清香桂總生物堿可以采用 酸水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等有機溶劑進行提取獲得，并經(jīng)加熱、回流或超聲、 微波輔助提取。
[0010] 本發(fā)明的一個實施例中，采用乙醇提取及分離獲得清香桂總生物堿：
[0011] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用95%乙醇分3次加熱回流， 合并濾液，減壓濃縮至浸膏，懸浮于鹽酸水溶液后用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層 用NaOH調(diào)節(jié)pH，再用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位， 收率為1. 5%。
[0012] 本發(fā)明的另一個實施例中采用酸水提取及分離獲得清香桂總生物堿：
[0013] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用5%鹽酸水溶液分3次超聲 提取，每次半小時，合并濾液，并用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH，再 用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位，收率為1. 2%。
[0014] 本發(fā)明的另一個實施例中采用氯仿，酸水提取及分離獲得清香桂總生物堿：
[0015] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎用氯仿分3次加熱回流，合并 濾液，減壓濃縮至干，2%的鹽酸水溶液懸浮后，用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用 NaOH調(diào)節(jié)pH至，再用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位， 收率為1. 0%。
[0016] 進一步，本發(fā)明采用萃取或色譜方法制備和純化清香桂總生物堿。
[0017] 本發(fā)明制得的清香桂總生物堿進行了抗腫瘤活性試驗，其中分別對人胃癌細胞株 AGS、MGC-803,人肺癌細胞株 A549、H1299,人結(jié)直腸癌細胞株 HCT116、HT29、SW480、SW620， 人膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U87、U251和人乳腺癌細胞株MCF-7、BT-549進行不同濃度的抑 制試驗，結(jié)果顯示，所述的香桂總生物堿對多種腫瘤細胞包括AGS、MGC-803、A549、H1299、 HCT116、HT29、SW480、SW620、U87、U251、MCF-7、BT-549 等腫瘤細胞具有顯著的抑制活性，所 述的清香桂總生物堿可進一步制備制備抗腫瘤藥物，用于但不局限于治療胃癌、肺癌、結(jié)直 腸癌、腦癌及乳腺癌等。
[0018] 更進一步的，所述藥物可用載體或賦形劑給予全身或局部給藥，或，經(jīng)鼻、經(jīng)口、透 皮、非腸道、靜脈或肌肉注射給藥。
【具體實施方式】
[0019] 實施例1提取及分離清香桂總生物堿的乙醇：
[0020] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用 95% 乙醇 300ml 分 3次加熱回流，合并濾液，減壓濃縮至浸膏，懸浮于2%的鹽酸水溶液后用石油醚萃取，除去 脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后， 減壓濃縮，得含生物堿部位0. 15g，收率為1. 5%。
[0021] 實施例2提取及分離清香桂總生物堿的酸水：
[0022] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用 5% 鹽酸水溶液 300ml分3次超聲提取，每次半小時，合并濾液，并用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層 用NaOH調(diào)節(jié)pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物 堿部位0. 12g，收率為1. 2%。
[0023] 實施例3提取及分離清香桂總生物堿的酸水：
[0024] 清香桂（Sarcococca ruscifolia Stapf)根莖粉碎（10.0 g)用氯仿 300ml 分 3 次 加熱回流，合并濾液，減壓濃縮至干，2%的鹽酸水溶液懸浮后，用石油醚萃取，除去脂溶性雜 質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH至~10,再用氯仿萃取。氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮， 得含生物堿部位0. l〇g，收率為1. 0%。
[0025] 實施例4抗腫瘤活性試驗
[0026] 試驗樣品制備：按實施例1中的方法，制備含清香桂總生物堿的供試品。
[0027] 分別采用人胃癌細胞株AGS、MGC-803,人肺癌細胞株A549、H1299,人結(jié)直腸癌細 胞株HCT116、HT29、SW480、SW620,人膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U87、U251和人乳腺癌細胞株 MCF-7、BT-549,在37°，含5% CO2條件下培養(yǎng)于含10%胎牛血清、50kU/L青霉素及50mg/ L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液內(nèi)，胰酶消化再用培養(yǎng)液稀釋細胞濃度至5X IO4個/ml，取100 μ 1 加入96孔板的孔內(nèi)，然后再加入不同濃度的供試品，培養(yǎng)68h后，每孔加入10 μ 15mg/ml的 MTT再培養(yǎng)4h，然后棄培養(yǎng)液每孔加入100 μ 1的DMS0,用酶標儀在490nm讀取每孔的吸光 值。用Bliss法計算IC5tl值，結(jié)果顯示，所述的香桂總生物堿對多種腫瘤細胞包括具有顯著 的抑制活性，具體結(jié)果如表1所示。
[0028] 表1.抗腫瘤活性試驗（IC5tl, μ g/ml)
[0029]
[0030]
【主權(quán)項】
1. 清香桂總生物堿在制備抗腫瘤藥物中的用途。
2. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的清香桂總生物堿采用酸水、氯仿、乙 酸乙酯、丙酮、乙醇或甲醇有機溶劑從黃楊科野扇花屬植物清香桂的生物堿部位分離提取 制得清香桂總生物堿。
3. 按權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的清香桂總生物堿采用加熱、回流 或超聲、微波輔助提取。
4. 按權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的清香桂總生物堿采用萃取或色譜 方法進行制備和純化。
5. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤是胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌、腦癌或 乳腺癌。
6. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物可用載體或賦形劑給予全身或 局部給藥。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其特征在于，所述藥物經(jīng)鼻、經(jīng)口、透皮、非腸道、靜脈或肌 肉注射給藥。
【專利摘要】本發(fā)明屬藥物領(lǐng)域，涉及清香桂總生物堿及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明通過抗腫瘤天然產(chǎn)物篩選，經(jīng)采用酸水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等有機溶劑提取分離的方法從黃楊科野扇花屬植物清香桂的生物堿部位分離制得清香桂總生物堿，通過試驗證實，所述的香桂總生物堿對多種腫瘤細胞具有顯著的抑制活性，可進一步制備制備抗腫瘤藥物，用于但不局限于治療胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌、腦癌及乳腺癌等。更進一步，所述藥物可用載體或賦形劑給予全身或局部給藥。
【IPC分類】A61K36-185, A61K125-00, A61P35-00
【公開號】CN104666374
【申請?zhí)枴緾N201310617117
【發(fā)明人】俞培忠, 程科軍, 石智, 胡昌奇
【申請人】復(fù)旦大學(xué), 麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院, 暨南大學(xué)
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年11月27日