面，本發(fā)明提供了一種美容護理組合物，該美容護理組合物包含PPAR-δ 激活物質、AMPK激活物質和PGCl- α激活物質。
[0054] 例如，美容護理組合物可以為化妝品組合物。該化妝品組合物可以包含美容或皮 膚學容許的隔離霜或底霜。該化妝品組合物可制成任何局部使用的形式，包括，例如，溶液， 凝膠，固體，無水漿體，水包油乳液，油包水乳液，多重乳液，懸浮液，微乳液，微膠囊，微粒 齊?，離子（脂質體）或非離子泡狀分散液，泡沫，或氣膠組合物，包括加壓推進物。這種組合 物可以通過本領域一般使用的方法制得。
[0055] 該美容組合物還包括脂肪物質，有機溶劑，增溶劑，增稠劑，膠凝劑，軟化劑，抗氧 化劑，懸浮劑，穩(wěn)定劑，起泡劑，芳香劑，表面活性劑，7Κ，例子或非離子乳化劑，填充物，隱蔽 劑，螯合劑，防腐劑，維生素，封阻劑，保濕劑，香精油，染料，顏料，親水或親脂的活性劑，月旨 囊泡或其它在化妝或皮膚學中一般使用的佐劑。該佐劑的加入量為化妝或皮膚學中通常使 用的劑量。
[0056] 該美容護理組合物的制劑并非限于以上所述制劑，可根據(jù)用途來確定。例如，該美 容護理組合物可以選自以下一種或多種制劑：化妝水，乳液，精華素，乳霜，軟膏，凝膠，化妝 包，貼劑，噴霧，粉底霜，乳液粉底，遮瑕棒，手或腳部護膚液，手或腳部乳霜，手或腳部油，手 或腳部精華素，手或腳部清潔乳，肥皂，洗面奶，清潔液，清潔泡沫和清潔水，但并非受此限 制。
[0057] 本發(fā)明的特點和效果將通過制備實施例和實施例和測試實施例來說明。然而，以 下的制備實施例，實施例和測試實施例僅用于說明，并非限制本發(fā)明的范圍。
[0058] 制備實施例1 :魁蒿提取物的制備
[0059] 購買在韓國忠清北道堤川市清川洞栽種的魁蒿。往魁蒿（300g)中加入70%的乙 醇（3L)后，將混合物在70-80°C下攪拌3小時。重復該過程兩遍后，通過濾紙過濾的濾液在 使用旋轉真空蒸發(fā)器的減壓條件下濃縮，經(jīng)過冷凍干燥來獲得干的粉末（29g)。
[0060] 制備實施例2 :絞股藍葉提取物的制備
[0061] 將絞股藍葉（Ikg)壓碎，加入約10倍體積的水或乙醇后，在90-KKTC溫度下、 12-24小時內，重復提取2-3次，過濾，濾液在減壓條件下濃縮以獲得絞股藍葉提取物。
[0062] 制備實施例3 :黃芪提取物的制備
[0063] 在韓國的當?shù)爻匈徺I黃芪。將黃芪和經(jīng)過三次蒸餾的蒸餾水以1:10的比例混 合，并用提取器進行3小時的提取。重復該過程2次后，用旋轉真空蒸發(fā)器在減壓條件下濃 縮用過濾紙過濾得到的濾液，該濾液通過冷凍干燥得到黃芪提取物的干粉。
[0064] 實施例
[0065] 上述制備的魁蒿提取物、絞股藍葉提取物和黃芪提取物以1:1:1的比例（實施例 1)混合。同樣，EPA、絞股藍葉提取物和黃芪提取物以1: 1:1的比例混合（實施例2)。
[0066] 測試實施例1 :PPAR- δ激活物質的篩選
[0067] 當配體與蛋白質的配體結合域（LBD)結合時，過氧化物酶體增殖物激活受 體-δ (PPAR-δ)被激活并調節(jié)其它基因的表達。因此，物質可以輕易地與LBD結合，以激 活轉錄因子?；诖?，約90的食用天然產(chǎn)品可用PPAR-δ篩選。
[0068] 將天然產(chǎn)品溶于二甲亞砜（DMSO)至200、100或50 μ g/mL，與PPAR-δ的LBD結合 的程度通過LanthaScreen TR-FRET過氧化物酶體增殖物受體δ輔激活因子分析套件、用 熒光強度進行定量，用DMSO作為陰性對照組。圖1展示了與PPAR-δ的LBD有良好結合的 22種類天然產(chǎn)物。
[0069] 從圖1中可以看出，魁蒿，黑胡椒粉，綠黛，葛根展示了優(yōu)越的活性。特別地，對于 9 μ g/mL PPAR- δ配體的LBD，魁蒿具有EC5tl的值。
[0070] 測試實施例2 :ΑΜΡΚ激活物質的篩選
[0071] 約90的可食用天然產(chǎn)品如下進行AMP-活化蛋白激酶（AMPK)的激活效果
[0072] 從美國組織細胞收藏中心（ATCC ;USA)處購買不成熟的C2C12細胞。該細胞在 5% CO2的培養(yǎng)器中的包含10%牛胎兒血清（FBS)的細胞培養(yǎng)基（DMEM5Gibco 1210-0038) 中培養(yǎng)，每隔一天更換培養(yǎng)基，直到達到70%的飽和度。該細胞在包含2%馬血清（HS)的 培養(yǎng)基中誘導分化成肌細胞。在包含2%馬血清（HS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天后，用溶解到 DMSO (200 μ g/mL)的天然產(chǎn)物處理24小時。
[0073] 作為陽性組，使用 ImL 的 AICAR(Cell Signaling Technology, Inc.，UK)，該 AICAR 為熟悉的AMPK激活物。24小時之后，用磷酸鹽緩沖鹽水（PBS)來清洗細胞，用200 μ L的 蛋白提取緩沖液處理來處理，該蛋白提取緩沖液包含8Μ尿素，2 %的3-[ (3-膽胺丙基）-二 甲基胺基]-1-丙磺酸鹽（CHAPS)，50mM的二硫蘇糖醇（DTT)，2Μ的硫脲，2mM的苯甲基磺酰 (PMSF)和100 μ g/μ L的亮抑酶肽，并在室溫下保存10分鐘。隨后，在4°C、離心力強度為 15, OOOg條件下，離心分離10分鐘，收集上層清液，用Bio-Rad Protein Dye Reagent?對蛋 白進行定量。100g的蛋白質用8%的SDS-PAGE基于尺寸來分離，并在50V電壓下，進行12 小時的印跡至PDF膜（Bio-Rad)上。所獲得的印跡用5%的脫脂乳封阻1小時，并與作為主 要抗體的抗-AMPK-α (細胞信號傳導），抗-磷酸-AMPK-α (細胞信號傳導）以及抗-β-肌 動蛋白反應，并和與辣根過氧化物酶結合的次要抗體反應（Amersham Biosciences),并用 增強化學發(fā)光（ECL)套件檢測。反應的印跡暴露于富士 X射線膠片，并經(jīng)過沖洗來確認蛋 白質表達的程度。膠片上的條紋用PowerLook 2100XL(UMAX)掃描，并用ImageMaster 2D Elite 程序（Amersham Bioscience)分析。
[0074] 表2顯示了在檢測的天然產(chǎn)品中，這6種植物展示出優(yōu)越的AMPK激活效果。從圖 2可以看到，用絞股藍葉提取物，溫州柑橘和魚腥草處理的細胞展示出優(yōu)越的增加的AMPK 磷酸化。
[0075] 測試實施例3 :PGCl_a激活物質的篩選
[0076] 使用APRDC PGCl- α啟動子細胞來檢測90種天然產(chǎn)品的PGCl- α啟動子激活效 果。該APRDC PGCl-a啟動子細胞是人類肝細胞（KCTC 11218BP)，其中，PGCl-a啟動子的 載體和突光素酶基因融合基因具有穩(wěn)定的表達。
[0077] 首先，APRDC PGCl-a啟動子細胞用90種溶于DMSO(200 μ g/mL)的天然產(chǎn)品處 理24小時。隨后，用PBS清洗2次，螢火素酶報告基因的活性通過Glo熒光素酶檢測套件 (Promega，Cat NO.E2520)測量。螢光素酶活性通過樣品轉移至96-孔板，并用光度計檢測 熒光來測定。DMSO用作陰性對照。
[0078] 圖3展示了幾種天然產(chǎn)物，這幾種天然產(chǎn)物在測試的天然產(chǎn)品中展示出優(yōu)越的 APRDC PGCl-α啟動子激活效應。如圖3所示，與陰性對照組DMSO或其它物質相比，經(jīng)過黃 芪，葛根花或溫州柑橘處理的導致了更強的熒光。這意味著黃芪，葛根花和溫州柑橘具有優(yōu) 越的PGCl-α啟動子激活效果。
[0079] 測試實施例4 :肌細胞中的基因表達評價（細胞水平）
[0080] 在此研究了用1:1:1比例混合的魁蒿提取物，生絞股藍葉提取物和黃芪提取物 對脂肪和血糖代謝有關的基因表達的處理效果，該混合物經(jīng)確認可激活PPAR- δ、AMPK和 PGCl-a。
[0081] 從美國組織細胞收藏中心（ATCC ;USA)處購買不成熟的C2C12細胞。該細胞在 5% CO2的培養(yǎng)器中的包含10%牛胎兒血清（FBS)的細胞培養(yǎng)基（DMEM5Gibco 1210-