專(zhuān)利名稱(chēng)：：共冷凍干燥法制備肽/脂類(lèi)絡(luò)合物的制作方法1．發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用肽和一種或多種脂類(lèi)，通過(guò)共冷凍干燥法制備肽／脂類(lèi)微囊和絡(luò)合物，優(yōu)選使用能采取兩性α-螺旋構(gòu)型的肽?？梢詫⒛苋芙怆暮椭?lèi)二者的同一溶液或兩種分別的溶液冷凍真空干燥。本方法用于制備穩(wěn)定的肽／脂類(lèi)微囊和絡(luò)合物，包括大量的和適合于用藥劑量的較小劑量單位的微囊、球狀和圓盤(pán)狀絡(luò)合物，但不局限于此。
背景技術(shù)：
：脂質(zhì)體是由至少一層脂類(lèi)雙分子膜包含一個(gè)含水核組成的微囊。通常，磷脂含有脂類(lèi)雙分子層，但雙分子層可以含有其它脂類(lèi)。脂質(zhì)體中的水溶液稱(chēng)為吸收體積。脂質(zhì)體已發(fā)展為傳遞藥物、化妝品、用于其它方面的生物活性化合物的微囊。脂類(lèi)雙分子層將藥物、化妝品、生物活性化合物等包成囊，在脂質(zhì)體的吸收體積中，脂類(lèi)雙分子層與細(xì)胞表面膜接觸時(shí)，藥物從脂質(zhì)體核排放。脂質(zhì)體通過(guò)脂類(lèi)交換、融合、細(xì)胞吞噬或吸收將內(nèi)容物釋放到細(xì)胞內(nèi)。見(jiàn)Ostro等，1989，美國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志461576的記載。另一方面，可以將藥物、化妝品、生物活性化合物等結(jié)合或鑲?cè)胛⒛业闹?lèi)雙分子膜中。除微囊外，已經(jīng)用含脂類(lèi)的顆粒狀絡(luò)合物輸送物質(zhì)。如，許多研究人員已發(fā)現(xiàn)它可以用于制備與高密度脂蛋白(HDL)顆粒有相似體積和密度的重構(gòu)的脂蛋白類(lèi)顆?；蚪j(luò)合物。這些重構(gòu)絡(luò)合物通常含有純化的脫輔基蛋白(通常是脫輔基蛋白A-1)和磷脂如卵磷脂。有時(shí)，也包括未酯化的膽固醇。制備這些顆粒最常用的方法是(1)通過(guò)水浴聲處理或探針聲處理進(jìn)行組分的超聲處理，(2)蛋白質(zhì)組分與預(yù)先形成的脂類(lèi)顆粒之間自發(fā)地相互作用，(3)由洗滌劑介導(dǎo)的重構(gòu)，然后通過(guò)透析除去洗滌劑。Jonas，1986，酶學(xué)方法，128553-582；Lins等，1993，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)，1151137-142；Brouillette＆Anantharamaiah，1995生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)，1256103-129；Jonas，1992，脫輔基蛋白的結(jié)構(gòu)與功能，第8章217-250。也通過(guò)用兩性螺旋型肽取代脫輔基蛋白組分形成相似的絡(luò)合物。不足的是，各種方法對(duì)于在合理的成本-效能基礎(chǔ)上形成大量的純絡(luò)合物均存在較大的問(wèn)題。并且，這些出版物未公開(kāi)兩性α-螺旋構(gòu)型的肽／或肽的類(lèi)似物和脂類(lèi)共冷凍干燥的方法。制備脂類(lèi)微囊和絡(luò)合物的一些技術(shù)是已知的。已經(jīng)用各種方案制備微囊，或脂質(zhì)體，從而形成不同類(lèi)型的微囊。各種類(lèi)型的脂質(zhì)體包括多層微囊、小單層微囊，和大單層微囊。用水溶液進(jìn)行磷脂(或其它脂類(lèi))的水合也能產(chǎn)生脂類(lèi)分散相和自發(fā)形成多層微囊(“MLVs”)。一種MLV是有多層脂類(lèi)雙分子層包圍中央含水核的脂質(zhì)體。這些類(lèi)型的脂質(zhì)體比小單層微囊(SUVs)大，其直徑為350-400nm。在一個(gè)圓底燒瓶?jī)?nèi)將脂類(lèi)溶解在氯仿中，并蒸發(fā)除去氯仿直至脂類(lèi)在燒瓶壁上形成一薄層，從而制備MLVs。加入水溶液，使脂類(lèi)層再水合。旋轉(zhuǎn)燒瓶形成微囊。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約(引用Bangham等，1965，分子生物學(xué)雜志13238)。Johnson等隨后報(bào)道此方法也能產(chǎn)生單層微囊，見(jiàn)Johnson等，1971，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)233820。小單層微囊(SUV)是一種單一脂類(lèi)雙分子層包合一個(gè)含水核的脂質(zhì)體。根據(jù)制備SUVs的不同方法，其直徑的范圍為25-110nm。最早的SUVs的制備方法是在充氮?dú)鈼l件下向氯仿中的磷脂干燥制備物加水相使脂類(lèi)濃度在毫克分子范圍，在45℃對(duì)溶液進(jìn)行超聲處理使其澄明。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約。用此種方式制備SUVs，產(chǎn)生直徑在25-50nm的脂質(zhì)體。另一種制備SUVs的方法是將一種乙醇／脂類(lèi)溶液快速注入一種將被包合的水溶液中。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約(引用Batzri等，1973，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)2981015)。用此種方式制備的SUVs直徑為25-50nm。也可以使多層微囊重復(fù)通過(guò)一壓力為20，000psi．的弗氏壓碎器4次制備SUVs。制得的SUVs的直徑為30-50nm。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約(引用Barenholz等，1979，歐洲生化學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)通訊99210)。也可以通過(guò)在高壓下擠壓磷脂的含水制備物通過(guò)微孔膜制備多層和單層磷脂微囊(Hope等，1996，脂類(lèi)化學(xué)和藥劑學(xué)4089-107)。大單層微囊(LUV)類(lèi)似于SUVs之處在于，它們均是單一的脂類(lèi)雙分子層包圍中央的含水核，但LUVs比SUVs大。根據(jù)其組成部分和制備方法的不同，LUVs的直徑為50-1000nm。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約。通常用3種方法之一制備LUVs洗滌劑稀釋法，轉(zhuǎn)相蒸發(fā)法和注入法。在洗滌劑稀釋技術(shù)中，使用如膽酸鹽、去氧膽酸鹽、辛基葡萄糖甙、庚基葡萄糖甙和TritonX-100等洗滌劑溶液使脂類(lèi)制劑形成膠束。然后將溶液透析除去洗滌劑，形成脂質(zhì)體。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約。此方法耗時(shí)，并且通常不能完全除去洗滌劑。在最終產(chǎn)品中出現(xiàn)洗滌劑會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體制劑的某些毒性和／或脂質(zhì)體制劑的物理化學(xué)性質(zhì)的改變。轉(zhuǎn)相蒸發(fā)技術(shù)將脂類(lèi)溶解在水-非極性溶液中，形成轉(zhuǎn)相的膠粒。將非極性溶劑蒸發(fā)，膠束聚集形成LUVs。此方法通常需要大量的脂類(lèi)。注入法將一種溶解在非極性溶液中的脂類(lèi)注入將被包合的水溶液中。當(dāng)非極性溶液蒸發(fā)時(shí)，脂類(lèi)聚集在氣-液交界面。當(dāng)氣體從水溶液中通過(guò)時(shí)，脂類(lèi)薄層形成LUVs和層數(shù)少的脂質(zhì)體。過(guò)濾測(cè)定脂質(zhì)體的大小。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約(引用Deamer等，1976，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)443629和Schieren等，1978，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)542137)。注入制備法在注入時(shí)需要相當(dāng)高的溫度，并且包合效率可能會(huì)較低。Deamer等，1983，脂質(zhì)體(Ostro，Ed．)，MarcelDekker，Inc．紐約。脂質(zhì)體研究的一個(gè)目標(biāo)是發(fā)展脂質(zhì)體制備技術(shù)使其可以在使用前長(zhǎng)期儲(chǔ)藏。如，Schneider等的美國(guó)專(zhuān)利No．4，229，360，公開(kāi)了一種通過(guò)向脂質(zhì)體在含水液體中形成的膠體分散相中加入親水化合物使脂質(zhì)體脫水的方法，并優(yōu)選用冷凍真空干燥法使溶液脫水。親水化合物的例子是高分子量的親水聚合物或蔗糖等低分子量的化合物。Shrank等的美國(guó)專(zhuān)利No．4，411，894，公開(kāi)了高濃度蔗糖在經(jīng)超聲波處理的脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。脂質(zhì)體在吸收體積中含有脂溶性產(chǎn)物，盡管可以將制劑冷凍真空干燥，但即使有高濃度的蔗糖，此法也不能阻止大量的吸收內(nèi)含物的丟失。Crowe等的美國(guó)專(zhuān)利No．4，857，319公開(kāi)了雙糖如蔗糖、麥芽糖、乳糖和海藻糖在脂質(zhì)體冷凍干燥技術(shù)中穩(wěn)定脂質(zhì)體的用途。雙糖與組分中脂類(lèi)含量(w／w)的比例為0．1∶1至4∶1。Crowe采用此法保持脂質(zhì)體的完整性，取得了比上述Shrank的美國(guó)專(zhuān)利No．4，411，894公開(kāi)的方法更大的成功。Janoff等的美國(guó)專(zhuān)利No．4，880，635公開(kāi)了一種使脂質(zhì)體脫水的方法，即在有保護(hù)性的糖如海藻糖和蔗糖存在的條件下將脂質(zhì)體真空冷凍干燥，優(yōu)選在脂類(lèi)雙分子層的內(nèi)、外層基團(tuán)上均引入保護(hù)性的糖。Janoff等的方法保留了充足的水，所以干燥脂質(zhì)體再水合后產(chǎn)生的脂質(zhì)體有顯著的結(jié)構(gòu)完整性。然而，本
技術(shù)領(lǐng)域：
需要一種簡(jiǎn)單而有效的方法，能夠制備真空冷凍干燥的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，并使其再水合。本發(fā)明的方法產(chǎn)生的肽／脂類(lèi)混合物，為穩(wěn)定的真空冷凍干燥粉末，可以直接以粉末形式或再水合后用于制備肽／脂類(lèi)絡(luò)合物。3．發(fā)明概述本發(fā)明是一種制備具有與高密度脂蛋白(HDL)相似特性的肽或蛋白質(zhì)-(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物或微囊的方法。本方法使用一種溶劑系統(tǒng)，其中至少一種肽溶解在一種溶液中，并且至少一種脂類(lèi)溶解在另一種溶液中。選擇兩種易于相互混溶的溶液。然后將溶液混合，將所得溶液真空冷凍干燥。本方法也可以使用第二類(lèi)溶劑系統(tǒng)，其中含有一種溶液使蛋白質(zhì)或肽和脂類(lèi)均可以溶解在其中。此溶液可以是單一溶液，或可以是在加入肽和脂類(lèi)前將兩種或多種溶液混合形成的一種復(fù)合溶液。肽和脂類(lèi)溶解在溶液或復(fù)合溶液中，然后將肽／脂類(lèi)溶液真空冷凍干燥。本發(fā)明優(yōu)選能夠采取兩性螺旋構(gòu)型的肽。在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，肽是脂類(lèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)。在另一實(shí)施例中，使用肽的類(lèi)似物ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ、ApoA-Ⅳ、ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅱ、ApoC-Ⅲ、ApoE、其它載脂蛋白類(lèi)似物等代替脂類(lèi)或與脂類(lèi)聯(lián)合使用。在另一特定實(shí)施例中，用此方法制備類(lèi)似于HDL的ApoAl類(lèi)似物／(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物。ApoAl／脂類(lèi)絡(luò)合物有效地用于治療與異常脂蛋白血有關(guān)的疾病-包括而不僅限于高膽固醇血癥、低HDL、和載脂蛋白A-1缺乏、敗血癥。此絡(luò)合物還作為標(biāo)志物用于HDL人群的體外診斷，并用于成像技術(shù)。本發(fā)明的方法使肽／脂類(lèi)絡(luò)合物制劑能夠胃腸外給藥，包括動(dòng)物或人的靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)注射和作為診斷用的造影劑團(tuán)靜脈注射，但不局限于此。進(jìn)一步，也可以將肽／脂類(lèi)絡(luò)合物配制成用于人或動(dòng)物口服、直腸、粘膜(例如口腔)或局部用藥的劑型，或用于體外實(shí)驗(yàn)。本方法也可以用于大規(guī)模生產(chǎn)兩性肽／磷脂絡(luò)合物、脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)／磷脂絡(luò)合物，和／或ApoAl肽類(lèi)似物／磷脂絡(luò)合物?？梢灾苽湔婵绽鋬龈稍锏脑嫌糜诖篌w積的制劑，或另選在真空冷凍干燥前將混合的肽／脂類(lèi)溶液置于小的容器中(如單劑量單位的)，將這些較小的包裝單位制備成無(wú)菌的單劑量劑型。用本發(fā)明的方法制備的真空冷凍干燥粉末可以在注射前再水合成無(wú)微粒的無(wú)菌溶液，或?qū)⒄婵绽鋬龈稍锓勰┲瞥蛇m宜的固體劑型直接給藥。本方法也適于缺少脂類(lèi)時(shí)不穩(wěn)定或不溶解的化合物的貯存。本方法可以用于配制治療或預(yù)防人類(lèi)疾病的產(chǎn)品，包括用于疫苗中抗原的共同呈遞、治療或預(yù)防異常脂蛋白血癥-包括但不局限于高膽固醇血癥、高甘油三脂血癥、低HDL和載脂蛋白A-1缺乏，及動(dòng)脈硬化等心血管疾病、敗血癥或感染性疾病。此方法還可以制備作為藥物載體的絡(luò)合物，作為向肝臟或肝外細(xì)胞傳遞藥物的媒介物(以傳遞藥物、DNA、基因)，或作為捕獲毒素(如殺蟲(chóng)劑、LPS等)的凈化劑。3．1．定義在本申請(qǐng)中，“溶劑系統(tǒng)”指能夠溶解肽和／或脂類(lèi)的一或多種溶劑，如果多于一種，相互之間易于混溶?！半模?lèi)絡(luò)合物”指脂類(lèi)部分與肽形成的，體積在高密度脂蛋白(HDLs)范圍內(nèi)的顆粒的集合?！肮怖鋬龈稍锓ā敝溉芤褐械亩喾N化合物(如，肽、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、磷脂)在同一容器內(nèi)冷凍真空干燥、凍干或真空干燥。如，脂類(lèi)溶液可以與同一容器內(nèi)的肽溶液混合，將所產(chǎn)生的組合溶液一起真空冷凍干燥，此時(shí)肽和脂類(lèi)同時(shí)被冷凍干燥?！皟尚噪摹被颉皟尚驭?螺旋肽”分別指能采取兩性或兩性螺旋構(gòu)型的肽。兩性α-螺旋是一種經(jīng)常在生物活性肽和蛋白質(zhì)中遇到的二級(jí)結(jié)構(gòu)基元。見(jiàn)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能與發(fā)生起源8103-117(1990)所載的JereP．Segrest，HansdeLoof，JanG．Dohlman，ChristieG．Brouillette和G．M．Anantharamaiah所寫(xiě)的兩性螺旋類(lèi)型分類(lèi)和性質(zhì)。兩性α-螺旋是一種有隨螺旋的長(zhǎng)軸上升的有相反極性和非極性表面的α-螺旋。帶電荷的殘基明顯沿極面分布。兩性螺旋與大量水合磷脂的極性-非極性界面互補(bǔ)；推測(cè)這些與脂類(lèi)相聯(lián)的結(jié)構(gòu)域部分地介入脂肪的?；満蜆O性端基之間的界面與磷脂相互反應(yīng)。見(jiàn)JereP．Segrest．歐洲生化學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)通訊1976，69(1)111-114?！半摹焙汀暗鞍踪|(zhì)”在此可以互相替換。另外，本發(fā)明的肽類(lèi)似物可以是肽、蛋白質(zhì)或非肽，即擬肽。然而所有這些類(lèi)似物優(yōu)選生物活性分子。“脂類(lèi)”包括但不限于天然和合成磷脂。進(jìn)而，術(shù)語(yǔ)“脂類(lèi)”和“磷脂”在此可以互換使用。4．對(duì)附圖的簡(jiǎn)要描述圖1用密度超速離心法從200μl人血清制得的HDL的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖2(底部)按1∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)(PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；SEQIDNO1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖2(頂部)按2∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖3(底部)按3∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖3(頂部)按4∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖4(底部)按5∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖4(頂部)按7．5∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖5按10∶1(w∶w)的比例制備的(DPPC肽1)絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖6在Ri=3∶1的14C-標(biāo)記的肽1絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖7在Ri=4∶1的14C-標(biāo)記的肽1絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。圖8在Ri=5∶1的14C-標(biāo)記的肽1絡(luò)合物的Superose6色譜曲線(xiàn)。5．對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述可以用任何現(xiàn)有技術(shù)合成或制備此發(fā)明使用的兩性α-螺旋肽或蛋白質(zhì)，脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)、ApoA-Ⅰ激動(dòng)劑肽(agonistpeptide)、脫輔基蛋白類(lèi)似物等?？梢詫㈦恼婵绽鋬龈稍镏苽渚哂休^長(zhǎng)保存期限的肽的穩(wěn)定制劑，或?yàn)橹匦屡渲贫苽浯罅康漠a(chǎn)品，或者制備成可以在給藥前用無(wú)菌水或適宜的緩沖溶液再水合而重構(gòu)成含水形態(tài)的單獨(dú)的份或劑量單位。據(jù)發(fā)明人所知，本發(fā)明是首次提出一種方法，將兩性α-螺旋肽或肽類(lèi)似物與脂類(lèi)共冷凍干燥，以形成一種可以重新構(gòu)成無(wú)菌肽／脂類(lèi)絡(luò)合物的混合物。在某些實(shí)施例中，可以?xún)?yōu)選將包括而不局限于ApoA-Ⅰ激動(dòng)劑的ApoA-Ⅰ類(lèi)似物配制在肽-脂類(lèi)絡(luò)合物中給藥。由于在藥物流通中絡(luò)合物應(yīng)有更長(zhǎng)的半衰期，特別地當(dāng)絡(luò)合物的體積和密度類(lèi)似于HDL類(lèi)蛋白質(zhì)，尤其是前-βHDL蛋白質(zhì)時(shí)，半衰期應(yīng)延長(zhǎng)，所以此方法有一些優(yōu)點(diǎn)?？梢园大w積、密度和電泳遷移率等特征將HDL脂類(lèi)蛋白質(zhì)分成一些小類(lèi)。按體積增加的順序排列的一些例子是，直徑為50-60埃的膠束狀前-βHDL、具有中間體積的圓盤(pán)狀HDL，即65kDa(約70埃)的團(tuán)塊，直徑為90-120埃的球形HDL3或HDL2。(J．Kane，1996inV．Fuster，R．Ross和E．Topol[eds．]動(dòng)脈硬化和冠狀動(dòng)脈疾病99頁(yè)；A．Tall和J．Breslow，ibid．，106頁(yè)；Barrans等，生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報(bào)1300，73-85頁(yè)；和Fielding等，1995，脂類(lèi)研究雜志36，211-228頁(yè))。然而，本發(fā)明也制得了體積比HDL更小或更大的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物。通?？梢圆捎孟率龉怖鋬龈稍锓▽⒈景l(fā)明的肽-脂類(lèi)絡(luò)合物制備成具有長(zhǎng)的保存期的穩(wěn)定制劑?？梢杂脙龈傻碾?脂類(lèi)絡(luò)合物制備大體積量的藥物原料用于藥物再配制，或者制備成可以在給藥前用無(wú)菌水或適宜的緩沖溶液再水合而重構(gòu)成含水形態(tài)的單獨(dú)的份或劑量單位。本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N制備具有類(lèi)似于HDL的特征的肽或蛋白質(zhì)-(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物的簡(jiǎn)單方法?？梢杂么朔椒ㄖ苽銩poA-Ⅰ肽-脂類(lèi)絡(luò)合物，它具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)用所包含的大部分或全部組分形成預(yù)計(jì)的絡(luò)合物，因此避免了其它方法中普遍存在的初始原料的浪費(fèi)。(2)形成在儲(chǔ)存過(guò)程中很穩(wěn)定的凍干的化合物。所產(chǎn)生的絡(luò)合物可以在使用前直接水合重構(gòu)成含水形態(tài)。(3)所產(chǎn)生的絡(luò)合物通常在制成后或使用前不需要進(jìn)一步的純化。(4)避免了使用包括洗滌劑如膽酸鹽等毒性化合物。進(jìn)而，可以容易地?cái)U(kuò)大制備規(guī)模并符合GMP生產(chǎn)要求(即在一種沒(méi)有內(nèi)毒素的環(huán)境中)。與優(yōu)選方法一致的是，肽和脂類(lèi)在能使每種成分均能溶解的溶劑系統(tǒng)中結(jié)合。在此步驟，要細(xì)心地選擇溶劑對(duì)以保證兩性肽和親水性脂類(lèi)的共同溶解。在一個(gè)實(shí)施例中，可以將欲加入顆粒中的蛋白質(zhì)或肽溶解在水性或有機(jī)溶劑或混合溶劑中(溶劑1)。(磷)脂類(lèi)組分溶解在易與溶劑1混合的水性或有機(jī)溶劑或混合溶劑中(溶劑2)，將兩溶液混合?；蛘?磷)脂類(lèi)成分直接溶解在肽(蛋白質(zhì))溶液中。或者可以將肽和脂類(lèi)加入共溶劑系統(tǒng)，即易混溶的溶劑混合物中。根據(jù)肽或蛋白質(zhì)的脂類(lèi)結(jié)合性質(zhì)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到在真空冷凍干燥前增溶或完全溶解(和／或增進(jìn)混合)可能是必需的；因此，可以相應(yīng)地選擇溶劑。首先根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定肽(蛋白質(zhì))與脂類(lèi)適當(dāng)?shù)谋壤允沟玫降慕j(luò)合物具有適宜的物理和化學(xué)性質(zhì)-這通常但不總是意味著與HDL2或HDL3相似的體積。脂類(lèi)與蛋白質(zhì)／肽的摩爾比應(yīng)在2-200的范圍內(nèi)，根據(jù)所需絡(luò)合物的種類(lèi)優(yōu)選5-50。這一體積類(lèi)型的肽／脂類(lèi)或蛋白質(zhì)／脂類(lèi)絡(luò)合物包括膠束或圓盤(pán)狀顆粒(通常比HDL2或HDL3小)、體積類(lèi)似于HDL2或HDL3的球狀顆粒和比HDL2更大的絡(luò)合物，但不局限于此。我們?cè)谏V中(圖1)用作標(biāo)準(zhǔn)物的HDLs主要是球狀的成熟HDL2。前-β1HDL是載脂蛋白和少量分子的磷脂的膠束絡(luò)合物。前-β2HDL是載脂蛋白和多分子的磷脂的圓盤(pán)狀絡(luò)合物。在絡(luò)合物中結(jié)合的脂類(lèi)(甘油三酯、膽固醇、磷脂)越多，HDL的體積越大，并且其形狀發(fā)生變化。(前-β1HDL(膠束絡(luò)合物)β2HDL(圓盤(pán)狀絡(luò)合物)HDL3(球狀絡(luò)合物)HDL2(球狀絡(luò)合物))。當(dāng)選擇溶劑并已加入肽和脂類(lèi)后，將產(chǎn)生的混合物冷凍并真空冷凍干燥至干。有時(shí)，在混合物中加入另一溶劑以助于真空冷凍干燥。制得的冷凍干燥產(chǎn)物可以長(zhǎng)時(shí)間保存并保持穩(wěn)定。在下面的實(shí)施例中，肽1PVLDLFRELLNELLEALKQKLK(SEQIDNO1)和(磷)脂類(lèi)分別溶解在甲醇中，混合，然后在真空冷凍干燥前與二甲苯混合?？梢詫㈦暮椭?lèi)都加入到兩種溶劑的混合物中?；蛘邔㈦牡募状既芤号c脂類(lèi)的二甲苯溶液混合。要小心避免肽鹽析析出。將所得的含有共溶于甲醇／二甲苯中的肽和脂類(lèi)的溶液真空冷凍干燥形成粉末。可以將冷凍干燥產(chǎn)品再水合重構(gòu)成含水形態(tài)得到肽-脂類(lèi)絡(luò)合物的溶液或懸浮液。為此，用水溶液將冷凍干燥粉末再水合至一適當(dāng)體積(常為便于靜脈注射的5mg肽／ml)。在一優(yōu)選實(shí)施例中，用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水溶液將冷凍干燥粉末再水合?？赡鼙仨殞⒒旌衔飻噭?dòng)或旋動(dòng)，以促進(jìn)再水合，在許多情況下，再水合重構(gòu)步驟的溫度要等于或大于絡(luò)合物中脂類(lèi)組分的相轉(zhuǎn)換溫度(Tm)。在數(shù)分鐘內(nèi)，形成水合重構(gòu)的脂類(lèi)-蛋白質(zhì)絡(luò)合物的溶液(當(dāng)絡(luò)合物較小時(shí)形成一種澄清的溶液)。可以鑒定產(chǎn)生的再水合重構(gòu)制劑以確認(rèn)制劑中的絡(luò)合物具有期望的體積分布，如HDL的體積分布。此時(shí)可以用凝膠過(guò)濾色譜。在下面的實(shí)施例中，使用PharmaciaSuperose6FPLC凝膠過(guò)濾色譜系統(tǒng)。所用的洗脫液是含有150mM氯化鈉的去離子水。典型的樣品體積是含5mg肽／ml的20-200毫升絡(luò)合物。柱的流速為0．5ml／min。使用一系列已知分子量和Stokes直徑的蛋白質(zhì)及人HDL作為標(biāo)準(zhǔn)物校準(zhǔn)色譜柱。用254或280nm波長(zhǎng)的光吸收或色散監(jiān)控蛋白質(zhì)和脂蛋白絡(luò)合物。根據(jù)本發(fā)明的方法可以使用的溶劑是非極性、極性、惰性、非惰性有機(jī)溶劑等如乙醇、甲醇、環(huán)己烷、1-丁醇、異丙基乙醇、二甲苯、THF、乙醚、二氯甲烷、苯和氯仿，但不局限于此。本發(fā)明除使用單一溶劑外還使用混合溶劑。并且，在用于本發(fā)明之前，可以將有機(jī)溶劑干燥除去水；然而某些脂類(lèi)、肽或蛋白質(zhì)可以使用水合溶劑或水。換一種說(shuō)法就是，水可能是適宜的溶劑，或可以使用水合的溶劑或有機(jī)溶劑／水混合物，然而如果使用水，其中必須不含洗滌劑。如上所述，優(yōu)選最純級(jí)別的溶劑(以避免冷凍干燥后雜質(zhì)的濃縮)，溶劑中應(yīng)無(wú)鹽且不含顆粒。然而，不要求溶劑無(wú)菌，因?yàn)樵诶鋬龈稍镏啊⑦^(guò)程中和之后可以按制藥領(lǐng)域的已知方法將產(chǎn)物滅菌，如Remington’s藥物學(xué)，第16版和18版，Mack出版公司，Easton，Pennsylvania(1980和1990)，和美國(guó)藥品手冊(cè)／國(guó)家藥典(USP／NF)ⅩⅦ所述的方法，全部引入在此作為參考。制備本發(fā)明組合物的方法可以使用的脂類(lèi)包括天然和合成脂類(lèi)和磷脂，包括低級(jí)烷基鏈磷脂，卵磷脂酰膽堿、豆磷脂酰膽堿、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二肉豆蔻?；字Ｄ憠A、二硬脂?；字Ｄ憠A、1-肉豆蔻?；?2-棕櫚酰基磷脂酰膽堿、1-棕櫚?；?2-肉豆蔻?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-硬脂酰基磷脂酰膽堿、1-硬脂?；?2-棕櫚?；字Ｄ憠A、二油?；字Ｄ憠A、二油酸酯磷脂酰乙醇胺、二月桂?；字８视?、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂類(lèi)、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻?；字８视汀⒍貦磅；字８视?、二硬脂?；字８视?、二油?；字８视?、二肉豆蔻?；字?、二棕櫚?；字?、二肉豆蔻?；字Ｒ掖及?、二棕櫚?；字Ｒ掖及贰⒍舛罐Ⅴ；字＝z氨酸、二棕櫚?；字＝z氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚?；柿字?、二硬脂酰基鞘磷脂、磷脂酸、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、二月桂基磷脂酰膽堿、(1，3)-D-甘露糖?；?(1，3)二甘油酯、氨基苯苷、3-膽甾烯基-6’-(糖基硫代)己基醚糖脂和膽甾醇及其衍生物。適用于本發(fā)明的肽包括但并不僅限于在3個(gè)共同的未決申請(qǐng)[在1997年9月29日申請(qǐng)的，系列號(hào)__，代理號(hào)為9196-0004-999，9196-0005-999，9196-0006-999]中記載的品種，將其全部引入在此作為參考。盡管不是在每種情況下都必需，但優(yōu)選在混合或攪拌脂類(lèi)和肽溶液之前或冷凍干燥前應(yīng)將沉淀物溶解或除去。此方法可以用于大規(guī)模制備肽／脂類(lèi)絡(luò)合物、兩性肽／(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物、脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)／(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物、和／或ApoAl肽類(lèi)似物／(磷)脂類(lèi)絡(luò)合物。可以制備用于大體積制劑的冷凍干燥原料，或者，將在冷凍干燥前混合的肽／脂類(lèi)溶液分置于較小容器中(如單劑量包裝)，這些較小的包裝可以制成無(wú)菌的單劑量劑型。本發(fā)明可以提供單劑量或多劑量包裝形式的真空干燥組合物，方法是將真空干燥前的無(wú)菌溶液分裝在適宜的容器中至規(guī)定的容量，制備所需的真空干燥組合物，然后將單劑量或多劑量容器密封。通過(guò)用適宜的無(wú)菌稀釋劑將干燥后的組合物原位水合重構(gòu)成具有所需給藥濃度的適宜的無(wú)菌溶液，從而在灌封的容器中快速形成溶液。此處所用的“適宜的容器”指能夠保持無(wú)菌環(huán)境，能采用塞子密封方式輸送真空干燥產(chǎn)品的容器，如小玻璃瓶。另外，適宜的容器有合適的大小，適合于真空干燥組合物水合重構(gòu)后的溶液的體積；和合適的容器材料，一般為Ⅰ類(lèi)玻璃。所用的塞子，例如無(wú)菌橡膠塞或同類(lèi)裝置，應(yīng)能提供上述密封，也能有加入稀釋劑-如注射用無(wú)菌水(USP)、生理鹽水(USP)或5％葡萄糖水溶液(USP)的入口，以重構(gòu)成所需溶液。容器如本申請(qǐng)所述的容器對(duì)藥品的適宜性的這些和其它方面對(duì)制藥領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的。在具體實(shí)施方案中，產(chǎn)品的單位劑量可以是10mg至2g肽，優(yōu)選100mg至1g，重構(gòu)成溶液后的濃度為1至50mg／ml，優(yōu)選2-25mg／ml。本發(fā)明的方法使蛋白質(zhì)或肽／脂類(lèi)絡(luò)合物的制劑能夠?qū)?dòng)物或人胃腸外給藥，包括靜脈、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)注射和作為診斷用的造影劑膠團(tuán)靜脈注射，或?qū)?dòng)物或人通過(guò)口服、直腸、粘膜給藥(如口腔粘膜)或局部給藥，或用于體外實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明方法制備的冷凍干燥粉末可以在注射前即刻重構(gòu)成溶液，或選擇直接服用冷凍干燥粉末。冷凍干燥粉末包括能夠形成微囊、脂質(zhì)體、球形或圓盤(pán)形顆粒、膠束顆粒等形態(tài)的絡(luò)合物的脂類(lèi)和肽，但不局限于此。為使冷凍干燥粉末重構(gòu)成溶液或再水合，根據(jù)所需的最終用途選擇溶液。用于藥物時(shí)選擇無(wú)菌溶液。進(jìn)而，為特定的用途優(yōu)選緩沖溶液，包括磷酸鹽、檸檬酸鹽、Tris、baribital、乙酸鹽、甘氨酸-HCl、琥珀酸鹽、卡可酸鹽、硼酸-硼砂、3-丙二醇和碳酸鹽?？梢杂萌魏伪绢I(lǐng)域已知的冷凍干燥技術(shù)，制備本發(fā)明的冷凍干燥粉末，包括將含肽／脂類(lèi)的溶液冷凍后減壓蒸發(fā)的凍干法，但不僅局限于使用凍干法。本方法也適用于儲(chǔ)存在缺少脂類(lèi)時(shí)不穩(wěn)定或不溶解的化合物。本方法可以用于配制治療或預(yù)防人類(lèi)疾病的產(chǎn)品，包括作為在疫苗中共同呈遞抗原的應(yīng)用，治療或預(yù)防異常脂蛋白血癥-包括但不局限于高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、低HDL和載脂蛋白A-1缺乏，及動(dòng)脈硬化等心血管疾病、敗血癥或感染性疾病。此方法還可以制備作為藥物載體的絡(luò)合物，如作為向肝臟或肝外細(xì)胞傳遞藥物的媒介物(傳遞藥物、DNA、基因)，或作為捕獲毒素(如殺蟲(chóng)劑、LPS等)的凈化劑?；蛘撸痉椒ㄒ部梢灾苽溆糜隗w外診斷系統(tǒng)或造影技術(shù)的絡(luò)合物。在具體實(shí)施方案中，可以用本方法制備ApoA-Ⅰ類(lèi)似物(包括但不局限于其激動(dòng)劑)的絡(luò)合物，用于體外診斷方法和作為DHL人群和亞群的標(biāo)志物。在其它具體實(shí)施方案中，ApoA-Ⅰ激動(dòng)劑絡(luò)合物可以用于免疫測(cè)定法或造影技術(shù)(如CAT掃描，MRT掃描)。以下的實(shí)例用以說(shuō)明本發(fā)明，但在任一方面都不能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的限制。6．實(shí)施例用共冷凍干燥法制備肽-脂類(lèi)絡(luò)合物用以下方案制備肽脂類(lèi)絡(luò)合物。將肽1(PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；SEQIDNO1)(22．4mg)溶解在甲醇中保溫?cái)?shù)分鐘并間斷地旋轉(zhuǎn)混合，制成3．5mg／ml的溶液。在此溶液中加入二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(DPPC)的甲醇溶液(100mg／ml儲(chǔ)備液)，使溶液中DPPC／肽的最終比例為2．5∶1(W／W)。將此溶液旋轉(zhuǎn)混合。在此溶液中加入二甲苯至終濃度為36％。取出部分所得溶液進(jìn)行凝膠過(guò)濾色譜分析。在液氮中將溶液冷凍，并真空冷凍至干。將含有20mg肽1(SEQIDNO1)和50mgDPPC的一部分在無(wú)菌鹽水中(0．9％NaCl)再水合，混合并加熱到41℃，維持幾分鐘，直至產(chǎn)生重構(gòu)的肽／磷脂絡(luò)合物澄清溶液。6．1例使用凝膠過(guò)濾和磷脂6．1．1原料和方法為試驗(yàn)絡(luò)合物的制備條件，經(jīng)常習(xí)慣于制備少量的絡(luò)合物進(jìn)行鑒定。這些制劑含有1mg肽，是按下述方法制備的在一1．0ml具塞的清潔玻璃瓶中(Waters#WAT025054)，將1mg肽1(SEQIDNO1)溶解于250μlHPLC級(jí)別的甲醇(PerkinElmer)。在室溫條件下不時(shí)旋轉(zhuǎn)小瓶以促使肽溶解。10分鐘后，還可以見(jiàn)到少量未溶解的顆粒狀物，但對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果無(wú)妨。從DPPC濃度為100mg／ml的甲醇溶液儲(chǔ)備液中分別取出含有1、2、3、4、5、7．5、10或15mgDPPC(Avanti極性脂類(lèi)，純度99％，產(chǎn)品號(hào)#850355)的幾份試液加入混合物中。加入甲醇使混合物的體積達(dá)400μl，在室溫進(jìn)一步間斷旋轉(zhuǎn)混合物10分鐘。此時(shí)在管中已幾乎不能見(jiàn)到未溶物質(zhì)。在每管中加入200μl二甲苯(Sigma-Aldrich純度99％，HPLC級(jí)別)并旋轉(zhuǎn)10秒。用20號(hào)標(biāo)準(zhǔn)注射器針頭在每管的頂部開(kāi)2個(gè)小洞，將試管在液氮中冷凍15秒，試管在真空條件下冷凍干燥過(guò)夜。向每管中加入200ml0．9％NaCl溶液。將每只試管旋轉(zhuǎn)20秒。此時(shí)試管中的溶液外觀呈乳狀。將試管在41℃保溫30分鐘。除含有15mgDPPC的試管仍為乳狀外，所有試管中的溶液均變澄清(即外觀類(lèi)似于水)。為測(cè)定是否所有用于制備絡(luò)合物的磷脂均實(shí)際出現(xiàn)在對(duì)應(yīng)于色譜吸收峰的柱洗脫部分中，按每份1ml或2ml的體積收集重構(gòu)肽／脂類(lèi)絡(luò)合物的柱洗脫物，用BioMerieux磷脂EnzymatiquePAP150試劑盒(#61491)按照廠(chǎng)商說(shuō)明酶法測(cè)定磷脂的含量。也可以大規(guī)模生產(chǎn)絡(luò)合物。以上報(bào)告了一個(gè)此制備的例子。這些混合物用于體內(nèi)試驗(yàn)。6．2絡(luò)合物的鑒定結(jié)果圖1用密度超速離心法從200μl人血清中制備的成熟HDL的Superose6色譜圖。色譜圖顯示在254nm的吸收。洗脫體積=14．8ml，相當(dāng)于Stokes’直徑為108埃(見(jiàn)表1)。圖2(底)按上述(小規(guī)模制備)保溫比例(Ri，定義為在初始混合物中總磷脂與總肽的比例)為1∶1(w∶w)制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為16．2ml和18．1ml，相當(dāng)于比HDL小的Stokes’直徑為74和82埃的顆粒。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的87％(見(jiàn)表1)。圖2(頂)按上述Ri=2∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為16．4ml，相當(dāng)于比HDL小的顆粒(77埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的70％(見(jiàn)表1)。圖3(底)按上述Ri=3∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為16．0ml，相當(dāng)于比HDL小的顆粒(80埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的79％(見(jiàn)表1)。圖3(頂)按上述Ri=4∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為15．7ml，相當(dāng)于比HDL小的顆粒(90埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的106％(見(jiàn)表1)。圖4(底)按上述Ri=5∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為15．1ml，相當(dāng)于比HDL小的顆粒(104埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的103％(見(jiàn)表1)。圖4(頂)按上述Ri=7．5∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為13．6ml，相當(dāng)于比HDL大的顆粒(134埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的92％(見(jiàn)表1)。圖5按上述Ri=10∶1(w∶w)的比例制備的DPPC肽1絡(luò)合物的Superose6色譜圖。吸收峰的保留體積為13．4ml，同樣相當(dāng)于比HDL大的顆粒(138埃)。包含吸收峰的洗脫部分回收了上柱磷脂的103％(見(jiàn)表1)。由于含有DPPC肽1的比例為15∶1的絡(luò)合物的樣品混濁，因此未用Superose6色譜柱處理，這也提示是有大的顆粒。上述的每個(gè)試驗(yàn)，除在含有與吸收峰對(duì)應(yīng)的洗脫物的洗脫部分外，未在其它部分檢測(cè)到顯著的磷脂(見(jiàn)圖2-8)。這提示實(shí)際上絡(luò)合物包合了所有的磷脂(在方法的試驗(yàn)誤差內(nèi))。試驗(yàn)顯示通過(guò)改變磷脂與肽的初始比例，可以得到各種體積的(比HDL大或小)均勻絡(luò)合物。6．3用14C-標(biāo)記肽1鑒定絡(luò)合物用上述共冷凍干燥法制備含有14C-標(biāo)記肽1(比活性為按重量計(jì)159，000DMP／mg肽，假定含有50％肽)的肽-磷脂絡(luò)合物。每種制劑含有1mg肽和3、4或5mgDPPC。絡(luò)合物在200μl0．9％NaCl中重構(gòu)后，將20μl(100μg)絡(luò)合物用PharmaciaSuperose6柱處理，用0．9％NaCl作為液相，流速為0．5ml／min。5ml的延遲體積后(柱空白體積=7．7ml)，收集1ml的流分。用含有20μl流分的試樣，以BioMerieux酶法測(cè)定其中磷脂的含量。每份流分的剩余部分置于Wallach1410液體閃爍計(jì)數(shù)器(Pharmacia)中，用快速計(jì)數(shù)程序(theEasyCountprogram)計(jì)數(shù)3分鐘。分析結(jié)果示于圖6-8?？梢?jiàn)，分別在峰體積約為16、16和15ml的少數(shù)流分中，同時(shí)回收得到了按3∶1、4∶1和5∶1的DPPC肽比例制備的絡(luò)合物中絕大部分的磷脂和肽。這些樣品的UV吸收曲線(xiàn)顯示按DPPC∶肽的比例為3∶1、4∶1和5∶1制備的絡(luò)合物，分別在15．1、14．7和14．4ml的體積處從柱上洗脫(流分收集器與UV檢測(cè)流動(dòng)池之間的死體積是1．3ml，這可以解釋為什么在放射活性／磷脂測(cè)定法和UV吸收法測(cè)得的洗脫體積之間存在小的差異)。Ri為3∶1、4∶1、5∶1的絡(luò)合物的洗脫體積分別對(duì)應(yīng)于106、114和120埃Stoke’s直徑。表1<tablesid="table1"num="001"><table>DPPC∶肽1比例洗脫體積顆粒的相對(duì)體積在吸收峰中出現(xiàn)的磷脂的％HDL14．8--1∶116．2和18．1小87％2∶116．4小70％3∶116．0小79％4∶115．7小106％5∶115．1小103％7．5∶113．6大92％10∶113．4大103％15∶1NDNDND</table></tables>·與HDL顆粒的體積相比¨ND，未作本發(fā)明不限于具體實(shí)施方案所述的范圍，它們僅作為對(duì)本發(fā)明各個(gè)方面的單一的解釋?zhuān)δ芟嗤姆椒ê统煞忠苍诒景l(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)際上，從以上描述和附圖所得出的，除本發(fā)明的記載之外的對(duì)本發(fā)明的各種改進(jìn)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員將是顯而易見(jiàn)的。這些改進(jìn)將落入所附權(quán)利要求書(shū)的保護(hù)范圍內(nèi)。權(quán)利要求1．一種制備冷凍干燥的肽／脂類(lèi)產(chǎn)品的方法，包括將在一溶劑系統(tǒng)中的一或多種能采取兩性構(gòu)型的肽或肽類(lèi)似物，和一或多種脂類(lèi)共冷凍干燥形成肽／脂類(lèi)產(chǎn)品，其中所述的產(chǎn)品可以再水合形成肽／脂類(lèi)絡(luò)合物。2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的肽是脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)。3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的肽類(lèi)似物是ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ、ApoA-Ⅳ、ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅱ、ApoC-Ⅲ、ApoE或其它脫輔基蛋白的類(lèi)似物。4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的肽是蛋白質(zhì)。5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的脂類(lèi)是天然脂類(lèi)、合成脂類(lèi)、飽和脂類(lèi)、不飽和脂類(lèi)或其混合物。6．根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的脂類(lèi)選自以下物質(zhì)卵磷脂酰膽堿、豆磷脂酰膽堿、醚磷脂(etherphospholipid)、低級(jí)烷基鏈磷脂、膽固醇、膽固醇衍生物、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二肉豆蔻?；字Ｄ憠A、二硬脂?；字Ｄ憠A、1-肉豆蔻?；?2-棕櫚?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-肉豆蔻酰基磷脂酰膽堿、1-棕櫚?；?2-硬脂酰基磷脂酰膽堿、1-硬脂酰基-2-棕櫚?；字Ｄ憠A、二油?；字Ｄ憠A、二油酸酯磷脂酰乙醇胺、二月桂?；字８视?、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂類(lèi)、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻?；字８视汀⒍貦磅；字８视?、二硬脂?；字８视?、二油?；字８视汀⒍舛罐Ⅴ；字?、二棕櫚酰基磷脂酸、二肉豆蔻?；字Ｒ掖及贰⒍貦磅；字Ｒ掖及?、二肉豆蔻酰基磷脂酰絲氨酸、二棕櫚?；字＝z氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚酰基鞘磷脂、二硬脂?；柿字?、磷脂酸、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、二月桂基磷脂酰膽堿、(1，3)-D-甘露糖基-(1，3)二甘油酯、氨基苯苷、3-膽甾烯基-6’-(糖基硫代)己基醚糖脂及其混合物。7．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括在真空冷凍干燥前、過(guò)程中或之后將產(chǎn)品滅菌的步驟。8．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物是無(wú)菌的。9．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括在真空冷凍干燥前將所述的肽和所述的脂類(lèi)分裝入單獨(dú)的容器中，以形成單位劑量的劑型。10．一種單位劑量的藥物劑型，其中含有按權(quán)利要求1或7的方法制備的無(wú)菌的冷凍干燥的肽／脂類(lèi)混合物。11．一種制備冷凍干燥肽／脂類(lèi)產(chǎn)品的方法，包括(a)將至少一種兩性肽或肽的類(lèi)似物溶解在第一溶液中，(b)將至少一種脂類(lèi)溶解在第二溶液中，其中所述的第二溶液與第一溶液混溶，(c)將所述的第一溶液和所述的第二溶液混合，形成肽／脂類(lèi)溶液，(d)將所述的肽／脂類(lèi)溶液冷凍干燥，以生成冷凍干燥的肽／脂類(lèi)產(chǎn)品，它可以再水合形成肽／脂類(lèi)絡(luò)合物。12．權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的肽是脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)。13．權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的肽是蛋白質(zhì)。14．根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的肽類(lèi)似物是ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ、ApoA-Ⅳ、ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅱ、ApoC-Ⅲ、ApoE或其它脫輔基蛋白的類(lèi)似物。15．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的脂類(lèi)是天然脂類(lèi)、合成脂類(lèi)、飽和脂類(lèi)、不飽和脂類(lèi)或其混合物。16．根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的脂類(lèi)選自以下物質(zhì)卵磷脂酰膽堿、膽固醇、膽固醇衍生物、醚磷脂(etherphospholipid)、豆磷脂酰膽堿、低級(jí)烷基鏈磷脂、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二肉豆蔻?；字Ｄ憠A、二硬脂酰基磷脂酰膽堿、1-肉豆蔻?；?2-棕櫚酰基磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰基-2-肉豆蔻?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-硬脂?；字Ｄ憠A、1-硬脂?；?2-棕櫚?；字Ｄ憠A、二油?；字Ｄ憠A、二油酸酯磷脂酰乙醇胺、二月桂酰基磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂類(lèi)、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻?；字８视汀⒍貦磅；字８视?、二硬脂?；字８视汀⒍王；字８视?、二肉豆蔻?；字?、二棕櫚酰基磷脂酸、二肉豆蔻?；字Ｒ掖及?、二棕櫚酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰絲氨酸、二棕櫚?；字＝z氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚?；柿字?、二硬脂?；柿字?、磷脂酸、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、二月桂基磷脂酰膽堿、(1，3)-D-甘露糖基-(1，3)二甘油酯、氨基苯苷、3-膽甾烯基-6’-(糖基硫代)己基醚糖脂及其混合物。17．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的肽／脂類(lèi)溶液是無(wú)菌的。18．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物是無(wú)菌的。19．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，還包括在真空冷凍干燥前將所述的肽／脂類(lèi)溶液分裝入單獨(dú)的容器中，以形成單位劑量的劑型。20．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，還包括在真空冷凍干燥前、過(guò)程中或之后將產(chǎn)品滅菌的步驟。21．一種單位劑量的藥物劑型，其含有按權(quán)利要求11或19的方法制備的無(wú)菌的穩(wěn)定的冷凍干燥的肽／脂類(lèi)混合物。22．用下述方法制備的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其方法包括將一溶劑系統(tǒng)中的一或多種兩性肽或肽類(lèi)似物和至少一種脂類(lèi)真空冷凍干燥以形成脫水的肽／脂類(lèi)產(chǎn)品，此產(chǎn)品可以再水合生成肽／脂類(lèi)絡(luò)合物。23．權(quán)利要求22所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中所述的肽是脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)。24．權(quán)利要求22所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中所述的肽是ApoAl類(lèi)似物。25．權(quán)利要求22所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中所述的脂類(lèi)是天然、合成、飽和、不飽和脂類(lèi)或其混合物。26．根據(jù)權(quán)利要求25所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中所述的脂類(lèi)選自以下物質(zhì)卵磷脂酰膽堿、豆磷脂酰膽堿、膽固醇、膽固醇衍生物、低級(jí)烷基鏈磷脂、醚磷脂、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿、二肉豆蔻?；字Ｄ憠A、二硬脂?；字Ｄ憠A、1-肉豆蔻?；?2-棕櫚?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-肉豆蔻?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-硬脂酰基磷脂酰膽堿、1-硬脂?；?2-棕櫚?；字Ｄ憠A、二油?；字Ｄ憠A、二油酸酯磷脂酰乙醇胺、二月桂?；字８视?、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂類(lèi)、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻?；字８视?、二棕櫚?；字８视?、二硬脂?；字８视汀⒍王；字８视汀⒍舛罐Ⅴ；字?、二棕櫚酰基磷脂酸、二肉豆蔻?；字Ｒ掖及贰⒍貦磅；字Ｒ掖及?、二肉豆蔻?；字＝z氨酸、二棕櫚酰基磷脂酰絲氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚?；柿字?、二硬脂?；柿字⒘字?、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、二月桂基磷脂酰膽堿、(1，3)-D-甘露糖基-(1，3)二甘油酯、氨基苯苷、3-膽甾烯基-6’-(糖基硫代)己基醚糖脂及其混合物。27．權(quán)利要求22所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中所述的絡(luò)合物是無(wú)菌的。28．權(quán)利要求22所述的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中將所述的絡(luò)合物配制成無(wú)菌的單位劑量。29．一種無(wú)菌、冷凍干燥的組合物，其中含有由可以采取兩性α-螺旋構(gòu)型的肽或肽的類(lèi)似物，和脂類(lèi)形成的絡(luò)合物的無(wú)菌制劑。30．根據(jù)權(quán)利要求28所述的制劑，其中所述的制劑為無(wú)菌單劑量劑型。31．一種冷凍干燥的組合物，其含有肽／脂類(lèi)絡(luò)合物，其中的肽是脂類(lèi)結(jié)合蛋白質(zhì)或ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ、ApoA-Ⅳ、ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅱ、ApoC-ⅢI、ApoE或其它脫輔基蛋白的類(lèi)似物。32．權(quán)利要求31的冷凍干燥組合物，其中的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物是微囊、膠束、脂質(zhì)體、圓盤(pán)狀顆粒、球狀顆?；蚱浠旌衔?。33．一種含有肽／脂類(lèi)絡(luò)合物的冷凍干燥組合物，其中的肽可以采取兩性α-螺旋構(gòu)型。34．權(quán)利要求33所述的冷凍干燥組合物，其中的肽／脂類(lèi)絡(luò)合物是微囊、膠束、脂質(zhì)體、圓盤(pán)狀顆粒、球狀顆?；蚱浠旌衔?。35．權(quán)利要求31或33所述的組合物，其中所述組合物是無(wú)菌的。36．權(quán)利要求29或31所述的組合物，其中所述的類(lèi)似物不是肽或蛋白質(zhì)。37．一種制備冷凍干燥肽／脂類(lèi)產(chǎn)品的方法，包括將溶劑系統(tǒng)中的一或多種可以采取兩性α-螺旋構(gòu)型的肽或肽的類(lèi)似物，和一或多種脂類(lèi)，按肽比脂類(lèi)為約2-200的比例，共冷凍干燥充足的時(shí)間，以形成可以在溶液中再水合生成肽／脂類(lèi)絡(luò)合物的肽／脂類(lèi)產(chǎn)品。全文摘要本發(fā)明涉及通過(guò)將肽—優(yōu)選能采取兩性α－螺旋構(gòu)型的肽,和一或多種脂類(lèi),進(jìn)行共冷凍干燥,形成肽/脂類(lèi)微囊和絡(luò)合物的方法?？梢詫⒛芡瑫r(shí)溶解肽和脂類(lèi)的單一溶液和兩種分別的溶液冷凍真空干燥。文檔編號(hào)A61K9/127GK1280490SQ98811818公開(kāi)日2001年1月17日申請(qǐng)日期1998年9月28日優(yōu)先權(quán)日1997年10月2日發(fā)明者瓊-路易斯·達(dá)索克斯申請(qǐng)人:瓊-路易斯·達(dá)索克斯