專利名稱：萘并噁嗪衍生物、其制備方法及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的雙取代的反式3,4,4a,5,6,10b-六氫化-2H-萘[1,2-b]-1,4-噁嗪、其制備方法以及含有它們的藥物組合物。
特別是涉及外消旋形式或其旋光異構體形式的式Ⅰ化合物及其與藥學上可接受的酸的加成鹽。
其中A代表直鏈或支鏈(C1-C10)烷基、(C3-C10)鏈烯基或(C3-C10)炔基，它們可選擇性地被一個或多個含3-8個碳原子的環(huán)烷基取代，或被選自苯基、噻吩基和吡啶基的芳基取代，這些芳基各自可選擇性地被一個或多個選自鹵原子、羥基、烷基和烷氧基(它們各自含1-6個碳原子且為直鏈或支鏈的)的取代基取代；E代表
其中R1和R2可以相同或不同，分別代表氫原子或上述A所代表的基團，R3代表氫原子或者含1-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
式Ⅰ化合物可用作體內外有效的多巴胺能配位體。
由于多巴胺能化合物對精神疾病和外周性心血管疾病的有益作用，所以它們在治療上被廣泛使用。
現(xiàn)已克隆和表征了五種多巴胺能受體亞型(D1-D5)。目前，大多數(shù)藥物是通過作用于D2亞型的方式或者作為阻斷劑(或拮抗劑)或者用作激活劑(或興奮劑)作用于多巴胺能系統(tǒng)。這些藥物有許多副作用遲發(fā)的運動障礙，高催乳素血癥，前一疾病下的閉經(jīng)以及后一疾病下的心血管和運動原性反應。
與D2受體不同，D3受體在黑質紋狀核和乳食性(lactotrophic)細胞中的濃度非常低。另一方面，與D2受體相同，D3受體的濃度在邊緣系統(tǒng)中非常顯著。存在于這兩種受體亞型位置的顯著差別促使研究得到新的藥物，這種藥物優(yōu)先作用于D3亞型，并且會使與上述D2亞型有關的副作用最小化或不存在這些副作用。
目前僅很少產(chǎn)品聲稱是這種作用機制。
現(xiàn)有技術記載了氨基1,2,3,4-四氫化萘的三環(huán)化合物(參見美國專利5,486,611號的說明書)，但這些化合物優(yōu)先作用于5-羥色胺能系統(tǒng)，確切地說是作用于5HT1A受體亞型。在結構和作用的專一性方面，本發(fā)明化合物與這些化合物不同。
對本發(fā)明化合物的體外研究(與克隆的人D2和D3受體結合)證明這些化合物優(yōu)先用作D3受體的配位體，對D2受體的親和性很小。
從降低已存在的副作用角度考慮，這種特性使得本發(fā)明化合物尤其有價值。
體內幾項實驗已證實了這些藥物在治療許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面的作用機制(記錄大鼠腹側大腦腳蓋區(qū)的細胞外單元的電活性)及其使用價值。
尤其是已證實本發(fā)明化合物在大鼠的超聲發(fā)音實驗，被迫游泳實驗以及6-OH-DPAT損傷性大鼠的“旋轉”實驗方面的活性。
所得的結果表明本發(fā)明產(chǎn)品可用于治療焦慮癥，抑郁癥，攻擊行為，帕金森病和精神分裂癥。
本發(fā)明還涉及制備式Ⅰ化合物的方法，其特征是將式Ⅱ的反式化合物在吡啶存在下與三氟甲磺酸酐反應得到式Ⅲ的反式化合物
其中A如前面所述，
其中A如前面所述，并將式Ⅲ化合物在高溫下在二甲基甲酰胺中與氰化鋅和四(三苯膦)鈀(0)反應得到式Ⅰa的反式化合物
其中A如前面所述，或者在Heck反應條件下與正丁基乙烯基醚反應得到式Ⅰb的反式化合物
其中A如前面所述，并且，任選地將前面所得的式Ⅰa化合物用鹽酸和醋酸的混合物進行回流處理得到式Ic的反式化合物
其中A如前面所述，任選化合物Ⅰc在鹽酸存在下用式Ⅳ化合物處理得到式Ⅰd的反式化合物R3-OH (Ⅳ)其中R3如前面所述，
其中A和R3如前面所述，或者在2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲陽離子(uronium)四氟硼酸鹽，三乙胺和二氯甲烷中的催化量4-二甲氨基吡啶存在下用式Ⅴ化合物處理得到式Ⅰe的反式化合物
其中R1和R2如前面所述，
其中A,R1和R2如前面所述，式Ⅰa,Ⅰb,Ⅰc,Ⅰd和Ⅰe的反式化合物的總和構成式Ⅰ的反式化合物總和。
根據(jù)文獻所述的起始于已知物質的方法制備式Ⅱ的起始物質。
根據(jù)文獻所述的已知方法，由式Ⅱ起始物質的旋光活性形式開始，或者通過分離式Ⅰ化合物的外消旋形式，可得到式Ⅰ化合物的旋光活性形式。
本發(fā)明還涉及藥學組合物，此組合物包括作活性成分的式Ⅰ化合物或其生理上可耐受的鹽以及與之混合或結合的一種或多種適宜的藥學賦形劑。
這樣制備的藥學組合物通常按含0.5-25mg活性成分的劑量形式出現(xiàn)。它們可以是片劑，糖衣丸，明膠膠囊，栓劑或注射液或口服液，且可以通過口服，直腸或腸胃外途徑給藥。
劑量可根據(jù)患者的年齡和體重，給藥途徑，疾病性質和相關治療的不同而變化，其范圍為0.5-25mg活性成分，1-3次/天。
下面的實施例是對本發(fā)明進行舉例說明，而不是限定本發(fā)明。使用Kofler熱板(K)或顯微鏡下的熱板(MK)測定熔點。除另有說明外，一般在200MHz測定質子核磁共振光譜(NMR)。實施例1反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氰基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪及其鹽酸鹽步驟A反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-[(三氟甲基)磺酰氧基]-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪將18.7ml三氟甲磺酸酐慢慢加入21.0g反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-羥基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪在17ml吡啶中的溶液中，同時使溫度保持在0-5℃。在0℃攪拌1小時后，在真空中將反應混合物濃縮。在硅膠柱中用色譜法分離蒸發(fā)殘余物(洗脫液CH2Cl2/CH3COOC2H5；85/15)得到22.4g預期產(chǎn)品。熔點56-57℃(K)產(chǎn)率69％步驟B標題化合物室溫下將2.39g Zn(CN)2和1.34g Pd[P(C6H5)3]4順序加入11.0g步驟A的標題化合物在55ml二甲基甲酰胺(DMF)中的脫氣溶液中。在80℃將反應混合物加熱3小時。在80℃下再依次向混合物中加入2.39g Zn(CN)2和1.34gPd[P(C6H5)3]4。于80℃加熱18小時后，將反應混合物注入500ml水中。用乙醚萃取混合物。合并有機相，再用1N HCl萃取四次。合并水相，用氫氧化鈉溶液進行堿化，并用乙醚萃取。合并有機相，用鹽水沖洗一次，再用硫酸鎂干燥，在真空中濃縮得到6.27g預期產(chǎn)品。將1g產(chǎn)品在硅柱上進行色譜分離(洗脫液CH2Cl2/CH3COOC2H5；90/10)得到0.66g預期的堿。從乙酸乙酯中結晶出其鹽酸鹽。熔點201-203℃(K)(升華190-195℃)1H-NMR:300MHz(DMSO)d611.6ppm,m,1H；7.75ppm,d,1H；7.7ppm,dd,1H；7.4ppm,d,1H；5.0ppm,d,1H；4.25ppm,d,2H；3.6ppm,d,1H；3.45-3.15ppm,m,3H；3.0ppm,m,3H；2.5ppm,m,1H；1.75ppm,m,2H；0.95ppm,t,3H.實施例2反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氨基甲?；?4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪將1g實施例1的標題產(chǎn)品在37ml乙醇和0.6g KOH中的溶液進行回流加熱。48小時后，在真空將反應混合物濃縮。殘余物溶于200ml 95∶5 CH2Cl2/CH3OH混合物中。用鹽水沖洗溶液兩次，并用硫酸鎂干燥，在真空中濃縮得到0.8g固體，將該固體用甲醇再結晶。熔點200-202℃(MK)產(chǎn)率72％1H-NMR:(DMSO)d67.94ppm,s,1H；7.90ppm,s,1H(可交換)；7.66ppm,dd,1H；7.15ppm,s,1H(可交換)；7.14ppm,d,1H；4.20ppm,d,1H；4.00ppm,dd,1H；3.78ppm,m,1H；2.98-2.70ppm,m,4H；2.40-2.0ppm,m,4H；1.60-1.35ppm,m,3H；0.9ppm,t,3H實施例3:(+)-反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氨基甲?；?4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪在手性載體(Chiracel AD，洗脫液100％乙醇，流速5ml/分，檢測240nm)上通過正相高壓色譜法對2g實施例2的標題產(chǎn)品進行色譜分離，得到0.72g最小殘留對映體。用甲醇再結晶得到0.7g標題產(chǎn)品(ee＞99％)。熔點200-202℃(MK)1H-NMR:(DMSO)d67.94ppm,s,1H；7.90ppm,s,1H(可交換)；7.66ppm,dd,1H；7.15ppm,s,1H(可交換)；7.14ppm,d,1H；4.20ppm,d,1H；4.00ppm,dd,1H；3.78ppm,m,1H；2.98-2.70ppm,m,4H；2.40-2.0ppm,m,4H；1.60-1.35ppm,m,3H；0.9.ppm,t,3H[α]20℃:(c=1％,CHCl3).
實施例4:(-)-反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氨基甲酰基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪在手性載體(Chiracel AD，洗脫液100％乙醇，流速5ml/分，檢測240nm)上通過正相高壓色譜法對2g實施例2的標題產(chǎn)品進行色譜分離，得到0.71g最多殘留對映體。用甲醇再結晶得到0.69g標題產(chǎn)品(ee＞99％)。熔點200-202℃(MK)1H-NMR:(DMSO)d67.94ppm,s,1H；7.90ppm,s,1H(可交換)；7.66ppm,dd,1H；7.15ppm,s,1H(可交換)；7.14ppm,d,1H；4.20ppm,d,1H；4.00ppm,dd,1H；3.78ppm,m,1H；2.98-2.70ppm,m,4H；2.40-2.0ppm,m,4H；1.60-1.35ppm,m,3H；0.9ppm,t,3H.[α]20℃；(c=1％,CHCl3
實施例5反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-(N-甲基氨基甲?；?-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪步驟A反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪-9-羧酸鹽酸鹽室溫下將68ml 36％鹽酸加入6.14g實施例1的標題化合物在68ml冰醋酸中的溶液中?；亓?8小時后，將反應混合物干燥。在乙醚中研制固體殘余物，過濾并干燥得到8.65g白色粉末，將該粉末用80ml水再結晶，這樣得到6.9g所需產(chǎn)品。熔點260℃(K)產(chǎn)率89％步驟B本實施例的標題化合物室溫下在1小時內將單甲胺加入1g上面所得的化合物，1.13g 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲陽離子四氟硼酸鹽(TBTU)和1.1ml三乙胺在14ml二氯甲烷中的溶液中。在室溫下攪拌18小時后，用二氯甲烷稀釋反應混合物，用1N NaOH沖洗一次，再用水沖洗三次，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后在真空中濃縮。將固體殘余物(1.14g)從100ml乙酸乙酯再結晶，得到0.41g標題化合物。熔點179-180℃產(chǎn)率44％1H-NMR:300MHz(CDCl3)7.8ppm,s,1H；7.7ppm,d,1H；7.1ppm,d,1H；6.2ppm,m,1H(可交換)；4.3ppm,d,1H；4.1-3.9ppm,m,2H；2.98ppm,s,3H；2.9ppm,m,2H；2.9ppm,m,1H；2.8-2.45ppm,m,2H；2.3ppm,m,2H；2.3-1.6ppm,m,2H；1.5ppm,m,2H；0.9ppm,t,3H.實施例6反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-(N,N-二甲基氨基甲酰基)-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪將1g實施例5的步驟A所得的產(chǎn)品按實施例5的步驟B進行處理(用二甲胺代替單甲胺)，在異丙醚中固化后得到0.46g標題產(chǎn)品。熔點85-87℃(MK)產(chǎn)率47％1H-NMR:300MHz(CDCl3)7.6ppm,s,1H；7.2ppm,d,1H；7.1ppm,d,1H；4.30ppm,d,1H；4.1-3.9ppm,m,2H；3.05ppm,s,6H；2.9ppm,m,2H；2.9ppm,m,1H；2.8-2.5ppm,m,2H；2.2ppm,m,2H；2.3-1.5ppm,m,2H；1.5ppm,m,2H；0.9ppm,t,3H.實施例7反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-(N-丁基氨基甲酰基)-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪室溫下將1g實施例5的步驟A所得的產(chǎn)品、1.13g TBTU和0.26g正丁胺懸浮在14ml二氯甲烷中。在室溫下加入1.1ml三乙胺，并在此溫度下將反應混合物攪拌18小時。用二氯甲烷稀釋反應混合物，用1N NaOH沖洗一次，再用水沖洗三次，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后在真空中濃縮。將油狀殘余物在異丙醚中固化得到0.6g標題產(chǎn)品。熔點128-131℃(MK)產(chǎn)率56％1H-NMR:300MHz(CDCl3)7.8ppm,s,1H；7.7ppm,d,1H；7.15ppm,d,1H；6.15ppm,t,1H(可交換)；4.1-3.95ppm,m,2H；3.4ppm,q,2H；3.0ppm,m,2H；2.9ppm,m,1H；2.85-2.5ppm,m,2H；2.3ppm,m,2H；2.3-1.6ppm,m,2H；1.6-1.4ppm,m,6H；0.9ppm,t,3H.實施例8反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-(N-對甲氧苯基氨基甲?；?-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪在室溫下，將0.8g實施例5的步驟A所得的產(chǎn)品、0.9g TBTU、催化量的4-二甲氨基吡啶和0.35g對甲氧苯胺懸浮在11ml二氯甲烷中。在室溫下加入0.9ml三乙胺，并在此溫度下將反應混合物攪拌18小時。用二氯甲烷稀釋反應混合物，用1N NaOH沖洗一次，再用水沖洗三次，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后在真空中濃縮。將固體殘余物從乙酸乙酯中再結晶得到0.42g標題產(chǎn)品。熔點185-186℃(MK)產(chǎn)率43％1H-NMR:300MHz(CDCl3)7.92ppm,s,1H；7.85ppm,d,1H；7.8ppm,m,1H(可交換)；7.5ppm,d,2H；7.2ppm,d,1H；6.9ppm,d,2H；4.3ppm,d,1H；4.1-3.45ppm,m,2H；3.8ppm,s,3H；2.95ppm,m,1H；2.9ppm,m,2H；2.8-2.5ppm,m,2H；2.3ppm,m,2H；2.3-1.6ppm,m,2H；1.6ppm,m,2H；0.9ppm,t,3H.實施例9反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-(N-對甲氧芐基氨基甲酰基)-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪將0.7g實施例5的步驟A所得的產(chǎn)品按實施例7進行處理(用對甲氧芐基胺代替正丁胺)，從乙酸乙酯中再結晶后得到0.34g標題產(chǎn)品。熔點148-150℃(MK)產(chǎn)率38％1H-NMR:300MHz(CDCl3)7.85ppm,d,1H；7.75ppm,dd,1H；7.3ppm,d,2H；7.2ppm,d,1H；6.9ppm,d,2H；6.4ppm,t,1H(可交換)；4.6ppm,m,2H；4.3ppm,d,1H；4.1-3.95ppm,m,2H；3.8ppm,s,3H；2.9ppm,m,4H；2.3ppm,m,4H；1.5ppm,m,3H；0.9ppm,t,3H.實施例10反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-乙酯基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪及其鹽酸鹽將1g實施例1的標題化合物溶解在15ml氯仿和15ml乙醇的混合物中。將溶液冷卻至0℃，再將HCl氣流以氣泡形式連續(xù)沖入1小時。將混合物置于室溫，攪拌24小時。然后在真空濃縮混合物，溶于100ml磷酸鹽緩沖液中，在室溫下攪拌3天。用1N氫氧化鈉溶液將溶液堿化，并用二氯甲烷萃取。蒸發(fā)得到1g標題產(chǎn)品，用4N氯化氫乙醚溶液將此產(chǎn)品轉化成其鹽酸鹽。重量1.05g熔點220-221℃(MK)產(chǎn)率79％1H-NMR:300MHz(CDCl3)13.20ppm,larges.,1H(可交換)；8.18ppm,s,1H；7.92ppm,dd,1H；7.18ppm,d,1H；8.35ppm,d,1H；4.70ppm,d,1H；4.38ppm,q,2H；4.22ppm,dd,1H；3.55ppm,d,1H；3.33ppm,td,1H；3.00ppm,m,5H；2.57ppm,m,1H；2.40ppm,m,1H；2.02ppm,m,1H；1.80ppm,m,1H；1.40ppm,t,3H；1.05ppm,t,3H實施例11反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-乙酰基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪及其鹽酸鹽將1.3g實施例1的步驟A所得的化合物溶解在10ml二甲基甲酰胺中。在室溫下，加入0.57ml三乙胺，2.22ml正丁基乙烯基醚，42mg 1,3-二-(二苯膦基)丙烷和19.3mg
將溶液在80-90℃加熱3小時，冷卻至室溫后，加入15ml 1N HCl。連續(xù)攪拌1小時。然后用1N HCl稀釋反應混合物，再用乙醚沖洗溶液數(shù)次。用氫氧化鈉溶液堿化水相，并用二氯甲烷萃取四次。通過快速色譜法(CH2Cl2/CH3COOC2H5:90/10和80/20)蒸發(fā)和純化得到0.61g預期產(chǎn)品，通過乙醚氯化氫的作用制備其鹽酸鹽。重量0.57g。熔點225-226℃(MK)產(chǎn)率54％1H-NMR::300MHz(DMSO)11.58ppm,s,1H(可交換)；8.03ppm,s,1H；7.88ppm,d,1H；7.33ppm,d,1H；5.01ppm,d,1H；4.22ppm,d,2H；3.58ppm,d,1H；3.40 to 3.20ppm,m,4H；3.15 to 2.90ppm,m,3H；2.55ppm,s,3H；2.04ppm,m,1H；1.72ppm,m,2H；0.98ppm,t,3H.實施例12藥理學研究A．體外人D2和D3受體結合研究細胞培養(yǎng)根據(jù)文獻記載的已知方法，按穩(wěn)定方式用基因編碼的人多巴胺D2或D3受體對中國倉鼠卵巢細胞(CHO)進行轉染。在二氫葉酸還原酶(DHFR)中缺乏天然細胞。這種細胞可在37℃在5％CO2和95％空氣的潮濕氣氛中置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。用脂質轉染劑(Gibco)進行轉染。根據(jù)對培養(yǎng)基中的抗生素的耐受性來選擇用人D2受體和腐草霉素抗性基因共同轉染的CHO細胞。在不含次黃嘌呤/胸苷的培養(yǎng)基中，在有氨甲蝶呤存在時選擇用人D3受體轉染的細胞。所用培養(yǎng)基的組成為CHO-D2:DMEM(Dulbecco改性Eagle培養(yǎng)基)加上10％胎牛血清和次黃嘌呤/胸苷。CHO-D3:DMEM加上10％滲析胎牛血清。在匯合處收集細胞，然后制備膜。膜的制備在0.2％胰蛋白酶中放置幾分鐘后，回收細胞并在2,000g離心5分鐘。將細胞群再懸浮在10mM pH7.5且含5mM MgSO4的Tris-HCl緩沖液中，然后通過Polytron。在50,000g將勻漿離心15分鐘，然后通過柔和的超聲處理將細胞群再懸浮在以下組成的培養(yǎng)緩沖液中pH7.5的50mM Tris-HCl，含120mM NaCl,5mM KCl,2mM CaCl2,5mM MgCl2。然后將膜分成等份，儲存在-80℃，直至實驗時。結合實驗在最終體積為400μl的聚丙烯管中進行培養(yǎng)，管中包含:
100μl[125I]-idosupride(Amersham)(對D2受體和D3受體分別為0.1nM和0.2nM)100μl緩沖液(全管)或100μl 10μM雷氯必利(非特異性結合)或100μl化合物200μl含置于緩沖液中的D2或D3受體的膜制劑，緩沖液中加有0.2％BSA(牛血清白蛋白)。
每一化合物的濃度范圍至少包含在三份中測定的七點，每一實驗至少重復兩次。
通過用Brandle裝置快速過濾使在30℃持續(xù)30分鐘的培養(yǎng)終止，然后用含120mM NaCl且pH為7.4的Tris-HCl緩沖液連續(xù)漂洗三次。回收的濾液用γ計數(shù)器進行計數(shù)。結果分析用非線性回歸(Prism Graph法)計算IC50,IC50表示抑制50％放射配體結合的濃度。
從式Ki=IC50/(1+L/Kd)得出Ki值，其中L為用于實驗的[125I]-iodosulpride的濃度，Kd為離解常數(shù)。結果表示為pKi(pKi=-logKi)。
對于人D2和D3受體，Kd分別為0.5nM和1.31nM。結果作為實例，實施例3產(chǎn)品對于D3受體的pKi為8，對于D2受體的pKi為6.5。B．體內1．記錄大鼠腹側大腦腳蓋區(qū)的細胞外單元的電活性的實驗原理多巴胺能興奮劑給藥以劑量依賴性方式降低神經(jīng)原的放電頻率。這種作用被多巴胺能拮抗劑氟哌啶醇逆轉。方法用水合氯醛(400mg/kg,i.p.)麻醉大鼠，在股靜脈插入導管后將大鼠置于有規(guī)立構裝置(unimécanique,France)中。通過每小時i.p.給予水合氯醛保持麻醉程度，用恒溫控制的加熱蓋保持直腸溫度為37±1℃。用電子微型插入裝置(Unimécanique,France)將鎢微電極(10MΩ,1μm)插入腹側大腦腳蓋區(qū)(AP:-5.5/前囟點；L:0.7；H；7.0-8.5/硬膜；Paxinos and Watson atlas,1986)。用其形態(tài)學(三相電勢+/-/+，持續(xù)時間大于3msec)，放電間歇(規(guī)則或突然出現(xiàn)降幅)，以及其放電頻率(2-8Hz)來記錄多巴胺能細胞的電勢。每只動物記錄用的是單個細胞。
過了大于等于5分鐘(基礎活性)且首次注射載體(加有幾滴稀乳酸的蒸餾水；用1N NaOH將pH調至5)后，靜脈內給予本發(fā)明產(chǎn)品，以2-3分鐘的間隔累計增加劑量。結果分析使用軟件Spike2(Cambridge Electronic Design,England)獲得實驗數(shù)據(jù)。在1分鐘內每次注射間的最大變異時測定放電頻率，表示為變異百分數(shù)，相對于100％的基礎活性(在第一次治療之前5分鐘的平均值)而言。通過重復測定的變異分析對本產(chǎn)品的作用進行統(tǒng)計學評價，然后根據(jù)Newman-Keuls實驗比較不同劑量的作用與載體的作用。結果作為實例，將實施例3產(chǎn)品的作用列于下表
單個值(n=4)=平均數(shù)±平均數(shù)的標準誤差根據(jù)重復測定的變異分析比較不同劑量化合物的作用實施例3,F(6.18)=28.29,p＜0.001,Newman-Keuls實驗*=p≤0.05。2．大鼠的超聲發(fā)音實驗原理如果將大鼠放在預先設有不愉快刺激的環(huán)境(電擊腳爪)中，它就會通過發(fā)出聽不見的哭聲(超聲發(fā)音)來表現(xiàn)其焦慮。本產(chǎn)品是通過減少這些發(fā)音的持續(xù)時間而證實其抗焦慮活性的。裝置置于吸音通風盒中的標準籠(Coulbourn Instruments)裝備有由可帶電金屬棒(電擊發(fā)生器和擾頻器Med Associates Inc)組成的地板，頂部中央有一個麥克風。將超聲轉換成可聽見的聲音(bat-detector Buitenbedrijf)。將按這種方式改性的信號過濾，然后進行處理(RTS軟件,Engineering Design)。在DAT帶上記錄得到的光譜圖。方法將新出生的重180-200g的雄性Wistar大鼠放在四只籠子中，實驗前五天自由飲水和食物，直至實驗結束。實驗過程按24小時分成三個連續(xù)階段，即訓練，選種和實驗。訓練期間，將動物單獨置于籠中，隨機電擊(0.8mA,8s)6次，共7分鐘。選種包括將每只動物在籠中放2分鐘，接受1次電擊，放回籠中30分鐘后記錄10分鐘的超聲發(fā)音；發(fā)音持續(xù)時間少于90秒的動物將不再用于后面的實驗。除了在實驗最后兩分鐘內給予本產(chǎn)品或載體外，實驗階段按選種階段類似的方式進行。結果作為實例，下列表中顯示了以1ml/kg體積把實施例3的產(chǎn)品皮下給藥的作用。
s.e.m.平均數(shù)的標準誤差n大鼠數(shù)與載體相比(Dunnett實驗):**p＜0.01當劑量為0.04和0.16mg/kg時，本產(chǎn)品使發(fā)音的持續(xù)時間大為縮短，表現(xiàn)出其抗焦慮活性。3．強迫游泳實驗原理強迫游泳實驗(Porsolt R.等人，歐洲藥理學雜志，1978,47,379-91)是一種有關行為的實驗；它包括將首次用來實驗的動物放在充滿水的箱中，動物不能從中跑出，這樣使動物喪失信心，此過程持續(xù)15分鐘。從開始5-10分鐘大鼠奮勇地掙扎，但在實驗的最后終于采取一種穩(wěn)定的姿勢。第二天將動物仍放在同樣的箱，實驗的大多數(shù)時間(5分鐘)動物保持穩(wěn)定姿勢。實驗期間抗抑郁藥減少了大鼠穩(wěn)定持續(xù)的時間。步驟實驗進行兩天，間隔24小時，使用平均重170g的大鼠，前一天單獨放在籠子中，給予自由飲食。
第1天，將每只大鼠在一個玻璃圓筒(直徑20cm×高40cm)中放置15分鐘，圓筒中充滿了25℃、高15cm的水。第2天，再將動物在圓筒中放置5分鐘；測定大鼠保持穩(wěn)定的總時間(秒)。實驗前30分鐘給動物使用本產(chǎn)品或溶劑。結果作為實例且為了舉例說明本發(fā)明產(chǎn)品的活性，下表記錄了實施例3產(chǎn)品的作用。
(n)=大鼠數(shù)實施例3的產(chǎn)品以劑量依賴的方式使動物的穩(wěn)定時間縮短，這表明當ID50為0.41mg/kg s.c.時此產(chǎn)品具有極好的抗抑郁作用。4．黑質單側損傷的大鼠被多巴胺能興奮劑誘導的“旋轉”原理向黑質單側注射神經(jīng)毒素6-羥基-多巴胺(6-OH-DA)可導致上行的黑質紋狀通路的退化，并伴有損傷一側的突觸后多巴胺能受體的超敏反應。在遭受此損傷的大鼠中，直接系統(tǒng)給予興奮劑(阿撲嗎啡)可導致對側旋轉(在損傷的對側)。這一實驗證明本產(chǎn)品的多巴胺能興奮特性可用于治療帕金森病。方法損傷在重280-330g，用戊巴比妥(40-50mg/kg i.p.)麻醉且給予25mg/kg i.p.地昔帕明的雄性Wistar大鼠中產(chǎn)生損傷。將動物放在KOPF有規(guī)立構裝置中，顱部按Pellegrino和Cushman Atlas(1979)取向。在黑質左側用微灌注器緩慢注入4μl 6-OH-DA(2μg/μl)溶液(A=2.4mm；L=2.0mm；V=3.1mm，與耳間的零度相對而言)(U.Ungerstedt,Acta Physiol.Scandi.Suppl.,1971,367,69-93)。裝置通過計算機用ROTACOUNT系統(tǒng)(Columbus Co,USA)自動記錄旋轉數(shù)和方向。將動物置于直徑30cm和高50cm的平底圓筒中。將細的半硬電纜繞在動物的前爪下方，與位于圓筒上方并與計算機相連的光學計數(shù)單元相連。損傷動物的選擇用6-OH-DA誘導損傷后一個月，根據(jù)在給予多巴胺能興奮劑阿撲嗎啡(0.04mg/kg,s.c.)后1小時中至少出現(xiàn)150次對側旋轉的標準來選擇正確受損的動物。步驟每周對動物進行一次實驗，本發(fā)明產(chǎn)品與多巴胺能興奮劑交替使用。注射多巴胺能興奮劑時(T0)開始記錄對側旋轉并持續(xù)1小時。每一動物均為自身對照。結果作為實例，下表表明了s.c.給予實施例3產(chǎn)品所產(chǎn)生的作用。
(n)=大鼠數(shù)在該實驗中實施制3的產(chǎn)品從0.04mg/kg的劑量起有效。
權利要求
1．一種外消旋形式或其旋光異構體形式的式Ⅰ化合物及其與藥學上可接受的酸的加成鹽
其中A代表直鏈或支鏈(C1-C10)烷基、(C3-C10)鏈烯基或(C3-C10)炔基，它們可選擇性地被一個或多個含3-8個碳原子的環(huán)烷基取代，或被選自苯基、噻吩基和吡啶基的芳基取代，這些芳基各自可選擇性地被一個或多個選自鹵原子、羥基、烷基和烷氧基(它們各自含1-6個碳原子且為直鏈或支鏈的)的取代基取代；E代表
其中R1和R2可以相同或不同，分別代表氫原子或上述A所代表的基團，R3代表氫原子或者含1-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
2．按照權利要求1所述的化合物，為反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氰基-4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪及其鹽酸鹽。
3．按照權利要求1所述的化合物，為反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氨基甲?；?4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪。
4．按照權利要求1所述的化合物，為(+)-反式-3,4,4a,5,6,10b-六氫化-9-氨基甲?；?4-丙基-2H-萘并[1,2-b]-1,4-噁嗪。
5．一種制備權利要求1的化合物的方法，其特征在于將式Ⅱ的反式化合物在吡啶存在下與三氟甲磺酸酐反應得到式Ⅲ的反式化合物
其中A如權利要求1所述，
其中A如前面所述，并將式Ⅲ化合物在高溫下在二甲基甲酰胺中與氰化鋅和四(三苯膦)鈀(0)反應得到式Ⅰa的反式化合物
其中A如前面所述，或者在Heck反應條件下與正丁基乙烯基醚反應得到式Ⅰb的反式化合物
其中A如前面所述，并且，任選地將前面所得的式Ⅰa化合物用鹽酸和醋酸的混合物進行回流處理得到式Ic的反式化合物
其中A如前面所述，任選將化合物Ⅰc在鹽酸存在下用式Ⅳ化合物處理得到式Ⅰd的反式化合物R3-OH(Ⅳ)其中R3如權利要求1所述，
其中A和R3如前面所述，或者在2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲陽離子四氟硼酸鹽，三乙胺和二氯甲烷中的催化量4-二甲氨基吡啶存在下用式Ⅴ化合物處理得到式Ⅰe的反式化合物
其中R1和R2如權利要求1所述，
其中A,R1和R2如前面所述。
6．一種可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥學組合物，它包括根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的化合物作為活性成分以及一種或多種合適的藥學賦形劑。
全文摘要
具有下式的外消旋形式或其旋光異構體形式的新化合物及其與藥學上可接受的酸的加成鹽:其中A代表烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基烷基或芳烷基,和E代表:該化合物可用作藥物。
文檔編號A61P25/24GK1222516SQ9811998
公開日1999年7月14日 申請日期1998年8月31日 優(yōu)先權日1997年9月1日
發(fā)明者J－L·佩吉里恩, J－C·哈曼杰, M·米蘭, F·萊杰尼 申請人:阿迪爾公司