專利名稱：含原人參二醇組分皂甙的藥物組合物,其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有原人參二醇組皂甙的新的藥物組合物，其制備方法及該組合物在預(yù)防和治療因自然或化學(xué)突變、自由基氧化損傷或物理?yè)p傷如阻塞性缺血引起的細(xì)胞、組織或器官病理改變中的應(yīng)用。
人參(panax gingseng)、西洋參(panax quinquefolium)、和三七(panaxnotoginseng)等均屬于五加科人參屬植物，這些植物的幾乎所有部分，如根、根莖、花、果實(shí)和莖葉都含有許多種人參皂甙。近十多年來(lái)，已對(duì)這些人參屬植物的皂甙進(jìn)行了深入地研究，發(fā)現(xiàn)人參皂甙，特別是達(dá)瑪烷型皂甙不僅含量豐富，而且具有十分廣泛的生物學(xué)活性。
按照人參皂甙的極性的不同，可將其分為兩個(gè)大的組分。一般說(shuō)來(lái)，基于硅膠薄層層析分析結(jié)果，其中Rf值在相應(yīng)Re(人參皂甙單體中的一種)以下的為極性較大的組分，稱為組分I；Rf值在相應(yīng)Re處及其以上的為極性較小的組分，稱為組分II?？傇磉爸胁煌M分的生理學(xué)活性不盡相同，有的甚至完全相反。因此，將人參屬植物的總皂甙分離成不同組分，將有利于對(duì)不同組分的合理開(kāi)發(fā)和利用，而且也便于進(jìn)一步分離和純化單體皂甙。
基于人參屬植物總皂甙的單體成分，人參總皂甙的組分I主要由人參皂甙-Ro、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc和-Rd中的幾種或所有單體的混合物組成，而組分II則主要由人參皂甙-Re、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-F2、-Rf、-RF11、-RT5、及極微量-Rh1和Rh2中的幾種或所有單體的混合物組成。
如果以人參根總皂甙為原料制備組分I，即所謂人參根二醇組皂甙，可得到主要由-Ra1、-Ra2、-Ra3、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd等單體組成的混合物；制備組分II，則得到所謂人參根三醇組皂甙，即主要由人參皂甙單體-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1等單體組成的混合物。如以西洋參莖葉總皂甙為原料，制備上述組分I，即西洋參莖葉二醇組皂甙，可得到主要由人參皂甙-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd等單體組成的混合物；制備組分II，則得到西洋參莖葉三醇組皂甙，即主要由人參皂甙-Re、-Rg1、-Rg2、-PF11、-RT5、-F2等單體組成的混合物。如以三七總皂甙為原料制備組分I，即所謂三七中原人參二醇組皂甙或稱Rb組(族)，可得到主要由人參皂甙-Rb1、-Rb2、-Rd和三七皂甙R1等單體組成的混合物；制備組分II，即所謂三七中原人參三醇組皂甙或稱Rg組(族)，則得到主要由人參皂甙-Re、-Rg1、-Rg2、-Rh1和-Rf等單體組成的混合物。
研究發(fā)現(xiàn)，人參二醇組皂甙(panaxadiol saponin，PDS)具有抗突變、抗自由基、抗氧化及保護(hù)生物膜和細(xì)胞結(jié)構(gòu)等多種功能(林樺等，人參二醇組皂甙對(duì)休克細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究，白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，18(2)123-125，1992；盧光等，人參莖葉總皂甙對(duì)環(huán)磷酰胺誘發(fā)小鼠骨髓細(xì)胞微核形成的影響，衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，4(3)176，1990；趙雪儉等，人參二醇組皂甙對(duì)內(nèi)毒素休克小鼠組織過(guò)氧化脂質(zhì)的影響，白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，16(4)342，1990)。
此外，有人發(fā)現(xiàn)，自三七植物中提取的原人參二醇型皂甙(或稱Rb組皂甙)對(duì)結(jié)扎冠脈家兔心肌梗塞的心電圖有顯著改善作用，并可見(jiàn)用藥動(dòng)物的心肌梗塞面積有所縮小，而原人參三醇型皂甙(或稱Rg組皂甙)則未見(jiàn)有這些效應(yīng)。而且，三七Rb組和Rg組原人參皂甙的鎮(zhèn)痛效果也顯著不同(饒曼人等，三七皂甙Rg、Rb對(duì)心肌缺血的影響，人參屬植物學(xué)術(shù)會(huì)議論文，89年9月，昆明；王俐文等，貴州醫(yī)藥，1989年第一期，第14頁(yè))。這里所說(shuō)的原人參二醇型皂甙和原人參三醇型皂甙及其皂甙元分別為原人參二醇和三醇皂甙元(參見(jiàn)共同待批中國(guó)專利申請(qǐng)No.98100070)。因此，為了更深入地研究和更充分地開(kāi)發(fā)與利用人參屬植物適當(dāng)部分的生物學(xué)活性成分，建立并完善以低成本、高產(chǎn)率，并簡(jiǎn)便快捷地分離人參總皂甙的兩大組分的方法是十分必要的。
共同待批中國(guó)專利申請(qǐng)No.98100070公開(kāi)了一種以堿金屬氫氧化物沉淀法分離制備原人參二醇組皂甙的方法，該方法大大簡(jiǎn)化了原人參二醇組皂甙的分離純化步驟，降低了有機(jī)溶劑的用量，提高了分組皂甙的收率，從而為工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)原人參二醇組皂甙提供了可能性。鑒于上述關(guān)于原人參二醇組分皂甙生物學(xué)作用的基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，如何將原人參二醇組分皂甙混合物開(kāi)發(fā)成一種新的藥物，是天然藥物研究，特別是基于人參屬天然植物的天然藥物生產(chǎn)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題。本發(fā)明人基于大量動(dòng)物試驗(yàn)研究，現(xiàn)已完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種含原人參二醇組皂甙的藥物組合物，該組合物包含原人參二醇組分皂甙，和一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的原人參二醇組分皂甙含有選自-Ra1、-Ra2、-Ra3、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd的一種或多種人參皂甙單體。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的原人參二醇組分皂甙基本上是按照共同待批中國(guó)專利申請(qǐng)98100070中所述的方法制備的。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的原人參二醇組分皂甙外，還含有具有相似或協(xié)同作用的一種或多種天然式合成的其他活性成分或其混合物。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物適于體外給藥的單位劑量形式的。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物是單位劑量形式的注射液。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備含原人參二醇組分皂甙的藥物組合物的方法，該方法包括將原人參二醇組分皂甙與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑或其他輔助成分相混合。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物中可加入或不加入一種或多種具有相似或協(xié)同作用的天然或合成的其他活性成分或其混合物。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供本發(fā)明的含原人參二醇組分皂甙的藥物組合物在抗突變和抗自由基氧化作用中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及以人參屬植物的總?cè)藚⒃磉盀樵?，分離并純化原人參二醇組分皂甙(組分I)的方法，和含有所說(shuō)的原人參二醇組分皂甙的藥物組合物，以及它們分別在預(yù)防和治療因基因突變、自由基氧化損傷或物理?yè)p傷引起的人或動(dòng)物的病理狀態(tài)中的應(yīng)用。
如前所述，包括人參、西洋參和三七在內(nèi)的五加科人參屬植物的根、根莖、莖葉、花和果實(shí)中均含有豐富的人參皂甙，特別是達(dá)瑪烷型皂甙。目前，已從這些植物中分離并鑒定了多種達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜化合物，并已對(duì)它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)及生物學(xué)功能進(jìn)行了廣泛的研究。根據(jù)這類化合物在硅膠薄層層析(TLC)中的遷移行為(Rf值)，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑洗脫后，可將總皂甙分離成前述組分I和組分II兩個(gè)基本組分。從而，為進(jìn)一步純化其中的個(gè)別單體提供起始材料，并為這些組分的生物學(xué)活性和臨床應(yīng)用研究提供基本材料來(lái)源。
為了制備富含原人參二醇組分皂甙的混合物，首先按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，從人參屬植物，如人參、西洋參或三七的適當(dāng)部分，如根、根莖、莖葉、花或果實(shí)中提取人參總皂甙。
以各種可能來(lái)源的人參總皂甙為起始材料制備人參皂甙組分I和組分II。為此，首先在室溫下將總皂甙溶解于過(guò)量的含水低級(jí)醇中，用適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾材料過(guò)濾以除去不溶性的成分，得到濾液A。同時(shí)將一定量的強(qiáng)堿如堿金屬氫氧化物溶解于盡可能少的水中，并在其中加入含水低級(jí)醇制得強(qiáng)堿的醇溶液B，并以該溶液作為繼后實(shí)驗(yàn)中的沉淀劑。室溫?cái)嚢柘聦⑷芤築緩慢滴加到上述濾液A中，此反應(yīng)過(guò)程中不斷有沉淀析出。靜止0.5-1小時(shí)，直到不再有新的沉淀物析出，即可將此沉淀物通過(guò)適當(dāng)?shù)臑V器進(jìn)行簡(jiǎn)單地過(guò)濾。由于富含人參二醇組皂甙的部分相對(duì)極性較大，而且親水性相對(duì)較小，因此用適當(dāng)濃度的強(qiáng)堿的醇溶液處理總皂甙后，其中主要由-Ro、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd組成的結(jié)合糖較多的單體混合物，即富含原人參二醇組分便首先從反應(yīng)混合物中沉淀析出，而主要由-Re、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-F2、-Rf組成的結(jié)合糖較少的單體混合物，即富含原人參三醇組皂甙則仍溶解于所說(shuō)的強(qiáng)堿的醇溶液中。從而，可基本上以高收率由人參總皂甙制得富含原人參二醇組皂甙和富含原人參三醇組皂甙。
根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，用于分離上述組分I和組分II的起始材料較好是西洋參莖葉總皂甙和人參莖葉總皂甙。用于溶解總皂甙的醇是含有1-5個(gè)碳原子的低級(jí)醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或戊醇，但優(yōu)選的是乙醇。所用乙醇的濃度應(yīng)大于85％。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，用于分離總皂甙各組分的強(qiáng)堿醇溶液較好是堿金屬氫氧化物的醇溶液，如氫氧化鈉或氫氧化鉀的乙醇溶液。其中堿金屬氫氧化物的濃度一般在0.01至10％(W/V)范圍內(nèi)，較好為0.1至5％，最好為0.3至1％(W/V)。用于制備沉淀劑堿金屬氫氧化物醇溶液的醇較好是乙醇、丙醇或正丁醇，且優(yōu)選濃度≥90％的乙醇溶液。
為了進(jìn)一步純化按上述方法制備的人參皂甙組分I的粗提取物，首先在所得粗提取物的水溶液中按照大約0.05至5％，較好約0.3至2％(W/V)的比例加入如上文所述的醇?jí)A溶液B，充分混勻后可見(jiàn)有部分沉淀析出。然后用布氏漏斗減壓過(guò)濾或用燒結(jié)的玻璃濾器過(guò)濾，收集沉淀物，并加水溶解之，然后加于強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂，例如101強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，用3-5倍柱床體積的水洗脫。收集洗脫液用脫色陰離子樹(shù)脂脫色，用水洗脫后將洗脫液濃縮至干，得到精制的人參皂甙組分I，即人參二醇組皂甙固體物。
由于這一新的方法省略了繁復(fù)的有機(jī)溶劑(正丁醇/乙酰乙脂)萃取步驟，因此不僅簡(jiǎn)化了分離提取工藝，而且節(jié)省了有機(jī)溶劑，大大降低了生產(chǎn)成本，從而使人參總分組皂甙的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)成為可能。特別是，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的制備實(shí)踐證實(shí)，以這一方法制備原人參二醇組的產(chǎn)物回收率高于以前通常使用的有機(jī)溶劑萃取工藝的產(chǎn)物回收率。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種藥物組合物，該組合物含有作為活性成分的原人參二醇組皂甙，和一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體和/或稀釋劑，以及其他輔助成分。可以按照制藥工業(yè)中已知的方法將按上述方法制備的人參皂甙組分I與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑按適當(dāng)比例混合，制成本發(fā)明的藥物組合物?？蓪⑺f(shuō)的組合物配制成可供靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腔腹內(nèi)、腦脊髓腔內(nèi)注射給藥的注射液，或者制成適于口服給藥的片劑、粉劑、丸劑、溶液劑和懸浮劑，以及適于局部給藥的噴霧劑、霜?jiǎng)?、軟膏、酏劑和栓劑?br> 為了制備適于胃腸道外途徑給藥的溶液劑，例如可以使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液，或者低濃度(例如1-100mM)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為載體或稀釋劑?？梢栽谶@些胃腸道外給藥的制劑中加入一種或多種其他輔助成分或添加劑，例如可使用抗壞血酸作為抗氧化劑，使用苯甲酸鈉等作為防腐劑。并且在這些劑型中，還可以含有其他適用的增溶劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、著色劑及分散劑或表面活性劑。
在制備適于口服給藥的片劑、粉末劑、膠囊劑或栓劑時(shí)，可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明膠、脂質(zhì)、微晶纖維素等作為載體或賦形劑。可以使用制藥工業(yè)中已知的方法和輔助成分制備微膠囊或脂質(zhì)體包裹劑。
在局部給藥的情況下，可將按照本發(fā)明方法制備的原人參二醇溶解于含水介質(zhì)或其他適當(dāng)?shù)妮d體或基質(zhì)中，與上述各種適用的輔助成分，如超氧化物歧化酶(SOD)等自由基清除劑及適當(dāng)?shù)钠つw滲透劑或吸收促進(jìn)劑如二甲基亞砜或朝桂氮卓酮混合，制成噴霧劑。另外，也可以將本發(fā)明的藥物組合物加在化妝品工業(yè)中已知的基質(zhì)中制成乳劑、霜?jiǎng)⑾磩?、面膜、軟膏等制成的皮膚保護(hù)劑。這樣的皮膚保護(hù)劑除具有常規(guī)化妝品的功能外，還具有預(yù)防和/或治療局部組織的自由基氧化損傷或放射損傷的功能，以及刺激皮膚局部(如面部)表皮細(xì)胞增殖，防止皮膚老化皺縮的功能，同時(shí)也是全身給藥的另一種輔助途徑。
根據(jù)使用目的的不同，本發(fā)明的藥物組合物中除含有作為基本活性成分的上述人參二醇組皂甙或人參三醇組皂甙外，還可含有一種或多種其他具有相同或相似生物學(xué)活性，具有輔助或協(xié)同作用的天然或合成的藥物成分或其混合物。例如用于抗腫瘤目的時(shí)，可在本發(fā)明的藥物組合物加入具有輔助或協(xié)同抗腫瘤作用的中草藥提取物或合成的化學(xué)抗腫瘤藥物或它們的混合物。
可根據(jù)待治療病人的實(shí)際情況，選用經(jīng)胃腸道途徑或胃腸道外途徑給藥。但為了提高藥物的利用率，加速藥物的吸收，并盡快達(dá)到預(yù)期的治療效果，推薦的優(yōu)選給藥途徑是胃腸道外途徑注射給藥，例如靜脈內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射、腹腔內(nèi)注射及腦脊髓腔內(nèi)注射給藥，但最好靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射給藥。
一般說(shuō)來(lái)，本發(fā)明藥物組合物中人參組二醇皂甙的肌肉注射給藥用藥量為0.1至100mg/kg體重/天，較好為1至50mg，最好5-30mg。當(dāng)然，確切的用量劑量應(yīng)根據(jù)待治療的病癥或病理狀態(tài)的性質(zhì)、嚴(yán)重程度、病人的年齡、體重、待治療病人對(duì)所用藥物的敏感性及給藥方式等因素由臨床醫(yī)生來(lái)確定。
以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例說(shuō)明，而不是限制本發(fā)明。在不違背本發(fā)明的精神和原則的前提下，對(duì)發(fā)明個(gè)別技術(shù)步驟進(jìn)行的任何改動(dòng)和改變均將落入本發(fā)明待批權(quán)利要求范圍內(nèi)。
實(shí)施例1西洋參莖葉分組皂甙的制備稱取西洋參莖葉總皂甙100g(大連天馬制藥有限公司生產(chǎn))，并溶解于1000ml 95％乙醇溶液中，室溫下緩慢攪拌使之充分溶解，然后用常規(guī)過(guò)濾裝置過(guò)濾，除去不溶物，得到濾液A。仔細(xì)稱取氫氧化鈉5.0g溶解于15.0ml水中，充分溶解后向所得溶液內(nèi)加入1000ml 95％乙醇，混勻后得到0.5％(W/V)氫氧化鈉乙醇溶液B。持續(xù)攪拌下，將所得乙醇鈉溶液B緩慢加入到上述濾液A中，漸漸有絮狀沉淀物生成。將該混合物于溫室下靜止24小時(shí)后，用布氏漏斗或G3漏斗減壓過(guò)濾。分別收集沉積于濾板上的沉淀物和裝入吸濾瓶?jī)?nèi)的濾出液，即得到人參皂甙組分I(沉淀物)和組分II(濾出液)的粗提取物。
在上述組分I粗提取物中加入100ml蒸餾水，加熱并攪拌使之充分溶解。然后于持續(xù)攪拌下，緩慢加入1000ml如上所述的0.5％氫氧化鈉醇溶液，將所得混合物室溫放置約12小時(shí)。用玻璃濾器真空過(guò)濾后，收集沉淀物并將其溶解于400ml蒸餾水中。將此溶液通過(guò)101強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂純化并通過(guò)脫色陰離子樹(shù)脂脫色，用蒸餾水洗脫。在硫酸鎂上方將洗脫液減壓濃縮至干，得到精制的人參皂甙組分I白色粉末，產(chǎn)率40.3％。經(jīng)用TLC分析(在硅膠G薄層板上用正丁醇/乙酸乙酯/水(4∶1∶2)展開(kāi))，并用標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照，證明所得產(chǎn)物中含有-Rb2、-Rb3、Rc、-Rd皂甙單體，據(jù)此可確認(rèn)其為西洋參莖葉二醇組皂甙混合物。
實(shí)施例2西洋參莖葉分組皂甙的制備以西洋參莖葉總皂甙(100g，大連天馬制藥有限公司生產(chǎn))為起始材料，基本上按照實(shí)施例1所述的方法分別制備組分I和組分II。所不同的是，將100g總皂甙溶于1000ml 95％乙醇中并過(guò)濾除去不溶物后，在澄清的濾液內(nèi)緩慢加入基本上按實(shí)施例1中所述方法制備的濃度為0.2％(V/V)的氫氧化鈉乙醇溶液(將2.0g NaOH溶解于10.0ml蒸餾水中，然后加入1000ml 95％乙醇，充分混勻后制成0.2％(W/V)NaOH-EtOH溶液)。TLC分析顯示，所得組分I，即西洋參莖葉二醇組皂甙的產(chǎn)率為33.6％；組分II，即西洋參莖葉三醇組皂甙(包括擬人參皂甙-RF11和-RT5)的產(chǎn)率為35.8％。
實(shí)施例3人參莖葉分組皂甙的制備基本上按照實(shí)施例1中所述的方法，以人參莖葉總皂甙為起始材料(100g，吉林省長(zhǎng)白市第二藥廠生產(chǎn))制備組分I和組分II，其中組分I產(chǎn)率為13.0％；組分II產(chǎn)率為69.8％。經(jīng)TLC分析(在硅膠G薄層板上，用正丁醇/乙酸乙酯/水(4∶1∶2)展開(kāi))表明純化精制后的組分I中主要成分為人參皂甙-Rb1、-Rb2、-Rc、-Rd，故可確定其為人參莖葉二醇組皂甙混合物；組分II中則主要由人參皂甙-Re、-Rg1、-Rg2、-Rf組成，故可確定其為人參莖葉三醇組皂甙混合物。
實(shí)施例4三七根分組皂甙的制備基本上按照實(shí)施例1中所述的方法，以三七根總皂甙(100g，白求恩醫(yī)科大學(xué)化學(xué)教研室制備)為起始材料，分別制備組分I和組分II。不同的是，將100g三七總皂甙溶于1000ml 95％乙醇溶液中并過(guò)濾除去不溶物后，在所得澄清的濾液內(nèi)緩慢加入基本上按實(shí)施例1中所述方法制備的濃度為1％的氫氧化鈉乙醇溶液(將100g氫氧化鈉溶解于20.0ml蒸餾水中，然后加入1000ml 95％乙醇，充分混勻后制成1.0％(V/V)NaOH-EtOH溶液)。TLC分析顯示，所得組分I，即三七原人參二醇組皂甙主要由人參皂甙-Rb1、-Rb2、-Rd和三七皂甙R4組成，產(chǎn)率38.9％；所得組分II，即三七原人參三醇組皂甙主要由人參皂甙-Re、-Rg1、-Rg2、-Rh1和-Rf組成，產(chǎn)率41.2％。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1原人參二醇組皂甙(PDS)對(duì)雄性小鼠生殖細(xì)胞非程序DNA合成(UDS)的抑制作用在甲基磺酸甲脂(MMS，Merck Co.)誘發(fā)生殖細(xì)胞非程序DNA合成(UDS)的雄性小鼠(C57 BL/6J)模型中觀察PDS對(duì)生殖細(xì)胞UDS的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MMS可顯著地誘導(dǎo)雄性小鼠的UDS反應(yīng)。于注射MMS之前腹腔內(nèi)注射PDS 15mg/0.2ml，發(fā)現(xiàn)可明顯地抑制小鼠精子的UDS，而在投用MMS之后腹腔注射PDS(15mg/0.2ml)則對(duì)MMS誘發(fā)的UDS無(wú)明顯影響。因此推測(cè)，PDS可抑制MMS誘發(fā)的原發(fā)性DNA合成障礙，即PDS可阻止誘變劑對(duì)細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)的損傷。
本實(shí)驗(yàn)還觀察到，PDS與MMS同時(shí)給藥的抑制效果比預(yù)前投用PDS的效果差，因而推測(cè)PDS抗DNA損傷可能是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)某些生物學(xué)過(guò)程間接起作用的，并且可能與PDS的清除自由基和抗氧化活性有關(guān)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2參二醇組分皂甙對(duì)小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量的影響按照已描述的方法(李儀奎，中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，114，上?？萍汲霭嫔纾?991)，觀察原人原二醇組皂甙混合物(由西洋參葉提取)的注射液對(duì)小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量的影響。
昆明種小鼠50只(體重21-24g)隨機(jī)分成5組，其中兩實(shí)驗(yàn)組分別按每公斤體重50和100mg腹腔注射西洋參葉二醇組皂甙注射液(白求恩醫(yī)科大學(xué)天然藥物化學(xué)研究室提供，批號(hào)960105)，陰性對(duì)照組給予生理鹽水(10mg/kg)、兩陰性對(duì)照組分別給予異丙腎上腺素(5mg/kg，上海天豐藥廠出品，批號(hào)950502-1)和人參皂甙單體Rb3(45mg/kg)。給藥后20分鐘經(jīng)尾靜脈注射RbCL(由中國(guó)科學(xué)院原子能研究所提供，比放射活性166.7mci/g)生理鹽水溶液(16000cpm/分)。注射后30處死動(dòng)物，取出心臟，剪去心房并剪開(kāi)心腔，用水清洗后置入試管內(nèi)，在FJ-2101型Υ計(jì)數(shù)器上測(cè)定放射強(qiáng)度并記錄之。得到下列表1所示的結(jié)果表1 西洋參葉二醇組皂甙注射液對(duì)小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量(R6攝取量)的影響(X±5D)組別Rb攝取量(cpm/min)攝取增減率(％)對(duì)照組 423.8±62.1 -異丙腎上腺素組 521.3±91.4 +23.0西洋參葉二醇組皂甙50mg/kg 483.8±65.7 +18.9100mg/kg 538.7±69.6 +27.1Rb 45mg/kg 512.8±74.4 +21.0與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01從上表中可以看出，西洋參二醇組皂甙注射液(50-100mg/kg)可使小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量(Rb攝入量)明顯增加。腹腔注射西洋參二醇組皂甙中的主要單體皂甙Rb3，也可顯著增加心肌Rb攝入量，表明西洋參二醇組皂甙增加小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量作用主要與其中所包含的Rb3單體有關(guān)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3參二醇組皂甙對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞的影響以實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞的雜種犬作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察本發(fā)明的的原人參二醇組皂甙(由西洋參葉中提取)對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞后動(dòng)物血清中肌酸磷酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(CDH)活性，以及血清脂肪酸(FFA)含量的影響，同時(shí)，間接估測(cè)用藥前后心肌梗塞區(qū)的面積，以估計(jì)原人參二醇組皂甙對(duì)實(shí)驗(yàn)性缺血心肌的保護(hù)作用。
將西洋參葉二醇組皂甙注射液(100mg/2ml，白求恩醫(yī)科大學(xué)天然藥物化學(xué)研究室提供)加生理鹽水稀到適當(dāng)濃度(總?cè)莘e剛好超過(guò)過(guò)多通道電子蠕動(dòng)泵)備用。將體重12-15kg的健康雜種犬30只隨機(jī)分成5組(每組6只)。假手術(shù)組(陰性對(duì)照組)注射生理鹽(4ml/kg)、梗塞對(duì)照組(模型對(duì)照組)注射生理鹽水(4ml/kg)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組投用維拉帕米5mg/kg，實(shí)驗(yàn)組投用劑量分別為10和20mg/kg的西洋參二醇組皂甙注射液。
注射后，于麻醉狀態(tài)下切開(kāi)動(dòng)物胸腔，暴露心臟并剝離冠狀動(dòng)脈左前降支的2-3個(gè)分支并結(jié)扎之，應(yīng)盡可能使心肌梗塞范圍保持一致。靜止20分鐘后，結(jié)扎左前降支，并立即通過(guò)右股靜脈穿刺輸注上述實(shí)驗(yàn)和對(duì)照藥物或生理鹽水。約6小時(shí)后自左股動(dòng)脈取血，并用COBAS-FARK型自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中CK和LDH活性，同時(shí)用一次提取比色法估測(cè)血清FFA含量。然后，取出動(dòng)物心臟并將左心室橫切成厚度約3-4mm的切片。將組織切片置于氯化硝基四氮唑蘭磷酸緩沖液中，于37C恒溫水浴，當(dāng)梗塞區(qū)界線明顯時(shí)，切下著色的梗塞區(qū)心肌并稱重，以梗塞區(qū)心肌占左心室濕重的百分比計(jì)算梗塞范圍。結(jié)果如下列表2所示。表2 西洋參葉二醇組皂甙注射液對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞的梗塞面積、CK和LDH活性及FFA含量的影響(X±5D)組別 梗塞面積 CKLDH FFA(％) (U/L) (U/L)(Eq/L)假手術(shù)組- 746±135 69.0±16.1 323±52梗塞對(duì)照組 20.60±5.035148±928314.2±96.7798±24維拉帕米組 10.00±2.122661±592120.9±69.1390±19實(shí)驗(yàn)組(二醇組皂甙)10mg/kg11.20±3.30 3672±527218.8±34.6558±1820mg/kg9.11±2.43 2244±765106.6±35.8512±21與假手術(shù)組比較， P＜0.01與梗塞對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001從表2所示結(jié)果可以看出，原人參二醇組皂甙可明顯減少實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞犬的心肌梗塞范圍，并可明顯降低通常作為心肌局部缺血之生化指標(biāo)的血清CK和LDH的活性，表明原人參二醇組皂甙具有較強(qiáng)的抗心肌缺血作用。另外，血流動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明，原人參二醇組皂甙可改善心肌梗塞動(dòng)物模型的心肌血流量、降低冠狀動(dòng)脈阻力、抑制梗塞后左心室內(nèi)壓變化最大速率的降低，并升高左心室舒張末血壓(數(shù)據(jù)未示出)。這些血流動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果進(jìn)一步提示，在投用本發(fā)明的原人參二醇組皂甙藥物組合物后，梗塞后心肌的供血狀態(tài)及心肌功能均得到明顯改善。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，所說(shuō)的組合物基本上由原人參二醇組分皂甙和一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所說(shuō)的原人參二醇組分皂甙含有選自-Ra1、-Ra2、-Ra3、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd的一種或多種人參皂甙單體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所說(shuō)的原人參二醇組分皂甙基本上是按照共同待批中國(guó)專利申請(qǐng)98100070中所述的方法制備的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的原人參二醇組分皂甙外，還含有具有相似或協(xié)同作用的一種或多種天然或合成的其他活性成分或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任何一項(xiàng)的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物是適于胃腸道外給藥的單位劑量形式的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物是單位劑量形式的注射液。
7.一種制備含原人參二醇組分皂甙的藥物組合物的方法，該方法包括將原人參二醇組分皂甙與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑或其他輔助成分相混合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所說(shuō)的藥物組合物中可加入或不加入一種或多種具有相似或協(xié)同作用的天然或合成的其他活性成分或其混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的藥物組合物，在預(yù)防和治療因基因突變、自由基氧化損傷或物理?yè)p傷引起的人或動(dòng)物的病理狀態(tài)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有原人參二醇組皂甙的新的藥物組合物,其制備方法及該組合物在預(yù)防和治療因自然或化學(xué)突變、自由基氧化損傷,或物理?yè)p傷如阻塞性缺血引起的細(xì)胞、組織或器官病理改變中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1187352SQ98100069
公開(kāi)日1998年7月15日 申請(qǐng)日期1998年1月22日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月22日
發(fā)明者馬興元, 陳燕萍, 孟勤, 王陸黎, 徐景達(dá), 穆乃翰, 孫廣學(xué) 申請(qǐng)人:吉林皇封參藥業(yè)股份有限公司, 白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院