專利名稱：前列腺素i的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及前列腺I2(PGI2)受體，更具體地說，涉及一種人類或大鼠PGI2受體多肽；其制備方法；編碼該多肽的DNAs；一種包含所說DNAs的復制和表達載體；一種用該載體轉染或轉化的受體細胞；一種抗所說多肽的單克隆或多克隆抗體；一種藥用組合物，包括所說的多肽或抗體或一種用所說的多肽或所說的受體細胞篩選一類具有PGI2促效或拮抗作用的化合物之方法。背景包括前列腺素(PG)，凝血噁烷(TX)、白三烯(LT)的類前列腺素，是一個家族的花生四烯酸的氧化代謝產物，并且具有維持機體內環(huán)境穩(wěn)定所要求的各種生理活性。(參見“治療學的藥學基礎”)(Thepharmacological Basis of Therapeutics)(Gilman，A.G.Good-man，L.S.，Rsil T.W.and Murad，F.eds)7th Ed.pp 660 Macmillan Publishing Co.New York(1985))。
這些生理活性是通過細胞膜上各個類前列腺素的特異性受體控制。(見Annu.Rev.Pharm.Tox.10，213(1989)and Prostanoids and theirReceptors.In Comprehensive Medicinal Chemistry，pp 643(1990)，Pergamon Press，Oxford)。
前列腺環(huán)素(PGI2)是類前列腺素中一種極不穩(wěn)定的化合物，它大部分由血管的內皮細胞產生。PGI2通過激活腺苷環(huán)化酶并產生cAMP來阻止血小板的聚集和誘導血管舒張。這些活性能夠拮抗另一類不穩(wěn)定的類前列腺素TXA2的血小板強烈聚集和血管收縮活力。PGI2對維持血液循環(huán)系統(tǒng)的穩(wěn)定有作用(見Br.J.Pharmacol 76，3(1982))。PGI2的這些活性可用于諸如腦血栓和心肌梗塞的疾病的預防和/或治療。許多醫(yī)藥用途的PGI2的穩(wěn)定衍生物已經合成。
通過使用PGI2及其穩(wěn)定衍生物，PGI2的活性已在血小板、平滑肌以及其它組織和各種細胞作了廣泛的研究(見Prostanoids and theirReceptors，InComprchensive Medicinal Chemistry.pp 643(1990)，Pergamon Press，Oxford)。這些研究表明不同種類的組織和細胞對PGI2及其衍生物的反應在某種程度上是不同的。
這種差別表明存在著受體亞型或存在著兩種或更多種PGI2受體相配的G蛋白，而且，這還表明PGI2及其衍生物能與其它類前列腺素受體亞型發(fā)生交叉反應(見Br.J.Pharmacol 76 1494982)and 97 657(1989))為了闡明這些觀點，對PGI2受體的結構、信號、分布進行分析被認為是必要的。發(fā)明的內容最近，本發(fā)明人等已成功地克隆了一種人類和一種小鼠TXA2受體和小鼠PGE受體的三種亞型，即EP1、EP2和EP3的cDNA.(見Nature.349617.(1991)，Biochem.Biophys.Res.Commun.184 1197，(1992)；J.BiolChem.268，20175(1993)；J.Biol.Chem.268，7759(1993)and J.BiolChem.267，6463(1992))。另外，一種小鼠PGI2受體的cDNA也已克隆(Presented at International Symposium On Molecular Biology of theArachidonate Cascade in December 6-7，1993)本發(fā)明人等用編碼一種小鼠PGI2受體的cDNA或它的片段為探針，在人類和鼠cDNA文庫中進行了同源性研究。分離的克隆序列的測定及表達的結果表明有與編碼一種人類和一種大鼠PGI2受體相應的克隆存在。因此本發(fā)明也就得到了。
用計算機將這個多肽的氨基酸序列與Swiss Prot數據庫(Swiss ProtRelease 20)中所有已知序列相比較，在這之前沒有一個多肽具有與本發(fā)明的那個多肽一致的氨基酸序列，而且將編碼本發(fā)明的多肽的核苷酸序列用計算機與Gen Bank數據庫(Gen Bank Relase 70.0)中已知序列比較，也沒有核酸序列與編碼本發(fā)明中多肽的核酸序列相同，這樣就證明本發(fā)明的多肽是一個全新的多肽。
也就是說，本發(fā)明涉及1)一種基本純化的人類PGI2受體，2)上面1)中所述受體是一種多肽，它包括在Seq.ID.No.1中表示的氨基酸序列，或與其同源的序列，或所說序列的片段或上述片段的同源序列，3)上面2)描述的多肽由Seq.ID No.1表示的氨基酸序列組成，4)一類DNA編碼上面1)，2)，3)中描述的多肽，5)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.2中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，
6)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.5中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，7)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.3中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，8)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.6中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，9)一種基本純化的大鼠PGI2受體，10)上面9)中所述受體是一種多肽，它包括在Seq.ID No.8中表示的氨基酸序列或與其同源的序列，或該序列的片段或上述片段的同源序列，11)上面10)中描述的多肽，由Seq.ID No.8表示的氨基酸序列組成，12)一類DNA，編碼上面9)，10)，11)中描述的多肽，13)上面12)描述的DNA，具有Seq.ID No.9中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，14)上面12)描述的DNA具有Seq.ID No.10中表示的核苷酸序列或具有能與該序列選擇性雜交的片段，15)一種包括上面4)-8)或12)-14)中描述的DNA復制和表達的載體，16)一株用上面15)中描述的復制和表達的載體轉化或轉染的宿主細胞，17)一種制備上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽的方法，這種方法包括在有效表達所說的多肽的條件下培養(yǎng)上面16)描述的宿主細胞，18)一類抗上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽的單克隆或多克隆抗體，19)一類藥用組合物，它的特性有包括在上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽，或在上面18)中描述的一類抗體的一類藥用賦形劑和/或載體，20)一種篩選具有PGI2促效或拮抗活性的化合物的方法，它的特點是使用上面1)-3)或9)-11)所描述的多肽，21)一種上面18)描述的篩選方法，其特征在于使用在上面16)中描述的宿主細胞。附圖簡述

圖1表示各種配體將〔3H〕伊洛前列素(iloprost)結合到MK71轉染的細胞膜上的抑制活性。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及基本純化的一種人或一種大鼠的PGI2受體。具體地說，本發(fā)明的人類PGI2受體涉及一種多肽，這種多肽包含Seq.ID No.1中表示的氨基酸序列或其同源序列，或這個所說序列的片段或所說片段的同源片段。另外，本發(fā)明還涉及編碼這些多肽的DNA。更具體地說，本發(fā)明涉及具有Seq.ID No.2，3，5或6表示的核苷酸序列的DNA，或含有能與在Seq.ID No.2，3，5或6中表示的核苷酸序列選擇性雜交的片段的DNA。本發(fā)明的小鼠PGI2受體涉及一種多肽，這種多肽包含Seq.ID No.8中表示的氨基酸序列或其同源序列，或這個所說序列的片段或這個片段的同源序列，本發(fā)明還涉及編碼這些多肽的DNA，更具體地說涉及在Seq.ID No.9或10中表示的核苷酸序列或包括在Seq.ID No.9或10中表示的片段的DNA或含有能與Seq.ID No.9或10中所示的核苷酸序列選擇性雜交的片段的DNA。
更具體地說，本發(fā)明涉及(1)包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽。
(2)編碼上面(1)所描述的多肽的DNA，(3)具有Seq.ID No.2，5或9所示的核苷酸序列的DNA。
(4)具有Seq.ID No.3，6或10表示的核苷酸序列的DNA。
這些多肽包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列，這不意味著只包含Seq.ID No.1或8中表示的氨基酸序列，而且還包括那些額外多肽，這些多肽的N-和/或C-末端的氨基酸序列包含20％或更少，更優(yōu)選的是5％或更少數量的在Seq.ID No.1或8中表示多肽的總氨基酸。
這個包含著Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽是純化了的，這意味著通常制劑中的多肽，90％或更多，如95％，98％或99％具有Seq.ID No.1或8中的多肽序列。
包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽的同源序列通常至少70％，優(yōu)選至少80或90％，和更優(yōu)選的是至少區(qū)域具有至少100，優(yōu)選至少150，如200，250，或300個相鄰氨基酸。這些同源多肽都將包括在本發(fā)明的多肽定義中。
另外，包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽的片段或所說多肽的同源序列的片段意味著至少10，優(yōu)選至少15，如20，25，30，40，50或60個氨基酸長度。
能與有Seq.ID No.2或3，5，6，9或10表示的核苷酸序列的DNA選擇性雜交的DNA通常至少70％，優(yōu)選至少80或90％，更優(yōu)選的是至少95％與所說的DNA區(qū)段有同源性，這個區(qū)段至少100個，優(yōu)選至少150個，如200，250或300個相鄰核苷酸。這些DNA都將包括在本發(fā)明的DNA定義中。
包含Seq.ID No.2，3，5，6，9或10中所示的核苷酸序列的片段有至少10個，優(yōu)選至少15，如20，25，30或40核苷酸長度，并且這些片段也包含在本發(fā)明中。
本發(fā)明的DNA可以按基因工程法，化學合成法或本領域的技術人員已知的方法制備。
本發(fā)明的進一步實施方案提供了包括本發(fā)明的DNA的復制和表達的載體。載體可以是比如，質粒、病毒或噬菌體載體，前提是這些載體具有了所說的DNA的復制起點，任選的表達啟動子，及任選的啟動子的調節(jié)子。這個載體可能包括一個或多個可選擇標記的啟動子，還包括一個或多個可選擇標記基因，比如氨芐青霉素抗性基因。
本發(fā)明的進一步實施方案還提供了用載體轉化或轉染了的受體細胞，而此載體是用于本發(fā)明的DNA復制與表達的，這些DNA包括Seq.ID No.2，3，5，6，9或10表示的核苷酸序列或其開放閱讀框。這種細胞可以是例如細菌、酵母、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。本發(fā)明的進一步實施方案還提供了一種制備本發(fā)明的多肽的方法，此方法包括在有效表達本發(fā)明的多肽的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細胞。
本發(fā)明中的多肽包括一類部分氨基酸序列缺失的多肽(如一種只包括成熟蛋白表現生物活性必須的序列的多肽)，一類部分氨基酸序列被其它氨基酸取代的多肽(如那些被相似特點的氨基酸取代的多肽)和一類其它氨基酸加到或插入到它們的部分氨基酸序列中的多肽，以及一類具有Seq.ID 1或8表示的氨基酸序列的多肽。
眾所周知一個氨基酸可能有一到六種密碼子編碼(如已知甲硫氨酸(Met)由一種密碼子編碼，亮氨酸(Leu)有六種密碼子編碼)。因此，DNA的核苷酸序列可以改變使其編碼的多肽仍具有相同的氨基酸序列。
本發(fā)明的DNA，特別是在(2)中的DNA，包括一組編碼多肽的核苷酸序列，通過改變核苷酸序列生產多肽的產物所示的多肽的各個核苷酸序列。
在(3)中限定的DNA是(2)中表示的DNA的實施方案并且是這個序列的天然形式。
在(4)中表示的DNA代表的是具有非翻譯區(qū)的(3)中限定的DNA的序列。
具有Seq.ID No.3，6或10表示的核苷酸序列的DNA可按以下方法制備，也就是I)將產生本發(fā)明的多肽的mRNA從細胞中分離出，ii)從得到的mRNA制備第一條鏈(單鏈cDNA)，接著制備第二條鏈(雙鏈cDNA)(合成cDNA)，iii)將得到的cDNA插入到合適的質粒載體中，iv)將重組載體轉染到宿主細胞中(構建cDNA文庫)，v)通過斑點雜交從得到的cDNA文庫中分離包含所要DNA的質粒，vi)測定所要的DNA的核苷酸序列。
詳細地說，步驟(i)可以按OKayama，H等的方法(在Method inEnzymology，154，3(1987)中描述的)或Chirgwin，J.M.等的方法(在Biochem，18，5294(1979)中描述的)從組織中實現，這些組織是人或鼠的PGI2受體表達的組織，優(yōu)選組織細胞或肺、血管、白細胞和血小板細胞等。
步驟(ii)、(iii)和(iv)是一系列制備cDNA文庫的步驟，可以按Glubler& Hoffman(在Gene，25，263，(1983)中描述)方法并稍加改進來完成。
已知在步驟(iii)中使用的質粒載體的實例有可以在大腸桿菌菌株中作用的(如pB322)和在枯草芽孢桿菌中作用的(如pUB110)的許多載體，優(yōu)選使用在大腸桿菌菌株λ-ZAPII。
作為步驟(iv)所用的宿主細胞，許多是已知的?？梢杂萌魏嗡拗骷毎鴥?yōu)選使用DH5感受態(tài)細胞(按Gene，96，23(1990)描述的制備)。
步驟(v)本身是一個已知的方法，比如這個步驟可采用斑點雜交法或菌落雜交法(在Gene，10，63(1980)中描述)等來實現。對于要足夠的探針，另一種類動物的PGI2受體的DNA及其片段，或與該DNA有同源性的DNA都可使用。
步驟(vi)本身也是已知的方法，比如這步可采用雙脫氧終止法或Maxam-Gilbert法實現。
一旦測定了在Seq.ID No.2，3，5，6，9或10中表示的核苷酸序列，本發(fā)明的DNA可通過化學合成法，PCR法(聚合酶鏈式反應)得到或通過用本發(fā)明所說的DNA片段為探針雜交得到。另外，本發(fā)明的DNA能夠得到想要的量，方法是將包含本發(fā)明的DNA的載體DNA轉化進合適的宿主，接著培養(yǎng)轉化子。
本發(fā)明的多肽(Seq.ID No.1或8)可按以下方法制備1)從有機體或培養(yǎng)細胞中分離和純化，2)化學合成，或3)用基因工程技術等，優(yōu)選用(3)中描述的方法。
采用基因工程制備多肽的表達系統(tǒng)(宿主細胞-載體系統(tǒng))實例有比如細菌、酵母、昆蟲細胞、哺乳動物細胞等表達系統(tǒng)。
例如，在大腸桿菌中的表達可按以下步驟進行，連接一種編碼成熟蛋白的DNA(如在Seq.ID No.2，5或9中表示的DNA編碼核苷酸序列)，得到以后再接到合適的啟動子的下游(如trp啟動子、Lac啟動子、λPL啟動子、T7啟動子等)，再插入到載體中(如pBR322，pUC18，pUC19等)，這些載體在大腸桿菌菌株中作用成為表達載體。再將這包含有表達載體的轉染物(如E.coli DH1，JM109，E.coli HB101)在合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)，想要的多肽可從得到的細菌制備。如果應用了細菌信號肽(如Pel B的信號肽)，所需多肽可在周質產生，并且與另一種多肽的融合蛋白也容易產生。
此外，在哺乳動物細胞中也可表達，例如，將Seq.ID No.3，6或10中表示的DNA插入到一個合適啟動子下游(如SV40啟動子，LTR啟動子，金屬硫蛋白啟動子等)，而這些啟動子又在合適的載體上(如逆轉錄病毒載體，乳頭瘤病毒載體，牛痘病毒載體，SV40載體)，這樣得到表達載體，再將得到的表達載體轉染到合適的哺乳細胞中(如猴COS-7細胞、中國倉鼠CHO細胞、小鼠L細胞)，然后將轉化物在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，從培養(yǎng)物中可得到所要的多肽。得到的多肽可通過常規(guī)生化方法分離和純化。
對于出血疾病等的治療，本發(fā)明的多肽可以按正常全身或局部用藥。通常經口服或腸胃外服用，優(yōu)選口服，靜脈注射或心內注射。
服用的劑量取決于年齡、體重、癥狀和預期的治療效果，服用的方法，和治療的時間。對于成人，每人的每次劑量通常在100μg-100mg，口服可以每天幾次，10μg-100mg，腸胃外服用，每天幾次。
正如上面提到的，使用劑量由各種條件決定，但是也有些例子可采用高于或低于上述范圍的。
在服用本發(fā)明的化合物時，口服可用固體的，流體的或其它形式的組合物，注射劑、搽劑、栓劑可用于腸胃外服用。
口服的固體組合物包括壓緊的片劑、丸劑、膠囊、可擴散粉、粒劑。膠囊包括軟膠囊和硬膠囊。
在這些組合物中，一種或多種活性成分與至少一種惰性稀釋劑混合(比如乳糖、甘露糖、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸鎂氧化鋁)，這些組合物還包括除惰性稀釋劑外通常用途的附加物，如潤滑劑(如硬脂酸鎂等)，分散劑(如羥乙酸鈣纖維素)，穩(wěn)定劑(如，人血清白蛋白，乳糖等)，助溶劑(如精氨酸、天冬氨酸)。
藥片或藥丸，如果需要可包上一層胃的或腸的材料膜(如糖、白明膠、羥基丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素、鄰苯二甲酸鹽)，或包上兩層或多層膜。另外包圍物也可作為可吸收材料包括在膠囊內容物中，如白明膠。
口服的流體組合物包括藥用乳液、溶液、懸濁液、糖漿和酏劑等，也可能包括本領域常用的惰性稀釋劑(如純水、乙醇)。除惰性稀釋劑，這些組合物也可能包含輔助劑，如潤濕劑、懸浮劑、增甜劑、增味劑、香味劑和保存劑。
其它口服組合物包括噴霧組合物，它可按已知方法制備并包含一種或多種活性化合物。噴霧組合物包含除惰性稀釋劑外的其它物質。如穩(wěn)定劑，如硫酸氫鈉等，穩(wěn)定劑，使主要化合物等滲，等滲緩沖液如氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸。要制備這樣的噴霧組合物可用例如美國專利No.2868691或3095355所描述的方法。
腸胃外服用的注射劑包括滅菌水或非水溶液，懸液和乳液。對于水溶液或非水溶液或懸液，一種或多種活性化合物與至少一種惰性稀釋劑混合。水稀釋液包括注射用蒸餾水和生理鹽水溶液。非水稀釋液包括丙烯乙二醇、聚乙烯乙二醇，植物油如橄欖油，酒精如乙醇POLYSOLBATE80(注冊商標)等。
注射劑可包含惰性稀釋劑以外的其它物質，如保存劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白乳糖)，和輔助劑如助溶液(精氨酸、天冬氨酸)。
它們將被滅菌，如通過細菌保留濾器過濾，通過用無菌試劑配制組合物或輻射。它們也可生產成無菌固體組合物的形式(如冷凍干燥)。這些固體組合物在注射使用前才溶解到無菌水或其它無菌稀釋液中。
其它腸胃外使用的組合物包括外用流體，皮膚搽劑(如藥膏)，用于直腸的栓劑和陰道栓劑，它們包含一種或一種以上活性化合物，并可按已知方法制備。本發(fā)明的最佳實施方式下面的實施例只是舉例，并不是限制本發(fā)明。參考實施例1克隆一種小鼠PGI2受體的cDNA小鼠P-815的培養(yǎng)肥大細胞瘤細胞的總RNA可通過酸性硫氰酸胍-苯酚-氯仿法(Anal Biochem，162，156(1987))分離。一種單鏈cDNA采用隨機引物(引物購制Toyobo.Co.Ltd)和莫洛尼(molony)小鼠白血病病毒逆轉錄酶(從Bethesda Research Laboratories購實)合成。對于PCR引物，使用人和小鼠TXA2受體的cDNA區(qū)域和對應于編碼第二細胞外環(huán)結構域和第七穿膜結構域。小鼠PGE受體的三種亞型的cDNA，這就是說，對于引物，使用下面表示的分別編碼氨基酸序列Leu-Ala-Val-Thr-Asp-Leu和Asp-Pro-Lie-Tyr-Ile的合成核苷酸(a)和(b)5’-CTG/CGCA/TGTG/CACNFGAT/CT/CT-3’(a)和5’-AT/GA/GTANACCCANGGA/GTC-3’(b)以上面得到的單鏈cDNA為模板，按下面擴增，在94℃變性1分鐘，在40℃退火0.5分鐘。在72℃延伸1分鐘，進行兩個循環(huán)，在94℃變性1分鐘，在46℃退火0.5分鐘，在72℃延伸1分鐘，進行3個循環(huán)，接著在94℃變性1分鐘，在5℃退火0.5分鐘。在72℃延伸1分鐘，進行27個循環(huán)。擴增的cDNA用DNA聚合酶I鈍化，用瓊脂糖凝膠電泳分離并亞克隆到pbluescript Sk(+)載體(購自Stratagene)的EcoRV位點。從隨機挑選的克隆的測序結果看出，這個克隆有706個堿基(叫做CY)與已知類前列腺素受體的cDNA核苷序列有同源性，所以這個克隆可用作雜交的探針。
從P-815細胞中分離聚腺苷RNA。使用cDNA合成試劑盒(購自Pharmacia)并采用寡聚脫氧胸腺嘧啶引導法制備了一種cDNA。在大小選擇后(大于1.5kb)，所說的cDNA插入到λ-ZAPIIDNA的EcoRI位點(λ-ZAPIIDNA購自Stratagene)，并采用了EcoRI接頭(購自New England Biolabs)，這樣制備了cDNA文庫。得到的cDNA文庫中有3.5×105個克隆轉移到尼龍膜上(商標Hybond-N plus，購自Amersham)并用插入克隆CY的cDNA交叉雜交篩選，雜交在65℃的6×SSC(900mM NaCl，90mM檸檬酸鈉)中進行，6×SSC還包括5×Denhardt’s溶液(0.1％Ficoll，0.1％聚乙烯吡咯烷酮和0.1％牛血清白白)，0.5％SDS(十二烷基磺酸鈉)，200μg/ml熱變性鮭精DNA和32P放射標記的克隆CY的插入cDNA，雜交15小時，然后尼龍膜在65℃用含1％SDS2×SSC洗兩遍30分鐘，挑選了9個陽性克隆并通過體內切除法轉移到質粒上。用Bca Best DNA測序試劑盒測定了雙鏈的核苷酸序列(試劑盒購自Takara-Shuzo Co.Ltd.)得到了一個代表性克隆CP302。實施例1克隆一種人PGI2受體cDNA(來自人血小板)采用寡聚(dT)引導法從人巨核細胞白血病細胞中制備了一種cDNA(CMK細胞，按Brit.J.Haematol.72，184(1989)描述方法制備)。在大小選擇后(大于1.5kb)，所說的cDNA用EcoRI接頭(購自NewEngland Biolabs)插入到λ-ZAPIIDNA(購自Stratagene)的EcoRI位點以制備cDNA文庫。在得到的cDNA文庫中轉移3.5×105個克隆到尼龍膜上(商標Hybond-N plus，購自Amersham)并用參考實施例1中CY克隆的cDNA插入序列通過交叉-雜交篩選。雜交在6×SSC(900mM NaCl，90mM檸檬酸鈉)中65℃下進行，6×SSC含有5×Denhardt’s溶液，0.5％SDS，200μg/ml熱變性鮭精DNA和32P標記的克隆CY的cDNA插入序列，雜交15小時，在雜交后，膜在65℃用含1％SDS的2×SSC洗兩次30分鐘。幾個陽性克隆挑選出來并用于序列分析。
用雙脫氧鏈終止法測定了雙鏈的核苷酸順序，從分析結果可看出，有一個代表性克隆，MK71，具有一個開放閱讀框(在Seq.ID No.2中表示)，1158bp的全長cDNA。全長核苷酸序列在Seq.ID No.3中表示。按開放閱讀框推測的氨基酸順序在Seq.ID No.1中表示。MK71的核苷酸序列在Seq.ID No.3中表示，而預測的氨基酸順序一起在Seq.IDNo.4中表示。實施例2人PGI2受體cDNA的克隆(受體來自人肺)使用來源于人肺的cDNA文庫(Clontech Code No.CHAL 1033a)和參考實施例1中制備的CP302用EcoRV消化后制備的片段(約1.5kb)，并在下面條件下按實施例1的方法進行交叉雜交。雜交在5×SSPE(0.75M NaCl，0.05M NaH2PO4-H2O，0.005M EDTA)在37℃下進行，5×SSPE還含有25％酰胺，1×Denhardt’s溶液，0.1％SDS，100μg/ml熱變性鮭精DNA和32P標記的探針(用EcoRV消化在參考實施例1中制備在CP302得到片段)，雜交20小時。雜交后，濾膜依次在室溫下用2×SSC洗兩次10分鐘，在2×SSC中37℃下洗兩次10分鐘，在2×SSC中42℃下洗一次10分鐘。接著許多陽性克隆被選出，亞克隆到pBluescript KS(-)(購自Invitrogen Co.Ltd.)中并進行序列分析。
用雙脫氧鏈終止法測定雙鏈核苷酸序列。從分析結果看出，一個代表性克隆，phIPR1是一個1158bp有開放閱讀框的全長cDNA(Seq.IDNo.5表示)的克隆。全長的核苷酸序列在Seq.ID No.6中表示。按開放閱讀框預計的氨基酸序列在Seq.ID No.1中表示。phIPR1的核苷酸序列正如在Seq.ID No.6中表示，預計的氨基酸順序一起在Seq.ID No.7中表示。
將Seq.ID No.2和5所示的核苷酸序列進行比較，在Seq.ID No.2的核苷酸序列中的第159個堿基位置是鳥嘌呤“G”。另一方面在Seq.IDNo.5的相對應處為胞嘧啶“C”。另外，在Seq.ID No.2的核苷酸序列的第984個堿基位置是腺嘌呤“A”，而在Seq.ID No.5相對應位置為胞嘧啶“C”。類似的差別還存在于Seq.ID No.3和6，Seq.ID No.4和7中。這種差別被認為是由于采用不同細胞制備cDNA文庫造成的。實施例3克隆大鼠PGI受體的cDNA(來源于大鼠肺)采用來源于大鼠肺的cDNA文庫(C1ontech Code No.CLRL 1008a)和用EcoRV消化參考實施例1中制備的CP302制備的片段(1.5kb)，按實施例2的方法進行交叉雜交。幾個陽性克隆被選出，并亞克隆至pBluescript KS(-)(購自Invitrogen Co.Ltd)并進行序列分析。
用雙脫氧鏈終止法測定雙鏈核苷酸順序。從分析的結果看出，一個代表性克隆，prIPR1，是1248bp的有開放閱讀框(在Seq.ID No.9表示)的全長cDNA的克隆。全長的核苷酸序列在Seq.ID No.10中表示。按開放閱讀框推測的氨基酸序列在Seq.ID No.8中表示。prIPR1的核苷酸序列在Seq.ID No.10中表示，而推測的氨基酸序列一起在Seq.ID No.11表示。實施例4在CHO細胞中的表達和配體結合試驗MK71 cDNA的EcoRI插入片段被亞克隆到pdKCR-dhfr，pdKCR-dhfr是一個包含小鼠基因作為選擇標記的真核細胞表達載體。得到的質粒DNA采用脂轉染(lipofection)法(在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，7413(1987))轉染到二氫葉酸還原酶缺陷型的CHO細胞(CHO-dhfr)中。一組表達二氫葉酸還原酶的細胞在包含青霉素(100 units/ml)，鏈霉素(100mg/ml)和10％透析的胎牛血清的α-改進egle培養(yǎng)基(購自Cell Culture Laboratories)中培養(yǎng)并選擇。從這組細胞中通過單細胞克隆分離出細胞系。通過RNA印跡分析測試cDNA的表達。用pdKCR-dhfr轉染的CHO細胞制備的細胞系為對照，在PNA印跡分析中沒有信號。
轉染的CHO細胞克隆培養(yǎng)、收獲后，用Potter-Eivehjem在包含25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.25M蔗糖，10mM MgCl2，1mM EDTA和0.1mM苯甲基磺酰氟溶液中勻漿。勻漿物在800×g離心10分鐘。上清液保存，沉淀懸浮在包含25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.25M蔗糖，10mM MgCl2，1mM EDTA和0.1mM苯基甲基磺酰基氟溶液中，再次勻漿并離心。上清液和保存的上清液混合，在100,000×g離心1小時，沉淀懸浮于20mM MES(2-CN-嗎啉代乙烷磺酸水合物，pH6.0)，10mM MgCl2和1mM EDTA(懸浮緩沖液)和舊弱(asthe)粗膜組織中。
〔3H〕伊洛前列素(iloprost)結合測試按下面進行，也就是說粗糙膜組織，40μg蛋白和各種濃度的〔3H〕伊洛前列素(iloprost)(用于Scatchard分析)或20nM〔3H〕伊洛前列素(iloprost)(用于替換試驗)懸浮于懸浮緩沖液中，總體積為100ml，在30℃保溫1小時，加入2ml冰冷卻懸浮緩沖液終止保溫?；旌衔锟焖儆?Whatman GF/C濾膜過濾，濾膜用2ml冰冷卻的懸浮緩沖液洗4次。濾膜放射性用傳統(tǒng)方法測定，結果見圖1。
這個測試表明〔3H〕伊洛前列素(iloprost)，這種PGI2受體的專一性配體專一性結合到表達MK-71的CHO細胞的細胞膜上。這個結合的斯卡查得(Scatehard)分析顯示出3.3nM的解離常數和3.2pmol/mg蛋白的最大結合。另外，各種類前列腺素對〔3H〕伊洛前列素(iloprost)專一性結合的抑制活力在圖1表示。這表明各種類前列腺抑制活力按以下排列伊洛前列素(iloprost)＝卡前列素(cicaprost)＞＞carbacyclin(都為穩(wěn)定PGI2促進劑)＞PGE1＞STA2(穩(wěn)定TXA2促進劑)＞＞PGE2＝PGD2＝PGF2a。本發(fā)明的效果本發(fā)明的多肽本身能與PGI2專一性結合，所以它們可用作PGI2產生過多而造成的疾病如出血病的治療和預防的藥劑。它們也可用于篩選促進或拮抗PGI2的化合物。
本發(fā)明的DNA也可反義方向插入上述載體中以便產生反義RNA。反義RNA也可用合成方法產生。這些反義RNA可以用在控制一個細胞中本發(fā)明多肽的水平。
本發(fā)明還提供了藥用組合物，這類組合物包括本發(fā)明的多肽，或其抗體，與一類藥用上可接受的賦形劑和/或載體相連。
另外，抗體發(fā)明多肽的多克隆或單克隆抗體可用于抗體中所說多肽數量的測定，并且可用于調查所說多肽和疾病之間關系的目的中，或用于疾病診斷的目的中等等。多克隆和單克隆抗體可以用所說多肽或它的片段為抗原用傳統(tǒng)方法制備。
本發(fā)明的DNA可用于作為一類重要和必要的模板來制備本發(fā)明的多肽，而此多肽可能在基因疾病的診斷和治療中有各種用途。另外，使用本發(fā)明的DNA為探針可以分離基因組DNA。同樣，可以在人或那些其它種類動物中分離與本發(fā)明DNA高度同源的基因。序列表(1)一般信息…………(2)SEQ ID No1的信息(i)序列特征(A)長度386個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲學線性(ii)分子類型蛋白質(xi)序列描述SEQ ID No1Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser Val Gly1 5 10 15Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly20 25 30Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro Ser Ala35 40 45Phe Ala Val Leu Val Thr Gly Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu Gly Thr50 55 60Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser65 70 75 80Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala Phe Ala85 90 95Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu Phe Ala100 105 110Met Ala Val Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala115 120 125Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr130 135 140Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Gln145 150 155 160His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met Arg Trp165 170 175Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly Leu Val180 185 190Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu195 200 205Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg Gln Gln Lys Arg His Gln Gly Ser Leu210 215 220Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly Glu Asp Glu Val Asp His Leu Ile Leu225 230 235 240Leu Ala Leu Met Thr Val Val Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr245 250 255Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser Glu Met260 265 270Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp275 280 285Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys290 295 300Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys Leu Gly Pro Ala His Gly Asp Ser Gln305 310 315 320Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg Ala Pro325 330 335Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser Ala Trp340 345 350Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser Ser Gly355 360 365Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala Cys Ser370 375 380Leu Cys385(2)SEQ ID No2的信息(i)序列特征(A)長度1158堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No2ATGGCGGATT CGTGCAGGAA CCTCACCTAC GTGCGGGGCT CGGTGGGGCC GGCCACCAGC 60ACCCTGATGT TCGTGGCCGG TGTGGTGGGC AACGGGCTGG CCCTGGGCAT CCTGAGCGCA 120CGGCGACCGG CGCGCCCCTC GGCCTTCGCG GTGCTGGTGA CCGGACTGGC GGCCACCGAC 180CTGCTGGGCA CCAGCTTCCT GAGCCCGGCC GTGTTCGTGG CCTATGCGCG CAACAGCTCC 240CTGCTGGGCC TGGCCCGAGG CGGCCCCGCC CTGTGCGATG CCTTCGCCTT CGCCATGACC 300TTCTTCGGCC TGGCGTCCAT GCTCATCCTC TTTGCCATGG CCGTGGAGCG CTGCCTGGCG 360CTGAGCCACC CCTACCTCTA CGCGCAGCTG GACGGGCCCC GCTGCGCCCG CCTGGCGCTG 420CCAGCCATCT ACGCCTTCTG CGTCCTCTTC TGCGCGCTGC CCCTGCTGGG CCTGGGCCAA 480CACCAGCAGT ACTGCCCCGG CAGCTGGTGC TTCCTCCGCA TGCGCTGGGC CCAGCCGGGC 540GGCGCCGCCT TCTCGCTGGC CTACGCCGGC CTGGTGGCCC TGCTGGTGGC TGCCATCTTC 600CTCTGCAACG GCTCGGTCAC CCTCAGCCTC TGCCGCATGT ACCGCCAGCA GAAGCGCCAC 660CAGGGCTCTC TGGGTCCACG GCCGCGCACC GGAGAGGACG AGGTGGACCA CCTGATCCTG 720CTGGCCCTCA TGACAGTGGT CATGGCCGTG TGCTCCCTGC CTCTCACGAT CCGCTGCTTC 780ACCCAGGCTG TCGCCCCTGA CAGCAGCAGT GAGATGGGGG ACCTCCTTGC CTTCCGCTTC 840TACGCCTTCA ACCCCATCCT GGACCCCTGG GTCTTCATCC TTTTCCGCAA GGCTGTCTTC 900CAGCGACTCA AGCTCTGGGT CTGCTGCCTG TGCCTCGGGC CTGCCCACGG AGACTCGCAG 960ACACCCCTTT CCCAGCTCGC CTCAGGGAGG AGGGACCCAA GGGCCCCCTC TGCTCCTGTG1020GGAAAGGAGG GGAGCTGCGT GCCTTTGTCG GCTTGGGGCG AGGGGCAGGT GGAGCCCTTG1080CCTCCCACAC AGCAGTCCAG CGGCAGCGCC GTGGGAACGT CGTCCAAAGC AGAAGCCAGC1140GTCGCCTGCT CCCTCTGC 1158(2)SEQ ID No3的信息(i)序列特征(A)長度1979堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No3AGGCAGCGAG AGACACGAGG AGCAAAGCAA GTGAAGGCAC AGACGCACGG GACAGGAGAG 60CCTGGGCAAG ACTGGAGAGC CCAGACCTGG GATGGCGGAT TCGTGCAGGA ACCTCACCTA 120CGTGCGGGGC TCGGTGGGGC CGGCCACCAG CACCCTGATG TTCGTGGCCG GTGTGGTGGG 180CAACGGGCTG GCCCTGGGCA TCCTGAGCGC ACGGCGACCG GCGCGCCCCT CGGCCTTCGC 240GGTGCTGGTG ACCGGACTGG CGGCCACCGA CCTGCTGGGC ACCAGCTTCC TGAGCCCGGC 300CGTGTTCGTG GCCTATGCGC GCAACAGCTC CCTGCTGGGC CTGGCCCGAG GCGGCCCCGC 360CCTGTGCGAT GCCTTCGCCT TCGCCATGAC CTTCTTCGGC CTGGCGTCCA TGCTCATCCT 420CTTTGCCATG GCCGTGGAGC GCTGCCTGGC GCTGAGCCAC CCCTACCTCT ACGCGCAGCT 480GGACGGGCCC CGCTGCGCCC GCCTGGCGCT GCCAGCCATC TACGCCTTCT GCGTCCTCTT 540CTGCGCGCTG CCCCTGCTGG GCCTGGGCCA ACACCAGCAG TACTGCCCCG GCAGCTGGTG 600CTTCCTCCGC ATGCGCTGGG CCCAGCCGGG CGGCGCCGCC TTCTCGCTGG CCTACGCCGG 660CCTGGTGGCC CTGCTGGTGG CTGCCATCTT CCTCTGCAAC GGCTCGGTCA CCCTCAGCCT 720CTGCCGCATG TACCGCCAGC AGAAGCGCCA CCAGGGCTCT CTGGGTCCAC GGCCGCGCAC 780CGGAGAGGAC GAGGTGGACC ACCTGATCCT GCTGGCCCTC ATGACAGTGG TCATGGCCGT 840GTGCTCCCTG CCTCTCACGA TCCGCTGCTT CACCCAGGCT GTCGCCCCTG ACAGCAGCAG 900TGAGATGGGG GACCTCCTTG CCTTCCGCTT CTACGCCTTC AACCCCATCC TGGACCCCTG 960GGTCTTCATC CTTTTCCGCA AGGCTGTCTT CCAGCGACTC AAGCTCTGGG TCTGCTGCCT1020GTGCCTCGGG CCTGCCCACG GAGACTCGCA GACACCCCTT TCCCAGCTCG CCTCAGGGAG1080GAGGGACCCA AGGGCCCCCT CTGCTCCTGT GGGAAAGGAG GGGAGCTGCG TGCCTTTGTC1140GGCTTGGGGC GAGGGGCAGG TGGAGCCCTT GCCTCCCACA CAGCAGTCCA GCGGCAGCGC1200CGTGGGAACG TCGTCCAAAG CAGAAGCCAG CGTCGCCTGC TCCCTCTGCT GACATTTCAA1260GCTGACCCTG TGATCTCTGC CCTGTCTTCG GGCGACAGGA GCCAGAAAAT CAGGGACATG 1320GCTGATGGCT GCGGATGCTG GAACCTTGGC CCCCAAACTC TGGGGCCGAT CAGCTGCTGT 1380TTCTCCTGCG GCAGGGCAGT CGCTGCTGGC TCTGGGAAGA GAGTGAGGGA CAGAGGAAAC 1440GTTTATCCTG GAGTGCAGAA AGAATGGTTC TCTCAAAATA ACCAGTGGCC TGGCCGACCT 1500GCTCTGGCCC TGGATTCCCC ATCCATCTCA TTGTCTAAAT ATTTAGAAGG CGGAGAAGTT 1560CCCAGAGGCT TCTGTACAGT CAGGTCTGCT CTGGTCTGGG TGCTGGCTCC AATCTGCGTC 1620CACTTAGGAG GCCCAACTGC CCACCCCAAG TCCCCAGGGG ATGGCCCTCC CCCTCTACCA 1680AGCCACTCCA AGAGCCAGCC CCTTTCTGCT CCACAAAAAC CACAGTTATT GGAAAAGCTC 1740CCTGCCTTCC CTTGCCGCTG GTCCCCCACC AGGCTTGGGA GCCCTGGCAT CCCAAAGGGG 1800CAACGGGAGG AAGGGGAGGC TGCTGCATTG TGGGTGATGA CGTAGGACAT GTGCTTGGTA 1860CAAAAAGGGC CTGAGACATT CCACCTAGCT TGACTGGCTG CAAGATGAGA ACTGGGGGGG 1920TGCAGGTGGT GGGGAGACAG ATGGAGAAGC TGGCAGATGA AGGGTGGGGG CTGCGGATC1979(2)SEQ ID No4的信息(i)序列特征(A)長度1979堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(vi)來源(A)生物人屬(G)細胞類型巨核細胞白血病細胞(H)細胞系CMK(ix)特點(A)名稱/關鍵字CDS(B)位置92-1249(C)鑒定方法P(xi)序列描述SEQ ID No4AGGCAGCGAG AGACACGAGG AGCAAAGCAA GTGAAGGCAC AGACGCACGG GACAGGAGAG 60CCTGGGCAAG ACTGGAGAGC CCAGACCTGG G ATG GCG GAT TCG TGC AGG AAC 112Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn1 5CTC ACC TAC GTG CGG GGC TCG GTG GGG CCG GCC ACC AGC ACC CTG ATG160Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met10 15 20TTC GTG GCC GGT GTG GTG GGC AAC GGG CTG GCC CTG GGC ATC CTG AGC208Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser25 30 35GCA CGG CGA CCG GCG CGC CCC TCG GCC TTC GCG GTG CTG GTG ACC GGA256Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr Gly40 45 50 55CTG GCG GCC ACC GAC CTG CTG GGC ACC AGC TTC CTG AGC CCG GCC GTG 304Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu Gly Thr Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val60 65 70TTC GTG GCC TAT GCG CGC AAC AGC TCC CTG CTG GGC CTG GCC CGA GGC 352Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly75 80 85GGC CCC GCC CTG TGC GAT GCC TTC GCC TTC GCC ATG ACC TTC TTC GGC 400Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly90 95 100CTG GCG TCC ATG CTC ATC CTC TTT GCC ATG GCC GTG GAG CGC TGC CTG 448Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys Leu105 110 115GCG CTG AGC CAC CCC TAC CTC TAC GCG CAG CTG GAC GGG CCC CGC TGC 496Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys120 125 130 135GCC CGC CTG GCG CTG CCA GCC ATC TAC GCC TTC TGC GTC CTC TTC TGC 544Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys140 145 150GCG CTG CCC CTG CTG GGC CTG GGC CAA CAC CAG CAG TAC TGC CCC GGC 592Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Gln His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly155 160 165AGC TGG TGC TTC CTC CGC ATG CGC TGG GCC CAG CCG GGC GGC GCC GCC 640Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met Arg Trp Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala170 175 180TTC TCG CTG GCC TAC GCC GGC CTG GTG GCC CTG CTG GTG GCT GCC ATC 688Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile185 190 195TTC CTC TGC AAC GGC TCG GTC ACC CTC AGC CTC TGC CGC ATG TAC CGC 736Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg200 205 210 215CAG CAG AAG CGC CAC CAG GGC TCT CTG GGT CCA CGG CCG CGC ACC GGA 784Gln Gln Lys Arg His Gln Gly Ser Leu Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly220 225 230GAG GAC GAG GTG GAC CAC CTG ATC CTG CTG GCC CTC ATG ACA GTG GTC 832Glu Asp Glu Val Asp His Leu Ile Leu Leu Ala Leu Met Thr Val Val235 240 245ATG GCC GTG TGC TCC CTG CCT CTC ACG ATC CGC TGC TTC ACC CAG GCT 880Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala250 255 260GTC GCC CCT GAC AGC AGC AGT GAG ATG GGG GAC CTC CTT GCC TTC CGC 928Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser Glu Met Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg265 270 275TTC TAC GCC TTC AAC CCC ATC CTG GAC CCC TGG GTC TTC ATC CTT TTC 976Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe280 285 290 295CGC AAG GCT GTC TTC CAG CGA CTC AAG CTC TGG GTC TGC TGC CTG TGC 1024Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys300 305 310CTC GGG CCT GCC CAC GGA GAC TCG CAG ACA CCC CTT TCC CAG CTC GCC 1072Leu Gly Pro Ala His Gly Asp Ser Gln Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala315 320 325TCA GGG AGG AGG GAC CCA AGG GCC CCC TCT GCT CCT GTG GGA AAG GAG 1120Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg Ala Pro Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu330 335 340GGG AGC TGC GTG CCT TTG TCG GCT TGG GGC GAG GGG CAG GTG GAG CCC 1168Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser Ala Trp Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro345 350 355TTG CCT CCC ACA CAG CAG TCC AGC GGC AGC GCC GTG GGA ACG TCG TCC 1216Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser Ser Gly Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser360 365 370 375AAA GCA GAA GCC AGC GTC GCC TGC TCC CTC TGC TGACATTTCA AGCTGACCCT 1269Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala Cys Ser Leu Cys380 385GTGATCTCTG CCCTGTCTTC GGGCGACAGG AGCCAGAAAA TCAGGGACAT GGCTGATGGC 1329TGCGGATGCT GGAACCTTGG CCCCCAAACT CTGGGGCCGA TCAGCTGCTG TTTCTCCTGC 1389GGCAGGGCAG TCGCTGCTGG CTCTGGGAAG AGAGTGAGGG ACAGAGGAAA CGTTTATCCT 1449GGAGTGCAGA AAGAATGGTT CTCTCAAAAT AACCAGTGGC CTGGCCGACC TGCTCTGGCC 1509CTGGATTCCC CATCCATCTC ATTGTCTAAA TATTTAGAAG GCGGAGAAGT TCCCAGAGGC 1569TTCTGTACAG TCAGGTCTGC TCTGGTCTGG GTGCTGGCTC CAATCTGCGT CCACTTAGGA 1629GGCCCAACTG CCCACCCCAA GTCCCCAGGG GATGGCCCTC CCCCTCTACC AAGCCACTCC 1689AAGAGCCAGC CCCTTTCTGC TCCACAAAAA CCACAGTTAT TGGAAAAGCT CCCTGCCTTC 1749CCTTGCCGCT GGTCCCCCAC CAGGCTTGGG AGCCCTGGCA TCCCAAAGGG GCAACGGGAG 1809GAAGGGGAGG CTGCTGCATT GTGGGTGATG ACGTAGGACA TGTGCTTGGT ACAAAAAGGG 1869CCTGAGACAT TCCACCTAGC TTGACTGGCT GCAAGATGAG AACTGGGGGG GTGCAGGTGG 1929TGGGGAGACA GATGGAGAAG CTGGCAGATG AAGGGTGGGG GCTGCGGATC1979(2)SEQ ID No5的信息(i)序列特征(A)長度1158堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No5ATGGCGGATT CGTGCAGGAA CCTCACCTAC GTGCGGGGCT CGGTGGGGCC GGCCACCAGC 60ACCCTGATGT TCGTGGCCGG TGTGGTGGGC AACGGGCTGG CCCTGGGCAT CCTGAGCGCA120CGGCGACCGG CGCGCCCCTC GGCCTTCGCG GTGCTGGTCA CCGGACTGGC GGCCACCGAC180CTGCTGGGCA CCAGCTTCCT GAGCCCGGCC GTGTTCGTGG CCTATGCGCG CAACAGCTCC240CTGCTGGGCC TGGCCCGAGG CGGCCCCGCC CTGTGCGATG CCTTCGCCTT CGCCATGACC300TTCTTCGGCC TGGCGTCCAT GCTCATCCTC TTTGCCATGG CCGTGGAGCG CTGCCTGGCG360CTGAGCCACC CCTACCTCTA CGCGCAGCTG GACGGGCCCC GCTGCGCCCG CCTGGCGCTG420CCAGCCATCT ACGCCTTCTG CGTCCTCTTC TGCGCGCTGC CCCTGCTGGG CCTGGGCCAA480CACCAGCAGT ACTGCCCCGG CAGCTGGTGC TTCCTCCGCA TGCGCTGGGC CCAGCCGGGC540GGCGCCGCCT TCTCGCTGGC CTACGCCGGC CTGGTGGCCC TGCTGGTGGC TGCCATCTTC600CTCTGCAACG GCTCGGTCAC CCTCAGCCTC TGCCGCATGT ACCGGCAGCA GAAGCGCCAC660CAGGGCTCTC TGGGTCCACG GCCGCGCACC GGAGAGGACG AGGTGGACCA CCTGATCCTG720CTGGCCCTCA TGACAGTGGT CATGGCCGTG TGCTCCCTGC CTCTCACGAT CCGCTGCTTC780ACCCAGGCTG TCGCCCCTGA CAGCAGCAGT GAGATGGGGG ACCTCCTTGC CTTCCGCTTC840TACGCCTTCA ACCCCATCCT GGACCCCTGG GTCTTCATCC TTTTCCGCAA GGCTGTCTTC900CAGCGACTCA AGCTCTGGGT CTGCTGCCTG TGCCTCGGGC CTGCCCACGG AGACTCGCAG960ACACCCCTTT CCCAGCTCGC CTCCGGGAGG AGGGACCCAA GGGCCCCCTC TGCTCCTGTG 1020GGAAAGGAGG GGAGCTGCGT GCCTTTGTCG GCTTGGGGCG AGGGGCAGGT GGAGCCCTTG 1080CCTCCCACAC AGCAGTCCAG CGGCAGCGCC GTGGGAACGT CGTCCAAAGC AGAAGCCAGC 1140GTCGCCTGCT CCCTCTGC 1158(2)SEQ ID No6的信息(i)序列特征(A)長度1320堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No6AGCAAGTGAA GGCACAGACG CACGGGACAG GAGAGCCTGG GCAAGACTGG AGAGCCCAGA 60CCTGGGATGG CGGATTCGTG CAGGAACCTC ACCTACGTGC GGGGCTCGGT GGGGCCGGCC 120ACCAGCACCC TGATGTTCGT GGCCGGTGTG GTGGGCAACG GGCTGGCCCT GGGCATCCTG 180AGCGCACGGC GACCGGCGCG CCCCTCGGCC TTCGCGGTGC TGGTCACCGG ACTGGCGGCC 240ACCGACCTGC TGGGCACCAG CTTCCTGAGC CCGGCCGTGT TCGTGGCCTA TGCGCGCAAC 300AGCTCCCTGC TGGGCCTGGC CCGAGGCGGC CCCGCCCTGT GCGATGCCTT CGCCTTCGCC 360ATGACCTTCT TCGGCCTGGC GTCCATGCTC ATCCTCTTTG CCATGGCCGT GGAGCGCTGC 420CTGGCGCTGA GCCACCCCTA CCTCTACGCG CAGCTGGACG GGCCCCGCTG CGCCCGCCTG 480GCGCTGCCAG CCATCTACGC CTTCTGCGTC CTCTTCTGCG CGCTGCCCCT GCTGGGCCTG 540GGCCAACACC AGCAGTACTG CCCCGGCAGC TGGTGCTTCC TCCGCATGCG CTGGGCCCAG 600CCGGGCGGCG CCGCCTTCTC GCTGGCCTAC GCCGGCCTGG TGGCCCTGCT GGTGGCTGCC 660ATCTTCCTCT GCAACGGCTC GGTCACCCTC AGCCTCTGCC GCATGTACCG CCAGCAGAAG 720CGCCACCAGG GCTCTCTGGG TCCACGGCCG CGCACCGGAG AGGACGAGGT GGACCACCTG 780ATCCTGCTGG CCCTCATGAC AGTGGTCATG GCCGTGTGCT CCCTGCCTCT CACGATCCGC 840TGCTTCACCC AGGCTGTCGC CCCTGACAGC AGCAGTGAGA TGGGGGACCT CCTTGCCTTC 900CGCTTCTACG CCTTCAACCC CATCCTGGAC CCCTGGGTCT TCATCCTTTT CCGCAAGGCT 960GTCTTCCAGC GACTCAAGCT CTGGGTCTGC TGCCTGTGCC TCGGGCCTGC CCACGGAGAC1020TCGCAGACAC CCCTTTCCCA GCTCGCCTCC GGGAGGAGGG ACCCAAGGGC CCCCTCTGCT1080CCTGTGGGAA AGGAGGGGAG CTGCGTGCCT TTGTCGGCTT GGGGCGAGGG GCAGGTGGAG1140CCCTTGCCTC CCACACAGCA GTCCAGCGGC AGCGCCGTGG GAACGTCGTC CAAAGCAGAA1200GCCAGCGTCG CCTGCTCCCT CTGCTGACAT TTCAAGCTGA CCCTGTGATC TCTGCCCTGT1260CTTCGGGCGA CAGGAGCCAG AAAATCAGGG ACATGGCTGA TGGCTGCGGA TGCTGGAACC1220(2)SEQ ID No7的信息(i)序列特征(A)長度1320堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(vi)來源(A)生物小鼠(F)組織類型肺(ix)特點(A)名字/關鍵字CDS(B)位置67-1224(C)鑒定方法P(xi)序列描述SEQ ID No7AGCAAGTGAA GGCACAGACG CACGGGACAG GAGAGCCTGG GCAAGACTGG AGAGCCCAGA 60CCTGGG ATG GCG GAT TCG TGC AGG AAC CTC ACC TAC GTG CGG GGC TCG 108Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser1 5 10GTG GGG CCG GCC ACC AGC ACC CTG ATG TTC GTG GCC GGT GTG GTG GGC156Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly15 20 25 30AAC GGG CTG GCC CTG GGC ATC CTG AGC GCA CGG CGA CCG GCG CGC CCC204Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro
35 40 45TGG GCC TTC GCG GTG CTG GTC ACC GGA CTG GCG GCC ACC GAC CTG CTG252Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr Gly Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu50 55 60GGC ACC AGC TTC CTG AGC CCG GCC GTG TTC GTG GCC TAT GCG CGC AAC300Gly Thr Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn65 70 75AGC TCC CTG CTG GGC CTG GCC CGA GGC GGC CCC GCC CTG TGC GAT GCC348Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala80 85 90TTC GCC TTC GCC ATG ACC TTC TTC GGC CTG GCG TCC ATG CTC ATC CTC396Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu95 100 105 110TTT GCC ATG GCC GTG GAG CGC TGC CTG GCG CTG AGC CAC CCC TAC CTC444Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu115 120 125TAC GCG CAG CTG GAC GGG CCC CGC TGC GCC CGC CTG GCG CTG CCA GCC492Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala130 135 140ATC TAC GCC TTC TGC GTC CTC TTC TGC GCG CTG CCC CTG CTG GGC CTG540Ile Tyr Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu145 150 155GGC CAA CAC CAG CAG TAC TGC CCC GGC AGC TGG TGC TTC CTC CGC ATG588Gly Gln His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met160 165 170CGC TGG GCC CAG CCG GGC GGC GCC GCC TTC TGG CTG GCC TAC GCC GGC636Arg Trp Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly175 180 185 190CTG GTG GCC CTG CTG GTG GCT GCC ATC TTC CTC TGC AAC GGC TCG GTC684Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val195 200 205ACC CTC AGC CTC TGC CGC ATG TAC CGC CAG CAG AAG CGC CAC CAG GGC732Thr Leu Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg Gln Gln Lys Arg His Gln Gly210 215 220TCT CTG GGT CCA CGG CCG CGC ACC GGA GAG GAC GAG GTG GAC CAC CTG780Ser Leu Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly Glu Asp Glu Val Asp His Leu225 230 235ATC CTG CTG GCC CTC ATG ACA GTG GTC ATG GCC GTG TGC TCC CTG CCT828lle Leu Leu Ala Leu Met Thr Val Val Met Ala Val Cys Ser Leu Pro240 245 250CTC ACG ATC CGC TGC TTC ACC CAG GCT GTC GCC CCT GAC AGC AGC AGT876Leu Thr Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser255 260 265 270GAG ATG GGG GAC CTC CTT GCC TTC CGC TTC TAC GCC TTC AAC CCC ATC924Glu Met Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile
275 280 285CTG GAC CCC TGG GTC TTC ATC CTT TTC CGC AAG GCT GTC TTC CAG CGA972Leu Asp Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg290 295 300CTC AAG CTC TGG GTC TGC TGC CTG TGC CTC GGG CCT GCC CAC GGA GAC 1020Leu Lys Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys Leu Gly Pro Ala His Gly Asp305 310 315TCG CAG ACA CCC CTT TCC CAG CTC GCC TCC GGG AGG AGG GAC CCA AGG 1068Ser Gln Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg320 325 330GCC CCC TCT GCT CCT GTG GGA AAG GAG GGG AGC TGC GTG CCT TTG TCG 1116Ala Pro Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser335 340 345 350GCT TGG GGC GAG GGG CAG GTG GAG CCC TTG CCT CCC ACA CAG CAG TCC 1164Ala Trp Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser355 360 365AGC GGC AGC GCC GTG GGA ACG TCG TCC AAA GCA GAA GCC AGC GTC GCC 1212Ser Gly Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala370 375 380TGC TCC CTC TGC TGACATTTCA AGCTGACCCT GTGATCTCTG CCCTGTCTTC 1264Cys Ser Leu Cys385GGGCGACAGG AGCCAGAAAA TCAGGGACAT GGCTGATGGC TGCGGATGCT GGAACC 1320(2)SEQ ID No8的信息(i)序列特征(A)長度416個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲學線性(ii)分子類型蛋白質(xi)序列描述SEQ ID No8Met Val Ala Ser Gly Gly Arg Pro Asp Gly Pro Pro Ser Ile Thr Pro1 5 10 15Glu Ser Pro Leu Ile Val Gly Gly Arg Glu Trp Gln Gly Met Ala Gly20 25 30Ser Cys Trp Asn Ile Thr Tyr Val Gln Asp Ser Val Gly Pro Ala Thr35 40 45Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu
50 55 60Gly Ile Leu Gly Ala Arg Arg Arg Ser His Pro Ser Ala Phe Ala Val65 70 75 80Leu Val Thr Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Cys Phe Leu85 90 95Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly100 105 110Leu Ala His Gly Gly Thr Met Leu Cys Asp Thr Phe Ala Phe Ala Met115 120 125Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Thr Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val130 135 140Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp145 150 155 160Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys165 170 175Cys Leu Phe Cys Ser Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Glu His Gln Gln180 185 190Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Ile Arg Met Arg Ser Pro Gln Pro195 200 205Gly Gly Cys Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Ser Leu Met Ala Leu Leu210 215 220Val Thr Ser Ile Phe Phe Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys225 230 235 240His Met Tyr Arg Gln Gln Arg Arg His His Gly Ser Phe Val Pro Thr245 250 255Ser Arg Ala Arg Glu Asp Glu Val Tyr His Leu Ile Leu Leu Ala Leu260 265 270Met Thr Gly Ile Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Gly275 280 285Phe Thr Gln Ala Ile Ala Pro Asp Ser Arg Glu Met Gly Asp Leu His290 295 300Ala Phe Arg Phe Asn Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Val Phe305 310 315 320Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys Phe Trp Leu Cys325 330 335Cys Leu Cys Ala Arg Ser Val His Gly Asp Leu Gln Thr Pro Leu Ser340 345 350Arg Pro Val Ser Gly Arg Arg Asp Thr Leu Ala Pro Asp Ser Leu Gln355 360 365Ala Lys Glu Gly Asn Trp Val Pro Leu Ser Thr Trp Gly Thr Gly Gln370 375 380Val Ala Pro Leu Thr Ala Val Pro Leu Ser Gly Gly Asp Gly Cys Ser385 390 395 400Val Gly Met Pro Ser Lys Thr Glu Ala Val Val Ala Cys Ser Leu Cys405 410 415(2)SEQ ID No9的信息(i)序列特征(A)長度1281堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No9ATGGTGGCCA GCGGTGGACG TCCTGATGGT CCCCCTTCTA TCACCCCCGA GAGCCCTCTC 60ATTGTAGGTG GCAGAGAGTG GCAGGGTATG GCAGGTTCTT GCTGGAACAT CACCTACGTT120CAAGACTCGG TAGGACCTGC CACCAGCACC CTGATGTTTG TGGCTGGTGT GGTGGGCAAC180GGGCTAGCAC TGGGCATCCT GGGTGCCCGA CGGAGGTCAC ACCCATCGGC GTTTGCAGTG240TTGGTCACTG GGCTGGCAGT GACGGATCTG CTGGGCACGT GCTTCTTGAG CCCCGCGGTG300TTTGTGGCCT ATGCTCGAAA CAGCTCTTTG CTGGGCCTGG CCCACGGTGG GACGATGCTG360TGTGACACTT TCGCCTTCGC TATGACTTTC TTCGGCCTGG CCTCCACGCT CATCCTCTTC420GCCATGGCTG TGGAGCGGTG CCTGGCTCTC AGTCATCCCT ACCTGTACGC CCAGCTGGAC480GGGCCCCGCT GTGCCCGCTT GGCTTTGCCT GCCATCTACG CTTTCTGTTG TCTCTTCTGC540TCACTGCCCC TGCTGGGCCT GGGCGAGCAC CAGCAGTATT GTCCCGGGAG CTGGTGCTTC600ATCCGCATGC GTTCCCCCCA GCCTGGTGGC TGTGCCTTCT CCCTGGCCTA TGCCAGTCTC660ATGGCCCTGC TGGTGACCTC CATCTTCTTC TGCAACGGCT CCGTCACTCT CAGCCTCTGT720CACATGTACC GCCAACAGAG ACGGCACCAT GGCTCGTTTG TGCCGACCTC TCGGGCACGA780GAGGATGAAG TTTACCACCT GATTCTGCTG GCCCTCATGA CAGGCATCAT GGCCGTATGC840TCCCTGCCTC TCACGATCAG AGGATTCACG CAGGCCATCG CCCCAGACAG CAGAGAGATG900GGGGACCTCC ACGCCTTCCG TTTTAATGCC TTCAACCCCA TCCTGGACCC CTGGGTCTTC960ATCCTTTTCC GAAAGGCTGT CTTCCAACGC CTCAAGTTCT GGTTGTGTTG TCTGTGTGCC 1020CGTTCTGTCC ATGGGGATCT GCAGACGCCC CTCTCCCGGC CCGTGTCGGG GAGAAGAGAC 1080ACACTGGCTC CCGATTCTCT CCAGGCTAAG GAAGGGAACT GGGTGCCCCT GTCAACCTGG 1140GGTACGGGGC AGGTGGCACC ATTGACTGCT GTGCCTCTGT CTGGTGGTGA TGGCTGTTCT 1200GTGGGAATGC CATCCAAAAC AGAGGCTGTG GTTGCCTGCT CCCTCTGCTG ATACCTAAGC 1260TGGTCCTGCT TGCCATCCCG G 1281(2)SEQ ID No10的信息(i)序列特征(A)長度1387堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No10CGGTGAAACA GGAGAGGGAC AGACCTGGAG AAGACGGAAA CAAAAGACAG AAACACACGC 60ACACGGGGAA CTGGGAGTTG ACTGGCAGAT CCCAGCTGCC CTGAGGATGG TGGCCAGCGG 120TGGACGTCCT GATGGTCCCC CTTCTATCAC CCCCGAGAGC CCTCTCATTG TAGGTGGCAG 180AGAGTGGCAG GGTATGGCAG GTTCTTGCTG GAACATCACC TACGTTCAAG ACTCGGTAGG 240ACCTGCCACC AGCACCCTGA TGTTTGTGGC TGGTGTGGTG GGCAACGGGC TAGCACTGGG 300CATCCTGGGT GCCCGACGGA GGTCACACCC ATCGGCGTTT GCAGTGTTGG TCACTGGGCT 360GGCAGTGACG GATCTGCTGG GCACGTGCTT CTTGAGCCCC GCGGTGTTTG TGGCCTATGC 420TCGAAACAGC TCTTTGCTGG GCCTGGCCCA CGGTGGGACG ATGCTGTGTG ACACTTTCGC 480CTTCGCTATG ACTTTCTTCG GCCTGGCCTC CACGCTCATC CTCTTCGCCA TGGCTGTGGA 540GCGGTGCCTG GCTCTCAGTC ATCCCTACCT GTACGCCCAG CTGGACGGGC CCCGCTGTGC 600CCGCTTGGCT TTGCCTGCCA TCTACGCTTT CTGTTGTCTC TTCTGCTCAC TGCCCCTGCT 660GGGCCTGGGC GAGCACCAGC AGFATTGTCC CGGGAGCTGG TGCTTCATCC GCATGCGTTC 720CCCCCAGCCT GGTGGCTGTG CCTTCTCCCT GGCCTATGCC AGTCTCATGG CCCTGCTGGT 780GACCTCCATC TTCTTCTGCA ACGGCTCCGT CACTCTCAGC CTCTGTCACA TGTACCGCCA 840ACAGAGACGG CACCATGGCT CGTTTGTGCC GACCTCTCGG GCACGAGAGG ATGAAGTTTA 900CCACCTGATT CTGCTGGCCC TCATGACAGG CATCATGGCC GTATGCTCCC TGCCTCTCAC 960GATCAGAGGA TTCACGCAGG CCATCGCCCC AGACAGCAGA GAGATGGGGG ACCTCCACGC1020CTTCCGTTTT AATGCCTTCA ACCCCATCCT GGACCCCTGG GTCTTCATCC TTTTCCGAAA1080GGCTGTCTTC CAACGCCTCA AGTTCTGGTT GTGTTGTCTG TGTGCCCGTT CTGTCCATGG1140GGATCTGCAG ACGCCCCTCT CCCGGCCCGT GTCGGGGAGA AGAGACACAC TGGCTCCCGA1200TTCTCTCCAG GCTAAGGAAG GGAACTGGGT GCCCCTGTCA ACCTGGGGTA CGGGGCAGGT1260GGCACCATTG ACTGCTGTGC CTCTGTCTGG TGGTGATGGC TGTTCTGTGG GAATGCCATC1320CAAAACAGAG GCTGTGGTTG CCTGCTCCCT CTGCTGATAC CTAAGCTGGT CCTGCTTGCC1380ATCCCGG 1387(2)SEQ ID No11的信息(i)序列特征(A)長度1320堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學線性(ii)分子類型mRNA的cDNA(vi)來源(A)生物小鼠(F)組織類型肺(ix)特點(A)名字/關鍵字CDS(B)位置107-1354(C)鑒定方法P(xi)序列描述SEQ ID No11CGGTGAAACA GGAGAGGGAC AGACCTGGAG AAGACGGAAA CAAAAGACAG AAACACACGC 60ACACGGGGAA CTGGGAGTTG ACTGGCAGAT CCCAGCTGCC CTGAGG ATG GTG GCC115Met Val Ala1AGC GGT GGA CGT CCT GAT GGT CCC CCT TCT ATC ACC CCC GAG AGC CCT 163Ser Gly Gly Arg Pro Asp Gly Pro Pro Ser Ile Thr Pro Glu Ser Pro5 10 15CTC ATT GTA GGT GGC AGA GAG TGG CAG GGT ATG GCA GGT TCT TGC TGG 211Leu Ile Val Gly Gly Arg Glu Trp Gln Gly Met Ala Gly Ser Cys Trp20 25 30 35AAC ATC ACC TAC GTT CAA GAC TCG GTA GGA CCT GCC ACC AGC ACC CTG 259Asn Ile Thr Tyr Val Gln Asp Ser Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu40 45 50ATG TTT GTG GCT GGT GTG GTG GGC AAC GGG CTA GCA CTG GGC ATC CTG 307Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu55 60 65GGT GCC CGA CGG AGG TCA CAC CCA TCG GCG TTT GCA GTG TTG GTC ACT 355Gly Ala Arg Arg Arg Ser His Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr70 75 80GGG CTG GCA GTG ACG GAT CTG CTG GGC ACG TGC TTC TTG AGC CCC GCG 403Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Cys Phe Leu Ser Pro Ala85 90 95GTG TTT GTG GCC TAT GCT CGA AAC AGC TCT TTG CTG GGC CTG GCC CAC 451Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala His100 105 110 115GGT GGG ACG ATG CTG TGT GAC ACT TTC GCC TTC GCT ATG ACT TTC TTC 499Gly Gly Thr Met Leu Cys Asp Thr Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe120 125 130GGC CTG GCC TCC ACG CTC ATC CTC TTC GCC ATG GCT GTG GAG CGG TGC 547Gly Leu Ala Ser Thr Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys135 140 145CTG GCT CTC AGT CAT CCC TAC CTG TAC GCC CAG CTG GAC GGG CCC CGC 595Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg150 155 160TGT GCC CGC TTG GCT TTG CCT GCC ATC TAC GCT TTC TGT TGT CTC TTC 643Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys Cys Leu Phe165 170 175TGC TCA CTG CCC CTG CTG GGC CTG GGC GAG CAC CAG CAG TAT TGT CCC 691Cys Ser Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Glu His Gln Gln Tyr Cys Pro180 185 190 195GGG AGC TGG TGC TTC ATC CGC ATG CGT TCC CCC CAG CCT GGT GGC TGT 739Gly Ser Trp Cys Phe Ile Arg Met Arg Ser Pro Gln Pro Gly Gly Cys200 205 210GCC TTC TCC CTG GCC TAT GCC AGT CTC ATG GCC CTG CTG GTG ACC TCC 787Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Ser Leu Met Ala Leu Leu Val Thr Ser215 220 225ATC TTC TTC TGC AAC GGC TCC GTC ACT CTC AGC CTC TGT CAC ATG TAC 835Ile Phe Phe Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys His Met Tyr230 235 240CGC CAA CAG AGA CGG CAC CAT GGC TCG TTT GTG CCG ACC TCT CGG GCA 883Arg Gln Gln Arg Arg His His Gly Ser Phe Val Pro Thr Ser Arg Ala245 250 255CGA GAG GAT GAA GTT TAC CAC CTG ATT CTG CTG GCC CTC ATG ACA GGC 931Arg Glu Asp Glu Val Tyr His Leu Ile Leu Leu Ala Leu Met Thr Gly260 265 270 275ATC ATG GCC GTA TGC TCC CTG CCT CTC ACG ATC AGA GGA TTC ACG CAG 979Ile Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Gly Phe Thr Gln280 285 290GCC ATC GCC CCA GAC AGC AGA GAG ATG GGG GAC CTC CAC GCC TTC CGT 1027Ala Ile Ala Pro Asp Ser Arg Glu Met Gly Asp Leu His Ala Phe Arg295 300 305TTT AAT GCC TTC AAC CCC ATC CTG GAC CCC TGG GTC TTC ATC CTT TTC 1075Phe Asn Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe310 315 320CGA AAG GCT GTC TTC CAA CGC CTC AAG TTC TGG TTG TGT TGT CTG TGT 1123Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys Phe Trp Leu Cys Cys Leu Cys325 330 335GCC CGT TCT GTC CAT GGG GAT CTG CAG ACG CCC CTC TCC CGG CCC GTG 1171Ala Arg Ser Val His Gly Asp Leu Gln Thr Pro Leu Ser Arg Pro Val340 345 350 355TCG GGG AGA AGA GAC ACA CTG GCT CCC GAT TCT CTC CAG GCT AAG GAA 1219Ser Gly Arg Arg Asp Thr Leu Ala Pro Asp Ser Leu Gln Ala Lys Glu360 365 370GGG AAC TGG GTG CCC CTG TCA ACC TGG GGT ACG GGG CAG GTG GCA CCA 1267Gly Asn Trp Val Pro Leu Ser Thr Trp Gly Thr Gly Gln Val Ala Pro375 380 385TTG ACT GCT GTG CCT CTG TCT GGT GGT GAT GGC TGT TCT GTG GGA ATG 1315Leu Thr Ala Val Pro Leu Ser Gly Gly Asp Gly Cys Ser Val Gly Met390 395 400CCA TCC AAA ACA GAG GCT GTG GTT GCC TGC TCC CTC TGC TGATACCTAA 1364Pro Ser Lys Thr Glu Ala Val Val Ala Cys Ser Leu Cys405 410 415GCTGGTCCTG CTTGCCATCC CGG138權利要求
1.一種基本純化的人PGI2受體。
2.根據權利要求1的受體，它是一種包括Seq.ID No.1表示的氨基酸序列或其同源序列，或所說序列的片段或同源片段的多肽。
3.根據權利要求2的多肽，它由Seq.ID No.1表示的氨基酸序列組成。
4.編碼根據權利要求1，2或3的多肽的DNA。
5.根據權利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.2中表示的核苷酸序列或能與所說序列選擇性雜交的片段。
6.根據權利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.5表示的核苷酸序列或能與所說序列選擇性雜交的片段。
7.根據權利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.3中表示的核苷酸序列或能與所說序列選擇性雜交的片段。
8.根據權利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.6中表示的核苷酸序列或能與該序列選擇性雜交的片段。
9.一種基本上純化的大鼠PGI2受體。
10.根據權利要求9的受體，它是一種包括Seq.ID No.8表示的氨基酸序列或其同源序列，或該序列的片段或同源片段的多肽。
11.根據權利要求10的多肽，它由Seq.ID No.8表示的氨基酸序列組成。
12.編碼權利要求9，10或11所述的多肽的DNA。
13.根據權利要求12的DNA，它具有Seq.ID No.9表示的核苷酸序列或能與該序列選擇性雜交的片段。
14.根據權利要求12的DNA，具有Seq.ID No.10表示的核苷酸序列或能與該序列選擇性雜交的片段。
15.包含權利要求4-8或12-14描述的DNA的復制或表達載體。
16.用權利要求15描述的復制或表達載體轉化或轉染的宿主細胞。
17.一種制備權利要求1-3或9-11描述的多肽的方法，它由在有效表達所說多肽的條件下培養(yǎng)權利要求16描述的宿主細胞組成。
18.一種抗權利要求1-3或9-11描述的多肽的單克隆或多克隆抗體。
19.一種藥用組合物，其特征在于它包含權利要求1-3或9-11描述的多肽，或權利要求18中描述的抗體和藥用賦形劑和/或載體。
20.一種篩選具有PGI2促進或拮抗活性的化合物的方法，其特征在于使用權利要求1-3或9-11描述的多肽。
21.根據權利要求18的篩選方法，其特征在于使用權利要求16描述的宿主細胞。
全文摘要
人和大鼠PGL
文檔編號A61K38/00GK1145076SQ9519236
公開日1997年3月12日 申請日期1995年2月8日 優(yōu)先權日1994年2月10日
發(fā)明者A·市川, K·中尾, S·成宮 申請人:小野藥品工業(yè)株式會社