專利名稱：應用異戊酰胺作為溫和的抗焦慮劑和溫和的鎮(zhèn)靜劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明的背景本發(fā)明涉及減少動物(包括人)的焦慮同時又不產生不希望的過度鎮(zhèn)靜作用的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及應用異戊酰胺作為溫和的抗焦慮劑和溫和的鎮(zhèn)靜劑。
影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的受體、神經(jīng)遞質和電脈沖的復雜的相互關系遠未被充分地了解。但是，可以區(qū)別各種藥物和其他藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為顯示的影響。
尤其是可以區(qū)別抗焦慮作用(減少焦慮)與鎮(zhèn)靜作用(即經(jīng)典的CNS抑制作用)。常用的行為試驗例如下面敘述的探索行為試驗和福格爾爭斗模型(Vogel Conflict Paradigm)可用于檢測、說明和定量表示各種藥物的抗焦慮作用。其他的試驗(包括巴比妥酸鹽引起的睡眠時間的延長和誘導的睡眠)分別表明鎮(zhèn)靜和催眠作用。
雖然一些藥物對誘導抗焦慮和鎮(zhèn)靜作用是有效的，但是結構上有關的其他藥物通常主要地僅具有一種或另一種作用。然而，常用的抗焦慮藥物主要地顯示抗焦慮或者鎮(zhèn)靜作用通常與劑量有關。參見Wolff，M.E.(Ed.)Burger′s Medicinal Chemistry，Part III，第4版(1981)，Wiley-Interscience，p.981-986；Foye，W.O.(Ed.)Principles of Medicinal Chemistry，第3版(1989)，Lea andFebiger，p.143-227。此外，還有對中樞神經(jīng)系統(tǒng)另外可能的作用，例如誘導或抑制驚厥。另外，各種結構上有關的化合物可以具有或者不具有上述性能。從目前現(xiàn)有的技術明白，似乎沒有明確的結構-功能關系來預言具體化合物以規(guī)定的方式影響或不影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
自古以來全世界許多不同栽培物中的某些藥用植物的提取物已用于緩解緊張和治療焦慮，并且從較高等的植物中已分離出許多抗焦慮劑和鎮(zhèn)靜劑的成分并且在近代已具有特色。的確，苯并二氮類安定劑如地西泮(安定)、奧沙西泮(舒寧)和勞拉西泮(氯羥去甲安定)被認為是典型的合成的抗焦慮劑，現(xiàn)在明確地表明從植物中得到的天然化合物也是卓越的，從植物中得到的天然化合物已在馬鈴薯、大豆、小扁豆、玉米、小麥、蕎麥、水稻、燕麥、大麥和小米中發(fā)現(xiàn)(Wildmann等，J.Neural Transm.(1987)70383-398；Wildmann，J.Biochem.Biophys.Res.Commun.(1988)1571436-1443；Wildmann等，Biochem.Pharmacol.(1988)373549-3559；Unseld等，Biochem.Pharmacol.(1989)382473-2478；Klotz，U.，Life Sci.(1991)48209-215；Bringmann，G.，J.Neural Transm.(1992)8877-82)。
應用纈草根提取物作為藥用目的已有多個世紀的歷史，但是鎮(zhèn)靜有效的成分仍不清楚或未確定地被鑒定(Krieglstein等，Deut.Apoth.Ztg.(1988)1282041-2046)，提取物作用的特征也不清楚，但已分離成在行為上有不同作用的部分。纈草的根含有3類化合物的成分(a)揮發(fā)油，它主要是由異戊酸和揮發(fā)性的單萜和倍半萜衍生物，(b)非揮發(fā)性的單萜環(huán)烯醚萜類或纈草三酯類，以及(c)單萜生物堿類。單萜生物堿類僅占極少量的成分，因此不認為對于纈草的作用有明顯的貢獻；同樣，揮發(fā)油部分看來僅有弱的作用。因此注意力集中在纈草三酯部分，它通常由單萜(環(huán)烯醚萜)酯類組成。該類酯是水不溶的，它不能完全地對植物的鎮(zhèn)靜作用產生影響，因為纈草根的水提取物(假定它沒有纈草三酯類化合物)依然具有鎮(zhèn)靜作用。纈草三酯類還是有毒的(見下述)。
近來對纈草三酯類的研究表明，所述化合物能不可逆地烷基化DNA和蛋白質，并且口服給藥少量的纈草三酯類化合物實際上可達到鼠大腦和其他的器官(Wagner，H.和K.Jurcie，Planta Med.(1980)38366-376)。但是盡管纈草三酯類具有潛在的有害毒性，但是在歐洲它已廣泛地上市作為鎮(zhèn)靜劑。
纈草根的水和水-醇提取物在歐洲和美國傳統(tǒng)上用作為鎮(zhèn)靜制劑。但是纈草根的含氨酊劑在美國和英國也用作為鎮(zhèn)靜劑，但僅作為粗的混合物應用。僅從纈草根的含氨酊劑，本發(fā)明入可以鑒別和分離出異戊酰胺，推測起來是纈草三酯類化合物與氨的反應產物。
在實驗動物中當給予很高劑量的情況下，已知異戊酸、異戊酰胺和有關的物質具有麻醉作用和催眠作用。參見Eeckhout，A.V.d.，Arch.exptle.Pathol.Pharmakol.(1907)57338-57；Impens，E.，Deut.med.Wochschr.(1912)38945-47；May，P.，THECHEMISTRY OF SYNTHETIC DRUGS，第3版.(1921)Longmans，Green and Co.，p.24；Meyer，K.H.和H.Hemmi，Biochem.Z.(1935)27739-71；Junkmann，K.，Naunyn-Schmiedeberg′sArch.exptl.Pathol.Pharmakol.(1937)186552-64；Samson等，J.Clin.Invest.(1956)351291-98；Teychenne等，Clin.Sci.Molec.Med.(1976)50(6)463-72。此外，異戊酸的鹽在20世紀早期被用作為鎮(zhèn)靜劑，但是人們認為，它們的作用是心理學的并且是由于其高度揮發(fā)性的游離酸的臭氣所致(Hare等，THENATIONAL STANDARD DISPENSATORY(1905)Lea Brothers andCo.，pp.94，159-160，1619-1620；Grier，J.，Chem.Drug.(1929)110420-422；Allport，N.L.，THE CHEMISTRY ANDPHARMACY OF VEGETABLE DRUGS(1944)Chemical PublishingCo.，pp.159-161；YEAR BOOK OF THE AMERICANPHARMACEUTICAL ASSOCIATION，1912(1914)1178-179；DERE MEDICINA(1938)Eli Lilly and Co.，p.159)。只是在給實驗動物服用很高劑量異戊酰胺時，異戊酰胺本身才具有催眠作用。并作為催眠藥沒有用在臨床。Impens，E.，Deut Med.Wochschr.(1912)38945-47；Junkmann，K.，Naunyn.-Schmiedeberg′sArch.exptl.Pathol.Pharmakol.(1937)186552-64。但是，一系列α-溴化和/或α-烷基化的異戊酰胺衍生物在這一點上被認為是有效的。參見Volwiler，E.H.和D.L.Tabern，J.Am.Chem.Soc.(1936)581352-54；Burger，A.，MEDICINAL CHEMISTRY，Vol.1，(1951)Interscience，pp.131-132；Burger，A.(Ed.)MEDICINAL CHEMISTRY，第2版(1960)Interscience，pp.357-375；Burger，A.(Ed.)MEDICINAL CHEMISTRY，Part II，第3版(1970)Wiley-Interscience，pp.1365-1385；Wolff，M.E.(Ed.)BURGER′S MEDICINAL CHEMISTRY，Part III，第4版(1981)Wiley-Interscience，pp.787-828。
乙甲戊酰胺(見

圖1)是異戊酰胺的高級同系物。乙甲戊酰胺是一合成的、巴比妥酸鹽衍生物的、α-支鏈的、水不溶的化合物，它具有安定和減輕焦慮的作用，它能使攻擊性的實驗動物和焦慮的人安定下來(Stepansky，W.，Curr.Therap.Res.(1960)2144-47；Goldberg，M.，Dis.Nerv.Syst.(1961)22346-48；Roszkowski，A.P.和W.M.Govier，Int.J.Neuropharmacol.(1962)1423-30)，大鼠按250mg/kg劑量經(jīng)腹膜內(IP)給藥，可產生催眠作用。雖然表面上看來乙甲戊酰胺結構上與異戊酰胺是相似的，但是在它們之間存在著相當大的物理和化學性質和藥理作用的差別。例如，乙甲戊酰胺是水不溶的，而異戊酰胺基本上是水可溶的。此外，乙甲戊酰胺在較低的劑量(例如250mg/kg[1.75mM/kg]，IP)下對大鼠具有明顯的催眠作用，而異戊酰胺即使在1000mg/kg(9.90mM/kg)，IP對小鼠也不具有催眠作用，只是在接近中毒的劑量(2000mg/kg IP和更高劑量)下才具有催眠作用。因此，乙甲戊酰胺的藥理特性看來更接近于其合成的巴比妥酸鹽前體而不是異戊酰胺。
乙甲戊酰胺在下述方面也不同于異戊酰胺它含有2個(手性的)立構中心(支鏈α和β碳)；而異戊酰胺不具有(手性的)立構中心。因此，“乙甲戊酰胺”實際上是由4個立體異構體以對映體的2組非對映體組成的外消旋體混合物。全部4個所述立體異構形式藥理學上是否等效是不清楚的。本發(fā)明人通過C—13核磁共振譜(13C—NMR)測定表明，所述對映體的2組非對映體以不同數(shù)量的“乙甲戊酰胺”存在。由于異戊酰胺不具有旋光活性(手性)的立構中心，因此它以單一的、十分確定的分子整體存在，并且不存在對映形式或非對映形式，并且實驗測定的藥理學性質和作用是單一的純的分子整體的結果。
異戊酰胺在較低劑量30-100mg/kg(IP)時，對小鼠具有定量的CNS—抑制作用。由于異戊酰胺對小鼠的LD50值大于4000mg/kg(IP)，因此該化合物的治療指數(shù)看來至少為40。而乙甲戊酰胺的治療指數(shù)為11.4。Roszkowski，A.P.和W.M.Govier，Int.J.Neuropharmacol.(1962)1423-30。因此，乙甲戊酰胺是異戊酰胺的巴比妥酸鹽衍生物的高級同系物，它具有某些巴比妥酸鹽的性質，例如確切的催眠作用，這種作用在抗焦慮的情況下是不希望有的。
此外，其結構上與乙甲戊酰胺有密切關系的某些有α-支鏈的異戊酰胺衍生物(即高級同系物)對肝臟的卟啉病有效，這是某些巴比妥酸鹽所共有的作用。例如參見Schmid.R.和S.Schwartz，Proc.Soc.Exptl.Biol.Med.(1952)81685-89；Case等，loc.Cit.(1953)83566-68；Goldberg，A.，Biochem.J.(1954)57(1)ii；Goldberg等，Proc.Roy.Soc.，Ser.B.(Biol.Sci.)(1955)143257-80；Talman等，J.Biol.Chem.(1955)212663-75；Talman等，Arch.Biochem.Biophys.(1957)66289-300；Goldberg，A.和C.Rimington，DISEASES OF PORPHYRINMETABOLISM(1962)Charles C.Thomas，pp.175-99；Granick，S.，Ann.N.Y.Acad.Sci.(1965)123188-97；Marks等，Biochem.Pharmacol.(1965)14(7)1077-84；de Barreiro，0.C.，Biochem.Pharmacol.(1965)141694-96；Hirsch等，loc.Cit.(1966)15(7)1006-08；Hirsch等，loc.Cit.(1967)16(8)1455-62；Schneck等，loc.Cit.(1968)17(7)1385-99；Schneck，D.W.和G.S.Narks，loc.Cit.(1972)21(18)2509-518。相反，異戊酰胺對肝臟的卟啉病沒有作用，這可能是因為在α-位沒有位阻，結果容易被肝臟酶進行酰胺水解。參見Hirsch等，Biochem.Pharmacol.(1966)15(7)1006-08；Hirsch等，loc.Cit.(1967)16(8)1455-62；Schneck等，loc.Cit.(1968)17(7)1385-99Schneck，D.W.和G.S.Marks，loc.Cit.(1972)21(18)2509-18。
異丙溴丁酰胺是異戊酰胺溴化的高級同系物(見圖1)，它也作為鎮(zhèn)靜-催眠劑在市場銷售。見YEAR BOOK OF THE AMERICANPHARMACEUTICAL ASSOCIATION，1929(1931)18154)；loc.Cit.1931 AND 1932(1934)20，21154。有幾篇報告錯誤地把異丙溴丁酰胺認為是α-乙基異戊酰胺；但是，已知圖1所示α-溴代的結構事實上才是正確的結構。
化學活性上定義的試劑的作用對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響顯示缺少有興趣的典范。例如酰胺基團氮原子的(N-烷基化)衍生作用得到的化合物如N，N-二乙基異戊酰胺(A.Liebrecht，德國專利129,967,1902年頒布)，據(jù)報告具有鎮(zhèn)靜作用并且已作為鎮(zhèn)靜劑銷售。Budavari等(Eds.)，THE MERCK INDEX，第11版，p.824，no.5122(Merck&Co.，1989)(見圖1中“Valyl”)。但是下述事實表明，該化合物具有CMS興奮作用，引起焦慮(即誘導焦慮)和驚厥的作用。N-甲基化的酰胺衍生物確實具有CNS興奮作用或者CNS抑制作用，而N-乙基和更大的烷基衍生物一般具有CNS興奮作用。Volwiler，E.H.和D.L.Tabern，J.Am.Chem.Soc.(1936)581352-54；Nelson等，J.Am.Pharm.Assoc.，Sci.Ed.(1941)30180-82。這與其他CNS藥物例如類似兒茶酚胺和5-羥色胺藥物(F.W.Schueler(Ed.)MOLECULAR MODIFICATION IN DRUG DESIGN，ADVANCES IN CHEMISTRY SERIES NO.45(1964)AmericanChemical Society pp.114-139)，巴比妥酸鹽(Burger，A.(Ed.)MEDICINAL CHENISTRY，Part II，第3版(1970)Wiley-Interscience，pp.1365-85)以及其他類化合物(Slater等，J.Pharmacol.Exptl.Therap.(1954)111182-196)中增加或減少甲基或亞甲基的作用是類似的，它們顯示CMS抑制作用或興奮作用。
其他有關的化合物如丙戊酸和丙戊酰胺[異戊酰胺的高級同系物(見圖1)]，它們已用作為抗癲癇(抗驚厥)藥物。Gilman等，(Eds.)GOODMAN AND GILMAN′S THE PHARMACOLOGICAL BASISOF THERAPEUTICS，第8版(1990)Pergamon Press，pp.436-62。相反，異戊酰胺本身沒有抗驚厥作用。
因此以前的研究表明，不清楚的可預言試驗化合物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有無影響的結構-作用關系。尤其是不可能預言那種烷基酰胺類衍生物可以提供作為治療上有用的抗焦慮和鎮(zhèn)靜的藥物。
本發(fā)明的概述本發(fā)明涉及應用異戊酰胺作為藥用組合物中的活性成分，在低劑量它是溫和的抗焦慮劑和在較高劑量它是溫和的鎮(zhèn)靜劑。在較低劑量下，異戊酰胺不產生不希望的鎮(zhèn)靜作用，也不產生催眠表現(xiàn)，并且基本上它還是無毒的。
令人驚奇的是，本發(fā)明已發(fā)現(xiàn)了在異戊酰胺類同系物中一般的活性模式。例如，在異戊酰胺引起抗焦慮作用的劑量下，正丁基酰胺(異戊酰胺的低級同系物)沒有明顯的抗焦慮作用，而作為鎮(zhèn)靜-催眠劑，乙甲戊酰胺(異戊酰胺的高級同系物)與異戊酰胺相比作用強約10倍以上(見下面實施例2)。因此，異戊酰胺的低級同系物作為臨床應用，它們的鎮(zhèn)靜作用太弱，而異戊酰胺的高級同系物可誘導鎮(zhèn)靜-催眠作用，這使得該類化合物不適合作為非處方藥物應用。相反，異戊酰胺具有所希望合適平衡的藥理作用，因此使得該化合物尤其適合作為溫和的精神治療藥物以非處方藥物應用。
因此，一方面本發(fā)明涉及應用一定劑量的異戊酰胺于藥物制劑中，以便用于需要所述治療的患者產生抗焦慮作用，其中異戊酰胺的劑量對于減輕焦慮有效而不引起過度的鎮(zhèn)靜作用。另一方面，本發(fā)明還涉及應用一定劑量的異戊酰胺于藥物制劑，以便用于需要所述治療的患者促使睡眠的方法。本發(fā)明也涉及用于上述方法中的藥用組合物，尤其是口服組合物。
附圖的簡要說明圖1表示異戊酰胺和結構上有關化合物的化學結構、通用名稱和商品名。
圖2表示用雄性大鼠從福格爾(Vogel)試驗得到的異戊酰胺和結構上有關化合物以及對照化合物的抗焦慮作用，并且以抗焦慮指數(shù)表示。
圖3表示與乙甲戊酰胺不同的異戊酰胺一般的鎮(zhèn)靜作用，它是在雄性大鼠中通過電測量藥物誘導的自發(fā)性運動活性減少來表明的。
圖4表示與對照的小鼠相比較，異戊酰胺處理過的小鼠的戊巴比妥誘導的睡眠時間平均相對百分比的增加。
優(yōu)選實施例的詳細敘述按照本發(fā)明，應用異戊酰胺作為溫和的抗焦慮劑，在較高劑量下作為溫和的鎮(zhèn)靜劑。因此，根據(jù)劑量，本發(fā)明將異戊酰胺的上述2個作用區(qū)分開來并著重進行敘述。
異戊酰胺發(fā)揮上述作用而沒有不希望的副作用的性能是其應用的主要特征。因此，重要的是區(qū)別由于服藥影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的、能夠經(jīng)試驗測定的各種行為的結果。一些行為和試驗的評價敘述如下?？菇箲]作用抗焦慮作用可以應用探索行為試驗或福格爾爭斗模型(VogelConflict Paradigm)進行測定。
按Christmas，A.J.和D.R.Maxwell(Neuropharmacology(1970)917-29)和Sepinwall，J.和L.Cook(Handbook ofPsychopharmacology(1978)13345-93)所述方法進行探索行為試驗，該試驗是當動物被置于新的或熟悉的環(huán)境中時通過測定運動活性增加或減少來進行的?？菇箲]劑在新環(huán)境中增加了探索行為(因為它們減少了恐懼和焦慮)，但是在熟悉環(huán)境中它們不影響行為。
在試驗的一個形式中，應用具有金屬絲網(wǎng)地板和離開地板3cm的光電管的木質小籠(65cm×100cm×20cm)。該光電管放置在框格中并在光路中通過斷路器自動記錄動物的橫越(測量運動活性大小)。光電管輸出端接到計算機(IBM)上以進行數(shù)據(jù)貯存和分析。通過計數(shù)橫越的總數(shù)和單位時間內橫越的次數(shù)進行活動性定量。
給Sprague-Dawley雄性大鼠腹膜內(IP)注射試驗化合物和對照物質，然后將其置于活動籠內。觀察1小時。這對動物來講是新的環(huán)境。在開始5分鐘的時候運動活性增加，這是由于抗焦慮劑“脫抑制”的結果。
在第1次試驗結束時，將動物移出并使其重新回到動物群體中7天，然后在第8和第9天將其置于同一活動籠中1小時。在這個時候，該環(huán)境對試驗動物來講是熟悉的。在第10天注射試驗化合物和對照物質，重復該試驗得到在熟悉環(huán)境中的結果。
在福格爾爭斗模型(Vogel Conflict Paradigm)中，通過金屬的水分配器在大鼠試圖飲水時給口渴的大鼠輕度的電擊。該電擊是不愉快的，但未足以嚴重的引起明顯的疼痛。與對照相比，給予抗焦慮劑的大鼠更經(jīng)常地舐該分配器(這也是由于減少焦慮的“脫抑制”的結果)。以增加舐分配器的次數(shù)評價抗焦慮劑的效果。
如以下所述，應用標準的福格爾試驗的改進形式，例如應用由Petersen，E.N.和J.B.Lassen改進的方法(Psychopharmacology(1981)75236-39)。動物(雄性Sprague-Dawley大鼠，250-300g)禁水24小時，然后置于有不銹鋼條格子供動物休息的清潔的有機玻璃箱(45cm×25cm×20cm)中。在條格橫杠和飲水嘴之間有一銀電極園環(huán)，并且它置于籠內的飲水瓶中。使動物舐水分配器5分鐘而不電擊，將不舐的動物排除在進一步試驗之外。
將動物再送回到群體中，再次禁水24小時，將動物送回到活動籠中并允許在無電擊情況下舐水1分鐘。然后在飲水嘴保持1毫安電流(電擊)4分鐘。與第1段時間相比，在進一步試驗中在舐水行為中僅有50％的動物抑制。
在上述一段時間之后經(jīng)腹膜內(IP)注射試驗化合物，30分鐘后再次將動物置于活動籠中。在無電擊的情況下允許動物舐水1分鐘，然后保持電擊4分鐘。在該期間受處罰舐水的動物數(shù)量用于評價抗焦慮作用。
上述2種評價試驗檢測、證明和量化了抗焦慮作用。在第1種試驗條件下，鎮(zhèn)靜劑不起作用，而在福格爾爭斗試驗中鎮(zhèn)靜劑也給予陽性的結果。鎮(zhèn)靜作用通過延長巴比妥酸鹽誘導的睡眠時間來測定鎮(zhèn)靜作用。在該試驗中，動物經(jīng)腹膜內(IP)注射試驗化合物或對照物質，15或30分鐘之后經(jīng)IP按50mg/kg注射戊巴比妥鈉。然后將動物置于行為試驗室內小的有機玻璃籠中，人工記錄潛在睡眠時間和睡眠的持續(xù)時間。當將動物側著放置時，假如動物本身失去翻正的能力，那么認定為睡眠開始發(fā)生(Irwin，S.，Psychopharmacologia(1968)13222-257)。在失去和恢復翻正反射之間發(fā)生的間隔認定為睡眠的持續(xù)時間。催眠作用可以通過簡單地測定足以引起喪失翻正反射(見上)以及明顯的喪失意識和應答的試驗化合物的劑量來評價催眠作用。這被認為表示“誘導睡眠”，并且明顯地不同于鎮(zhèn)靜作用，在鎮(zhèn)靜作用中實驗動物的行為只是緩慢和變得不活潑，但仍保持一定程度的翻正反射以及一些應答方式。異戊酰胺的特征在對各種CNS作用的試驗中，異戊酰胺的效果以及它沒有毒性，使得它成為理想的溫和抗焦慮劑，并且在較高劑量下為溫和的鎮(zhèn)靜劑。例如，異戊酰胺可用于治療患有緊張、輕度焦慮的癥狀(包括緊張、坐立不安、神經(jīng)過敏、注意力不能集中、易怒、進取心過度和失眠)。異戊酰胺的抗焦慮作用可以治療的其他疾病和治療的范圍包括治療戒煙出現(xiàn)的癥狀、治療酒精中毒和其他的藥物濫用、月經(jīng)前綜合癥、月經(jīng)期煩悶和兒童的過度興奮。
圖1表示結構上與異戊酰胺有關的各種已知化合物的結構。異戊酰胺最初由本發(fā)明人從纈草(普通名拔地麻)的地下部分的提取液中制得(即含氨的酊劑)。纈草及其有關種屬的提取物歷史上已用作為鎮(zhèn)靜劑和鎮(zhèn)痙劑。但是如以上所述，關于拔地麻提取物和圖1中所示化合物是已知的，但是沒人提出過異戊酰胺本身是有效成分，或該化合物具有所述可用于制備藥用組合物產生抗焦慮作用而又無過度鎮(zhèn)靜作用的特性，或者用較高劑量的異戊酰胺促進需要該治療患者的睡眠。
對于非處方藥物的劑型，優(yōu)選經(jīng)口服途徑給藥，并且可以通過固體口服劑型如腸包衣片劑、caplets、gelcaps或膠囊劑實現(xiàn)，或通過液體劑型如糖漿劑或酏劑實現(xiàn)。作為抗焦慮劑，異戊酰胺的指示劑量為每個成年人100-1000mg，優(yōu)選100-500mg/60-70kg成年人。這相當于約1.5-20mg/kg，優(yōu)選約1.5-10mg/kg。單位固體口服劑型通常含有約100-250mg/片或膠囊，通常為1次服1-2片或粒，每天最多服4次。也可以應用含有有效成分組合物的液體劑型，每次劑量為1-2匙。此外，還可以開發(fā)相應減少劑量的兒童口嚼片和液體口服劑型。還可以將該化合物加到食物和飲料中制成滴劑(從“濃縮液”中取一滴管)供口服。另外，還可以將異戊酰胺配制成口香糖。
有效成分異戊酰胺也可以通過注射或其他系統(tǒng)的途徑(例如經(jīng)皮或經(jīng)粘膜)給藥，例如經(jīng)鼻、口腔含化或經(jīng)栓劑直腸給藥。但是，口服給藥更為方便，因此是優(yōu)選的。
進一步認識到，異戊酰胺可以與其他藥學上有效的成分一起合并應用。
作為促進睡眠的溫和鎮(zhèn)靜劑應用，劑量為每個普通的成年人約500-1000mg或10-20mg/kg，一般在希望促進睡眠之前15-30分鐘服藥?？诜┝靠梢耘渲圃谙鄳^高濃度的濃縮液中，或服用較大量的膠囊劑或片劑。在所述情況下，也可以簡單地將異戊酰胺加到食物或快消耗完的飲料中?；加惺甙Y的人可以從所述溫和的鎮(zhèn)靜作用中獲益。
除了應用異戊酰胺作為人用溫和的抗焦慮劑或溫和的鎮(zhèn)靜劑之外，異戊酰胺還可以用作為不希望其興奮的家養(yǎng)動物或馴養(yǎng)動物，例如但不限于，貓、狗、鳥、馬、牛、水貂、家禽和魚溫和的抗焦慮劑或溫和的鎮(zhèn)靜劑。在所述情況下，將異戊酰胺通過注射或其他系統(tǒng)途徑如經(jīng)皮或經(jīng)粘膜給藥(例如用栓劑直腸給藥)，或加到食物或飲料中口服。根據(jù)動物的種類和給藥途徑，給所述動物異戊酰胺的指示劑量為約0.15～20mg/kg體重，優(yōu)選約0.25～10mg/kg體重。根據(jù)動物的種類和給藥途徑，作為動物溫和的鎮(zhèn)靜劑，異戊酰胺的指示劑量為約1.25～20mg/kg體重。
因此本發(fā)明設想了含有異戊酰胺作為有效成分的適合于口服、非經(jīng)胃腸道、經(jīng)皮、經(jīng)鼻內、口腔含化或直腸給藥的多種藥用組合物。雖然在本發(fā)明范圍之外，異戊酰胺在某些藥用組合物中可以以非主要的副產物形式存在，但是權利要求所述組合物的一般情況是異戊酰胺以標準的劑量存在。這就是說，權利要求所述組合物含有預先確定劑量的異戊酰胺，以便能夠確定需要獲得所述異戊酰胺劑量水平的具體組合物的量。
下面實施例詳細敘述本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。實施例1化合物異戊酰胺和纈草三酯的體外細胞毒性比較該試驗比較了異戊酰胺和纈草三酯類化合物纈草三酯、雙羥噁戊酯及螺呋醋戊酯對人和鼠各種瘤細胞系的作用。處于對數(shù)生長期的細胞用不同濃度的試驗化合物處理48小時。然后通過細胞直接計數(shù)或蛋白測定法來測定細胞生長率。抑制50％細胞生長的試驗化合物的有效濃度是受試化合物的EC50。
異戊酰胺和纈草三酯類化合物的比較結果如表1所示。該表清楚表明，當異戊酰胺濃度遠遠大于纈草三酯深度中毒濃度時，也未顯示出對細胞有任何毒性。這就清楚證明，纈草三酯類化合物是有細胞毒的(毒性順序∶纈草三酯＞雙羥噁戊酯＞螺呋醋戊酯)，異戊酰胺是非一細胞毒的。
表1Ec50(μg/ml)化合物BCA-1 COL-2HT-1080 LUC-1 KB KB-V1MEL-2P388纈草三酯 0.410.59 0.41 2.000.510.72 0.39 0.06雙羥噁戊酯0.701.49 0.70 2.912.031.29 0.42 0.19螺呋醋戊酯1.942.89 2.05 4.302.702.26 0.75 0.88異戊酰胺 ＞20＞20 ＞20＞20 ＞20＞20 ＞20 ＞20
實施例2異戊酰胺對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的作用抗焦慮作用用Vogel對比試驗(Vogel Conflict Assay)測試異戊酰胺和另外5個化合物的抗焦慮作用。圖2顯示這些受試化合物在不同劑量下的抗焦慮指數(shù)，這些指數(shù)是用雄性大鼠在Vogel對比(抗焦慮)試驗中得到的。“抗焦慮指數(shù)”的定義是4分鐘內受試動物被擊次數(shù)與對照動物被擊次數(shù)之比?？菇箲]指數(shù)大于1，表明受試化合物有抗焦慮(鎮(zhèn)靜)作用。實際上，當抗焦慮指數(shù)大于1.5時，就可看到明顯的“鎮(zhèn)靜”作用?？菇箲]指數(shù)小于1.0，表明受試化合物有引起焦慮(中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮)作用。引起焦慮作用的化合物可提高受試動物的警覺性，表現(xiàn)為緊張、畏懼、驚跳反射增強等。
雄性Sprague-Dawley鼠(250～300g)，試前禁水24小時。然后讓動物在實驗籠內飲水5分鐘，接著按預定劑量給藥。30分鐘后，將動物放回實驗籠，并讓其在無任何驚動情況下飲水1分鐘。在以后的4分鐘內，給水管嘴以電擊，并記錄動物被擊次數(shù)。實驗動物每組4或5只。
經(jīng)腹腔給大鼠注射異戊酰胺500～1000mg/kg，結果顯示試驗鼠被擊次數(shù)比對照鼠約高出3倍，證明在這個劑量下該化合物有明顯的抗焦慮(“鎮(zhèn)靜”)作用(圖2)。(注射治療量的“安定”(地西泮)，被擊次數(shù)增加10倍)正丁酰胺，異戊酰胺的低級同系物(見圖1)和葡萄糖是實驗對照，在相應劑量下未顯示抗焦慮作用，而異戊酰胺的結構異構體正戊酰胺和異戊酰胺的高級同系物乙甲戊酰胺(見圖1)在較低劑量(分別為250和50mg/kg)下也表現(xiàn)有顯著的鎮(zhèn)靜作用。這些結果清楚證明，正戊酰胺和乙甲戊酰胺比異戊酰胺有更強的催眠作用與趨勢。N，N-二乙基異戊酰胺是一個較簡單的異戊酰胺N，N-二乙基衍生物(圖1)，據(jù)報道有鎮(zhèn)靜作用，事實上，在50mg/kg時，對大鼠有中樞神經(jīng)刺激(興奮)作用(圖2)，在250mg/kg時，則使大鼠強烈抽搐(數(shù)據(jù)未在圖2中顯示)。因此，異戊酰胺是這組受試化合物中具備藥理學上所期望的最佳平衡特性的溫和的“鎮(zhèn)靜”(抗焦慮)藥。鎮(zhèn)靜作用受試藥物的鎮(zhèn)靜作用可以通過直接觀察到的實驗動物自發(fā)活動次數(shù)的減少而予以證實，例如用自由活動觀察實驗。在這類實驗中，先給動物施藥(通常為腹腔注射)，等適當時間(一般5～30分鐘)后，將動物放入一個能自由活動的籠子內，這個籠子是一個透明塑料盒，底部劃有清晰可見的格子。在一既定時間(通常為1～3小時)內，記錄實驗動物跨越的格子數(shù)，并與用鹽水作類似處理的對照組動物跨越的格子數(shù)比較。記錄下來的每只實驗動物跨越的格子數(shù)直接表明了該動物總的活動能力(自發(fā)活動性)。藥物的鎮(zhèn)靜作用，可按單位時間內跨越的格子數(shù)計算結果，表示為實驗動物與對照組動物自發(fā)活動性的百分比。
直接觀察實驗表明，觀察者憑借觀察到的動物總的活動情況，能夠容易地鑒別與區(qū)分異戊酰胺處理的小鼠(劑量為250mg/kg，腹腔注射)和生理鹽水對照組小鼠的活動性，甚至不需計數(shù)小鼠跨越的格子數(shù)。(十分機敏的觀察者，當劑量降至100mg/kg，IP，也能將實驗動物和對照組動物活動性區(qū)別開)。劑量更大時，如腹腔注射500和1000mg/kg，鎮(zhèn)靜作用就更明顯，實驗動物(雄性小鼠)呈現(xiàn)為進行性的深度鎮(zhèn)靜狀態(tài)。腹腔注射1000mg/kg時，異戊酰胺處理的動物將一動不動，皮毛柔順而有光澤。
鎮(zhèn)靜作用也能通過電子設備所記錄的藥物誘發(fā)的實驗動物自發(fā)活動的減少測量出來，如圖3所示。圖3資料清楚表明，異戊酰胺的高級同系物乙甲戊酰胺的鎮(zhèn)靜催眠作用比異戊酰胺強約10倍。乙甲戊酰胺在腹腔注射250mg/kg時可使雄性大鼠完全進入催眠狀態(tài)，而相同劑量的異戊酰胺僅使動物的活動降至相當于腹腔注射乙甲戊酰胺25mg/kg的水平。同樣地，腹腔注射異戊酰胺500mg/kg所導致的活動的降低僅相當于腹腔注射乙甲戊酰胺50mg/kg的水平。因此，異戊酰胺的鎮(zhèn)靜催眠作用只有較低劑量乙甲戊酰胺的1/10(催眠作用是不希望有的)，由此可看出，異戊酰胺是一種優(yōu)良的溫和鎮(zhèn)靜劑。
藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)靜作用，也可通過戊巴比妥誘導的睡眠時間的延長予以證明。在這些實驗中，給予實驗動物催眠劑量巴比妥酸鹽(一般為戊巴比妥鈉，50mg/kg，腹腔注射)，如同時給予一個有鎮(zhèn)靜作用的藥物，其睡眠時間將比對照組(生理鹽水處理的)動物長。在我們的實驗中，異戊酰胺以30～500mg/kg(腹腔注射)劑量給予雄性Swiss-Webster小鼠(30-45g)，30分鐘后再給戊巴比妥50mg/kg(腹腔注射)，這樣就可檢測和定量異戊酰胺的鎮(zhèn)靜作用(見圖4)。如圖4所示，戊巴比妥誘導的睡眠時間顯著延長，因而可證明異戊酰胺當其劑量為100～500mg/kg(腹腔注射)時，對實驗動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯鎮(zhèn)靜作用。微弱的催眠作用和效能通過測定足以引起實驗鼠翻正反射喪失和意識、應答明顯消失(睡眠誘導)的劑量(腹腔注射)的方法，比較了異戊酰胺及其前面提到的高級同系物乙甲戊酰胺的催眠作用。雖然乙甲戊酰胺在劑量為250mg/kg(腹腔注射)時對雄性大鼠已有催眠作用(誘導睡眠)，但異戊酰胺即使在1000mg/kg(腹腔注射)時對雄性大鼠也無催眠作用。只有當其劑量接近中毒水平2000mg/kg(IP)時對雄鼠才表現(xiàn)出催眠作用。這就是說，乙甲戊酰胺的催眠作用比異戊酰胺強得多，異戊酰胺的催眠作用微弱，只有當其劑量很大，接近中毒水平(即大于1g/kg)時才產生催眠作用。沒有中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激作用和引發(fā)驚厥作用以及其他急性毒性通過給嚙齒動物(雄性小鼠和大鼠)腹腔注射適當劑量的方法，評價N，N-二乙基異戊酰胺(文獻記載是個鎮(zhèn)靜藥)和異戊酰胺可能有的中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激作用與引發(fā)驚厥的作用。雖然以前有人說N，N-二乙基異戊酰胺有鎮(zhèn)靜作用，事實上在其劑量為250mg/kg(腹腔注射)時對雄性小鼠和大鼠有強烈的中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激作用和引發(fā)驚厥的作用，而在劑量為500mg/kg(腹腔注射)時，則使雄性小鼠抽搐，繼之死亡。與之不同，異戊酰胺本身在測試的10-4000mg/kg(腹腔注射)范圍內，任何劑量對雄性小鼠都絕對沒有顯示出中樞神經(jīng)刺激作用和引發(fā)抽搐的作用。在給予最高劑量(4000mg/kg，腹腔注射)的異戊酰胺時，雖然有些實驗動物(雄性小鼠)在睡眠幾天之后死亡，但明顯地是由于呼吸抑制所致。這個劑量仍低于異戊酰胺的半數(shù)致死量(LD50)，因為半數(shù)以上的實驗動物睡眠幾天之后仍存活了下來。異戊酰胺更大劑量的試驗，為其溶解度有限和需要注射過大的容量而未能進行。
權利要求
1.應用一定劑量的異戊酰胺于藥物制劑中，以便用于需要所述治療的病體產生抗焦慮作用，其中所述異戊酰胺的劑量可減輕焦慮而又不引起極度的鎮(zhèn)靜。
2.按照權利要求1所述的應用，其中所述有效劑量為1.5～20mg/kg體重。
3.按照權利要求2所述的應用，其中所述有效劑量為1.5～10mg/kg體重。
4.按照權利要求1所述的應用，其中所述病體是人，抗焦慮作用對治療輕度焦慮、戒煙后的癥狀、酒精中毒和其他藥物濫用、月經(jīng)前綜合癥、月經(jīng)期不安和兒童過度興奮是有效的。
5.按照權利要求1所述的應用，其中病體是家養(yǎng)動物和馴養(yǎng)動物，并且抗焦慮作用對不希望興奮的動物是有效的。
6.應用一定劑量的異戊酰胺于藥物制劑中，以便用于一方法促使需要所述治療的病體睡眠，其中所述異戊酰胺的劑量對促進睡眠是有效的。
7.按照權利要求6所述的應用，其中所述有效劑量為10—20mg/kg體重。
8.按照權利要求6所述的應用，其中病體是人。
9.按照權利要求6所述的應用，其中病體是家養(yǎng)動物或馴養(yǎng)動物。
10.在單位劑型中含有預先確定劑量異戊酰胺的藥用組合物。
11.權利要求10所述藥用組合物，該組合物適合經(jīng)口服給藥。
12.權利要求10所述藥用組合物，該組合物適合注射給藥。
13.權利要求10所述藥用組合物，該組合物適合經(jīng)皮或經(jīng)粘膜給藥。
全文摘要
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，異戊酰胺在低～中等劑量水平下具有溫和的抗焦慮(減輕焦慮)作用，在較高劑量水平下具有溫和的鎮(zhèn)靜作用。與某些其他的藥物相比，雖然某些其他藥物具有抗焦慮作用或溫和的鎮(zhèn)靜作用，但是異戊酰胺沒有細胞毒性，也沒有不合理的刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。因此，異戊酰胺可用作為出售給公眾的溫和抗焦慮劑和溫和鎮(zhèn)靜劑。
文檔編號A61K31/16GK1127472SQ94192865
公開日1996年7月24日 申請日期1994年6月10日 優(yōu)先權日1993年6月11日
發(fā)明者M·F·巴蘭德林, B·C·范韋根倫 申請人:Nps藥物有限公司