專利名稱：使用雙鏈rna消除病毒對(duì)核苷類似物的耐藥的制作方法
核苷類似物通常用作抗病毒劑，尤其用作抗可逆性病毒(retroviruses)劑。病毒經(jīng)歷基因變異或突變，導(dǎo)致對(duì)這些抗病毒劑相對(duì)耐藥。一旦發(fā)生耐藥，病毒迅速繁殖，于是加速了潛在的疾病發(fā)作。感染的早期部署雙鏈RNA(dsRNA)可以降低病毒耐藥出現(xiàn)的速度。即使是感染后期，基因突變已經(jīng)發(fā)生，dsRNA也能恢復(fù)病毒對(duì)其它無(wú)效的抗病毒劑的敏感性。這點(diǎn)可以由臨床上長(zhǎng)期使用兩種模式相結(jié)合治療導(dǎo)致的出乎意料的結(jié)果中看出。這種臨床結(jié)果是，宿主免疫功能大大恢復(fù)，可檢測(cè)的病毒甚微。這種結(jié)果是單獨(dú)使用任何一類抗病毒劑所沒(méi)有的。
病毒性疾病的長(zhǎng)期治療，特別是可逆的病毒性疾病，與病毒抗藥性出現(xiàn)有關(guān)(參考文獻(xiàn)1和2)。理想情況是，使用核苷類似物進(jìn)行化療時(shí)，核苷能插入到病毒基因信息之中，并導(dǎo)致基因缺陷或不完全，從而降低病毒生長(zhǎng)循環(huán)效率。有缺陷的或者不完全的病毒后代形成感染的能力降低。不過(guò)，通過(guò)修飾本身的基因構(gòu)造，病毒可以相對(duì)出現(xiàn)耐藥，從而即使存在核苷類似物，也可以產(chǎn)生感染性的病毒后代。典型的基因變化出現(xiàn)在聚合酶基因(即在生長(zhǎng)循環(huán)的第一步指導(dǎo)抗病毒核苷插入的病毒組分)，使得病毒可以受抗病毒封鎖形態(tài)影響。目前最好的研究例子是可逆病毒間的相互作用，例如HIV(人體免疫缺陷病毒)和3′-疊氮基-3′-去氧胸苷，后者亦稱作為AZT或Zidovudine。導(dǎo)致對(duì)AIT具有抗藥性的變種常常同時(shí)對(duì)其它藥物，例如二脫氧肌苷(DDI)和二脫氧胞苷(DDC)(不限于這兩種化合物)耐藥。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了在使用核苷類似物治療前，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間使用有效量錯(cuò)誤匹配的dsRNA，可以使HIV感染(HIV陽(yáng)性)的病人推遲或降低，或既推遲又降低出現(xiàn)核苷類似物耐藥病毒的程序。這些程序使得病人在HIV感染后期，需要使用核苷類似物抗病毒劑時(shí)，對(duì)藥物敏感。
還描述了使用有效量錯(cuò)誤匹配的dsRNA，改進(jìn)可逆病毒感染病人的外周血液?jiǎn)魏搜?xì)胞(PBMC)群，尤其是T4或CD4淋巴細(xì)胞的治療程序。
dsRNA可以是含有部分尿嘧啶堿基或鳥嘌呤基的聚肌苷和聚胞苷的復(fù)合物，例如這類鹼基的含量從1/4至1/29(poly I.poly(C4-29X＞U或G))。
dsRNA的通式可以是rIn·r(C11-14′U)n或者是rIn·r(C12′U)n。下面討論dsRNA的其它合適的例子。
“錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA”用來(lái)描述那些配對(duì)鏈之間的氫鍵(堿基堆積)相對(duì)完整，即氫鍵受到干擾被中斷的平均數(shù)在連續(xù)的每29個(gè)堿基對(duì)殘基中不足1個(gè)堿基時(shí)?！板e(cuò)誤配對(duì)的dsRNA”應(yīng)按此理解。
本發(fā)明提倡使用的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA以選自poly(Cn′U)和poly(Cn′G)的共聚核苷酸為基礎(chǔ)，其中n為4至29的整數(shù)，而且共聚核苷酸是通過(guò)沿聚核糖胞苷鍵(rCn)把rIn·rIn修飾并插入未配時(shí)堿基(尿嘧啶或鳥嘌呤)而生成的聚核糖肌苷酸和聚核糖胞苷酸的復(fù)合物的錯(cuò)誤配對(duì)的類似物。另外，通過(guò)修飾聚核糖肌苷酸(rIn)的核糖骨架，例如把2′-O-甲基核糖殘基包括于其中，從poly(I)·poly(C)dsRNA衍生錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA。錯(cuò)誤配對(duì)的復(fù)合物可以使用RNA-穩(wěn)定化的高聚物，例如聚賴氨酸或纖維素進(jìn)行復(fù)合。Carter和Ts′o在美國(guó)專利4，130，641和4，024，222中描述了rIn·rCn′的錯(cuò)誤配對(duì)類似物中優(yōu)選的類似物，通式為rIn·(C11-14′U)n或rInl·r(C29′G)n′，這些發(fā)明列為參考文獻(xiàn)。按照本發(fā)明，其中描述的dsRNA一般都適用。優(yōu)選的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA為rIn·(C11-14′U)n或AMPLIGEN(HEN Resarch，Inc，Rockn ille，MD，USA)，可以買到凍干粉。
本發(fā)明中使用的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA的其它例子包括poly(I)·poly(C4′，U)poly(I)·poly(C7′，U)poly(I)·poly(C13′，U)poly(I)·poly(C22，U)poly(I)·poly(C20，U)poly(I)·poly(C29，U)和
poly(I)·poly CP23G＞p適用于實(shí)施本發(fā)明的另一類dsRNA是確定結(jié)構(gòu)的短鏈dsRNA，例如通式為5′-封鎖-(I)n-封鎖3′3′-封鎖-(C)n-封鎖5′的寡核苷酸。其中m和n各自都大于5至小于100，I為單磷酸化肌苷，C為單磷酸化胞苷，而且一根鏈上的封鎖基與相對(duì)鏈上的封鎖基互補(bǔ)?；蛘呤峭ㄊ綖?′-封鎖-〔(I)xA〕j-封鎖3′5′-封鎖-〔(C)yU〕k-封鎖3′的寡核苷酸。其中x和y各自大于5小于25，j和k至少等于1并小于10，I和C同上，A為I以外的核苷酸，U為堿基與A配對(duì)的核苷酸。
另外，短鏈寡核苷酸可以具有下述結(jié)構(gòu)5′(I)n-鉸鏈-(C)m3′其中n，m，I和C的定義同上。
這些寡核苷酸可以在與相對(duì)鏈上的核苷酸不互補(bǔ)的一根鏈上含有取代基。這些寡核苷酸最好被互補(bǔ)的非均勻高聚體的內(nèi)部配對(duì)所穩(wěn)定，理想地，封鎖基和鉸鏈基或二者都含有互補(bǔ)非均勻高聚體的區(qū)域。這些寡核苷酸理想地含有單一鏈尾。這些寡核苷酸在PCT/US89/02172中已有描述。
病人需要根據(jù)臨床改善情況每周一次或每日一次靜脈輸200至700mg rI·r(C11-14′U)。dsRNA的用量和給藥次數(shù)將使病人的全身血液循環(huán)在用藥后于遠(yuǎn)離輸液部位的地方測(cè)定到dsRNA水平達(dá)0.01μg至1，000μg/升。
例證性的核苷類似物抗病毒劑包括Ziodovudine(象這里普遍使用的AZT或疊氮胸腺啶或Retrovar)，即3′-疊氮-3′-去氧胸腺定，是用于因人體免疫缺陷病毒(HIV，HTLV-I，HTLV-Ⅱ，HTLV-Ⅲ，LAV，ARV和各種菌株的類似信息物)引起的AIDS和AIDS相關(guān)復(fù)雜情況需要全身性治療的核苷類似物抗病毒劑。成人劑量是每天每四小時(shí)給藥200mg。一個(gè)70kg體重的病人，對(duì)應(yīng)的劑量是每四小時(shí)每公斤體重2.9mg。每天每公斤體重的劑量已用達(dá)60mg。如同后面的討論將進(jìn)一步顯示的，與錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA配位時(shí)，使用的核苷類似物的可逆病毒劑量通常小于正常劑量和習(xí)慣用量。


圖1是描述298位病人死亡或AIDS“全身感染”的時(shí)間(月數(shù))表，與癥狀出現(xiàn)前AZT“早期”(方格)治療或癥狀出現(xiàn)后AZT“晚期”(圓圈)治療相比較，采用無(wú)致命的HIV情況的病人的比例表示。
圖2，比較早期使用dsRNA或它與AZT并用對(duì)可逆病毒生長(zhǎng)的控制與單獨(dú)使用AZT病例中可逆病毒迅速生長(zhǎng)。在圖2中，HIV培養(yǎng)按參考文獻(xiàn)3進(jìn)行，使用的PBMC來(lái)自例＃1至例＃3培養(yǎng)4天，7天和14天之后，收集PBMC，溶于GUSCN之中，并按方法中描述的使用分子雜化技術(shù)測(cè)定HIVRNA。PBMC＝外周血液中單核細(xì)胞;GUSCN為氰酸胍溶液，用于溶解細(xì)胞并釋放病毒物質(zhì)。
圖3，比較dsRNA和AZT作為單一治療劑時(shí)與安慰劑及dsRNA和AZT聯(lián)合治療時(shí)，在指明的周數(shù)上長(zhǎng)期保持HIV疾病中CD4細(xì)胞按CD4T淋巴細(xì)胞中的中質(zhì)變化的相對(duì)效果。
圖4，把AZT和dsRNA聯(lián)合治療的天數(shù)與T4水平的變化百分?jǐn)?shù)相關(guān)聯(lián)，表明dsRNA Ampligen
把HIV疾病中T4細(xì)胞的穩(wěn)定周期擴(kuò)展到超出了單獨(dú)使用AZT預(yù)期的穩(wěn)定周期。指出了聯(lián)合用藥的每個(gè)成員的中間劑量。
圖5，把Ampligen
和AZT聯(lián)用的天數(shù)與T4細(xì)胞平均百分變化(增加)相關(guān)聯(lián)，表明Ampligen
增加和/或者穩(wěn)定HIV疾病中T4細(xì)胞水平在AZT有效的時(shí)間周期內(nèi)仍超出該時(shí)間周期。
圖6是12個(gè)月中安慰劑、單獨(dú)使用AZT、Ampligen
單一治療以及Ampligen
和AZT聯(lián)合治療時(shí)無(wú)致命的HIV病人的比例圖解。
在圖4和圖6中，病人數(shù)目在有關(guān)數(shù)據(jù)點(diǎn)附近的括號(hào)中指明，在圖3和圖5中用N＝指明。
在圖2中，按照參考文獻(xiàn)3中描述的方法，使用來(lái)自例1和3的外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞完成HIV共培養(yǎng)。共培養(yǎng)4天，7天和14天之后，收集外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞并溶于氰酸胍溶液中，后者是用來(lái)溶解細(xì)胞并釋放病毒物質(zhì)的。用分子雜化測(cè)定HIV RNA，下面將詳細(xì)描述。
圖1說(shuō)明在HIV感染病人的充分公布的Veterans組的“早期”(例如失重，盜汗等癥狀出現(xiàn)之前)或者“晚期”(即包括由真菌或細(xì)菌引起的HIV相關(guān)的感染在內(nèi)的這類癥狀出現(xiàn)以后)使用AZT治療時(shí)，致命情況(發(fā)展成全身感染的AIDS或死亡)的發(fā)展。
從圖1可以明顯看出，“早期”使用AZT不延長(zhǎng)壽命。取自發(fā)展了致命情況的病人的血樣表明AZT耐藥病毒(本文以AZT 表示)濃度增加，而在大約40個(gè)月觀察周期中仍無(wú)致命情況的病人一般有對(duì)AZT都變?yōu)槊舾械牟《?AZTS)。
以下，更充分的特征是從盡管AZT治療，疾病仍然發(fā)展的病人身上分離的典型的HIV分離體的相對(duì)AZT敏感度，并把這些結(jié)果與包括從疾病得到相對(duì)好的控制的病人身上分離到的肝炎病毒在內(nèi)的病毒分離體進(jìn)行比較。很明顯，出現(xiàn)AZT 病毒會(huì)縮短生命期。典型的人體可逆病毒HTLV-1，HTLV-2，HTLV-3以及通過(guò)相同機(jī)制繁殖的病毒包括一些肝炎病毒。
在此本發(fā)明人描述改進(jìn)這一目前未解決的問(wèn)題的發(fā)明。該發(fā)明可以通過(guò)多種途徑實(shí)施，這些途徑包括(a)在病毒暴露于AZT或其它類似物前，使用特殊類型的dsRNA，降低AZT 的出現(xiàn)(b)通過(guò)往體系中反加dsRNA，克服AZT HIV(或其它病毒耐藥類似物)的致死性質(zhì)。dsRNA/核苷體系顯示了對(duì)抗AZT HIV的出乎意料的協(xié)同作用而沒(méi)有對(duì)應(yīng)的協(xié)同毒性，這樣這種體系確實(shí)是獨(dú)特的出乎意料有用的聯(lián)合藥物，使用正確即可挽救生命。
本發(fā)明人的研究考察了如何聯(lián)合使用Ampligen -AZT降低HIV-病毒所造成的問(wèn)題，研究中病毒無(wú)細(xì)胞來(lái)自或者接受Ampliger 單獨(dú)治療或接受AZT單獨(dú)治療或接受Ampligen -AZT聯(lián)合治療的病人，該病毒用于感染新鮮的人外周血液細(xì)胞，該血液血胞事先被暴露在Ampligen 、AZT、或Ampligen 和AZT之中。來(lái)自于僅接受AZT單一治療一年以上的病人的病毒對(duì)AZT不敏感(0.5uMAZT＝4%抑制率;ED50＜5uM)，但象原始HIV病毒一樣對(duì)單一Ampligen敏感(5ug/ml，Ampligen -AZT聯(lián)用比單一Ampligen 可以產(chǎn)生更大的HIV抑制率(93%)。來(lái)自于接受單一Ampligen 治療或Ampligen -AZT聯(lián)合治療的病人的病毒顯示了對(duì)AZT相對(duì)耐藥，對(duì)Ampligen敏感 ，而對(duì)Ampligen -AZT聯(lián)合用藥甚至有更大的敏感性。根據(jù)病人的不同治療計(jì)劃，比較用許多不同病毒分離體所得的結(jié)果，可以明顯看到，來(lái)自暴露于AZT之前就接受了Ampligen 治療病人的病毒對(duì)于AZT(以及其它核苷類似物)的敏感性要大于來(lái)自于首先接受了AZT的病人的病毒。
a＝AZT-Ampligen 相互作用通過(guò)等數(shù)分析測(cè)定(參考文獻(xiàn)4)。聯(lián)合指數(shù)(CI)定義為CI+(Ac/As)+(Be/Bs)，其中Ac和Bc是聯(lián)合治療中使用的藥物濃度，As和Bs是單獨(dú)使用時(shí)產(chǎn)生聯(lián)合治療相同效應(yīng)的藥物濃度。當(dāng)CI＜1時(shí)，藥物是協(xié)同的;當(dāng)CI＝1時(shí)，藥物是加和的;當(dāng)CI＞1時(shí)，藥物相互拮抗。ED50為抑制50%病毒繁殖的體外劑量。
在圖2中發(fā)明人表明本發(fā)明的典型的實(shí)施方案，在實(shí)施方案中早期使用Ampligen 或與AZT同時(shí)使用，事實(shí)上會(huì)產(chǎn)生實(shí)質(zhì)上的好處，比如降低象可逆病毒這樣的有害病毒的體內(nèi)濃度。用開環(huán)表示的病毒RNA(核糖核酸)的迅速升高的產(chǎn)生曲線是未控制病毒生長(zhǎng)的指征，而兩條平線表示通過(guò)聯(lián)合治療病毒產(chǎn)生得到良好控制。圖2中的開環(huán)說(shuō)明AZT 病毒迅速發(fā)展，這樣就成為圖1中病人的典型癥狀，這些病人當(dāng)單獨(dú)給AZT時(shí)，往疾病的更晚期發(fā)展。
無(wú)論什么耐藥表現(xiàn)型(表1)，一些dsRNA，尤其是錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA若與AZT(或其它核苷類似物)聯(lián)用，則顯示對(duì)可逆病毒的協(xié)同抑制作用。H112-2和6910-6是分別顯示典型敏感度和耐藥的非常特征化的HIV顯型克隆。而例＃1到例＃6是從暴露于各種體系(例如例＃1，2，3病人與圖2中的病人相同，例如4，5，6病人象圖1中建議的，開初用AZT單獨(dú)治療)的特殊病人中分離出的病毒。
當(dāng)在臨床上聯(lián)合用藥時(shí)，結(jié)果再次出乎意料，而且根據(jù)單獨(dú)使用兩種藥物(單一治療)的臨床觀察根本不可預(yù)測(cè)。例如，單獨(dú)使用AZT(和其它類似物)使一些免疫細(xì)胞短時(shí)增加(參考文獻(xiàn)5)，這些免疫細(xì)胞叫作CD4細(xì)胞，它們最易為一些可逆病毒和一些肝炎病毒(特別是HHV6)進(jìn)攻。短時(shí)增加之后(見于12至16周左右)，由于HIV增殖和出現(xiàn)AZT HIV，免疫細(xì)胞惡化(圖3)。括號(hào)中的數(shù)目叫作研究的主體數(shù)。相比之外，單獨(dú)合作Ampligen 始終引起CD4細(xì)胞數(shù)處于水平線(圖3，例如免疫細(xì)胞數(shù)既不增加也不減少，換句話說(shuō)，細(xì)胞數(shù)穩(wěn)定化)，Ampligen 的劑量大約400至500mg，每周兩次，靜脈給藥。
病人接受AZT單獨(dú)治療，每天每四小時(shí)口服200mg(1200mg/日)。Ampligen 單獨(dú)治療組的病人每周靜脈最低給藥量?jī)纱?平均劑量范圍為每周463-555mg)。〔圖4中顯示的接受聯(lián)合治療的病人也每周兩次輸以400mg典型的Ampligen 劑量，而且平均伴用每日劑量范圍300至540mg的AZT〕。
安慰劑和AZT單一治療組(16周之后)T4淋巴細(xì)胞中值變化的趨勢(shì)與疾病進(jìn)程無(wú)情地衰退的證據(jù)相符。沒(méi)有有效的治療干預(yù)，安慰劑病人的淋巴細(xì)胞的中值變化計(jì)數(shù)下降。開初增加之后，即使接受AZT單一治療的病人也經(jīng)歷他們的T4細(xì)胞中值計(jì)數(shù)的下降并出現(xiàn)AZT HIV。這種下降從第12周起開始出現(xiàn)與安慰劑處理的病人中出現(xiàn)的下降相平行。
根據(jù)AZT單獨(dú)治療和安慰劑組12周開始T4細(xì)胞中值變化構(gòu)成的線性回歸線統(tǒng)計(jì)方法比較斜率，表明它們與中值T4細(xì)胞水平無(wú)變化的0斜率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(分別有p＜0.01和p＜0.01)。“無(wú)變化”典型地表示免疫學(xué)疾病的穩(wěn)定，“負(fù)斜率”表示疾病惡化，而最理想的后果是正科率，表示疾病(免疫)恢復(fù)，但這不可能通過(guò)研究的單一治療體系而達(dá)到。
安慰劑的AZT單一治療12周之后，Ampligen 單獨(dú)消除了預(yù)料的CD4下降。Ampligen 治療中的連續(xù)中值CD4水平的回歸線斜率與反映無(wú)CD4細(xì)胞損失的水平線在整個(gè)時(shí)間都沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
斜率與水平線(無(wú)變化)相比較P值A(chǔ)mpligen 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 P>0.2AZT 顯著差異 P<0.01安慰劑 顯著性差異 P<0.01雖然Ampligen 的單一治療(圖3)可以消除在安慰劑和AZT治療的兩組病人中都看到的中值T4淋巴細(xì)胞(在短時(shí)的12周升高之后)的嚴(yán)重下降，但平均T4水平不升高。而且在Ampligen 組中，在一年中觀察到的小的(無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)中值T4淋巴細(xì)胞減少(圖3)可以通過(guò)把劑量增至每周兩次200mg以上而生產(chǎn)更持久的T4穩(wěn)定化而容易逆轉(zhuǎn)。在Ampligen 單一治療組中從12周開始觀察到的中值T4細(xì)胞的變化構(gòu)成的回歸線的斜率與表明疾病穩(wěn)定的0之間沒(méi)有顯著差異。圖3給出的Ampligen 單一治療組，AZT單一治療組或安慰劑治療組具有大致相等的中值和平均的絕對(duì)T4(亦稱CD4)淋巴細(xì)胞水平。然后我把它們與接受Ampligen 和AZT聯(lián)合治療的新組進(jìn)行比較。該新組實(shí)際上具有較低的(約33%)中值和這種加重的HIV感染的預(yù)后指征的絕對(duì)水平，從而表明他們具有更大的死亡危險(xiǎn)或別的“致命事件”。
下表給出了Ampligen 和AZT長(zhǎng)期維持HIV疾病中每mm3CD4細(xì)胞的相對(duì)效應(yīng)。
正如在圖3中看到的，完成一年治療使用安慰劑的病人中值絕對(duì)T4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)減少59個(gè)細(xì)胞(大約每月減少4.9個(gè)細(xì)胞);接受AZT單一治療的病人減少28個(gè)細(xì)胞(大約每月減少2.3個(gè)細(xì)胞);接受Ampligen 單一治療的病人，只減少15個(gè)細(xì)胞(平均每月約減少1.25個(gè)細(xì)胞)。不過(guò)，接受Ampli-gen 和AZT聯(lián)合治療組，該組具有最低的預(yù)治療中值和平均絕對(duì)T4淋巴細(xì)胞水平(所以處于最大的冒險(xiǎn)之中)，實(shí)際上經(jīng)歷了中值絕對(duì)T4細(xì)胞水平增加了13個(gè)細(xì)胞，即使聯(lián)合治療一年之后，仍然如此。這些結(jié)果總結(jié)在表2中，且圖4中列得更為詳細(xì)。
圖4闡明了在聯(lián)合治療的一年中中值T4淋巴細(xì)胞水平的連續(xù)變化，該聯(lián)合治療應(yīng)與圖3中的Ampligen 單一治療，AZT單一治療及安慰劑效應(yīng)相比較。用于比較的基線根據(jù)開始聯(lián)合治療前的三個(gè)月立即測(cè)定的病人的連續(xù)絕對(duì)T4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的平均值算得。
頭九十天周期中觀察到的增加與原先報(bào)道的圖3中觀察到的AZT單一治療的初步效果相符。不過(guò)，所看到的從180天至540天聯(lián)合治療中持續(xù)增加顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這在接受AZT單一治療的病人中，未觀察到。(非參數(shù)分析證實(shí)了一年中T4計(jì)數(shù)增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。之所以進(jìn)行這種分析，是由于相對(duì)小的樣本數(shù)使得有可能T水平分布不正常)。這樣一來(lái)，T4淋巴細(xì)胞增加持續(xù)的時(shí)間要比AZT一單治療預(yù)計(jì)的3至6個(gè)月的短時(shí)增加要長(zhǎng)，而且這種結(jié)果必須來(lái)自于dsRNA的存在。另外，使用相對(duì)低劑量的AZT和dsRNA時(shí)，也看到這種效應(yīng)。該觀察與早先在低至200mg劑量的情況下看到的相符合。每周靜脈注射兩次，持續(xù)1至4個(gè)月，Ampligen 的單一治療可以穩(wěn)定未經(jīng)治療的HIV感染病人(T4＝60-300細(xì)胞/mm3)的預(yù)計(jì)的T4細(xì)胞減少，如果病人繼續(xù)這種治療5至8個(gè)月，可以維持這種效應(yīng)(圖3)。
根據(jù)dsRNA和AZT聯(lián)合治療的135天至630天中T4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的平均百分變化，得到的回歸線見于圖5。聯(lián)合治療的91至180天中每個(gè)病人的連續(xù)T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的平均數(shù)，用作確定百分變化的基線。該基線被選作為分界點(diǎn)，在該點(diǎn)的后面，估計(jì)的AZT對(duì)T4水平的影響一般已經(jīng)消失。
使用統(tǒng)計(jì)方法，回歸線的正斜率和95%可信限度的斜率指出，Ampligen 和AZT聯(lián)合治療成功地阻止了預(yù)計(jì)到的未經(jīng)治療的病人(4-6個(gè)細(xì)胞/月)和長(zhǎng)期AZT單一治療病人(多于6個(gè)細(xì)胞/月)的長(zhǎng)期T4細(xì)胞減少。這樣一來(lái)，聯(lián)合治療事實(shí)上無(wú)限期地維持了T4水平，而且持續(xù)時(shí)間比原先AZT單一治療觀察到的長(zhǎng)得多，這一點(diǎn)正好說(shuō)明了本發(fā)明在核酸耐藥病毒，特別是可逆病毒治療中的基本用途。
最后，圖6通過(guò)表述當(dāng)病人接受安慰劑、AZT單一治療，Ampligen 單一治療，或者Ampligen 和AZT聯(lián)合治療時(shí)，發(fā)展成AIDA感染/淋巴瘤(“致命事件”)的比例，證實(shí)了本發(fā)明的效用。
如同圖6指出的，接受安慰劑的病人中有大約10%在12個(gè)月的觀察周期中經(jīng)歷致命事件。開始的病人數(shù)目，研究的第6個(gè)月和第12個(gè)月，在括號(hào)中標(biāo)明。在該時(shí)期內(nèi)，接受AZT的病人中有大約4%經(jīng)歷致命事件。特別應(yīng)當(dāng)指出的是，單獨(dú)使用AZT可以預(yù)期形成的腫瘤(參考文獻(xiàn)6)，通過(guò)聯(lián)合治療而得到避免。使用Ampligen 和AZT聯(lián)合治療時(shí)，在絕對(duì)T4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)大于115個(gè)細(xì)胞/mm3的病人中，無(wú)人發(fā)生致命事件，甚至那些由于聯(lián)合治療前基線上的中值CD4水平只有201，免疫系統(tǒng)明顯惡化的，這樣做處于極大危險(xiǎn)中的病人，也是如此。
與實(shí)踐本發(fā)明相一致，在控制病毒復(fù)制的基礎(chǔ)打好之后，可以明智地加入諸如白細(xì)胞介素和干擾素一類的淋巴細(xì)胞活素。
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權(quán)利要求
1.一種聯(lián)合用藥治療體系，通過(guò)這種聯(lián)合治療可以防止出現(xiàn)對(duì)核苷類似物耐藥病毒和/或改善病情，尤其是事先存在對(duì)核苷耐藥病毒的與免疫細(xì)胞有關(guān)的病情。
2.延緩，減少，或既延緩又減少在HIV感染病人中出現(xiàn)對(duì)核苷類似物耐藥病毒的方法，該方法包括在使用核苷類似物抗病毒藥治療前，給所說(shuō)的病人服用有效量的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA。
3.改善被核苷類似物耐藥的HIA感染病人的外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞病情的方法，該方法包括給所說(shuō)的病人服用有效量的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA。
4.權(quán)利要求2的方法，其中病人在使用所說(shuō)的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA治療之后，服用核苷類似物抗病毒劑。
5.權(quán)利要求3的方法，其中所說(shuō)的細(xì)胞為CD4淋巴細(xì)胞。
6.權(quán)利要求2或3的方法，其中所說(shuō)的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA為與聚尿苷酸復(fù)合的聚腺苷酸。
7.權(quán)利要求6的方法，其中錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA為聚肌苷如聚胞苷的復(fù)合物，聚胞苷中含有1/4至1/29的尿嘧啶或鳥嘌呤堿基。
8.權(quán)利要求7的方法，其中錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA為rIn·r(C11-14′U)n或?yàn)楹墟I斷裂區(qū)域并顯示有利的治療比例性質(zhì)的rIn·r(C11-14′U)n。
9.權(quán)利要求6的方法，其中服用的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA量可以使得病人全身血液循環(huán)中該錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA水平達(dá)到2至1000μg/ml。
10.權(quán)利要求2或3的方法，其中dsRNA為短鏈的寡核苷酸，定義該寡核苷酸的通式為5′-封鎖-(I)n-封鎖3′3′-封鎖-(C)m-封鎖5′其中m和n各自都大于5，小于100，I為單磷酸化肌苷，C為單磷酸化胞苷，或5′-封鎖-〔(I)xA〕j-封鎖3′3′-封鎖-〔(C)yU〕k-封鎖3′其中x和y各自都大于5，小于25，j和k各自至少為1并小于10，I和C的定義同上，A為不是I和核苷酸，U為堿基與A配對(duì)的核苷酸，或5′(I)-鉸鏈-(C)m3′其中n，m，I和C的定義同上，提供一根鏈上的封鎖基與相對(duì)鏈上的封鎖基互補(bǔ)。
11.按照權(quán)利要求10的方法，其中寡核苷酸被互補(bǔ)的非均勻高聚物的內(nèi)部配對(duì)所穩(wěn)定，并且封鎖基或鉸鏈基或二者都含有互補(bǔ)的非均勻高聚物的區(qū)域。
12.權(quán)利要求2，3或4的方法，其中所說(shuō)的核苷類似物抗病毒劑為Zidovudine，二脫氧肌苷，二脫氧胞苷，或者它們的并用藥物。
13.權(quán)利要求2或3的方法，其中所說(shuō)的錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA為rIn·(C11-14′U)n。
全文摘要
在感染治療的早期或晚期即當(dāng)病毒的基因突變已經(jīng)發(fā)生以恢復(fù)對(duì)否則是無(wú)效的抗病毒劑的敏感性時(shí)，服用錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA，降低用核苷類似物抗病毒劑治療過(guò)程中，病毒的耐藥性發(fā)展速度。使用錯(cuò)誤配對(duì)的dsRNA，在外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞，尤其是CD4淋巴細(xì)胞中明顯達(dá)到推遲和/或減小對(duì)核苷類似物耐藥的可逆病毒的出現(xiàn)，尤其是HIV的出現(xiàn)。
文檔編號(hào)A61K31/7084GK1068035SQ9210222
公開日1993年1月20日 申請(qǐng)日期1992年4月6日 優(yōu)先權(quán)日1991年4月16日
發(fā)明者W·A·卡特 申請(qǐng)人:Hem制藥公司