專利名稱：含苯甲酰胺衍生物的藥物組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺衍生物、其制備方法，含它們的藥物組合物及其應(yīng)用于對抗腫瘤疾病。
德意志聯(lián)邦共和國專利說明書3305755號介紹過通式Ⅰ的化合物
其中R1、R2和R3可以相同或不同，它們各代表氫原子或甲基。它們有效地對抗惡性的、增生的和自身免疫的疾病，而4-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺及其N-一甲基的衍生物據(jù)說是特別有效。
出人意料地，我們現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)最初被認(rèn)為是藥物學(xué)上必要的堿性的對-氨基官能團(tuán)，其實(shí)與這些化合物的治療效力并無關(guān)系，反而沒有它存在或以非堿性基通過取代作用或置換作用將其轉(zhuǎn)變?yōu)橹行缘姆磻?yīng)基團(tuán)，卻可產(chǎn)生適合性極佳的有效化合物。
因此，本發(fā)明提供可對付惡性的、增生的和自身免疫的疾病的新的具有通式Ⅱ的N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺衍生物。
其中R是鹵原子或低級酰氨基，而這些低級酰氨基包括那些至多含4個碳原子并可任意用羥基取代的低級酰氨基。
含低級酰氨基R的通式(Ⅱ)之優(yōu)選化合物包括1)4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，2)4-異丁酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，3)4-甲酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，4)4-(β-羥基丙酰氨基)-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，5)4-乙醇酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，4-酰氨基化合物1)至5)，和以上提及的其它的用鹵原子取代的通式(Ⅱ)的N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺衍生物，都是新的。雖然，其中R是氫原子的化合物有過介紹(見Beilstein，13，Main Work，第20頁)，但并無提及它的藥理作用。
因此，本發(fā)明也涉及R可以是氫原子的通式(Ⅱ)的化合物可用以對抗腫瘤疾病。
制備通式(Ⅱ)的化合物可用通式Ⅲa化合物與通式Ⅲb的化合物作用，得通式Ⅳ的化合物，再還原或把保護(hù)基分離使它轉(zhuǎn)化為通式Ⅱ的化合物
式Ⅲa中R的含意與上述相同而A是活性酸基，
式Ⅲb中X是含有保護(hù)基的氨基或硝基，
式(Ⅳ)中X和R的含意與上述相同。
通式Ⅲa的化合物與通式Ⅲb的化合物按已知方法進(jìn)行反應(yīng)?；钚运峄鵄，更詳細(xì)的說是那些可以和氨基起反應(yīng)的酰基鹵、酸酐、咪唑化物(imidazolide)或酯基。因此，A優(yōu)選是鹵原子或是咪唑基、?；虻图壨檠趸?。
用作X的保護(hù)基是肽化學(xué)中習(xí)用的一種基團(tuán)，例如芐基或芐酯基。利用適當(dāng)?shù)拇呋瘎玢K或鈀，以氫氣進(jìn)行還原，于是，一方面，游離的硝基給還原為伯氨基，另一方面，氨基上的保護(hù)基在氫解作用下分離。
本發(fā)明的活性物質(zhì)適宜以藥物組合物形式給藥。所含的活性物質(zhì)可作單體形式或與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或無機(jī)固體或液體的藥物載體料，作成混合劑的形式，它們可以局部的、腸內(nèi)的、如口的或直腸的給藥，也可以腸外的、如肌內(nèi)的或靜脈內(nèi)的給藥。這些組合物的制備，可用那些不與本發(fā)明的新化合物起反應(yīng)的原料，如明膠、乳糖、淀粉、十八烷醇、硬脂酸鎂、滑石、植物油、芐醇、丙二醇、石油膏或其它的藥物載體。
藥物組合物的類型可為，如片劑、糖衣藥丸、膠囊、栓劑、軟膏或乳劑，或以液體形式如懸浮液或乳濁液。若有需要，它們可作消毒和/或包含佐藥，如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑或乳化劑、加溶劑或用以改變滲透壓的鹽類或緩沖劑。它們也可包含其它活性物質(zhì)。
使用的劑量取決于要治療疾病的性質(zhì)和個人的因素。一般是是給予由10至300毫克，尤其是由20至50毫克的劑量，特別情況下，個別的劑量亦可以重些。
下述實(shí)施例用以說明本發(fā)明例14-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺30克(0.1摩爾)N-(2′-硝中，在標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下進(jìn)行氫化。移去催化劑后，將濾液濃縮至約為其體積的四分之一。所得的沉淀物用吸力過濾。若有需要，產(chǎn)物可以從甲醇/四氫呋喃(1∶1體積/體積)再結(jié)晶。產(chǎn)量是18.6克(理論值的69%);熔點(diǎn)為243.7℃。
用作原材料的N-(2′-硝基苯基)-4-乙酰氨基-苯甲酰胺的制備如下41.3克(0.33摩爾)的草酰氯，在0-5℃，并排除濕氣下，滴加于60.3克(0.83摩爾)二甲基甲酰胺在1.5升無水乙酸乙酯的溶液中。在這溫度下攪拌30分鐘后，加入44.8克(0.25摩爾)4-乙酰氨基苯甲酸及27.7克(0.35摩爾)吡啶，并移去冰浴。在室溫下攪拌3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物混合于38克(0.28摩爾)鄰-硝基苯胺和27.7克(0.35摩爾)吡啶在30毫升無水乙酸乙酯的溶液中。在室溫下攪拌15小時(shí)后，將反應(yīng)混合于500毫升1N氫氧化鈉水溶液中。將物相分開，并用150毫升乙酸乙酯三次將水相搖出。合并的有機(jī)相用水洗至中性，通過無水硫酸鈉干燥后，濃縮至約三分之一。所得沉淀物用吸力過濾，并用再結(jié)晶或柱色譜法純化。產(chǎn)量為15克(理論值的20%);熔點(diǎn)為205.8℃。
例24-(β-羥基丙酰基)-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺2克(4.76毫摩爾)N-(2′-硝基苯基)-4-(3-芐氧基丙?；被?-苯甲酰胺溶解于300毫升乙醇中，并在1克5%鈀-木炭的存在下和80℃時(shí)，在壓熱器中進(jìn)行氫化6小時(shí)。過濾后，移去溶劑，殘余物則用柱色譜(硅膠;二氯甲烷/甲醇9∶1體積/體積)純化。產(chǎn)量為0.8克(理論值的56%);溶點(diǎn)為198.7℃。
用作原材料的化合物的制備方法如下4-(3-芐氧基丙?；被?-苯甲酸8.09(59毫摩爾)對-氨基苯甲酸，與4.98克(63毫摩爾)吡啶一同溶解于100毫升二烷中，并與在2毫升烷中的11.7克(59毫摩爾)3-芐氧基丙酰氯(見J.C.S，Perkin I，1976，2229)在15℃下混和。在室溫下攪拌3小時(shí)后，反應(yīng)混合物用200毫升水混和。所得沉淀物用吸力過濾、水洗和干燥。產(chǎn)物不需再純化便可在下一個步驟上使用。產(chǎn)量為15.7克(理論值的89%);熔點(diǎn)為162-164℃熔結(jié)，＞200℃分解。
N-(2′-硝基苯基)-4-(3-芐氧基丙酰基氨基)-苯甲酰胺的制備類似實(shí)施例一，但用12克(40.1毫摩爾)4-(3-芐氧基丙?；被?-苯甲酸、6.6克(0.13毫摩爾)草酰氯、9.7克(0.13摩爾)二甲基甲酰胺、2×4.5克吡啶、6.1克(44.1毫摩爾)鄰-硝基苯胺和280毫升無水乙酸乙酯。粗制品用柱色譜(硅膠;乙酸乙酯/正己烷1∶5-1∶1體積/體積)純化。產(chǎn)量為3.5克(理論值的21%);熔點(diǎn)為140℃。
例34-異丁酰氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺13.1克(40毫摩爾)N-(2′-硝基苯基)-4-異丁酰-氨基苯甲酰胺在10%鈀-木炭存在下，于400毫升四氫呋喃中、在標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下進(jìn)行氫化。將溶劑濃縮至120毫升之后，沉淀的結(jié)晶用吸力過濾。產(chǎn)量為10.2克(理論值的86%);熔點(diǎn)為247.6℃。
用作原材料的化合物的制備方法如下4-異丁酰氨基苯甲酸將50克(0.36摩爾)對-氨基苯甲酸及30克(0.38摩爾)吡啶溶解于600毫升二烷中，并在150℃與排除濕氣下，逐滴混和于40.5克(0.38摩爾)異丁酰氯之中。在室溫下攪拌2小時(shí)后，在劇烈攪拌下加入500毫升水。所得沉淀物用吸力過濾、用水洗滌、干燥及從二異丙醚/乙酸乙酯(3∶4體積/體積)再結(jié)晶。產(chǎn)量為22克(理論值的30%);熔點(diǎn)為241℃。
N-(2′-硝基苯基)-4-異丁酰氨基苯甲酰胺是在例5提出的反應(yīng)條件下制備加入吡啶/鄰-硝基苯胺之后，反應(yīng)溶液在室溫下給攪拌15小時(shí)及在沸點(diǎn)溫度下給攪拌5小時(shí)。所用的成分如下54.6克(74.68毫摩爾)二甲基甲酰胺、1.5升無水乙酸乙酯、37.3克(29.42毫摩爾)草酰氯、47克(22.63毫摩爾)4-異丁酰氨基苯甲酸、25.6克(32.36毫摩爾)吡啶及34.4克(24.89)毫摩爾)鄰-硝基苯胺。產(chǎn)物從乙酸乙酯再結(jié)晶。產(chǎn)量為13.3克(理論值的18%);溶點(diǎn)為237.6℃。
例44-乙醇酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺將6.08克(15毫摩爾)N-(2′-硝基苯基)-4-芐氧基-乙酰氨基苯甲酰胺溶解于400毫升乙醇和200毫升四氫呋喃中，并在3克5%鈀-木炭存在下，80℃及50巴氫氣壓力下在壓熱器中進(jìn)行氫化19小時(shí)。當(dāng)壓熱器內(nèi)容物仍然熱時(shí)，將其過濾及將無色的濾液蒸干。結(jié)晶殘余物從800毫升甲醇中再結(jié)晶。產(chǎn)量為2.6克(理論值的63.2%);熔點(diǎn)為221-223℃。
所用的原材料的制備方法如下4-芐氧基乙酰氨基苯甲酸將35.7克1(0.26摩爾)對-氨基苯甲酸與23.7克(0.30摩爾)吡啶一同溶解于420毫升二烷中，并在15℃下逐滴混和于51.7克(0.28摩爾)芐氧基乙酰氯之中(見雜環(huán)化學(xué)15，601/1978)。在室溫下攪拌2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物與300毫升水混和。所得沉淀物用吸力過濾、用水洗滌并干燥。產(chǎn)物不需再純化便可在下一個步驟上使用。產(chǎn)量為73克(理論值的98.3%)，熔點(diǎn)為178-179℃。
N-(2′-硝基苯基)-4-芐氧基-乙酰氨基苯甲酰胺將溶于910毫升無水乙酸乙酯的28.5克(0.39摩爾)二甲基甲酰胺在2℃氮?dú)夥障轮鸬位旌陀?1.5克(0.17摩爾)草酰氯之中。在2至5℃下攪拌30分鐘后，加入37.2克(0.13摩爾)4-芐氧基乙酰氨基苯甲酸與14.4克(0.18摩爾)吡啶在65毫升乙酸乙酯的懸浮液，并移去冰浴。在室溫下攪拌2.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物和于19.8克(0.14摩爾)鄰-在室溫下攪拌2.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物和于19.8克(0.14摩爾)鄰-硝基苯胺和14.4克(0.18摩爾)吡啶在65毫升乙酸乙酯的溶液之中。在室溫下攪拌1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物加熱至沸騰3小時(shí)。冷卻后，將其與500毫升1N氫氧化鈉水溶液混和，并將物相分開。用乙酸乙酯兩次將水相搖出。合并的有機(jī)相用水洗至中性和用無水硫酸鈉干燥。溶劑蒸至150毫升。沉淀的結(jié)晶用吸力過濾，并從700毫升乙醇再結(jié)晶。產(chǎn)量為13克(理論值的24.7%);熔點(diǎn)為128-130℃。
例5N-(2′-氨基苯基)-4-甲酰氨基-苯甲酰胺1.92克(67.3毫摩爾)N-(2′-硝基苯基)-4-甲酰-酰氨基苯甲酰胺在10%鈀-木炭的存在下，于500毫升四氫呋喃中與標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下進(jìn)行氫化。移去催化劑后，在真空中移去溶劑，結(jié)晶殘余物從四氫呋喃/二異丙醚(1∶1體積/體積)中再結(jié)晶;產(chǎn)量為1∶5克(理論值的88.5%);熔點(diǎn)為196.7℃(分解)。
原材料的制備方法如后N-(2′-硝基苯基)-4-甲酰-酰氨基苯甲酰胺將7.9克(0.11摩爾)二甲基甲酰胺與80毫升無水乙酸乙酯混合后，在0至5℃和氮?dú)夥障?，滴加?.9克(46.8毫摩爾)草酰氯之中。在這溫度下攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物混于5.95克(36毫摩爾)甲酰-4酰氨基苯甲酸(見Chem，Ber.，23，3625/1890;Beilsteins Handbuch der Organischen Chemie Pub Springer Verleg，1931，Vol.P.432)和4.3克(54毫摩爾)吡啶之中，同時(shí)移去冰浴。在室溫下攪拌3小時(shí)后，將溶液混與5.47克(39.6毫摩爾)鄰-硝基苯胺在15毫升無水乙酸乙酯中混合，然后在室溫下攪拌15小時(shí)，隨后用氨使溶液變?yōu)閴A性、用水洗滌及以無水硫酸鈉干燥。移去溶劑之后，剩下的晶狀殘余物從乙酸乙酯中再結(jié)晶。產(chǎn)量為1.5克(理論值的14.6%);熔點(diǎn)為237.6℃。
4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺乃用作本發(fā)明的化合物的一個例子，并與作為標(biāo)準(zhǔn)的4-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺比較。已知該標(biāo)準(zhǔn)化合物對抗在試管內(nèi)和在體內(nèi)各種實(shí)驗(yàn)上的腫瘤有顯著的抑制作用。用L1210和乳房腺癌16C的腫瘤細(xì)胞，以“細(xì)胞毒性比色測定”，在試管內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。在這試驗(yàn)系統(tǒng)上，IC的值小于或等于250微克/毫升的物質(zhì)被評定為在抑制細(xì)胞上有效。
按本發(fā)明的活性物質(zhì)4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺，它顯示(見下例表1)出1.在抑制細(xì)胞上表現(xiàn)突出;
2.有和比較標(biāo)準(zhǔn)大約相同或更好的抑制細(xì)胞的效能。
表1L1210 細(xì)胞毒性比色測定試驗(yàn)物質(zhì) IC 微克/毫升4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 3.754-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 2.784-甲基氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 4.04乳房腺癌 16C細(xì)胞毒性比色測定試驗(yàn)物質(zhì) IC微克/毫升4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.734-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.694-異丁酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.324-甲酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.404-(β-羥基丙?；?氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.774-乙醇酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 0.62出人意料地，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的活性物質(zhì)4-乙酰氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺在急性的胃內(nèi)投藥的情況下，較參比標(biāo)準(zhǔn)的毒性小得多。一個對雄性小鼠作七天觀察期測定半數(shù)致死量(LD)的定向?qū)嶒?yàn)已表明這事實(shí)。結(jié)果顯示在下列表2表2雄性小鼠的急性的胃內(nèi)毒性試驗(yàn)物質(zhì) IC 毫克/千克4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺 16004-氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺 625在對老鼠的藥物動力學(xué)的實(shí)驗(yàn)中，可以排除減少再吸收可能引起本發(fā)明的活性物質(zhì)比標(biāo)準(zhǔn)制劑對急性適合性有實(shí)質(zhì)的改進(jìn)這物質(zhì)的腸內(nèi)再吸收迅速地，完全地和劑量一直線地進(jìn)行。
本發(fā)明的活性物質(zhì)的生物利用度是100%。對老鼠以靜脈內(nèi)投藥與胃內(nèi)投藥10毫克/千克之后血藥濃度時(shí)間曲線下的面積(AUC值)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有重大的差別。這可顯示于附圖中的圖1。
除了它的較好的適合性外，本發(fā)明的活性物質(zhì)，與標(biāo)準(zhǔn)制劑相比較，其特征是有較長的半壽期(見附圖中的圖(2)及圖(3))，因此可以在較長期間里維持抑制細(xì)胞的有效水平。
4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺在體內(nèi)的效能則試驗(yàn)于出生后第50天、第71天和第92天的雌性標(biāo)準(zhǔn)差(SD)老鼠，分別由三次靜脈內(nèi)施以甲基亞硝基脲以誘發(fā)初期的乳腺癌。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到或大于0.8立方厘米時(shí)，隨意選擇試驗(yàn)的老鼠，并開始給于治療?；衔锸┯谖竷?nèi)，劑量分別為7.5、10.0、與12.5毫克/千克/天，每周5次，共5周。每周測定腫瘤體積的中位數(shù)，并與未治療的對照組比較。由圖4可以證明依賴一定程度的4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺劑量影響腫瘤的增長，而在最高的劑量組別中，腫瘤的增長幾乎完全受到抑制。
因此，本發(fā)明的化合物，與作為參比標(biāo)準(zhǔn)的4-氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺比較，在重要的生物學(xué)上的參數(shù)中，是明顯地改進(jìn)了的抑制細(xì)胞藥物。同時(shí)，它也是對抗L 1210白血病細(xì)胞同樣有效的抑制細(xì)胞藥物，而且可以更有效地對抗乳腺癌16C。
所以，本發(fā)明的新化合物具有治療的價(jià)值。它們是全身和/或局部治療惡性腫瘤的藥劑?？捎米髁夹缘脑錾募膊〉闹委熂坝米骷?xì)胞的和體液的免疫系統(tǒng)失調(diào)的治療。
此外，還包括與其它治療結(jié)合的可能性，并預(yù)料這些治療可加強(qiáng)和有利地影響所期望的效果。


如下圖1說明把4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺施于老鼠后，其血藥濃度時(shí)間曲線下的面積(AUC)。圖中＊表示胃內(nèi)投藥(2毫克/千克、10毫克/千克、50毫克/千克);表示靜脈內(nèi)投藥(10毫克/千克)。
圖2說明10毫克/千克的單劑量投藥于老鼠胃內(nèi)之后，血漿中4-氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺的平均水平(n＝4)。而其半壽期(t 1/2)約為15分鐘。
圖3說明10毫克/千克的單劑量投藥于老鼠靜脈內(nèi)之后，血漿中4-乙酰氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺的平均水平(n＝5)，圖中0表示2毫克/千克劑量于胃內(nèi)投藥后(n＝5)，表示10毫克/千克劑量于胃內(nèi)投藥后(n＝6)，表示50毫克/千克劑量于胃內(nèi)投藥后(n＝5)，半壽期(t 1/2)約為4.2至4.5小時(shí)。
圖4說明4-乙酰氨基-N-(2′氨基苯基)-苯甲酰胺對抗由甲基亞硝基脲在SD老鼠誘發(fā)的乳腺癌的效能。
權(quán)利要求
1.至少含有一種活性物質(zhì)為式Ⅱ所示的苯甲酰胺衍生物的抗腫瘤藥物組合物的制備方法，式Ⅱ?yàn)?br> 其中R可以是低級酰氨基或用羥基取代的低級酰氨基，該方法包括將通式Ⅰ的活性物質(zhì)與固體或液體的藥物稀釋劑或載體混合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所用的活性物質(zhì)是4-乙酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所用的活性物質(zhì)是4-(β-羥基丙酰氨基)-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所用的活性物質(zhì)是4-異丁酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所用的活性物質(zhì)是4-乙醇酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所用的活性物質(zhì)是4-甲酰氨基-N-(2′-氨基苯基)-苯甲酰胺。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抗腫瘤藥物組合物的制備方法，該組合物至少含有一種活性物質(zhì)為式II所示的苯甲酰胺衍生物。式II中R可以是低級酰氨基或用羥基取代的低級酰氨基。該方法包括將式II的活動物質(zhì)與固體或液體的藥物稀釋劑或載體混合。
文檔編號A61K31/165GK1048321SQ9010499
公開日1991年1月9日 申請日期1987年4月22日 優(yōu)先權(quán)日1986年4月22日
發(fā)明者烏特·韋爾肖森, 格哈特·薩特津格, 卡爾-奧托·沃爾默, 沃爾夫區(qū)·赫曼 申請人:歌德克股份公司