專利名稱：具有酶抑制作用的二肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可抑制天然血管緊張肽原酶之作用的二肽衍生物，其制備和使用方法及含有這些二肽衍生物的醫(yī)藥制劑。歐洲專利申請Ep-A0，255，082中描述了攜帶N末端環(huán)烷基羰基和環(huán)烷基-烷羰基取代基的二肽衍生物。國際專利88/05050中描述了具有血管緊張肽原酶抑制作用的氨基二醇衍生物。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基衍生物可顯著改善化合物在體內(nèi)的作用，并提高吸收率。
本發(fā)明涉及式Ⅰ的化合物
其中Ra代表(C3-C8)環(huán)烷基、(C4-C10)二環(huán)烷基、(C8-C12)三環(huán)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基-(C1-C6)烷基、(C4-C10)二環(huán)烷基-(C1-C6)烷基及(C8-C12)三環(huán)烷基-(C1-C6)烷基，其中各環(huán)烷基、二環(huán)烷基和三環(huán)烷基取代基均可被選自F、Cl、Br、I、羥基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、羧基、(C1-C6)烷氧基羰基、氨基甲?；Ⅳ燃籽趸?、氨基、(C1-C6)單烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、氨基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基-(C1-C6)烷基、二-(C1-C6)烷基氨基-(C1-C6)烷基、脒基、羥氨基、羥肟基、亞肼基、亞氨基、胍基、(C1-C6)烷氧基磺酰、(C1-C6)烷氧基亞磺酰、三氟甲基、(C1-C4)-烷氧羰基氨基或(C6-C12)芳基-(C1-C4)烷氧羰基氨基的一個或兩個相同或不同的殘基取代的;
W 代表-CO-、-O-CO-或-SO2-;
R2代表氫、(C1-C10)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基-(C1-C4)烷基、(C6-C14)芳基或(C6-C14)芳基-(C1-C4)烷基;
R3代表氫、(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基，(C6-C14)芳基-(C1-C4)烷基、羥基或氨基;
R4代表式Ⅱ的殘基其中R5代表氫、(C1-C7)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C5)烷基硫代、(C1-C5)烷基氨基、羥基、疊氮基、氟、氯、溴或碘;
D代表殘基Het，其中Het代表可與苯、芳香環(huán)融合的部分或完全氫化的5至7元雜環(huán)，作為雜原子其可含有選自N、O、S、NO、SO或SO2的一個或兩個相同或不同的基因，且可以是被選自(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羥基、鹵素、氨基、一或二(C1-C4)烷基氨基或CF3的一個或兩個相同或不同的基團取代的，而m則代表0、1、2、3或4;
A和B各自代表在氮端與Ra-W或A相連接，且在碳端與B或NH-CHR2-CHOH-CHR3-R4相連接的氨基酸殘基，其包括苯丙氨酸、組氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、β-2-噻吩丙氨酸、β-3-噻吩丙氨酸、β-2-呋喃丙氨酸、β-3-呋喃丙氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、丙氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸、4-氯苯丙氨酸、蛋氨酸砜、蛋氨酸亞砜、2-吡啶丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、間-甲基組氨酸、鄰-甲基酪氨酸、鄰-芐基酪氨酸、鄰-叔丁基酪氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、正纈氨酸、β-2-苯并〔b〕噻吩基丙氨酸、β-3-苯并〔b〕噻吩基丙氨酸、2-氟苯丙氨酸、3-氟苯丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸，4-氟苯丙氨酸、正亮氨酸、半胱氨酸、S-甲基半胱氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、多巴、鄰-二甲基多巴、N-甲基組氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸、2-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸、3-(2-噻吩基)絲氨酸、(Z)-脫氫苯丙氨酸、(E)-脫氫苯丙氨酸、1，3-二氧戊環(huán)-2-基丙氨酸、N-吡咯基丙氨酸和1-，3-或4-吡唑基丙氨酸，以及其生理上可耐受的鹽。
式Ⅰ化合物的手性中心可有R-、S-或R，S-構(gòu)型。
烷基可以是直鏈或分支鏈的。這也適用于由之衍生的殘基，如烷氧基、烷基硫代、烷氨基、二烷基氨基、鏈烷醇基或芳烷基。(C3-C8)環(huán)烷基是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。(C4-C10)雙環(huán)烷基或(C8-C12)三環(huán)烷基是指可含有非對稱雙鍵，且可被開鏈脂族側(cè)鏈取代的等環(huán)脂族、非芳族殘基。這種形式的殘基中可有兩或三個環(huán)作為殘基的組成部分互相稠合，或者以螺環(huán)方式并通過環(huán)碳原子或側(cè)鏈碳原子相連接。這些殘基的例子有冰片基、降冰片基、蒎烷基、降蒎烷基、蒈烷基、降蒈烷基、苧烷基、金剛烷基、二環(huán)(3.3.0)辛基、二環(huán)(1.1.0)丁基和螺環(huán)(3.3)庚基取代基。
如果上述環(huán)狀化合物攜帶一個以上的取代基，這些取代基彼此可以是順式或反式的。
(C6-C14)芳基可以是苯基、萘基、聯(lián)苯基或芴基，其中最好是苯基。這同樣適于由之衍生的殘基，如芳氧基、芳酰基、芳烷基和芳烷氧基。芳烷基是指未取代或取代的與(C1-C6)烷基連接的(C6-C14)芳基基團，如芐基、α-和β-萘甲基、鹵代芐基和烷氧基芐基、芳烷基，但不僅限于這些基團。
上文限定的殘基Het，如包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β-咔啉基或這些殘基與苯、環(huán)戊烷、環(huán)己烷或環(huán)庚烷融合的衍生物。這種雜環(huán)可以是在氮原子上被氧、(C1-C6)烷基如甲基或乙基、苯基或苯基-(C1-C4)烷基如芐基取代的，和/或在一個或多個碳原子上被(C1-C4)烷基如甲基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基如芐基、鹵素如氯、羥基、(C1-C4)烷氧基如甲氧基、苯基-(C1-C4)烷氧基如芐氧基，或氧所取代的，并且可以是部分飽和的，如可以是2-或3-吡咯基、苯基吡咯基如4-或5-苯基-2-吡咯基、2-呋喃基、2-噻吩基、4-咪唑基、甲基咪唑基如1-甲基-2-，4-或5-咪唑基、1，3-噻唑-2-基、2-，3-或4-吡啶基、1-氧-2-，3-或4-吡啶并，2-吡嗪基、2-，4-或5-嘧啶基、2-，3-或5-吲哚基、取代的2-吲哚基如1-甲基-，5-甲基-，5-甲氧基-，5-芐氧基-，5-氯-或4，5-二甲基-2-吲哚基、1-芐基-2-或3-吲哚基、4，5，6，7-四氫-2-吲哚基、環(huán)芳庚并〔b〕-5-吡咯基、2-，3-或4-喹啉基、4-氫-2-喹啉基、1-，3-或4-異喹啉基、1-氧-1，2-二氫-3-異喹啉基、2-喹喔啉基、2-苯并呋喃基、2-苯并噁唑基、2-苯并噻唑基、苯并〔e〕吲哚-2-基或β-咔啉-3-基。
部分氫化或完全氫化的雜環(huán)如包括二氫吡啶基、吡咯烷基如2-3-或4-N-甲基吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉代、硫代嗎啉代和四氫苯硫基。
式Ⅰ化合物的鹽具體地是指醫(yī)藥上可利用的或無毒性的鹽。
這樣的鹽例如可以由含有酸性基團如羧基的式Ⅰ化合物，與堿金屬或堿土金屬如Na、K、Mg和Ca形成，或者也可與生理上可耐受的有機胺如三乙胺和三-(2-羥乙基)胺形成。
含有堿性基團如氨基基團或胍基基團的式Ⅰ化合物，可與無機酸如鹽酸、硫酸或磷酸，以及與有機羧酸或磺酸如乙酸、檸檬酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸和對甲苯磺酸形成鹽。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物為其中Ra和W是上文限定的基團，R2代表異丁基、芐基或環(huán)己基甲基;
R3代表氫、(C1-C5)烷基、(C6-C10)芳基、(C6-C10)-芳基-(C1-C4)烷基或羥基;
R4代表式Ⅱ所示的殘基，其中R5代表氫、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基硫代、(C1-C4)烷基氨基、羥基、疊氮基、氟、氯、溴或碘，D定義同上文所述的殘基Het，且M代表0、1或2，A和B分別代表選自苯丙氨基、組氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、β-2-噻吩基丙氨酸、β-3-噻吩基丙氨酸、β-2-呋喃基丙氨酸、β-3-呋喃基丙氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、丙氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸、4-氯苯丙氨酸、蛋氨酸砜、蛋氨酸亞砜、2-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、間-甲基組氨酸、鄰-甲基酪氨酸、鄰-芐基酪氨酸、鄰-叔丁基酪氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、半胱氨酸、S-甲基半胱氨酸、N-甲基組氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸、2-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸、3-(2-噻吩基)-絲氨酸、(Z)-脫氫苯丙氨酸、(E)-脫氫苯丙氨酸、1，3-二氧戊環(huán)-2-基丙氨酸、N-吡咯基丙氨酸和1-、3-或4-吡唑基丙氨酸的二價殘基及其生理上可耐受的鹽。
特別優(yōu)選的式Ⅰ化合物是其中Ra代表(C4-C6)環(huán)烷基和(C4-C6)環(huán)烷基-(C1-C2)烷基、其中各環(huán)烷基取代基均可被選自羥基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C2)烷基、羧基、(C1-C2)烷氧羰基、氨甲酰基、羧甲氧基、氨基、(C1-C2)單烷基氨基、(C1-C2)二烷基氨基、氨基-(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷基氨基-(C1-C2)烷基、二-(C1-C2)-烷基氨基-(C1-C2)烷基、脒基、三氟甲基、(C1-C4)烷氧羰基氨基如叔丁氧羰基氨基、(C6-C12)-芳基-(C1-C2)烷氧羰基氨基如芐氧羰基氨基和甲磺?；被蛉谆酋；被囊粋€或兩個相同或不同的殘基取代;
W代表-CO-;
R2代表異丁基、芐基或環(huán)己基甲基;
R3代表氫或羥基;
R4代表式Ⅱ的殘基，其中R5代表氫或氟，D代表2-、3-或4-吡啶殘基、2-，4-或5-咪唑殘基或2-噁唑啉殘基，上述各雜環(huán)均可被選自甲基、乙基、丙基、烯丙基、氟、氯、溴、CF3及甲氧基的一個或兩個殘基取代;且m代表0、1或2;
A和B各自單獨代表選自苯丙氨酸、組氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、β-2-噻吩基丙氨酸、β-3-噻吩基丙氨酸、β-2-呋喃基丙氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、丙氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸、4-氯苯丙氨酸、蛋氨酸砜、蛋氨酸亞砜、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、間-甲基組氨酸、鄰-甲基酪氨酸、鄰-芐基酪氨酸、鄰-叔丁基酪氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸及1-，3-和4-吡唑基丙氨酸的二價殘基及其生理上可耐受的鹽。
本發(fā)明進一步涉及制備式Ⅰ化合物的方法，其包括使含有末端羧基基團的片段或其反應性衍生物與含有游離氨基基團的相應片段偶聯(lián)，根據(jù)需要除去為保護其他功能性基團而暫時引入的一個或多個保護性基團，并將如此得到的化合物適當?shù)剞D(zhuǎn)化成其生理上可耐受的鹽。
含有末端羧基基團之式Ⅰ化合物的片段具有下列結(jié)構(gòu)通式
含有末端氨基基團之式Ⅰ化合物的片段具有下列結(jié)構(gòu)通式
Houben-Weyl〔MethodenderorganischenChemie(有機化學方法)，Vol.15/2〕、Bodanszky等人〔peptideSynthesis，2nded(Wiley&Sons，NewYork1976)〕及Gross，Meienhofer，〔Thepeptides。Analysis，synthesis，biology(Academinicpress，NewYork1979)〕等已描述了制備酰胺鍵合化合物的方法。其中優(yōu)選的方法是使用N-羥基琥珀酰亞胺或1-羥基苯并三唑作為酯成分，與碳化二亞胺如二環(huán)己基碳化二亞胺或丙烷膦酸酐相偶聯(lián)的活性酯方法，以及與新戊酰氯偶聯(lián)的混合酸酐方法。
可制備活性胺用作式Ⅳc片段的起始化合物
其中R2、R3和R4定義如前所述，制備過程可由活性α-氨基酸開始，并保留其不對稱中心。為此目的?？砂匆阎椒ㄖ苽銷端保護的氨基酸醛，以3-羥基丁醛類似物的形式偶聯(lián)加合到相應雜芳基烷基結(jié)構(gòu)單元上，除去N端保護性基團后，得到式Ⅳc的氨基醇?？捎靡阎椒ǎ绶旨壗Y(jié)晶法或?qū)游龇ǚ蛛x所得與OH攜帶中心有關(guān)的非對映體混合物?？捎肏pLC方法檢查非對映體純度，并經(jīng)轉(zhuǎn)化成Mosher衍生物(H.S.Mosheretal.J.Org.Chem.34，2543，1969)后按已知方法分析對映體純度。
按B。Castro等人(Synthesis，1983，676)所述方法制備N端保護的氨基醛。
在對堿呈惰性的溶劑如醚、THF、甲苯、DME、DMSO或二甲氧基乙烷中將3-羥基丁醛類似物加成到N端保護的氨基醛上(最好是N-叔丁氧基羰基和芐氧基羰基保護性基團)。
可用于雜芳基烷基組分去質(zhì)子化作用的堿包括堿金屬醇化物如鄰-叔丁醇鉀或甲醇鈉、堿金屬氫化物如氫化鈉或氫化鉀、有機金屬堿如正丁基鋰、S-丁基鋰、甲基鋰或苯基鋰、氨基鈉及含氮有機堿的堿金屬鹽如異丙基氨基鋰。
按現(xiàn)有文獻如T.W.GreeneprotectiveGroupsinOrganicSynthesis所述的方法完成制備式Ⅰ化合物所必需的前述及繼后操作(如引入及除去保護性基團)。按已知方法制備具有成鹽基團之式Ⅰ化合物的鹽，例如使含有堿性基團的式Ⅰ化合物與化學計算量的適當酸反應。
可用已知的分級結(jié)晶法或?qū)游龇ǚ蛛x使用外消旋氨基酸A或B制得的立體異構(gòu)體混合物，特別是非對映體混合物。
本發(fā)明的式Ⅰ化合物表現(xiàn)有酶抑制性質(zhì);特別是它們可抑制天然血管緊張肽原酶的作用。血管緊張肽原酶是天冬氨酰蛋白酶類的蛋白水解酶，它是作為各種刺激(體液減少、鈉缺乏、β-受體刺激)的結(jié)果由腎臟的近腎小球細胞分泌到血循環(huán)中的。然后它將由肝臟釋放的血管緊張素原裂解為十肽血管緊張素Ⅰ。后者被“血管緊張素轉(zhuǎn)化酶”(ACE)轉(zhuǎn)化成血管緊張素Ⅱ。因為血管緊張素可通過血管收縮直接增加血壓，所以它在調(diào)節(jié)血壓中起著重要作用。此外，它可刺激腎上腺分泌醛固酮，從而通過抑制鈉排泄增加細胞外液量，導致血壓升高。血管緊張肽原酶酶促活性的抑制物增加血管緊張素Ⅰ的生成，進而增加了血管緊張素Ⅱ的生成。這種活性肽激素濃度的降低是血管緊張肽原酶抑制物之降血壓作用的直接原因。
可通過體外試驗來分析血管緊張肽原酶抑制物的活性。其中可借多種不同的系統(tǒng)(人血漿、純化的人血管緊張肽原酶)檢測血管緊張素Ⅰ之產(chǎn)生量的增加。
1.試驗原理于37℃下將含有血管緊張肽原酶和血管緊張素原的人血漿與被試化合物一起保溫。該過程中，血管緊張素原在血管緊張肽原酶的作用下轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅰ并可使用商品放射免疫檢測試劑盒檢測出來。這種血管緊張素釋放作用可被血管緊張肽原酶抑制物所抑制。
2.血漿制備由自愿受試者得到血液(每人約0.5升;使用ASIDBonzundSohn，UnterschleiBheim的Bluko采樣器)并收集在冰冷的部分抽空的瓶子內(nèi)。為防止凝血加入EDTA(終濃度為10mM)。離心(HS4轉(zhuǎn)子(Sorvall)，3，500rpm，0-4℃，15分鐘;必要時重復進行)后，小心吸出血漿并于-30℃下按合適的份兒冷凍保存。只將具有足夠高血管緊張肽原酶活性的血漿用于試驗。經(jīng)冷處理(-4℃，3天)以活化有低血管緊張肽原酶活性的血漿(前血管緊張肽原酶→血管緊張肽原酶)。
3.試驗程序使用血管緊張肽原酶MaiaR試劑盒(Serono Diagnostics S.A.，Coinsins，Switserland)檢測血管緊張素Ⅰ。血漿按說明書指出的方法進行保溫保溫混合物1000μl血漿(于0～4℃解凍)100μl磷酸鹽緩沖液(pH7.4)(加10-4M ramiprilate)10μlpMSF溶液10μl0.1%GenaPolpFIC12μlDMSO或試驗制劑一般將試驗制劑以10-2M溶解于100%二甲基亞砜(DMSO)中并用DMSO進行適當稀釋。保溫混合物中最多含有1%DMSO。
在冰上充分混合上述保溫混合物并置于水浴(37℃)中保溫1小時。由不加抑制物的另一批保溫混合物中取出沒有進一步保溫的共6份樣品(各100μl)，以檢測所用血漿中的初始血管緊張素Ⅰ含量。
選用的試驗制劑濃度范圍應為大約含10-90%酶抑制物(至少5個濃度)。保溫終了時，由各批保溫混合物中取3份100μl樣品，加在預冷的Eppendorf容器內(nèi)于干冰上冷凍，并保存于-25℃下以備檢測血管緊張素Ⅰ(三份樣品的平均值)。
血管緊張素Ⅰ的放射免疫測定(RIA)確切按照RIA試劑盒(血管緊張肽原酶Maia 試劑盒，Serono DiagnosticsS.A.，Coinsins，Switzerland)使用說明書的記載進行操作。
校準曲線包括的區(qū)域范圍為每ml含0.2至25.0ng血管緊張素Ⅰ。由所有測得值中減去血漿的基礎(chǔ)血管緊張素Ⅰ含量。血漿血管緊張肽原酶活性(pRA)是作為每毫升中血管緊張素Ⅰ的ng數(shù)X小時數(shù)給出的(Ang I(ng)/mlX小時)。存在試驗物質(zhì)時的pRA值是基于一批沒有抑制物的情況下(＝100%)測得的，并作為百分殘留活性給出。IC50值是在百分殘留活性對試驗制劑之濃度(M)的座標圖上(計算尺)讀出的。
本發(fā)明的通式Ⅰ之化合物，在體外試驗中當濃度為大約10-5至10-10mol/L時表現(xiàn)出抑制作用。
血管緊張肽原酶抑制物可降低鹽耗竭動物的血壓。因為人血管緊張肽原酶與其他種動物者不同，故使用靈長類(狨、獼猴)進行血管緊張肽原酶抑制物的體內(nèi)試驗。靈長類血管緊張肽原酶與人血管緊張肽原酶在氨基酸順序上基本上是同源的?？梢蜢o脈內(nèi)注射呋喃苯胺酸而刺激內(nèi)源性滲出。然后給予試驗化合物并檢測它們對血壓及心搏率的影響。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可以大約0.1～5mg/kg的劑量靜脈注射給藥，如通過胃鏡進行十二指腸內(nèi)給藥時則劑量范圍為大約1～50mg/kg。本發(fā)明通式Ⅰ的化合物可用作抗高血壓劑，并可用于治療心功能不全。
HIV蛋白酶是通過自動催化機制由GAG-pOL多肽上切下來的，然后裂解前體肽P55成為核心抗原p17、p24和p14。因此它是一重要的酶，對該酶的抑制作用可干擾病毒的增殖周期并抑制其復制。
在生物學試驗中，已證明本發(fā)明的化合物也可抑制病毒酶如HIV蛋白酶。這種HIV蛋白酶抑制作用具有特殊的重要性，其使得本發(fā)明的化合物能夠用于治療和預防因HIV感染所引起的疾病。根據(jù)本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物在體外試驗中當濃度為大約10-4至10-8mol/l時顯示有抑制作用。
本發(fā)明還涉及式Ⅰ化合物在制備用于治療高血壓和心功能不全的藥物，及制備用于治療和預防病毒性疾病特別是因HIV引起之疾病的藥物中的應用，此外還涉及上述藥物本身。
醫(yī)藥制劑含有有效劑量的式Ⅰ之活性化合物，以及醫(yī)藥上可利用的有機或無機賦形劑?？赏ㄟ^鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下或口服途徑給藥?；钚曰衔锏膭┝恳罁?jù)溫血動物種屬、體重、年齡及給藥方式而定。
本發(fā)明的醫(yī)藥制劑是以已知的溶解、混合、造粒及片劑包衣等加工過程制得的。
為了制成口服劑，可將活性化合物按常規(guī)方法與賦形劑、穩(wěn)定劑或惰性釋劑等常用添加劑混合，制成適于口服給藥的劑型，如片劑、糖衣片劑、硬膠囊劑、含水、含醇或油狀懸浮劑及含水、含醇或油狀溶液劑?？墒褂玫亩栊再x形劑包括阿拉伯膠、氧化鎂、碳酸鎂、磷酸鉀、乳糖、葡萄糖、十八醇延胡索酸鎂或淀粉，特別是玉米淀粉?？芍瞥筛苫驖竦念w粒制劑。適用的油狀賦形劑或溶劑包括植物或動物油，如葵花籽油或魚肝油。
為了皮下或靜脈內(nèi)給藥，可將活性化合物或其醫(yī)藥上可耐受的鹽制成溶液、懸浮液或乳劑，必要時可加入穩(wěn)定劑、乳化劑及其他常規(guī)佐劑。適用的溶劑包括水、生理鹽水或醇，如乙醇、丙二醇或甘油，此外還可使用含糖溶液如葡萄糖或甘露糖醇溶液，或上述不同溶劑的混合物。
文中使用的縮寫詞有ACC4-氨基環(huán)己基羰基BOC叔丁氧基羰基BuLi正丁基鋰DCC二環(huán)己基碳化二亞胺DCI解吸化學電離DNP2，4-二硝基苯基DME二甲氧基乙烷DMF二甲基甲酰胺EA乙酸乙酯EI電子沖擊FAB快原子轟擊n小時HOBt1-羥基苯并三唑M分子峰MS質(zhì)譜MTBE甲基.叔丁基酯NEMN-乙基嗎啉n-proPRA正丙基膦酸酐THF四氫呋喃有關(guān)各氨基酸的縮寫符號為一般慣用的三字母符號(如參見Eur.J.Biochem.138，9-37，1984)。除特別指出者外，氨基酸均為L構(gòu)型的氨基酸。
所用洗脫劑的縮寫符號為El1 CH2Cl2/CH3OH 20∶1El2 CH2Cl2/CH3OH 9∶1El3 CH2Cl2/CH3OH 12∶1El4 CH2Cl2/CH3OH/濃氨水 10∶1∶0.1El5環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1El6正己烷/乙酸乙酯2∶1下列實施例旨在進一步說明而不是限定本發(fā)明。
實施例1N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺將98mgHOBt、130mgDCC和0.08mlNEM加到溶于3mlDMF的235mgN-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸中。向該溶液中加入溶于3mlDMF的230mgL-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)-戊酰胺，并于室溫下將混合物攪拌過夜。在高真空中蒸餾除去DMF，用乙酸乙酯配制余留溶液，過濾除去沉淀的尿素并用飽和NaHCO3和飽和NaCl溶液將濾液洗兩次，通過MgSO4干燥有機相并在真空中濃縮。用柱層析法(硅膠，El1)分離出315mg產(chǎn)物。
熔點100-103℃MS(FAB)748(M+1)a)N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸于常壓下，在230ml乙醇中通過1gpd/碳氫化5.5gN-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸芐酯。反應完成后，濾去催化劑并蒸餾除去溶劑。由正庚烷/乙酸乙酯中重結(jié)晶后得到4.1g無色產(chǎn)物。
熔點160-161℃(分解)MS(DCI)391(M+1)b)N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸芐酯將6.0gN-叔丁氧基羰基-順式-1，4-氨基環(huán)己基羧酸和6.3gL-苯丙氨酸芐酯溶解在75mlDMF中并在0℃下與24mln-proP pA和15.7mlNEM混合，然后使混合物于室溫下反應過夜。用CH2Cl2稀釋溶液并分別用半飽和NaHCO3溶液、10%強度檸檬酸和水洗滌，通過MgSO4干燥并在真空中濃縮?？焖?flash)層析得到5.7g純產(chǎn)物。
αD-14.6°(C＝1.1，在CH3OH中)實施例2N-(順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶))-戊酰胺將77.7mg實施例1所述的化合物溶解在2mlCH2Cl2中，并于0℃及N2環(huán)境下加入2mlCF3COOH。30分鐘后濃縮該溶液，用乙酸乙酯稀釋殘留物并分別用飽和NaHCO3和NaCl溶液洗一次。
柱層析(硅膠，El1)后得到24.7mg產(chǎn)物。
MS(FAB)648(M+1)實施例3N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按與實施例1所述的相似方法，由N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸和L-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)-戊酰胺制備題目化合物。產(chǎn)量為270mg。
熔點219-220℃MS(FAB)748(M+1)a)N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸于室溫、常壓下，在200ml乙醇中通過900mg鈀-碳催化劑氫化4.45gN-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己羰基)-L-苯丙氨酸芐酯。反應完成后濾去催化劑并真空下蒸餾除去溶劑。重結(jié)晶后得到2.67g純產(chǎn)物。
熔點160℃開始分解MS(DCI)391(M+1)b)N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸芐酯將3gN-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己烷羧酸和3.2gL-苯丙氨酸芐酯溶解在40mlDMF和7.85mlNEM中，然后于0℃加入12mln-ProP PA。使混合物于室溫下反應過夜。用200ml乙酸乙酯稀釋后用H2O、10%強度檸檬酸、飽和NaHCO3和飽和NaCl溶液各洗兩次。使用MgSO4干燥余留的有機相并于真空下除去溶劑。用二乙醚研制所得粗產(chǎn)物，經(jīng)抽吸過濾得到沉淀的結(jié)晶并干燥之，得到4.45g無色晶體物。
熔點176～177℃MS(DCI)481(M+1)實施例4N-(N-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-正纈氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)-戊酰胺按實施例2所述方法由實施例3所述化合物制備題目化合物。層析(硅膠，El2)后得到27mg產(chǎn)物。
MS(FAB)648(M+1)RF0.17(CH2Cl2/CH3OH 8∶2)實施例5N-(N-叔丁基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-N(間)-三苯甲基-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例1所述方法，由實施例3a)中所述的苯丙氨酸衍生物和FMOC-三苯甲基-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基))-戊酰胺制備題目化合物。
層析(硅膠，El1)后得到0.4g產(chǎn)物MS(FAB)1028(M+1)，1034(M+7)
RF0.5(甲苯/乙醇8∶2)實施例6N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺將40mg實施例5中制得的物質(zhì)溶解在5ml90%強度檸檬酸中并將混合物于60℃加熱2小時。用Na2CO3將溶液pH調(diào)到8并使用乙酸乙酯提取3次。用飽和NaHCO3和飽和NaCl溶液將有機相各洗兩次。然后經(jīng)MgSO4干燥并在真空下濃縮。層析(硅膠，El1)后得到16mg純產(chǎn)物。
155°分解MS(FAB)786(M+1)實施例7N-(反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺300mg實施例5中所述物質(zhì)與5mlCF3COOH和0.25mlH2O于0℃下攪拌15分鐘，并于室溫下攪拌2小時。真空濃縮該溶液，用NaHCO3溶液堿化殘留物并用乙酸乙酯提取之。真空下濃縮有機相并層析(硅膠，El2)分離殘留物。
熔點114～116℃MS(FAB)686(M+1)實施例8N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-N(間)-三苯甲基-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例1中所述方法，由實施例1a)所述的苯丙氨酸衍生物和FMOC-三苯甲基-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺制備題目化合物。層析(硅膠，El1)后得到0.5g產(chǎn)物。
MS(FAB)1028(M+1)，1034(M+7)RF0.26(El1)實施例9N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例6中所述方法由實施例8所述的化合物制備題目化合物。
產(chǎn)率61mg熔點127-130℃，MS(FAB)786(M+1)，RF0.21(El2)實施例10N-(順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例7所述方法由實施例8所述的化合物制備題目化合物。
產(chǎn)率180mg熔點177℃(分解)MS(FAB)686(M+1)
實施例11N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-N-(間)-三苯甲基-L-組氨酸(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例1中所述方法，由N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-甲基-L-酪氨酸和三苯甲基-L-組氨酸(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺制備題目化合物。
MS(FAB)1058(M+1)RF0.54(甲苯/乙醇 8∶2)實施例12N-(N-叔丁氧基羰基-反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-L-組氨酸(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例6所述方法由實施例11中所述的化合物制備題目化合物。
熔點180℃(分解)MS(FAB)816(M+1)Rf0.2(甲苯/乙醇8∶2)實施例13N-(反式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例7所述方法由實施例11中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)716(M+1)實施例14N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-N(間)-三苯甲基-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-S-(2-吡啶基))戊酰胺按實施例1中所述方法由N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸和三苯甲基-L-組氨酸-(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺制備題目化合物。
MS(FAB)1058(M+1)Rf0.75(El2)實施例15N-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-L-組氨酸(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基)戊酰胺按實施例6所述方法由實施例14中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)816(M+1)，Rf0.80(El4)實施例16N-(順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-鄰-甲基-L-酪氨酸-L-組氨酸(1-S-環(huán)己基甲基-2-S-羥基-5-(2-吡啶基))戊酰胺按實施例7所述方法由實施例14中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)716(M+1)Rf0.50(El4)實施例17N-(N-(N-(順式-4-叔丁氧基羰基氨基-環(huán)己基羰基苯丙氨酰)-組氨酰)-2-(5-S-氨基-6-環(huán)己基-3S，4R-二羥基-正己基)-吡啶60mg實施例17a)中制得的化合物與40mg苯硫酚在2ml乙腈中攪拌2小時。濃縮后，層析純化(硅膠，El4)殘留物，得45mg非晶形粉末。
MS(FAB)802(M+1)a)Boc-順式-ACC-phe-DNp-His-2-(5-氨基-6-環(huán)己基-3S，4R-二羥基-正己基)吡啶60mgBOC-DNp-His-(3S，4R，5S)-2-(5-氨基-6-環(huán)己基-3，4-二羥基己基)吡啶在5mlDME/HCl中攪拌2小時。濃縮后，將粗產(chǎn)物溶解于3mlDMF連同50mgN-(N-叔丁氧基羰基-順式-4-氨基環(huán)己基羰基)-L-苯丙氨酸、120mgDCC和80mgHOBt中。用NEM將溶液pH調(diào)到9并攪拌16小時。過濾溶液、用乙酸乙酯稀釋并用3%強度NaHCO3溶液、H2O和飽和NaCl溶液各洗一次，用MgSO4干燥、濃縮并在硅膠(El3)上層析，得到60mg黃色泡沫狀題目化合物。
MS(FAB)968(M+1)
b)BOC-DNP-His-(3S，4R，5S)-2-(5-氨基-6-環(huán)己基-3，4-二羥基己基)吡啶0.5mmol得自實施例17c)的(3S、4R、5S)異構(gòu)體與5mlHCl在DME(飽和的)中攪拌2小時。真空濃縮后，將殘留物溶解于3ml無水DMF中，然后加入BOC-DNp-His-OH、二環(huán)己基碳化二亞胺和HOBt各0.5mmol。用NEM將溶液調(diào)至pH9并攪拌24小時。過濾后用EA稀釋并用3%強度NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。在硅膠(El1)上層析后得到黃色樹脂樣題目化合物。
MS(FAB)696(M+1)c)2-((3S、4R、5S)-5-叔丁氧基羰基氨基-3，4-二羥基-6-環(huán)己基-正己基)吡啶于-78℃將1.4ml(1mmol)正丁基鋰加入溶于10mlTHF的93mg(1mmol)2-甲基吡啶中。升溫至室溫后，將混合物攪拌30分鐘，然后冷卻到-40℃。加入1mmol(2RS，3R，4S)-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4-叔丁氧基羰基氨基-5-環(huán)己基-1，2-氧代戊烷(見Ep-A189，203，實施例6)(溶解于5mlTHF)。室溫下10小時后，用水稀釋該混合物并用MTBE提取之。將粗產(chǎn)物(0.4g)溶解于THF中并于0℃下與5ml1M氟化四丁銨(于THF中)攪拌1小時。用水稀釋并用EA提取后，得到0.15g(3S、4R、5S)異構(gòu)體(MS(FAB)∶391(M+1))和0.12g(3S、4S、5S)異構(gòu)體(MS(FAB)∶391(M+1))實施例18
順式-4-氨基環(huán)己基羰基-L-phe-L-His-(1-S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基))-正戊酰胺三-三氟乙酸鹽25mg實施例17所述的化合物在1mlTEA/1mlCH2Cl2中攪拌2小時。濃縮后，將殘留物加水恢復并凍干，得到20mg無色粉末狀產(chǎn)物。
MS(FAB)702(M+1)實施例19BOC-反式-ACC-L-phe-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基))-正戊酰胺按實施例17中所述方法，由實施例19a)所述的化合物制備題目化合物。產(chǎn)率79.5mg。
MS(FAB)802(M+1)，Rf0.19(El2)a)BOC-反式-ACC-L-phe-L-DNp-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例17a)中所述方法，由實施例3a)和19b)所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)968(M+1);Rf0.40(El2)b)DNp-H-His-(3S，4R，5S)-2-(5-氨基-6-環(huán)己基-3，4-二羥基-正己基)-吡啶鹽酸鹽400mg實施例17b)的化合物在10mlDME/HCl(飽和的)中攪拌2小時。濃縮后，殘留物在甲苯中重新配制并濃縮重復兩次，得到黃色泡沫狀題目化合物。
MS(FAB)596(M+1)實施例20反式-ACC-L-phe-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例18所述的方法，由實施例19中所述的化合物制備題目化合物。
產(chǎn)率49mg;MS(FAB)702(M+1)實施例21BOC-反式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-DNp-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例17所述的方法，由實施例21a)中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)832(M+1)a)BOC-反式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-DNp-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例17a)中所述的方法，由實施例21b)和19b)中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)998(M+1)b)BOC-反式-ACC-Tyr(OCH3)-OH將0.05molBOC-反式-ACC-Tyr(OCH3)-OCH3溶解于250mlDME中并加入等摩爾量1NNaOH溶液攪拌5小時。然后濃縮該溶液并加水重新配成殘留物的溶液，用KHSO4酸化至pH4并用EA提取。由正庚烷/EA中重結(jié)晶該粗產(chǎn)物，得到白色粉末狀的題目化合物。
熔點181℃(分解)MS(DCI)421(M+1)RF0.20(甲苯/乙醇8∶2)c)BOC-反式-ACC-Tyr(OCH3)-OCH3將0.1molBOC-反式-ACC-OH和0.1molL-酪氨酸(OCH3)甲酯溶解于500mlDMF中，于0℃及N2環(huán)境下加100ml n-proP pA(在CH2Cl2中，50%濃度)和0.5mol三乙胺攪拌，使溶液反應過夜。反應完成(TLC檢驗)后，于高真空中蒸餾除去溶劑并用EA重新稀釋殘留物。用10%濃度檸檬酸、水、半飽和NaHCO3溶液和飽和NaCl溶液將有機相各洗兩次，通過MgSO4干燥并真空濃縮，然后層析(硅膠，El5)純化殘留物。
熔點150-155℃MS(DCI)435(M+1)實施例22反式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基))-正戊酰胺按實施例18所述的方法，由實施例21中所述的化合物制備題目化合物MS(FAB)732(M+1)實施例23BOC-順式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基))-正戊酰胺按實施例17所述的方法，由實施例23a)中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)832(M+1)RF0.21(El2)a)BOC-順式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-DNp-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例17a)中所述的方法，由實施例23b)和19b)中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)998(M+1)b)BOC-順式-ACC-Tyr(OCH3)-OH按實施例21b)的相似方法制得題目化合物。
α25D＝+18.6°(C＝1，CH3OH)MS(DCI)421(M+1)c)BOC-順式-ACC-Tyr(OCH3)甲酯按實施例21c)的相似方法制備題目化合物。
MS(DCI)435(M+1)實施例24順式-ACC-鄰-甲基-L-Tyr-L-His-(1S-環(huán)己基甲基-2R，3S-二羥基-5-(2-吡啶基)-正戊酰胺按實施例18中所述的方法，由實施例23中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)732(M+1)RF0.56(El4)實施例25BOC-順式-ACC-phe-His-(1S-環(huán)己基甲基-2S-羥基-5-(N-丙基-2-咪唑基)戊酰胺按實施例17中所述的方法，由實施例25中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)817(M+1)a)BOC-順式-ACC-phe-DNp-His-(1S-環(huán)己基甲基-2S-羥基-5-(N-丙基-2-咪唑基))戊酰胺80mg由實施例6得到的化合物與4mlHCl在DME(飽和)中攪拌2小時。真空濃縮后，將殘留物溶解于3ml無水DMF中。加入44mgBOC-順式-ACC-phe-OH和各0.11mmolDCC與HOBt。用NEM將溶液調(diào)至pH9并攪拌24小時。過濾后用EA稀釋，并分別用3%濃度NaHCO3溶液、H2O和飽和NaCl溶液各洗兩次，使用MgSO4干燥并濃縮。在硅膠上層析后得到黃色樹脂樣的題目化合物。
MS(FAB)983(M+1)b)BOC-DNp-His-(1S-環(huán)己基甲基-2S-羥基-5-(N-丙基-2-咪唑基)戊酰胺100mg得自實施例C的化合物與5mlHCI在DME(飽和)中攪拌2小時。真空濃縮后將殘留物溶解于3ml無水DMF中。加入105mgBOC-DNp-His-OH和各0.3mmolDCC與HOBt。用NEM將溶液調(diào)至pH9并攪拌24小時。過濾后用EA稀釋并分別用3%濃度NaHCO3溶液、H2O和飽和NaCl溶液各洗兩次，使用MgSO4干燥并濃縮。在硅膠上層析后得到黃色樹脂樣的題目化合物。
MS(FAB)711(M+1)c)3-BOC-4S-環(huán)己基甲基-2，2-二甲基-5-(3-(2-N-丙基咪唑基)-丙基)噁唑烷將500mg得自實施例d的化合物溶解在5ml無水THF中。在氬氣環(huán)境下，于-60℃加入1.9ml溶于正己烷的1.5摩爾正丁基鋰溶液。15分鐘后，加入溶于5ml無水THF的500mg得自實施例e的化合物。于-60℃反應1小時后，加入10ml飽和NaHCO3溶液。加溫至室溫后用EA將混合物提取三次，使用NaSO4干燥并濃縮。在硅膠(El EA)上層析后得到題目化合物。
R(f)0.3(EA);MS(FAB)(M+1)d)2-甲基-N-正丙基咪唑10g2-甲基咪唑在40ml正丙基溴中加熱煮沸2小時。然后將溶液倒入150ml5%濃度NaHSO4溶液中并用EA將混合物提取三次，使用NaSO4干燥并濃縮。用醚重新溶解殘留物并經(jīng)過濾使之與不溶性起始材料分離。以這種方法得到無色油狀的題目化合物。
Rf0.2(EA/CH3OH 10∶1)e)3-BOC-環(huán)己基甲基-2，2-二甲基-5-(2-溴乙基)噁唑烷于20℃在氬氣環(huán)境下將1.6ml偶氮羧酸二乙酯逐滴加到溶于15mlCH2Cl2中的690mg3-BOC-1S-環(huán)己基甲基-2，2-二甲基-5-(2-羥乙基)噁唑烷、2.6g三苯膦和1.6g溴化吡啶鎓中。室溫反應16小時后，加入水并用100ml CH2Cl2稀釋該混合物。有機相用飽和NaHCO3溶液洗兩次并用NaCl溶液洗一次。用NaSO4干燥有機相并濃縮之，在小量EA中重新溶解殘留物并過濾分離出pph3。在硅膠(El6)上純化得到題目化合物。
Rf0.3(El6);MS404(M+1)f)3-BOC-4S-環(huán)己基甲基-2，2-二甲基-5-(2-羥乙基)噁唑烷在氬氣環(huán)境下，在160ml甲苯中將10gBOC-ACHpA-OC2H5(按照J.Med.Chem.28，1779(1985)中所述方法制備)、500mg對甲苯磺酸和7.2ml二甲氧基丙烷于80℃加熱2小時。然后濃縮該混合物。于0℃下將殘留物逐滴加到在200mlTHF中之2gLiAIH4的懸液中。于0℃反應2.5小時后加入100ml5%濃度的NaHSO4溶液并用EA將該混合物提取三次。用飽和的NaHCO3溶液洗合并的有機相。用Na2SO4干燥后濃縮該混合物并在硅膠(E16)上層析。
Rf0.1(El6);MS(DCI)342(M+1)。
實施例26順式-ACC-phe-His-(1S-環(huán)己基甲基-2S-羥基-5-(N-丙基-2-咪唑基)戊酰胺按實施例18中所述方法，由實施例25中所述的化合物制備題目化合物。
MS(FAB)717(M+1)。
權(quán)利要求
1.制備式I化合物的方法
其中Ra代表(C3-C8)環(huán)烷基、(C4-C10)二環(huán)烷基、(C8-C12)三環(huán)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基-(C1-C6)烷基、(C4-C10)二環(huán)烷基-(C1-C6)烷基及(C8-C12)三環(huán)烷基-(C1-C6)烷基，其中各環(huán)烷基、二環(huán)烷基和三環(huán)烷基取代基均被選自F、Cl、Br、I、羥基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、羧基、(C1-C6)烷氧基羰基、氨甲?；?、羧甲氧基、氨基、(C1-C6)一烷基氨基、(C1-C6)二烷基氨基、氨基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基-(C1-C6)烷基、二-(C1-C6)烷基氨基-(C1-C6)烷基、脒基、羥氨基、羥肟基、亞肼基、亞氨基、胍基、(C1-C6)烷氧基磺酰、(C1-C6)烷氧基亞磺酰、三氟甲基、(C1-C4)烷氧羰基氨基或(C6-C12)芳基-(C1-C4)烷氧羰基氨基的一個或兩個相同或不同的殘基取代的，W代表-CO-、-O-CO-或-SO2-，R2代表氫、(C1-C10)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基-(C1-C4)烷基、(C6-C14)芳基或(C6-C14)芳基-(C1-C4)烷基，R3代表氫、(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C6-C14)芳基-(C1-C4)烷基、羥基或氨基，R4代表式Ⅱ的殘基其中R5代表氫、(C1-C7)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C5)烷基硫代、(C1-C5)烷基氨基、羥基、疊氮基、氟、氯、溴或碘，D代表殘基Het，其中Het代表可與苯、芳環(huán)稠全的、部分或完全氫化的5至7元雜環(huán)，其中作為雜原子可含有一個或兩個選自N、O、S、NO、SO或SO2的相同或不同的殘基，而且其可以是被選自(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、羥基、鹵素、氨基、-或二(C1-C4)烷基氨基或CF3的一個或兩個相同或不同的殘基取代的，且m代表0、1、2、3或4；A和B各自獨立地代表在氮端與R1或A連接，在碳端與B或NH-CHR2-CHOH-CHR3-R4連接的選自苯丙氨酸、組氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、β-2-噻吩基丙氨酸、β-3-噻吩基丙氨酸、β-2-呋喃基丙氨酸、β-3-呋喃基丙氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、丙氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸、4-氯苯丙氨酸、蛋氨酸砜、蛋氨酸亞砜、2-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、環(huán)已基丙氨酸、環(huán)已基甘氨酸、間-甲基組氨酸、鄰-甲基酪氨酸、鄰- 基酪氨酸、鄰-叔丁基酪氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、正纈氨酸、β-2-苯并[b]噻吩基丙氨酸、β-3-苯并[b]噻吩基丙氨酸、2-氟苯丙氨酸、3-氟苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、正亮氨酸、半胱氨酸、S-甲基半胱氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、多巴、鄰-二甲基多巴、N-甲基組氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸，2-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸、3-(2-噻吩基)-絲氨酸、(Z)-脫氫苯丙氨酸、(E)-脫氫苯丙氨酸、1，3-二氧戊環(huán)，-2-基丙氨酸、N-吡咯基丙氨酸及1-，3-或4-吡唑基丙氨酸的氨基酸，以及它們的生理上可耐受的鹽，該方法包括使含有末端羧基基團的片段或其反應性衍生物與含有游離氨基基團的相應片段相偶聯(lián)，根據(jù)需要除去為保護其他功能性基團而暫時引入的一個或多個保護性基團，并根據(jù)需要將如引得到的化合物轉(zhuǎn)化為其生理上可耐受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中Ra和W如權(quán)利要求1中所定義，R2代表氫、(C1-C10)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基、(C4-C7)環(huán)烷基-(C1-C4)烷基、(C6-C14)芳基或(C6-C14)芳基、(C1-C4)烷基，R3代表氫、(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C6-C14)芳基-(C1-C4)烷基、羥基或氨基，R4代表式Ⅱ的殘基，其中R5代表氫、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基硫代、(C1-C4)烷基氨基、羥基、疊氮基、氟、氯、溴或碘，D限定為上文所述的殘基Het，且A和B分別代表苯丙氨酸、組氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、β-2-噻吩基丙氨酸、β-3-噻吩基丙氨酸、β-2-呋喃基丙氨酸、β-3-呋喃基丙氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、丙氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸、4-氯苯丙氨酸、蛋氨酸砜，蛋氨酸亞砜、2-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、間-甲基組氨酸、鄰-甲基酪氨酸、鄰-
基酪氨酸、鄰-叔丁基酪氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、正纈氨酸、β-2-苯并〔b〕噻吩基丙氨酸、β-3-苯并〔b〕噻吩基丙氨酸、2-氟苯丙氨酸、3-氟苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、正亮氨酸、半胱氨酸、S-甲基半胱氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、多巴，鄰-二甲基-多巴、N-甲基組氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸、2-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸、3-(2-噻吩基)-絲氨酸、(Z)-脫氫苯丙氨酸、(E)-脫氫苯丙氨酸、1，3-二氧戊環(huán)-2-基丙氨酸、N-吡咯基丙氨酸和1-，3-或4-吡唑基丙氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和/或2的方法，其中Ra代表(C4-C6)環(huán)烷基和(C4-C6)環(huán)烷基-(C1-C2)烷基，其中各環(huán)烷基可以是被選自羥基、(C1-C4)烷氧基、(C1-及承影板作縱向的移動。由于底片夾框的兩側(cè)各有一個限位檔，因而無法作橫向移動。</p><p>本發(fā)明的目的在于通過底片承載裝置的改進，克服上述各機型及各種作法的缺點，方便地完成衛(wèi)片大比例尺影象處理。</p><p>本發(fā)明的特征在于保留狄維亞108A／F型底片承載裝置的縱向轉(zhuǎn)動裝置等部件的情況下，取消原橫向限位擋，增加一個可使底片夾框作橫向移動的橫向傳動裝置。該裝置由橫向滑軌，橫向微調(diào)螺桿及“
”形支撐體組成，橫向滑軌也可以是燕尾槽型，后者穩(wěn)定性更好，橫向滑軌(附圖
2)用易于拆卸的螺釘固定于底片框支撐體的后部。從加工、拆卸及計量移動距離的方便角度出發(fā)，本發(fā)明采用微調(diào)螺桿進行橫向傳動。微調(diào)螺桿用一個“
”形支撐體支撐(附圖3)“
”支撐體用螺釘?shù)纫子诓鹦兜倪B接方式固定在底片框支撐體的右側(cè)，螺桿前端通過一個固定于底片夾框右側(cè)的螺桿卡片與底片夾框相連，以便通過轉(zhuǎn)動位螺桿另一端的搖柄實現(xiàn)對底片夾框的橫向傳動，底片夾框內(nèi)的底片夾上的衛(wèi)片就可以相對于燈箱、皮腔作橫向移動，通過縱、橫向傳動的配合，使得放大機的短焦鏡頭象一個巡視窗口，可以對底片上的任何一個小區(qū)進行35倍以上的放大。如欲獲得整幅衛(wèi)片的大倍率影像，將各小區(qū)的放大圖像鑲嵌即可。</p><p>為了克服底片承載裝置作橫向移動時出現(xiàn)漏光現(xiàn)象，在燈箱下部安置兩板長方形遮光板6和7，當?shù)灼瑠A框向右移動時，遮光板7可以遮住燈箱底片承載裝置反射的光，遮光板6可以遮住燈箱射出的光源。這樣即可保證曝光的順利進行。遮光板6可與底片框連為一體，7可以固于燈箱上，也可作為配件，在作橫向傳動時加上。</p><p>用裝有該底片承載裝置的狄維亞108A／F型放大機可以(1)很方便地進行放大倍率的調(diào)整；(2)很容易進行聚焦和操作；(3)可以方便地選擇衛(wèi)星影象的局部區(qū)域，進行放大和幾何誤差校正；幾何誤差可以達到與計算機處理相當?shù)木?，處理費用遠較計算機處理便宜。</p><p>(4)在原放大機的升降范圍內(nèi)即可完成大比例尺放大及幾何誤差糾正作業(yè)，而無需很長的投影距離，且原放大機的其他功用不受影響。</p><p>實施例本實例采用平滑型滑軌，分離式遮光板(即在作橫向移動時，將遮光板置于相3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、高苯丙氨酸、2-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸及1-，3-和4-吡唑基丙氨酸的二價殘基。
4.按上述權(quán)利要求1至3的方法制備的式Ⅰ之化合物作為醫(yī)藥的應用。
5.按上述權(quán)利要求1至3的方法制備的式Ⅰ之化合物在治療高血壓中的應用。
6.生產(chǎn)含有按權(quán)利要求1至3方法制備之式Ⅰ化合物的醫(yī)藥制劑的方法，其中將該化合物與某種生理上可接受的賦形劑，且必要時加入其他輔助劑和添加劑一起制成適于給藥的劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的化合物
文檔編號A61K38/55GK1047084SQ9010226
公開日1990年11月21日 申請日期1990年4月20日 優(yōu)先權(quán)日1989年4月22日
發(fā)明者沃爾伏-烏爾里奇·倪克, 沃伏剛·林·梓, 笛特·魯波特, 漢思約格·吾爾巴赫, 阿達伯特·瓦格鈉 申請人:赫徹斯特股份公司