專利名稱：：聚集在皮膚內(nèi)的外用抗病毒藥及其制備方法此項(xiàng)發(fā)明涉及聚集在皮膚內(nèi)的外用抗病毒藥物及其制備方法。眾所周知，雖經(jīng)廣泛的衛(wèi)生宣傳教育運(yùn)動(dòng)和化學(xué)藥物治療的現(xiàn)代成果，皰疹病毒感染病例仍不斷增多。因此，內(nèi)用的抗病毒制劑如片劑、針劑、靜脈注射溶液等的需求不斷增加(Saral，R.etal.N.Eng.J.Med.305，63-67/1981)外用藥物也被用于皰疹感染的治療。5號(hào)位替代的2′-脫氧尿核甙(5-Substituted2-deoxyuridines)包括在替代物中含有鹵原子如(E)-5-氯化烯基-2′-脫氧尿核甙。(E)-5-溴乙烯基-2′-脫氧尿核甙和(E)-5碘乙烯基-脫氧尿核甙都是很有效的抗皰疹病毒藥(DeClercq，E.andWalker，R.T.Pharm。Therapy26，1/1984/)來(lái)自含鹵原子的5-替代的2′-脫氧尿核甙中的5-碘-2′-β-脫氧尿核甙(IDU)雖然化學(xué)穩(wěn)定性低，且分解所產(chǎn)生有毒物質(zhì)仍作為某些外用抗病毒藥中的有效成分應(yīng)用于臨床(Prusoff，W.H.andGoz，B.inSartorelli，A.C.andJones，d.G.AntineoplasticandImmunosuppressiveAgents，PartⅡ，pp.272-347，SpringerVerlag，NewYork，1975)。屬于嘧啶衍生物的5-烷基替代的2′-β-脫氧尿核甙的抗病毒作用已被檢驗(yàn)，在體外此類藥物的抗病毒作用遠(yuǎn)低于鹵素衍生物(DeClercq，E.etal.Curr。Chemother.，352-354/1978/)。E.DeClercq曾做過(guò)5-替代2′-脫氧尿核甙抗Ⅰ型單純皰疹病毒作用的體外試驗(yàn)(Proc。ofthe4thInt.RoundTableonNucleosides，NucleotidesandTheirBiologicalApplications，Antwerpen，1981)以取自人胚的新鮮纖維母細(xì)胞培養(yǎng)物使之造成Ⅰ型單純皰疹病毒HSV-1感染，通過(guò)改變感染病毒的濃度，可確定造成感染細(xì)胞培養(yǎng)中50%發(fā)生病理改變所需病毒的劑量〔TCID50(組織培養(yǎng)感染劑量50%)〕，將5-替代2′-脫氧尿核甙濃度不同的營(yíng)養(yǎng)基倒置入預(yù)先制備的病毒感染達(dá)TCID50的細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)，營(yíng)養(yǎng)基為含Earles鹽的最低限量必需培養(yǎng)基(MEM，GIBCO)實(shí)驗(yàn)時(shí)加以10%小牛血清、青霉素10Iu/ml和鏈霉素100μg/ml，pH調(diào)查至7.4。此法可測(cè)定降低一個(gè)對(duì)數(shù)單位的病毒TCID50值所需的有效成份的最低濃度。實(shí)驗(yàn)及反映藥物效應(yīng)的結(jié)果見表1。表1</tables>表1的數(shù)據(jù)表明Ⅰ式的5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙(IPDU)中其抗皰疹病毒作用低于其他5-替代的2′-β-脫氧尿核甙一個(gè)數(shù)量級(jí)，在體外實(shí)際上無(wú)抗皰疹病毒效應(yīng)。此項(xiàng)結(jié)果與K.K.Gauri和R.D.Walter(Chemotherapy18，269/1973/)報(bào)告的5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙不能用于治療皰疹病毒的結(jié)論是一致的。此項(xiàng)發(fā)明的目的是提供較過(guò)去使用的藥物更有效的外用藥以治療各種皰疹病毒所致的皮膚病損。此發(fā)明是基于5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙如與適當(dāng)?shù)妮d體相結(jié)合可積聚在皮內(nèi)，因此能產(chǎn)生極好的抗病毒作用。表二是藥物檢測(cè)結(jié)果，用14C標(biāo)靶的5-異丙基2′-β-脫氧尿核甙進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明一種含IPDU的油膏涂于皮膚后15分鐘即完全吸收，始料不及的是被吸收的有效成份中20-25%積聚在皮內(nèi)達(dá)8小時(shí)而濃度不減。本發(fā)明還基于有效成份在皮內(nèi)的積聚有很強(qiáng)的選擇性，因劑量的75-80%被吸收進(jìn)入循環(huán)和器官并很快排出。在表3所列的器官內(nèi)，3-6小時(shí)內(nèi)IPDU濃度降至可測(cè)水平以下。表2</tables>表3的數(shù)據(jù)清楚顯示，在所列器官中放射活性物質(zhì)主要積聚在皮膚內(nèi)，也就是說(shuō)IPDU進(jìn)入皮膚的吸收是有選擇性的。最后，此發(fā)明的另一依據(jù)是IPDU與其他藥用嘧啶核甙不同，抗降解酶性能非常穩(wěn)定，核甙不致被分解為和2-脫氧核糖-1-磷酸鹽。此點(diǎn)已經(jīng)酶反應(yīng)(見圖1)和體內(nèi)14C標(biāo)記IPDU代謝實(shí)驗(yàn)證實(shí)。圖1示胸腺嘧啶核甙磷酸酶分解胸腺嘧啶核甙，5-乙基-Z′-β-脫氧尿核甙(EDU)和5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙(IPDU)的速率。圖2示經(jīng)IPDU(I)治療(i.P.200mg/kg)的小鼠尿中檢出的代謝產(chǎn)物。此圖證明IPDUI的80～85%是原物排出體外，僅2～5%以5-異丙基-尿嘧啶和10～15%以5-(1-甲基-2羥乙基)-Z′-脫氧尿核甙排出。我們的實(shí)驗(yàn)也證明了5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙實(shí)際上無(wú)毒，也無(wú)誘變或致畸效應(yīng)。即使按有效治療量成倍增加劑量也不致引起皮損或過(guò)敏。由于以上優(yōu)點(diǎn)5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙可作為抗病毒，首先是抗皰疹病毒皮膚用藥的優(yōu)良有效成分。根據(jù)以上認(rèn)識(shí)，此發(fā)明涉及外用能積聚在皮內(nèi)的抗病毒制劑。此藥含0.02-5%(重量)的5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙以及載體，稀釋劑和/或其他制備外用藥常用的添加劑。新發(fā)明的抗病毒藥的制備是將0.02～5%(重量)的5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙與載體、稀釋劑和/或其他制備外用藥常用的添加劑混合即得。新發(fā)明的抗病毒藥用于眼科疾病時(shí)，其制備方法是將0.1-1%(重量)5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙與載體、稀釋劑和/或其他制備藥物常用的添加劑混合制成。按照本發(fā)明配制的藥物有顯著抗病毒效果，藥物可制成油膏、凝膠、乳劑、混懸液、溶液、噴霧劑、粘劑等?？共《舅巸?nèi)的有效成分因使用方法和治療而不同。使用0.3～2%(重量)的5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙于受治療的皮膚，通常能取得滿意療效。按本發(fā)明配制抗病毒藥時(shí)可用羊毛脂、凡士林、聚乙烯醇、蜂臘。此外，水、有機(jī)溶劑如乙醇也可作為首選。根據(jù)劑型的要求也可用穩(wěn)定劑、乳化劑、表面活性劑和色素以及其它添加劑。按照本發(fā)明，除5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙外，還可加入其他生物有效成分如抗炎劑氯霉素、皮膚安定劑六藍(lán)烴、皮膚干燥劑如氧化鋅等。本發(fā)明藥物的制備與一般藥物制備技術(shù)方法相同。5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙已有成品，可按文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的方法生產(chǎn)例如Szabolcs，A.，Sagi，J.andOetvoes，L.Carbohydrates，NucleosidesandNucleotides2，197-211(1975);NucleicAcidsRew.1，49-52(1975)。其物理特性如下白色，結(jié)晶，未加香料的粉末略有苦味，融點(diǎn)181-183℃，室溫下溶于水，甲醇和乙醇，其溶解度分別為7.9mg/cm3、25.4mg/cm3和11mg/cm3。基本上不溶于苯、氯仿和二乙基乙醚。在室溫下可儲(chǔ)存多年而不分解。此成份用薄層色譜法以硅膠膜(Merck)及乙酸乙酯-甲醇(95∶5)層析其Rf-值為0.43，最大紫外線吸收在267.4±0.4nm，其克分子消光系數(shù)為9500±400，(n＝50)。毒性和皮膚有無(wú)損害的觀察急性中毒以小白鼠、大白鼠、兔作毒性檢測(cè)，腹膜腔內(nèi)注射此成份14天，其50%致死劑量(LD50)如下小白鼠920mg/kg大白鼠820mg/kg兔2000mg/kg大白鼠30日毒性檢測(cè)每日腹膜腔內(nèi)注射此藥的有效成份劑量為5-50mg/kg連續(xù)30天。在試驗(yàn)期內(nèi)，注射組與對(duì)照組動(dòng)物表現(xiàn)無(wú)差別，其體重、進(jìn)食、神經(jīng)系統(tǒng)和死亡率均無(wú)差別。尸體剖驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)任何毒性作用變化。兔6周急性和亞急性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹膜腔內(nèi)每日注射3-30mg/kg此藥物的有效成份，在6周用藥期間和延長(zhǎng)的另2周內(nèi)，動(dòng)物無(wú)中毒癥狀、體重變化或死亡。解剖也未發(fā)現(xiàn)組織學(xué)改變。Ames試驗(yàn)檢測(cè)此藥有效成份的誘變和致癌作用以沙門氏傷寒菌作誘變?cè)囼?yàn)對(duì)象。實(shí)驗(yàn)使用了0.125～8.0%(重量)的5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙水懸浮液或溶液，以后又應(yīng)用了固體粉劑。研究中應(yīng)用了擴(kuò)散逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)，液體逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)(Ames，B.N.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA71，2281/1973/)和用S9成份的其他試驗(yàn)(Ames，B.N.etal.Mutat.Res.31，347/1975/)未見誘變效應(yīng)也未見致癌效應(yīng)。體內(nèi)誘變，畸變和胚毒試驗(yàn)按Roussel的“小白鼠斑點(diǎn)試驗(yàn)”，以C57/BL鼠進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)(Roussel，L.B.andMajos，M.H.Genetics42，161-175/157/;Roussel，L.B.etal.Mutation.Res.86，355-359/1981/)5-異丙基-Z′-β-脫氧尿核甙的生理鹽水溶液按460和230mg/kg分兩組實(shí)驗(yàn)。在劑量為230mg/kg的一組，其用量為正常治療量的45倍，既未見誘變和胚胎中毒，也未見致畸作用。吸收試驗(yàn)以體重23-25g的CFLP雄性白鼠進(jìn)行試驗(yàn)，按例1法制成的油膏，內(nèi)含0.8%(重量)的14C標(biāo)記5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙，每只動(dòng)物所用劑量為50mg，每組試驗(yàn)用動(dòng)物5只，用脫毛劑“Depilan”(商標(biāo)HamolInternational，Krk，Yugoslavia)處理動(dòng)物腹部皮膚，24小時(shí)后將動(dòng)物仰臥固定，在腹部脫毛區(qū)2cm2范圍內(nèi)涂以該油膏，將動(dòng)物固定于代謝控制箱內(nèi)8小時(shí)，然后拭去油膏，放開動(dòng)物，在觀察時(shí)間內(nèi)任其自由活動(dòng)，觀察時(shí)間為15、30、60、120、180、360和480分鐘。對(duì)拭下的油膏。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臟器(皮、血、肝、脾、腎、肺、腦)以及24小時(shí)尿進(jìn)行放射性檢測(cè)，結(jié)果見表4。表4表4的數(shù)據(jù)表明被吸收藥物的放射性在15分鐘后，幾乎無(wú)變化，即油膏內(nèi)的放射性標(biāo)記物在15分鐘內(nèi)被吸收，并長(zhǎng)時(shí)間保留在皮膚內(nèi)，皮、血和其他器官吸收的放射性總量表明油膏內(nèi)20-35%的有效成分已被吸收。此量的65-80%則迅速經(jīng)其他器官排出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在治療后3小時(shí)只能測(cè)得微量放射性(表3)。同時(shí)，表2的數(shù)據(jù)清楚地說(shuō)明放射性充分積聚在皮膚內(nèi)，其濃度在8小時(shí)內(nèi)基本不變。耐量試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為25-30克重的小白鼠，皮膚健康或經(jīng)劃痕處理，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2-3cm2的皮面，每日涂以2.5%(重量)的5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙油膏，連續(xù)6周。對(duì)照組所涂油膏不含有效成份(安慰劑)。動(dòng)物經(jīng)治療后再觀察2周，在治療期及觀察期內(nèi)實(shí)驗(yàn)鼠無(wú)改變(皮膚刺激，變態(tài)反應(yīng)或炎癥)，也未發(fā)現(xiàn)組織病理學(xué)改變。臨床試驗(yàn)以患單純皰疹、生殖器皰疹和帶狀皰疹的志愿者，分組作為治療觀察對(duì)象。根據(jù)病情每日進(jìn)行3-5次治療，5-10日為一療程。使用此新發(fā)明的藥物，按雙育法進(jìn)行臨床試驗(yàn)。分1號(hào)處方組(A)，含5-碘-2′-β-脫氧尿核甙的商品油膏組(B)和不含有效成份的安慰劑組(C)，以觀察療效。臨床試驗(yàn)結(jié)果綜合于表5?！癆”油膏內(nèi)含5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙“B”安慰劑“C”油膏內(nèi)含5-碘-2′-β-脫氧尿核甙(對(duì)照組)本發(fā)明的新藥及其制備的主要優(yōu)點(diǎn)是(a)皮膚能迅速有選擇的吸收并積聚此藥的有效成份。因此制劑中只含少量有效成份即可獲得滿意療效。(b)此藥為外用藥所需的有效成份遠(yuǎn)低于內(nèi)服藥。(c)此藥的有效成份非常穩(wěn)定，因此只需使用少量即能保持良好的療效。下面例舉此新藥的成份及配方例1皮膚用油膏5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙8g聚山制醇油酸酯(ph.Hg.Ⅶ.731)36g液體石臘50g鯨蠟硬酯酰醇(ph.Hg.Ⅶ.731)80g白凡士林100g甘油200g白蜂蠟4gP-羥安息香酸甲酯2g蒸餾水500g此油膏在室溫下至少可保存2年而不分解。例2皮膚用凝膠5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙1.0g甲基纖維素4.0g甘油20.0g蒸餾水73.9g安息香酸鈉0.1g乙醇(96%)0.9gP-羥安息香酸乙酯(尼泊金)0.1g例3眼科用油膏5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙0.8g單純眼膏999.2g單純眼膏的成分如下羊毛脂酒精(PH.Hg.Ⅶ.1088)50g液體石臘(PH.Hg.Ⅶ.1283)250g眼用白凡士林700g權(quán)利要求1.積聚于皮膚內(nèi)的外用抗病毒藥，內(nèi)含與載體、稀釋劑和/或其他常用于制備外用藥的添加劑相混合的0.02-5%(重量)5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙。2.用于眼科的抗病毒藥內(nèi)含與載體以及稀釋劑和/或其他常用于制備外用藥的添加劑相混合的0.1-1%(重量)5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙。3.一種制備積聚于皮膚內(nèi)的外用抗病毒藥的方法，此藥內(nèi)含0.2-5%(重量)5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙、載體、稀釋液和/或其他常用制備外用藥的添加劑，制成的劑型有油膏、乳劑、混懸液、凝膠、溶液、噴劑、粘合劑等。全文摘要此項(xiàng)發(fā)明涉及一種外用于皮膚內(nèi)的抗病毒藥物及其制備方法，該藥內(nèi)含與載體、稀釋劑和/或其他制備外用藥常用的添加劑相混合的0.2-5％(重量)5-異丙基-2′-β-脫氧尿核甙。文檔編號(hào)A61K31/70GK1034133SQ8810490公開日1989年7月26日申請(qǐng)日期1988年8月6日優(yōu)先權(quán)日1987年8月7日發(fā)明者安娜·薩博萊克斯,拉茨羅·奧托夫斯,雅諾升·薩吉,赫爾杰·圖德斯,阿蒂拉森姆索,薩蘇賽·福斯,埃斯特萬(wàn)·蘇尼亞,卡特林·馬洛斯,桑多·捷克索,埃瓦·麥德韋西,米克勞斯·瓦吉達(dá),伊斯特萬(wàn)·卡色尼,喬治·巴克薩申請(qǐng)人:匈牙利科學(xué)院化學(xué)中心研究所,生物化學(xué)藥物廠