本發(fā)明的目的是提供活性成分類別，利用這些活性成分類別可以治療由冠狀病毒引起的人或動物的病毒性疾病。這方面的治療包括對已經(jīng)存在的病毒性疾病的急性治療及其預(yù)防。

背景技術(shù)：

1、鑒于covid-19疫情的持續(xù)，仍然迫切需要提供額外的活性成分或活性成分類別來治療病毒性疾病。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及菠蘿蛋白酶(同義詞“菠蘿酶”)，其用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染。菠蘿蛋白酶特別是選自莖菠蘿酶(sbm)(ec3.4.22.32，cas?no.:37189-34-7)、果菠蘿酶(ec?3.4.22.33，cas?no.:9001-00-7)、ananain(ec?3.4.22.31)及其混合物和組合的菠蘿蛋白酶。

2、從菠蘿植物(ananas?comosus)的莖或果實中制備和分離菠蘿蛋白酶，特別是莖菠蘿酶(sbm)(ec?3.4.22.32)和果菠蘿酶(ec?3.4.22.33)在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的，例如rowan,a.d.,buttle,d.j.&barrett,a.j.在arch.biochem.biophys.267,262-270(1988)或在archives?of?biochemistry?and?biophysics,vol.267,no.1,november?15,pp.262-270(1988)中所描述的。

3、除了直接的抗病毒作用，所述菠蘿蛋白酶還具有整體上有助于治療病毒感染的全身作用。特別是以下這些作用：抑制過度免疫反應(yīng)的抗炎作用、抗水腫作用例如消除肺部水腫、以及抵消炎癥和/或過度活躍的凝血系統(tǒng)引起的血栓形成的抗凝血作用。

4、根據(jù)第二方面，本發(fā)明涉及木菠蘿素類凝集素，其用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染。

5、這里木菠蘿素類凝集素特別地選自甘露糖特異性凝集素和葡萄糖特異性凝集素。

6、木菠蘿素類凝集素特別優(yōu)選選自菠蘿凝集素(來自菠蘿的木菠蘿素類凝集素(acmjrl))、木菠蘿素凝集素、桂木黃酮凝集素、mpa凝集素、菊芋凝集素、紅藻凝集素及其混合物和組合。

7、本發(fā)明的第三方面還涉及菠蘿植物的莖和/或果的提取物，其用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染。

8、菠蘿植物特別是鳳梨和菠蘿。這樣的提取物包含一種或多于一種先前提到的菠蘿蛋白酶和/或ananain。

9、根據(jù)第四方面，本發(fā)明還涉及包含至少一種菠蘿蛋白酶和至少一種木菠蘿素類凝集素的組合制劑，其用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染。

10、在優(yōu)選的實施方案中，至少一種菠蘿蛋白酶的總量與至少一種木菠蘿素類凝集素的總量的重量比為50:50至0.1:99.9，優(yōu)選40:60至1:99，更優(yōu)選30:70至2:98，更優(yōu)選20:80至3:97，特別優(yōu)選10:90至5:95。

11、更有利地，根據(jù)本發(fā)明的組合制劑包含至少一種菠蘿蛋白酶，在提取物或組合制劑中所有菠蘿蛋白酶的總濃度優(yōu)選為0.01重量％至50.0重量％，更優(yōu)選0.1重量％至20.0重量％，特別優(yōu)選1.0重量％至10.0重量％。

12、此外，有利地，組合制劑包含至少一種木菠蘿素類凝集素，在提取物中至少一種木菠蘿素類凝集素的總濃度優(yōu)選為0.01重量％至60.0重量％，更優(yōu)選1.5重量％至50.0重量％，特別優(yōu)選2.0重量％至30重量％。

13、1973年，perlstein&kezdy在菠蘿酶基粉(bbp)中發(fā)現(xiàn)了蛋白酶抑制劑，該基粉是從菠蘿植物的莖中獲得的菠蘿酶(perlstein&kezdy,struct.,vol.1,249-254)。這些蛋白酶抑制劑可以抑制bbp中菠蘿蛋白酶的酶活性。

14、這些菠蘿蛋白酶抑制劑的七種異形體最初描述于1973年(perlstein&kezdy,struct.,vol.1,249-254)。1975年，reddy等人完全揭示了異形體vii的一級結(jié)構(gòu)，并指出了七種分離的異形體的微觀不均一性(reddy等人，j.biol.chem.,vol.250,1741-1750)。

15、lenarcic等人在1992年揭示了另一種菠蘿蛋白酶抑制劑的一級結(jié)構(gòu)，并且還揭示了其對組織蛋白酶l的抑制作用(lenarcic等人，biol.chem.,vol.373,459-464)。

16、hatano等人于1995年(hatano等人，eur.j.biochem.,vol.232,335-343)發(fā)表了菠蘿蛋白酶抑制劑vi的一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)。在接下來的一年中，菠蘿蛋白酶抑制劑vi與已經(jīng)被描述過的bowman-birk胰蛋白酶抑制劑的相似性被揭示了(hatano等人，biochemistry,vol.35,5379-5384)。hatano等人于1998年最終發(fā)表了所有先前描述的菠蘿蛋白酶抑制劑七種異形體的氨基酸序列(hatano等人,j.biochem.,vol.124,457-461)。

17、先前在文獻(xiàn)中描述過的所有菠蘿蛋白酶抑制劑的分離過程都使用兩步色譜法。這種方法的基本原理已經(jīng)由perlstein&kezdy于1973年發(fā)表(perlstein&kezdy,struct.,vol.1,249-254)。在第一維度中，即在第一純化步驟中，色譜法應(yīng)用尺寸排阻色譜(sec)?？梢允褂胹ec將bbp中所含的分子根據(jù)它們的不同尺寸彼此分離。菠蘿蛋白酶(約25kda)和菠蘿蛋白酶抑制劑(約6kda)尤其可以由此分離。

18、根據(jù)perlstein&kezdy的方法，陰離子交換色譜(例如弱陰離子交換色譜＝wax)通常用于第二次色譜分離。利用這種方法，perlstein&kezdy成功地從bbp中分離出七種菠蘿蛋白酶抑制劑(七種不同的異形體)。

19、已經(jīng)有報告表明使用該方法從1g?bbp中獲得了約3mg菠蘿蛋白酶抑制劑異形體vii或1mg菠蘿蛋白酶抑制劑異形體vi(reddy等人，biol.chem.,vol.250,1741-1750；hatano等人，eur.j.biochem.,vol.232,335-343)。

20、perlstein&kezdy發(fā)表的純化方法也可以稱為sec/wax，其缺點是未能成功分離出高純度或純形式的菠蘿蛋白酶抑制劑異形體。

21、人們一致認(rèn)為，所有先前純化的菠蘿蛋白酶抑制劑異形體實際上都是菠蘿蛋白酶抑制劑的不同異形體的混合物(hatano等人，biol.chem.,vol.383,1151-1156)。

22、此外，sec/wax方法擴(kuò)大到工業(yè)規(guī)模并不經(jīng)濟(jì)劃算。這里決定性的是sec方法在第一維度，即在第一純化步驟中的使用。與吸附色譜蛋白質(zhì)純化方法相比，sec的容量和分離能力都更小。這一點在hatano等人曾三次重復(fù)第一sec步驟用于分離1mg菠蘿酶蛋白酶抑制劑變得尤為明顯，其表示了即使在這種小規(guī)模(1g?bbp)下也需要花費大量的時間(hatano等人，1995,eur.j.biochem.,vol.232,335-343)。

23、由于三個色譜步驟被認(rèn)為是經(jīng)濟(jì)性上限，重復(fù)sec色譜對于工業(yè)應(yīng)用來說是不經(jīng)濟(jì)的。舉例來說，使用sec/wax方法獲得約1g的菠蘿蛋白酶抑制劑必須使用體積約為100升的sec柱。因此，無論從技術(shù)材料方面還是從時間經(jīng)濟(jì)性方面來看，sec/wax方法都是不經(jīng)濟(jì)的，對商業(yè)用途來說沒什么價值。

24、對于菠蘿蛋白酶的純化，文獻(xiàn)中已經(jīng)描述了不同的方法(rowan等人,arch.biochem.biophys.,vol.267,262-270；harrach等人，protein?chem.,vol.14,41-52)。

25、因此，本發(fā)明的目的還在于提供分離菠蘿蛋白酶抑制劑和菠蘿蛋白酶的改進(jìn)方法，并且進(jìn)一步提供高純度且具有豐富生物活性的菠蘿蛋白酶抑制劑和菠蘿蛋白酶混合物。

26、在第五方面，本發(fā)明因此涉及菠蘿蛋白酶抑制劑，其用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染，所述菠蘿蛋白酶抑制劑包含或組成為具有與seq?id?no:1至seq?id?no:7中的一個序列具有至少90％、優(yōu)選95％、特別優(yōu)選100％同一性的氨基酸序列的至少一種肽，其中至少一種肽優(yōu)選具有至少80重量％、特別優(yōu)選至少95重量％的純度。

27、根據(jù)本發(fā)明，同樣提供了純化至少一種菠蘿蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于用陽離子交換色譜純化含有溶解的菠蘿的莖提取物的水溶液，該水溶液的ph值為6.5至9.5，陽離子交換材料在該ph值內(nèi)結(jié)合菠蘿蛋白酶，并且色譜通過物中包含至少一種菠蘿蛋白酶抑制劑。

28、可用于陽離子交換色譜的水溶液和/或其它溶液(例如洗脫緩沖液)任選地包含在ph值為6.5至9.5具有緩沖作用的緩沖物質(zhì)。

29、使用強(qiáng)陽離子交換色譜或弱陽離子交換色譜(scx或wcx)可以用于高容量和分離效率，即使用強(qiáng)離子交換材料或弱離子交換材料的陽離子交換色譜。

30、優(yōu)選地選擇緩沖條件使得在陽離子交換色譜中，來自菠蘿植物的莖提取物的菠蘿蛋白酶抑制劑起初不與陽離子交換材料(陽離子交換柱)結(jié)合，但所有菠蘿蛋白酶都與陽離子交換材料結(jié)合。菠蘿蛋白酶抑制劑因此位于陽離子交換色譜的通過物中，該通過物可被收集并進(jìn)行進(jìn)一步的色譜步驟。

31、在優(yōu)選的實施方案中，選擇緩沖條件，使得陽離子交換色譜在5.0至10、優(yōu)選7.0至9.5的ph下進(jìn)行。該方法中的水溶液可以包含緩沖物質(zhì)，例如選自tris、hepes、磷酸鈉、和/或磷酸鉀的緩沖物質(zhì)。在優(yōu)選實施方案中，水溶液具有弱導(dǎo)電性。水溶液中包含的緩沖物質(zhì)的濃度可以為5mm至100mm，優(yōu)選10mm至50mm。

32、與陽離子交換材料結(jié)合的菠蘿蛋白酶可以從陽離子交換材料中釋放并在進(jìn)一步的步驟中分離。這可以通過使用合適的洗脫緩沖液洗脫菠蘿蛋白酶來完成。

33、選擇洗脫緩沖液中的緩沖條件，以解除菠蘿蛋白酶與陽離子交換材料的結(jié)合。緩沖液可以具有0.01m至1.0m、優(yōu)選0.10m至0.5m的鹽(例如nacl或kcl)濃度?？蛇x地，可以通過洗脫緩沖液從陽離子緩沖材料進(jìn)行洗脫，該洗脫緩沖液的ph高于水溶液的ph或高于洗滌緩沖液的ph。

34、可以采用階梯梯度或線性梯度進(jìn)行洗脫。如果提供菠蘿蛋白酶的至少一個其他的純化步驟，則優(yōu)選以線性梯度進(jìn)行洗脫。在特別優(yōu)選的實施方案中，在此過程中分離洗脫液的各個部分。階梯梯度的洗脫產(chǎn)生具有與bbp相比富集的生物活性的菠蘿蛋白酶混合物。

35、陽離子交換材料的洗脫液包含基本上不含抑制劑的菠蘿蛋白酶。在這方面，菠蘿蛋白酶可以含有相對于總肽質(zhì)量的小于5.0重量％、優(yōu)選小于2.0重量％、進(jìn)一步優(yōu)選小于1.0重量％、更優(yōu)選小于0.5重量％、更優(yōu)選小于0.2重量％、特別優(yōu)選小于0.1重量％的菠蘿蛋白酶抑制劑。菠蘿蛋白酶的純度可以通過sec-hplc或rp-hplc測定。

36、如果要進(jìn)一步純化菠蘿蛋白酶抑制劑，則可以在隨后的第二步中通過陰離子交換色譜(ax)、疏水色譜(hic)、反相hplc(rp-hplc)、或sec純化含有菠蘿蛋白酶抑制劑的陽離子交換材料通過物。

37、選擇緩沖液的條件使得至少一種菠蘿蛋白酶抑制劑與陰離子交換材料、疏水色譜的材料或rp-hplc的材料結(jié)合，然后分離。除sec外，分離優(yōu)選使用一種緩沖液進(jìn)行洗滌，隨后用另一種緩沖液進(jìn)行洗脫。由于菠蘿蛋白酶抑制劑根本不與sec色譜材料結(jié)合，因此這一步驟在sec中是不必要的。本領(lǐng)域技術(shù)人員從現(xiàn)有技術(shù)中已知用于相應(yīng)材料的合適緩沖條件(用于肽或蛋白質(zhì)的結(jié)合、洗滌和/或洗脫)。

38、本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉術(shù)語“洗滌”。“洗滌”優(yōu)選地理解為色譜材料與緩沖液的接觸，該緩沖液削弱了不期望的材料與色譜柱的結(jié)合，特別優(yōu)選完全消除了這種結(jié)合，同時保持了菠蘿蛋白酶抑制劑與色譜材料的結(jié)合。

39、可以采用階梯梯度或線性梯度進(jìn)行洗脫，洗脫液可任選地收集在單獨的部分中。

40、根據(jù)菠蘿蛋白酶抑制劑的所需品質(zhì)，可以在第二步驟之后進(jìn)行第三色譜步驟。在該第三步驟中進(jìn)行進(jìn)一步純化，其中通過rp-hplc、ax、或sec純化至少一種分離的菠蘿蛋白酶抑制劑，選擇緩沖條件使得至少一種菠蘿蛋白酶抑制劑與rp-hplc的材料或陰離子交換材料結(jié)合，然后分離。除sec外，分離優(yōu)選使用一種緩沖液進(jìn)行洗滌，然后用另一緩沖液進(jìn)行洗脫。由于菠蘿蛋白酶抑制劑不與sec材料結(jié)合，因此不需要洗滌或洗脫(流動緩沖液就足夠了)。

41、在根據(jù)本發(fā)明的所有方法中，陽離子交換材料可以選自強(qiáng)陽離子交換材料和弱陽離子交換材料；陰離子交換材料可以選自強(qiáng)陰離子交換材料和弱陰離子交換材料；疏水色譜的材料可以選自碳數(shù)為c3至c20的直鏈、環(huán)狀、非芳香族和芳香族配體；rp-hplc的材料可以選自鏈長為c4至c18的直鏈、環(huán)狀、非芳香族和芳香族配體(優(yōu)選直鏈配體)；凝膠過濾色譜的材料可以是superdex材材料(例如ge?healthcare的superdex30prepgrade)。

42、在根據(jù)本發(fā)明的方法的優(yōu)選實施方案中，來自菠蘿植物莖的提取物是bbp。

43、根據(jù)本發(fā)明的方法的優(yōu)點是獲得了菠蘿蛋白酶抑制劑異形體的混合物，其不含菠蘿植物的莖提取物的其他成分。

44、通過所述方法可以提供菠蘿蛋白酶抑制劑混合物(即所有菠蘿蛋白酶抑制劑異形體的全部)，其產(chǎn)率為菠蘿酶基粉(bbp＝市售的菠蘿植物的莖提取物)的起始物質(zhì)的約為1重量％至50重量％，優(yōu)選5重量％至30重量％。由于在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)報道的單獨的菠蘿酶蛋白酶抑制劑異形體為0.1重量％或0.3重量％，這意味著根據(jù)本發(fā)明的方法對現(xiàn)有技術(shù)有很大的改進(jìn)。因此，根據(jù)本發(fā)明的從bbp中分離菠蘿蛋白酶抑制劑異形體的方法比現(xiàn)有技術(shù)的方法更有效和經(jīng)濟(jì)。

45、還可能提供單獨的超純菠蘿蛋白酶抑制劑異形體。這可以通過在第二維度(＝第二步)中進(jìn)行ax色譜和在第三維度(＝第三步)中進(jìn)行rp-hplc色譜來實現(xiàn)。因此，可以從菠蘿植物的莖提取物中分離出單獨的超純菠蘿蛋白酶抑制劑異形體。

46、本發(fā)明包括菠蘿蛋白酶抑制劑，其包含或組成為具有與seq?id?no.1至seq?idno.7之一的序列具有至少90％、優(yōu)選95％、特別優(yōu)選100％同一性的氨基酸序列(已知的菠蘿蛋白酶抑制劑i至vii的序列)的至少一種肽。

47、根據(jù)本發(fā)明，菠蘿蛋白酶抑制劑中的至少一種肽(例如菠蘿蛋白酶抑制劑的至少一個異形體)相對于污染分子和其他菠蘿蛋白酶異形體可以具有至少80重量％、優(yōu)選至少90重量％、特別優(yōu)選至少95重量％的純度。

48、根據(jù)本發(fā)明，還可以提供菠蘿蛋白酶抑制劑，其是至少兩種、優(yōu)選至少三種、特別優(yōu)選至少四種菠蘿蛋白酶抑制劑異形體的混合物?；旌衔锟梢匀芜x地包括所有七種已知的菠蘿蛋白酶抑制劑異形體(參見seq?id?no.1至seq?id?no.7)。相比于單獨的菠蘿蛋白酶抑制劑異形體，多種菠蘿蛋白酶抑制劑異形體的混合物的優(yōu)點是可以結(jié)合更大范圍的分子靶標(biāo)，因此具有更好的效果。

49、在其他優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的菠蘿蛋白酶抑制劑至少包括菠蘿蛋白酶抑制劑異形體iv(seq?id?no.4)和/或菠蘿蛋白酶抑制劑異形體v(seq?id?no.5)。

50、對于菠蘿蛋白酶抑制劑與非菠蘿蛋白酶抑制劑的污染分子(例如菠蘿蛋白酶)的比率，該混合物可以具有至少80重量％、優(yōu)選至少90重量％、特別優(yōu)選至少95重量％的純度。

51、根據(jù)本發(fā)明的菠蘿蛋白酶抑制劑中的至少一種肽還可以：

52、a)包含菠蘿植物特有的翻譯后修飾，優(yōu)選糖基化；和/或

53、b)不包含任何翻譯后修飾。

54、根據(jù)本發(fā)明的菠蘿蛋白酶抑制劑可以優(yōu)選使用根據(jù)本發(fā)明的方法制備。

55、根據(jù)本發(fā)明的菠蘿蛋白酶抑制劑可用于醫(yī)學(xué)，優(yōu)選用于治療和/或預(yù)防以至少一種細(xì)胞蛋白酶、優(yōu)選至少一種半胱氨酸蛋白酶的強(qiáng)化表達(dá)為特征的疾病。

56、本發(fā)明還包括菠蘿蛋白酶的混合物，其含有相對于總肽質(zhì)量的小于0.5重量％、優(yōu)選小于0.2重量％、特別優(yōu)選小于0.1重量％的菠蘿蛋白酶抑制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以例如通過分析性sec或rp-hplc測定菠蘿蛋白酶混合物中菠蘿蛋白酶抑制劑的殘留含量。

57、根據(jù)本發(fā)明的菠蘿蛋白酶混合物可以根據(jù)根據(jù)本發(fā)明方法的變體制備。

58、在第六方面，本發(fā)明涉及菠蘿蛋白酶混合物，其用于治療或預(yù)防冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染，所述菠蘿蛋白酶混合物包含相對于總肽質(zhì)量的小于5.0重量％、優(yōu)選小于2.0重量％、更優(yōu)選小于1.0重量％、更優(yōu)選小于0.5重量％、更優(yōu)選小于0.2重量％、特別優(yōu)選小于0.1重量％的菠蘿蛋白酶抑制劑。

59、在第七方面，本發(fā)明還涉及糖化的菠蘿酶蛋白，其包含至少一個與菠蘿酶蛋白共價結(jié)合的糖單元。所述糖化的菠蘿酶蛋白通過外源性非酶糖化產(chǎn)生，特別是糖化的木菠蘿素類凝集素、糖化的菠蘿蛋白酶、糖化的菠蘿酶蛋白酶抑制劑、或其混合物產(chǎn)生。

60、優(yōu)選使用糖化的菠蘿蛋白酶用于治療或預(yù)防由冠狀病毒引起的人或動物的病毒感染。

61、這里更優(yōu)選的實施方案中，至少一個與菠蘿酶蛋白共價結(jié)合的糖單元選自單體己糖或低聚己糖，特別是葡萄糖、半乳糖、和/或其混合物和組合。

62、1個至10個、優(yōu)選1個至5個、特別優(yōu)選1個、2個或3個糖單元通過美拉德反應(yīng)與菠蘿酶蛋白共價結(jié)合。

63、上述糖化的菠蘿酶蛋白尤其可以通過將至少一種菠蘿酶蛋白與至少一種還原糖混合并通過進(jìn)行美拉德反應(yīng)來制備。

64、冠狀病毒可以選自例如正冠狀病毒，優(yōu)選α冠狀病毒、β冠狀病毒、γ冠狀病毒或δ冠狀病毒、以及l(fā)etovirus，優(yōu)選alphaletovirus，特別是milecovirus，例如microhylaletavirus1(mlev-1)。

65、這里，正冠狀病毒特別選自：

66、α冠狀病毒，選自冠狀病毒，例如蝙蝠冠狀病毒cdphe15；decacovirus，例如馬鐵菊頭蝠α冠狀病毒hub-2013；duvinacovirus，例如人冠狀病毒229e(hcov229e)；luchacovirus，例如鹿城褐家鼠冠狀病毒；minacovirus，例如雪貂冠狀病毒或水貂冠狀病毒1；minunacovirus，例如長翼蝠冠狀病毒1或長翼蝠冠狀病毒hku8；myotacovirus，例如大足鼠耳蝠α冠狀病毒sax-2011或中華山蝠α冠狀病毒sc-2013；pedacovirus，例如豬流行性腹瀉病毒(pedv)或黃蝠冠狀病毒512；rhinacovirus，例如菊頭蝠冠狀病毒hku2或豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(sads-cov)；setracovirus，例如人冠狀病毒nl63(hcov-nl63)或nl63相關(guān)蝙蝠冠狀病毒株btkynl63-9b；tegacovirus，例如α冠狀病毒1，特別是犬冠狀病毒(ccov)、貓冠狀病毒(fcov)或傳染性胃腸炎病毒(tgev)；

67、β冠狀病毒選自sarbecovirus，例如重癥急性呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒(“sars相關(guān)冠狀病毒”，特別是重癥急性呼吸綜合癥冠狀病毒2型(sars-cov-2)及其同義或非同義突變體，包括變體b.1.1.7、b.1.351、b.1.617、p.1、p.2、b.1.525、b.1.427、b.1.429、l452r、fin-796h、b.1.526、s:h66d、s:g142v、s:d215g、s:v483a、s:d614g、s:h655y、s:g669s、s:q949r、s:n1187d、orf6:k23-、orf6:v24-、orf6:s25-、orf6：i26-、orf6:w27-、orf6:n28-、orf6:l29-、orf6:d30-、orf6:y31-、s:y144-、e484k、voc?20i/484q、b.1、r.1、a.2.5、c.36，b.1.1.318，b.1.621，b.1.623，重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒(sars-cov，sars冠狀病毒，也稱sars-cov-1)，embecovirus，例如β冠狀病毒1，特別是牛冠狀病毒(bcov)、馬冠狀病毒(ecov-nc99)、人冠狀病毒oc43(hcov-oc43)、豬血凝性腦脊髓炎病毒(hev)、puffinosis冠狀病毒(pcov)、人腸道冠狀病毒(hecov)；中國家鼠冠狀病毒hku24；人冠狀病毒hku1(hcov-hku1)；鼠冠狀病毒例如小鼠肝炎病毒(mhv)或大鼠冠狀病毒(rtcov)；hibecovirus，例如蹄蝠β冠狀病毒浙江2013；merbecovirus(以前是mers相關(guān)冠狀病毒，mersr-cov)，例如刺猬冠狀病毒1、中東呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒(mers-cov)、伏翼蝠冠狀病毒hku5、扁顱蝠冠狀病毒hku4；nobecovirus，例如果蝠冠狀病毒gccdc1或果蝠冠狀病毒hku9；或batcov?ratg13、manis-cov?srr10168377和srr10168378；

68、γ冠狀病毒選自cegavirus，例如白鯨冠狀病毒sw1；或igacovirus，例如禽冠狀病毒，特別是火雞冠狀病毒(tcov)、野雞冠狀病毒(phcov)、傳染性支氣管炎病毒(ibv)；和

69、δ冠狀病毒選自andecovirus，例如赤頸鴨冠狀病毒hku20；buldecovirus，例如夜鶯冠狀病毒hku11(bucov?hku11)、冠狀病毒hku15、文鳥冠狀病毒hku13(muncov?hku23)、繡眼鳥冠狀病毒hku16、或鶇冠狀病毒hku12(thcov?hku2)；herdecovirus，如夜鷺冠狀病毒hku19；和moordecovirus，例如黑水雞冠狀病毒hku21。

70、根據(jù)本發(fā)明，如上所述的菠蘿蛋白酶、木菠蘿素類凝集素、提取物、組合制劑、菠蘿蛋白酶抑制劑、菠蘿蛋白酶混合物或糖化的菠蘿酶蛋白，均適合根據(jù)本發(fā)明的用于治療由冠狀病毒感染引起的癥狀，所述癥狀特別是發(fā)熱、咳嗽、肺炎、淋巴細(xì)胞減少的社區(qū)獲得性肺炎(l-cap)、胸膜炎、呼吸困難、不適和/或疲勞、痰、嗅覺喪失和/或味覺缺失、呼吸短促、肌肉炎和/或咽喉炎、關(guān)節(jié)痛、胸痛、咽痛、頭痛、背痛、瘧疾、惡心和/或嘔吐、畏寒、腹瀉、咳血、淋巴細(xì)胞減少、手、腳或口腔皮疹、兩側(cè)非化膿性結(jié)膜炎、肌張力低下、休克、高酪氨酸血癥、心肌功能障礙、心包炎和/或心瓣膜炎癥、凝血功能障礙、兒童多系統(tǒng)炎癥綜合征(mis-c)和結(jié)膜腫脹。

71、有利地，前述的提取物或組合制劑中，至少一種菠蘿蛋白酶的總量與至少一種木菠蘿素類凝集素的總量的重量比為1:99至99.9:0.1，優(yōu)選50:50至99:1，更優(yōu)選60:40至98:2，更優(yōu)選70:30至97:3，更優(yōu)選80:20至96:4，特別優(yōu)選90:10至95:5。

72、權(quán)利要求10至12中限定了jrl/菠蘿酶的重量比或量，例如它們存在于天然產(chǎn)物(提取物)中或以其天然比例使用時。提取物或組合制劑優(yōu)選包含菠蘿蛋白酶，所有菠蘿蛋白酶在提取物或組合制劑中的總濃度優(yōu)選為0.1重量％至80.0重量％，更優(yōu)選1.0重量％至50.0重量％，特別優(yōu)選5.0重量％至20.0重量％。

73、更有利地，提取物或組合制劑包含至少一種木菠蘿素類凝集素，該至少一種木菠蘿素類凝集素在提取物中的總濃度優(yōu)選為0.01重量％至50.0重量％，更優(yōu)選0.1重量％至10.0重量％，特別優(yōu)選2.0重量％至8.0重量％。

74、有利地，所有上述實施方案中的菠蘿蛋白酶、木菠蘿素類凝集素、提取物、組合制劑、菠蘿蛋白酶抑制劑、菠蘿蛋白酶混合物或糖化的菠蘿酶蛋白，其為以下形式或作為以下形式的組分：散劑、顆粒劑、片劑，特別是薄膜片劑、硬膠囊、軟膠囊、泡騰片劑、溶液，特別是注射溶液或輸注溶液、乳劑、混懸劑、藥膏、乳膏、膏劑、凝膠、酊劑、滴眼劑、粉霧劑、鼻噴霧劑、栓劑或透皮貼劑。

75、同樣有利地，在本發(fā)明的上述各個方面中，提取物、菠蘿蛋白酶、木菠蘿素類凝集素、菠蘿蛋白酶抑制劑、菠蘿蛋白酶混合物或糖化的菠蘿酶蛋白經(jīng)口或口服，通過靜脈注射、皮下注射或肌肉注射，通過輸注到鼻黏膜、口黏膜或咽黏膜上，通過吸入，通過施用到眼表、直腸，和/或通過透皮貼劑進(jìn)行施用。

76、根據(jù)本發(fā)明各個方面的示例性的實施方案：施用每周一次至每小時一次、優(yōu)選每天一次至每天10次、特別優(yōu)選每天1至3次、或連續(xù)進(jìn)行。

77、根據(jù)本發(fā)明的主題將參考以下附圖和以下實施例更詳細(xì)地解釋，但不限于這里所示的具體實施方案。