本發(fā)明涉及醫(yī)療器械敷料技術領域，尤其是涉及一種醫(yī)用多層胎盤組織植入物的制作方法。
背景技術：
羊膜是一種天然的優(yōu)良生物學材料，正常羊膜薄而透明，無血管及神經生長。它在臨床上可作為基底膜促進上皮形成，可促進上皮細胞移性分化、增強基底上皮細胞黏附、防止上皮細胞凋亡，促進上皮的增殖分化；能抑制炎癥和新生血管；能抑制纖維化，達到抗瘢痕化的作用，同時還可以抑制由上皮細胞誘導的肌成纖維細胞分化，減少瘢痕形成；它可以作為細胞移行生長的良好支架，用于組織工程重建修復；它無抗原性，臨床應用不會發(fā)生排斥反應，安全性高。目前國內生物羊膜的處理方法中為使羊膜的免疫原性降到最低，通過各種化學試劑對羊膜進行脫細胞處理，一方面導致化學試劑殘留量過多而影響患者健康；另一方面也容易破壞羊膜的組成結構，導致韌性太差而不能滿足臨床需求。cn106540323a研發(fā)的生物羊膜產品在這兩方面得到很大程度地改善，然而韌性雖然增強，卻仍顯單薄、易撕裂。
技術實現要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種醫(yī)用多層胎盤組織植入物的制作方法。
為實現上述目的，本發(fā)明采用以下內容：
一種醫(yī)用多層胎盤組織植入物的制作方法，包括以下步驟：
1)獲取合格的胎盤組織材料；
2)從胎盤組織材料分離出羊膜和絨毛膜組織；
3)對羊膜和絨毛膜組織進行處理，去除血污、細胞和dna，并對去細胞的組織進行消毒；
4)疊層干燥處理
按照順序將消毒的羊膜和/或絨毛膜組織多層疊放在模具上，然后將模具放入烘箱中，在30-50℃溫度條件下干燥20-120分鐘，得到干燥組織；
多層疊放的順序滿足：
①當為多層羊膜時，
第一層羊膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層羊膜：同第一層羊膜；
最后一層羊膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
②當為多層絨毛膜時，
第一層絨毛膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層絨毛膜：同第一層絨毛膜；
最后一層絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
③當為多層羊膜和絨毛膜的混合結構時，
第一層羊膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
中間層羊膜：同第一層羊膜；
最后一層羊膜或絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
此種混合結構時，須注明干燥組織的面向性；
5)按照醫(yī)療需要切割成相應的尺寸和形狀，完成。
進一步地，步驟2)中，將獲取的胎盤組織在無菌條件下送至控制處理環(huán)境并浸泡在盛有0.9-3.0wt％氯化鈉水溶液(作為潤洗液)的無菌盆中進行潤洗，將羊膜和絨毛膜組織從其他胎盤組織中分離出來。
進一步地，步驟3)中，首先，用0.9-3.0wt％氯化鈉水溶液反復清洗分離出來的羊膜和絨毛膜組織以去除血污；然后，將除去血污的組織浸泡在0.9-4.0wt％氯化鈉水溶液中，在室溫下搖動混合15-240分鐘以去除細胞；之后，將去除細胞的組織放入去dna溶液中，在室溫下搖動混合1-9小時至組織中殘留dna含量滿足不大于250納克/每毫克組織(干重)；最后，將去dna的組織浸泡到消毒液里進行消毒處理。所述消毒液可以是乙醇、異丙醇、過乙酸等。
優(yōu)選地，步驟4)中，按照順序將消毒的羊膜和/或絨毛膜組織多層疊放，先對多層膜組織的上下兩面同時施加10-50psi壓力5-30分鐘，之后再放在模具上，進行干燥處理?？紤]到疊層后可能粘合效果不佳，此時，使用壓力進行擠壓粘連，將每層膜的成纖維細胞層面作為膠聯材料把各層膜穩(wěn)固粘在一起，之后再進行干燥處理。
優(yōu)選地，步驟4)中，先使用葡萄糖、蔗糖溶液、hespan、生理鹽水或無菌水噴灑于膜上，之后再按照順序多層疊放在模具上，進行干燥處理。使用葡萄糖、蔗糖溶液、hespan、生理鹽水或無菌水噴灑于膜上可以增強膜之間的粘合效果。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
本發(fā)明制得的醫(yī)用多層胎盤組織植入物對深度創(chuàng)面具有更好的粘附效果；韌性強，不易撕裂。
具體實施方式
為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結合優(yōu)選實施例對本發(fā)明做進一步的說明。本領域技術人員應當理解，下面所具體描述的內容是說明性的而非限制性的，不應以此限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例
一種醫(yī)用多層胎盤組織植入物的制作方法，包括以下步驟：
1、獲取胎盤組織材料：胎盤組織取材于i)全期，健康，篩選合格的剖腹分娩；或者ii)全期，健康，常規(guī)陰道分娩。捐獻胎盤組織的分娩母親必須經過醫(yī)療和社會健康史篩選并合格，并且分娩時的血液和組織樣本的常規(guī)傳染病檢測也必須符合標準。組織的獲取，包裝及運輸都必須嚴格按照書面方案執(zhí)行，達到最大程度地保存胎盤組織原有的特性。
2、從胎盤組織材料分離出羊膜和絨毛膜組織：將獲取的胎盤組織在無菌條件下送至控制處理環(huán)境并浸泡在盛有0.9-3.0wt％氯化鈉水溶液(作為潤洗液)的無菌盆中進行潤洗，將羊膜和絨毛膜組織從其他胎盤組織中分離出來。
3、對羊膜和絨毛膜組織進行處理，去除血污、細胞和dna，并對去細胞的組織進行消毒：首先，用0.9-3.0wt％氯化鈉水溶液反復清洗分離出來的羊膜和絨毛膜組織以去除血污；然后，將除去血污的組織浸泡在0.9-4.0wt％氯化鈉水溶液中，在室溫下搖動混合15-240分鐘以去除細胞；之后，將去除細胞的組織放入去dna溶液(由hepes溶液、mgcl2溶液、cacl2溶液、純化水、dna酶混合組成)中，在室溫下搖動混合1-9小時至組織中殘留dna含量滿足不大于250納克/每毫克組織(干重)；最后，將去dna的組織浸泡在70％異丙醇中浸泡15-90分鐘進行消毒。
4、疊層干燥處理：按照順序將消毒的羊膜和/或絨毛膜組織多層疊放在模具上，然后將模具放入機械對流烘箱(如，memmert公司生產的ufplus-55)中，在30-50℃溫度條件下進行干燥處理。干燥過程中，風要直接吹向膜組織或間接從膜表面吹過。干燥完全一般需要20-120分鐘。實際應用時，在模具上有按照產品規(guī)格設定的框架和申請人的“up”產品標識，將多層膜放上模具后沿著框架之間縫隙進行切割裁剪即可以得到既定的產品規(guī)格。
多層疊放的順序滿足：
①當為多層羊膜時，
第一層羊膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層羊膜：同第一層羊膜；
最后一層羊膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
②當為多層絨毛膜時，
第一層絨毛膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層絨毛膜：同第一層絨毛膜；
最后一層絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
③當為多層羊膜和絨毛膜的混合結構時，
第一層羊膜：基底層面朝下，成纖維細胞層面朝上；
中間層絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上；
中間層羊膜：同第一層羊膜；
最后一層羊膜或絨毛膜：成纖維細胞層面朝下，基底層面朝上。
此種混合結構時，須注明干燥組織的面向性(可使用設計記號，例如前述的“up”字樣標記干燥組織，便于在手術使用時區(qū)分組織的面向性)。
說明：羊膜的基底層面是嬰兒面，成纖維細胞層面是母親面；而絨毛膜的基底層面是母親面，而成纖維細胞層面是嬰兒面。
考慮到疊層后可能粘合效果不佳，該步驟中，按照順序將消毒的羊膜和/或絨毛膜組織多層疊放，可先對多層膜組織的上下兩面同時施加10-50psi壓力5-30分鐘，之后再放在模具上，進行干燥處理。此時，使用壓力進行擠壓粘連，將每層膜的成纖維細胞層面作為膠聯材料把各層膜穩(wěn)固粘在一起。或者，先使用葡萄糖、蔗糖溶液、hespan、生理鹽水或無菌水噴灑于膜上，之后再按照順序多層疊放在模具上，進行干燥處理。使用葡萄糖、蔗糖溶液、hespan、生理鹽水或無菌水噴灑于膜上可以增強膜之間的粘合效果。
5、按照醫(yī)療需要切割成相應的尺寸和形狀并進行包裝。
本發(fā)明制得的醫(yī)用多層胎盤組織植入物較單層生物羊膜具有更多活性因子，絨毛膜含有豐富膠原成分可以更快促進創(chuàng)面愈合，對深度創(chuàng)面具有更好的粘附效果；韌性強，不易撕裂，可更好的進行固定縫合，方便臨床操作，解決了現有單層生物羊膜在臨床使用時容易出現的拉斷、撕裂問題；同時采取類似脫細胞處理工藝來獲取羊膜，保證了多層胚胎組織植入材料的低免疫原性和相對完整的組成成分，從而具有更好的臨床效用。
顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定，對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動，這里無法對所有的實施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā)明的技術方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之列。