本發(fā)明涉及抗生素領(lǐng)域，具體涉及一種天然源植物抗生素的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

抗生素(antibiotics)是由微生物(包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬)或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的次級代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細(xì)胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)?，F(xiàn)臨床常用的抗生素有轉(zhuǎn)基因工程菌培養(yǎng)液中提取物以及用化學(xué)方法合成或半合成的化合物。

目前濫用抗生素已經(jīng)成為一個嚴(yán)重的社會問題。濫用抗生素，可以導(dǎo)致菌群失調(diào)。正常人類的肌體中，往往都含有一定量的正常菌群，它們是人們正常生命活動的有益菌，參與人身體的正常代謝。同時在人體的軀體中，只要這些有益菌群的存在，其他對人體有害的菌群是不容易在這些地方生存的。而人們在濫用抗生素的同時，抗生素是不能識別對人類有益還是有害菌群的，結(jié)果是人身體正常的菌群也被殺死了。這樣其他的有害菌就會在此繁殖，從而形成了“二次感染”，這往往會導(dǎo)致應(yīng)用其他抗生素?zé)o效，死亡率很高?？股氐臑E用和誤用，也導(dǎo)致了許多藥物無法治療的“超級感染”，并產(chǎn)生了“超級細(xì)菌”和“超級病毒”。

濫用抗生素的危害：

1、誘發(fā)細(xì)菌耐藥：病原微生物為躲避藥物在不斷變異，耐藥菌株也隨之產(chǎn)生。目前，幾乎沒有一種抗菌藥物不存在耐藥現(xiàn)象。

2、損害人體器官：抗生素在殺菌同時，也會造成人體損害，影響肝、腎臟功能、胃腸道反應(yīng)等。

3、導(dǎo)致二重感染：在正常情況下，人體的口腔、呼吸道、腸道都有細(xì)菌寄生，寄殖菌群在相互拮抗下維持著平衡狀態(tài)。如果長期使用廣譜抗菌藥物，敏感菌會被殺滅，而不敏感菌乘機(jī)繁殖，未被抑制的細(xì)菌、真菌及外來菌也可乘虛而入，誘發(fā)又一次的感染。

4、造成社會危害：濫用抗生素可能引起某些細(xì)菌耐藥現(xiàn)象的發(fā)生，對感染的治療會變得十分困難。

此外由于長期濫用抗生素，許多對抗生素非常敏感的病原微生物產(chǎn)生了耐藥性，使過去多種神奇的抗生素失去了原有的威力。為了克服抗生素本身的缺點和避免因使用不當(dāng)而帶來的后果，人們不得不對抗生素的使用進(jìn)行嚴(yán)格的限制，同時加大研究開發(fā)新抗生素的力度，天然源植物抗生素就是這種人們期待的新抗生素之一，目前各國都在研究與開發(fā)。我國是草藥的發(fā)源地，抗菌中草藥在抗菌消炎的過程中曾發(fā)揮了重要作用，但要把這些抗菌中草藥開發(fā)成規(guī)模化、劑型化，其工藝比較復(fù)雜，成本較高，且這些抗菌中草藥的抗菌普相對較窄，有的只對革蘭氏陽性菌有效，有的只對革蘭氏陰性菌有效，有的只對病毒有效，在尚未確定病原體之前，很難準(zhǔn)確用藥。

由于天然源植物抗生素來源于自然，具有對人、畜安全，不污染環(huán)境，不易引起抗藥性，在自然環(huán)境中易于降解等優(yōu)點，因此研究與開發(fā)安全性高的植物醫(yī)藥和植物農(nóng)藥，成為當(dāng)今新型殺菌劑創(chuàng)制研究的熱點。同時，植物來源的殺菌劑亦是發(fā)掘新一代醫(yī)藥和農(nóng)藥先導(dǎo)物的重要途徑之一。

經(jīng)檢索，利用水果和堅果制備物具有強活性及強穿透性等特點，對細(xì)菌、真菌、病毒、黑色枯草芽孢等均具有明顯的殺滅功效，可用于防治病原微生物感染，同時還具有調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)作用的天然源植物抗生素還未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種利用水果和堅果制備天然源植物抗生素的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種天然源植物抗生素的制備方法，包括以下步驟：

1)將山楂核、楊梅核殼、酸棗仁殼、橘子核、桃核殼、枇杷核、大棗核殼、杏核殼、桃核殼、李子核殼、柚子核、松子殼、榛子殼為原材料分別加入到干餾釜，采用熱裂解技術(shù)，依據(jù)上述原材料熱裂解的不同收集初始原液，共分三個階段進(jìn)行，分別是80～180℃(RF1)，181～380℃(RF2)，381～550℃(RF3)，將每種原材料三個階段收集到的初始原液分別合并得每種原材料的合并初始原液；

2)將步驟1)得到的每種原材料的合并初始原液按照比例混合，得到復(fù)合初始原液；

3)將步驟2)得到的復(fù)合初始原液存入貯存槽靜置1-3個月，讓不穩(wěn)定成分完全發(fā)生氧化、聚合作用而沉淀，除去懸浮物質(zhì)和其他固體顆粒，用泵抽取中層澄清液體，加入原液池，經(jīng)過濾后再經(jīng)原水泵進(jìn)入精濾裝置，再依次經(jīng)超濾裝置、納濾裝置、高壓反滲透膜裝置和低壓反滲透膜裝置，控制各裝置對應(yīng)的濃水部分回流，調(diào)整流體流速和操作壓力，調(diào)整工藝參數(shù)，確定設(shè)備穩(wěn)定運行的原液處理量為300L/h，對復(fù)合初始原液低溫濃縮分水，得到穩(wěn)定的透明液體即為天然源植物抗生素。

具體地，所述步驟2)中每種原材料的合并初始原液的比例以重量份計，具體如下：山楂核4-8.5份、楊梅核殼4.5-7份、酸棗仁殼4-7.5份、橘子核4-7份、桃核殼5-9.5份、枇杷核5-8份、大棗核殼5-5.5份、杏核殼5.5-9.5份、桃核殼6-9份、李子核殼4-6.8份、柚子核4-7份、松子殼3.5-6份、榛子殼3.5-6.5份。

具體地，所述步驟3)中制得的天然源植物抗生素以酚類和有機(jī)酸含量計，其中酚類以苯酚含量計，不低于7.04％；有機(jī)酸類以乙酸含量計，不低于18.61％，密度為1.0033；pH值為1.5～3.0。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素作為殺真菌、細(xì)菌藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素作為抗病毒藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素在植物生長方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素作為飼料添加劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素在保健品領(lǐng)域的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備的天然源植物抗生素在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用。

本發(fā)明的天然源植物抗生素是從植物提取的次級代謝產(chǎn)物是植物體內(nèi)合成的具有抗病原體或其他活性，具有多種結(jié)構(gòu)類型的一類物質(zhì)。經(jīng)儀器分析測定，其主要成分包含以下種類成分：有機(jī)酸類、萜烯類、生物堿類、類黃酮、抗毒素類、甾體、醛類、酮類、醇類、酚類、木質(zhì)素類、皂甙、特殊氨基酸、多肽、多糖、多酚類、糖蛋白、核糖體失活蛋白類、呋喃及吡喃衍生物等植物活性物質(zhì)。其中共有物質(zhì)分別為：乙酸、丙酸、2-甲氧基-苯酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚、苯酚、愈創(chuàng)木酚、4-甲基-苯酚、2，6-二甲氧基-苯酚、1，4：3，6-雙脫水-α-D-吡喃葡萄糖、2-甲基-2-環(huán)戊烯酮、3-甲基-2-環(huán)戊烯酮和4-羥基-3-甲氧基苯丙酮。

現(xiàn)代科學(xué)研究已經(jīng)證實：上述種類成分中的多酚類、黃酮類、乙酸以及酚類等成分是具有很強的殺真菌、殺細(xì)菌和抗病毒活性物質(zhì)；針對禽流感病毒、甲、乙型流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、艾滋病毒(HIV一1)、SARS病毒、人體呼吸系統(tǒng)合孢體病毒(RSV)、胃腸炎病毒、肝炎病毒、對芽孢桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、假單胞菌、革蘭氏陰性菌均、革蘭氏陽性菌等均有很強的抑制作用；同時具有抗感染、抗過敏、抗氧化、抗出血和血管張等作用；對血脂的保護(hù)作用(包括它們的氧化性)；多酚類物質(zhì)所具有的抗氧化劑作用表現(xiàn)為，它們能通過清除自由基誘導(dǎo)的脂類過氧化反應(yīng)，來保護(hù)血脂不受氧化傷。有證據(jù)表明多酚類化合物具有抗氧化、強化血管壁、促進(jìn)腸胃消化、降低血脂肪、與增加身體抵抗力，并具有軟化血管、防止動脈硬化、血栓形成、降低膽固醇和甘油三脂等作用；還能利尿、降血壓、抑制細(xì)菌與癌細(xì)胞生長，及幫助消化。

本發(fā)明所述天然源植物抗生素作為殺真菌藥物的應(yīng)用如下：

1)以去離子水稀釋1-5倍，pH值為3.5～5，用于各種真菌、細(xì)菌引起的腳氣、腳癬、手癬、股癬、體癬等皮膚癬病及婦女霉菌性陰道炎；嬰幼兒童及孕產(chǎn)婦臀部腫脹、皮炎、皮癬、瘙癢、痱子、蚊蟲叮咬、外陰感染；以及嬰幼兒童因糞、尿、酸、堿或微生物生長引起的紅腫刺激，尿布疹，具有抑菌消炎、除味功效。

2)以去離子水稀釋5-10倍，pH值為4～6，用于長期臥床的病人由于受力點集中，長期的血液不流通和免疫力下降而引起的病毒及細(xì)菌感染，以及用于褥瘡及痔瘡、肛周炎、肛門膿腫、肛門出血，可有效緩解癥狀。

3)以去離子水稀釋1-5倍，pH值為3.5～5，用于皮膚黏膜的消毒滅菌、醫(yī)療殺菌、家庭室內(nèi)、辦公場所消毒滅菌、公共衛(wèi)生消毒防治、垃圾站消毒除味、動物特別是家禽疾病預(yù)防、食品防腐及調(diào)味、水果保鮮等領(lǐng)域具有應(yīng)用價值，推廣和開發(fā)利用前景廣闊。

4)以去離子水稀釋2-6倍，pH值為3.5～5.5，可用于預(yù)防病毒病菌提高自身免疫力的口服保健產(chǎn)品，具有明顯提高自身免疫力效果。

本發(fā)明所述天然源植物抗生素抑菌范圍廣，對臨床常見致病菌如金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、變形桿菌、產(chǎn)氣桿菌、淋球菌、克氏肺炎桿菌、綠濃桿菌及大腸桿菌等抑制作用較強。還可明顯抑制并殺滅紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、斷毛發(fā)癬菌、絮狀表皮癬菌、石膏樣小孢子菌、羊毛小孢子菌；對白色念球菌、申克氏孢子絲菌及裴氏著色菌也具有明顯抑制作用，且效果與化學(xué)抗生素比較無顯著差異。

本發(fā)明采用多級膜分離低溫濃縮提取的天然源植物抗生素，避免了高溫提取對植物中有效成份的破壞，所含弱酸組分，不僅針對病毒、真菌、細(xì)菌的滅活效果顯著，弱酸組分可以被人體輕易分解，安全無害，且可有效提高人體免疫力，而且成份明確，制備的植物抗生素性能穩(wěn)定。

本發(fā)明采用多級膜分離低溫濃縮提取的天然源植物抗生素，能夠迅速殺滅引起霉菌性陰道炎、腳氣、小兒鵝口瘡等多種疾病的金黃色葡萄球菌和白色念珠菌。對多種陰道炎、皮膚病、濕疹、神經(jīng)性皮炎、手癬、灰指甲、牛皮癬治療療效明顯。

本發(fā)明采用多級膜分離低溫濃縮提取的天然源植物抗生素制成的飲料具有強化腸胃、活化細(xì)胞機(jī)能，去除體脂肪和預(yù)防老化、肝病、皮膚疾病、糖尿病等均有良好效果；添加到食品飲料中，具有很強的抗酸化作用，其SOD活性值很高，可去除體內(nèi)的活性酸素，對於過度疲勞、吸煙、過飽應(yīng)激反應(yīng)等產(chǎn)生的活性酸素，有很好的清除作用，并使添加天然源植物抗生素的食品獲得保健和預(yù)防疾病的作用；添加于化妝品中具有軟化皮膚表面角質(zhì)，殺菌消毒、保養(yǎng)皮膚等良好的作用；用于食品防腐劑和食品添劑起到食品防腐、保鮮、儲存等方面也具有廣泛的應(yīng)用；用于創(chuàng)傷口，具有愈合傷口、消炎、止痛、止癢和消腫作用。此外，天然源植物抗生素對植物生長具有調(diào)節(jié)作用，土壤中施用天然源植物抗生素能抑制有礙植物生長的微生物類的繁殖,并能殺死根瘤線蟲等害蟲；還可制造肥料、防除雜草、促進(jìn)植物生長、用作蟲害的忌避劑以及家畜飼料的添加劑等。

本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明所述天然源植物抗生素抗菌譜廣，對病毒、真菌、細(xì)菌的滅活效果顯著，安全穩(wěn)定，集治療、預(yù)防、保健于一體，在殺菌消炎同時，不僅保護(hù)皮膚酸性環(huán)境不受破壞，而且能加強自凈作用，具有促進(jìn)粘膜創(chuàng)面愈合，修復(fù)病變組織增強自然防御功能，可有效預(yù)防和治療病原微生物對人體的侵害。因此，本發(fā)明可以廣泛應(yīng)用于疾病預(yù)防、抗衰保健、肌膚護(hù)理、衛(wèi)生用品、化妝品、日化用品、空氣消毒、食品、醫(yī)藥、飼料添加劑、食品添加劑、脫臭劑、土壤改良劑、病蟲害防治、提高蔬菜和農(nóng)作物產(chǎn)量等與人類生活環(huán)境密切相關(guān)的多個領(lǐng)域，具有廣泛的利用價值及開發(fā)前景。

附圖說明

圖1是本發(fā)明制備天然源植物抗生素的工藝流程圖。

圖2是實施例1中樣品1納濾裝置初始出口濃水的GC-MS總離子流圖。

圖3是實施例1中樣品2低壓反滲透裝置出口淡水的GC-MS總離子流圖。

具體實施方式

以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實例1

將山楂核、楊梅核殼、酸棗仁殼、橘子核、桃核殼、枇杷核、大棗核殼、杏核殼、桃核殼、李子核殼、柚子核、松子殼、榛子殼的果核、果殼為原材料分別加入到干餾釜，采用熱裂解技術(shù)，依據(jù)上述原材料熱裂解的不同收集初始原液，共分三個階段進(jìn)行，分別是80～180℃(RF1)，181～380℃(RF2)，381～550℃(RF3)，將這三個階段收集到的初始原液合并。

再將根據(jù)以上原材料得到的合并初始原液按比例：山楂核6.5、楊梅核殼6、酸棗仁殼5、橘子核4、桃核殼7.5、枇杷核7、大棗核殼5.5、杏核殼6、桃核殼6、李子核殼4、柚子核5、松子殼4、榛子殼3.5混合得到復(fù)合初始原液；并將復(fù)合初始原液存入貯存槽，靜置1-3個月，讓不穩(wěn)定成分完全發(fā)生氧化、聚合等作用而沉淀，除去懸浮物質(zhì)和其他固體顆粒，用泵抽取中層澄清液體，加入原液池，經(jīng)過濾后再經(jīng)原水泵進(jìn)入精濾裝置，再依次經(jīng)超濾裝置、納濾裝置、高壓反滲透膜裝置和低壓反滲透膜裝置，控制各裝置對應(yīng)的濃水部分回流，調(diào)整流體流速和操作壓力，調(diào)整工藝參數(shù)，確定設(shè)備穩(wěn)定運行的原液處理量為300L/h。膜分離法采用低溫濃縮，能最大限度保留各種生物質(zhì)本體的完整性。本發(fā)明利用多級膜分離系統(tǒng)對復(fù)合初始原液進(jìn)行分級處理，最終實現(xiàn)對復(fù)合初始原液低溫濃縮分水，得到穩(wěn)定的透明液體即為本發(fā)明的天然源植物抗生素。工藝流程圖如圖1所示。

依次開啟超濾裝置、納濾裝置、高壓反滲透裝置和低壓反滲透裝置，調(diào)整工藝參數(shù)，確定設(shè)備穩(wěn)定運行的原液處理量為300L/h時，對應(yīng)各部分的工藝數(shù)據(jù)見表1。

表1原液處理量為300L/h時對應(yīng)各裝置的工藝參數(shù)

對各級膜的分離效果進(jìn)行考察，采用分級模式，分別對納濾裝置和反滲透膜裝置進(jìn)行了開車運行，調(diào)整納濾裝置濃液出口流量至無回流狀態(tài)，分別對納濾裝置未經(jīng)循環(huán)的初始出口濃水(樣品1)和低壓反滲透裝置出口淡水(樣品2)取樣進(jìn)行GC-MS分析，驗證納濾膜和反滲透膜的有效性。

結(jié)果與討論：

GC—MS分析測定結(jié)果

樣品1和樣品2經(jīng)預(yù)處理后分別取樣進(jìn)行測量，根據(jù)圖庫檢索和人工分析譜圖確定樣品中主要成分，并根據(jù)面積歸一法確定百分含量，樣品的總離子流圖見圖2和圖3，對應(yīng)主要成分百分含量見表2和表3。

表2樣品1主要成分及含量

表3樣品2主要成分及含量

從表2中可知，納濾裝置出口濃水中同時含有大分子有機(jī)物和小分子有機(jī)物，與初始原液分析結(jié)果相一致，說明經(jīng)超濾分離后的液體成分并沒有明顯變化。表2和表3相比較，結(jié)果顯示，經(jīng)低壓反滲透裝置分離后淡水中不含高分子化合物，小分子化合物的含量也大大降低，說明該套裝置能有效的對初始原液的混合液進(jìn)行濃縮和分離得到本發(fā)明的一種天然源植物抗生素。

實例2

將山楂核、楊梅核殼、酸棗仁殼、橘子核、桃核殼、枇杷核、大棗核殼、杏核殼、桃核殼、李子核殼、柚子核、松子殼、榛子殼的果核、果殼為原材料分別加入到干餾釜，采用熱裂解技術(shù)，依據(jù)上述原材料熱裂解的不同收集初始原液，共分三個階段進(jìn)行，分別是80～180℃(RF1)，181～380℃(RF2)，381～550℃(RF3)，將這三個階段收集到的初始原液合并。

再將根據(jù)以上原材料得到的合并初始原液按比例：山楂核4、楊梅核殼4.5、酸棗仁殼7.5、橘子核5、桃核殼9.5、枇杷核8、大棗核殼5.3、杏核殼9.5、桃核殼8、李子核殼5、柚子核7、松子殼6、榛子殼6.5混合得到復(fù)合初始原液；并將復(fù)合初始原液存入貯存槽，靜置1-3個月，讓不穩(wěn)定成分完全發(fā)生氧化、聚合等作用而沉淀，除去懸浮物質(zhì)和其他固體顆粒，用泵抽取中層澄清液體，加入原液池，經(jīng)過濾后再經(jīng)原水泵進(jìn)入精濾裝置，再依次經(jīng)超濾裝置、納濾裝置、高壓反滲透膜裝置和低壓反滲透膜裝置，控制各裝置對應(yīng)的濃水部分回流，調(diào)整流體流速和操作壓力，調(diào)整工藝參數(shù)，確定設(shè)備穩(wěn)定運行的原液處理量為300L/h。膜分離法采用低溫濃縮，能最大限度保留各種生物質(zhì)本體的完整性。本發(fā)明利用多級膜分離系統(tǒng)對復(fù)合初始原液進(jìn)行分級處理，最終實現(xiàn)對復(fù)合初始原液低溫濃縮分水，得到穩(wěn)定的透明液體即為本發(fā)明的天然源植物抗生素。

實施例3

將山楂核、楊梅核殼、酸棗仁殼、橘子核、桃核殼、枇杷核、大棗核殼、杏核殼、桃核殼、李子核殼、柚子核、松子殼、榛子殼的果核、果殼為原材料分別加入到干餾釜，采用熱裂解技術(shù)，依據(jù)上述原材料熱裂解的不同收集初始原液，共分三個階段進(jìn)行，分別是80～180℃(RF1)，181～380℃(RF2)，381～550℃(RF3)，將這三個階段收集到的初始原液合并。

再將根據(jù)以上原材料得到的合并初始原液按比例：山楂核8.5、楊梅核殼7、酸棗仁殼4、橘子核7、桃核殼5、枇杷核5、大棗核殼5、杏核殼5.5、桃核殼9、李子核殼6.8、柚子核4、松子殼3.5、榛子殼5混合得到復(fù)合初始原液；并將復(fù)合初始原液存入貯存槽，靜置1-3個月，讓不穩(wěn)定成分完全發(fā)生氧化、聚合等作用而沉淀，除去懸浮物質(zhì)和其他固體顆粒，用泵抽取中層澄清液體，加入原液池，經(jīng)過濾后再經(jīng)原水泵進(jìn)入精濾裝置，再依次經(jīng)超濾裝置、納濾裝置、高壓反滲透膜裝置和低壓反滲透膜裝置，控制各裝置對應(yīng)的濃水部分回流，調(diào)整流體流速和操作壓力，調(diào)整工藝參數(shù)，確定設(shè)備穩(wěn)定運行的原液處理量為300L/h。膜分離法采用低溫濃縮，能最大限度保留各種生物質(zhì)本體的完整性。本發(fā)明利用多級膜分離系統(tǒng)對復(fù)合初始原液進(jìn)行分級處理，最終實現(xiàn)對復(fù)合初始原液低溫濃縮分水，得到穩(wěn)定的透明液體即為本發(fā)明的天然源植物抗生素。

實施例4

本發(fā)明天然源植物抗生素成分所含乙酸的測定：

1.儀器與試劑

儀器：島津LG-1200高效液相色譜儀，975型紫外檢測器，C---R6A數(shù)據(jù)處理機(jī)。

試劑：除乙酸為色譜純外，其他試劑均為分析純；硅膠GF254為青島海洋化工廠生產(chǎn)。

2.色譜條件：

分析柱：YMC---DDS---AQ(150mm×6mm，5u)，20ul定量閥，檢測波長225nm，流動相0.2mol/L醋酸銨---甲醇(85∶15)，流速1.0ml/min，衰減6，紙速cm/min，0.02AuFs。

3.實驗與結(jié)果：

精確稱取乙酸對照品0.1克置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，分別取其0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml至10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行操作，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：

y＝35.94x+0.393；r＝0.9994

結(jié)果表明：乙酸濃度在0.05～0.30mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

樣品處理：取本發(fā)明天然源植物抗生素5ml，置分液漏斗中，依次加乙醚10，5，5ml提取，合并提取液，水浴上蒸發(fā)至干，殘渣用乙醇溶解，溶解液置100ml容量瓶中，加乙醇至刻度，備用。

對照品溶液的制備：精確稱取乙酸對照品0.1g置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，取此液2.0ml置10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，備用。

含量測定取實施例1-3的樣品3批，按上述色譜條件測定，計算含量，苯酚以mg/ml計的百分含量為18.61％、18.83％、18.85％。

4.回收試驗：

取已知含量的天然源植物抗生素制劑3.6g，精密稱定，共6份，分別精密加入苯酚對照溶液(7.0531mg/ml-1)1ml，置250ml圓底燒瓶中，加水150ml，連接揮發(fā)油測定器，照供試品制備項下方法處理測定，平均回收率為99.58％，RSD為0.17％。

實施例5

本發(fā)明天然源植物抗生素所含成分苯酚的測定：

1、儀器和材料

GC-122氣相色譜儀，苯酚，天津市光成化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，天然源植物抗生素(自制)萘、乙酸乙酯和無水硫酸鈉分析純。

2、方法與結(jié)果

色譜條件色譜柱為聚乙二醇(PEG)-20M，柱溫120℃；氣化室溫度為240℃；檢測器；氫火焰離子化檢測器，溫度為280℃，流速1.5ml/min^-1；H2流速30ml/min^-1；空氣流速350ml/min^-1。

校正因子測定取萘100mg，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1ml含100mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取苯酚對照品40mg，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1ml含苯酚4g的溶液，作為對照品溶液，精密量取對照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各1ml，置10ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻、精精吸取1μl注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，按平均峰面積計算較正因子。

供試品溶液的制備取樣品天然源植物抗生素制劑，精密稱定，取約8g，精密稱定，置250ml圓底燒瓶中，加水150ml，搖勻，連接揮發(fā)油測定器，自測定器上端加水使充滿刻度部分，再加入乙酸乙酯4ml連接回流冷凝管，加熱回流4h，放冷，將揮發(fā)油測定器中液體移至分液漏斗中，用少量乙酸乙酯洗滌冷凝管，并入分液漏斗，分取乙酸乙酯層，用鋪有無水硫酸鈉0.6g的垂熔玻璃漏斗濾過，濾液置10ml量瓶中，用少量乙酸乙酯洗滌溶器，洗液并入同一瓶中，精密加入1ml內(nèi)標(biāo)溶液，加乙酸乙酯至刻度，搖勻、即得，精密吸取供試品溶液1ml，注入氣相色譜儀，測定。

線性關(guān)系考察精密稱取苯酚對照品220mg，置25ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，再分別精密移取1、3、5、7、9ml置100ml量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液1ml，注入氣相色譜儀，測定峰面積，以苯酚進(jìn)行濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方段：C＝56.12x+0.435；r＝0.9999，表明苯酚在5～50ug/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度試驗吸取對照品溶液1μl重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，RSD＝0.2％(n＝5)。

重現(xiàn)性試驗取同批樣品5份，分別按供試品制備項下制備，測苯酚含量，RSD＝0.3％(n＝5)。

空白對照試驗按處方比例及工藝配制空的制劑，同供試液制備方法制得空白對照溶液，照含量測定項下方法試驗，取對照品、樣品及空白對照溶液各1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果陰性樣品溶液不干擾苯酚的含量測定。

穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣測定峰面積，并計算RSD＝0.9％，表明樣品液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收率試驗取乙知含量的天然源植物抗生素制劑3.6g，精密稱定，共6份，分別精密加入苯酚對照溶液(7mg/ml-1)1ml，置250ml圓底燒瓶中，加水150ml，連接揮發(fā)油測定器，照供試品制備項下方法處理測定，平均回收率為99.76％，RSD為0.27％。

含量測定取實施例1-3的樣品3批，按上述色譜條件測定，計算含量，苯酚以mg/ml計的百分含量為7.04％、7.15％、7.18％。

實施例6：本發(fā)明天然源植物抗生素作為葉面肥的施用，在草莓上的施用結(jié)果表明，稀釋200倍后的天然源植物抗生素用背負(fù)式噴霧器噴施于草莓葉片，收獲總量和個數(shù)均大幅度地增加，糖度也有明顯的提高。

實施例7：本發(fā)明天然源植物抗生素用于病蟲害防治，將天然源植物抗生素稀釋50倍后在作物上噴灑防治蟲害，用此種稀釋液浸種，用500倍稀釋液進(jìn)行播前灌溉可代替土菌消、百菌清等農(nóng)藥實施無農(nóng)藥防治。

實施例8：本發(fā)明天然源植物抗生素用于化妝品稀釋30倍后具有軟化皮膚表面角質(zhì)，殺菌消毒、保養(yǎng)皮膚等良好的作用；同時具有清潔皮膚和殺菌、消毒、消炎等功能。

實施例9：本發(fā)明天然源植物抗生素稀釋15倍后用于潰爛皮膚消炎殺菌和快速修復(fù)潰爛面，能夠迅速起到消炎殺菌的作用，并且潰爛面會在1～2天內(nèi)就會結(jié)痂愈合。

實施例10：本發(fā)明天然源植物抗生素稀釋10倍后用于身體有狐臭部位，兩到三天內(nèi)，狐臭就消失了。

殺菌試驗

殺菌試驗采用濾紙片法和固體稀釋法。以慶大霉素作為對照，測定天然源植物抗生素對大腸桿菌、變形桿菌、巨大芽孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌、金黃色葡萄球菌和北京棒狀桿菌的殺菌作用；以苯唑青霉為對照，測定天然源植物抗生素對黑曲霉菌、青霉菌、綠木霉菌、康氏木霉菌和白色念珠菌的殺菌作用。對細(xì)菌的殺菌效果如表4所示。對霉菌的殺菌效果如表5所示。

表4天然源植物抗生素與慶大霉素殺菌對照

注：表中數(shù)據(jù)為殺菌圈直徑，單位為mm，均為3次平行試驗的平均值；顯著水平P＜0.05。

表5天然源植物抗生素與苯唑青霉殺菌對照

注：表中數(shù)據(jù)為殺菌圈直徑，單位為mm，均為3次平行試驗的平均值；顯著水平P＜0.05。

根據(jù)以上表4和慶大霉素、表5和苯唑青霉作殺菌對照，天然源植物抗生素的對供試細(xì)菌、霉菌的殺滅效果與對照間均顯著優(yōu)于對照樣品。因此，天然源植物抗菌素，具有在醫(yī)藥、食品、衛(wèi)生用品、化妝品、養(yǎng)殖、生物農(nóng)藥等方面具有廣泛的開發(fā)利用的價值。

皮膚刺激試驗:

1.驗動物：健康家兔6只，雌雄各3只，體重2.5kg，皮膚完好。

2.實驗：在實驗前24h，將家兔背部脊柱兩側(cè)的毛去掉，去毛范圍4cm×4cm，次日將本發(fā)明天然源植物抗生素直接滴于面積為3cm×3cm的一側(cè)去毛完整皮膚上；另一側(cè)用自來水做對照。分別于試驗后1h、24h和48h觀察皮膚局部反應(yīng)。

3.實驗結(jié)果：1只家兔有輕微的紅斑，5只家兔均無水腫形成、無刺激性反應(yīng)、無皮膚過敏性反應(yīng)。

毒性實驗：

對該天然源植物抗生素進(jìn)行了大鼠進(jìn)行注射的毒性研究，結(jié)果如下：

樣品提取及設(shè)定：隨機(jī)取大鼠60只，按公斤體重計算大鼠的用藥量。

一組30只，大鼠注射本產(chǎn)品分別相當(dāng)于臨床人用量(0.5ml)的50倍、25倍、5倍，每18天按體重調(diào)整1次劑量，每天放藥1次；共放藥72次(72天)。

二組30只，給大鼠注射本產(chǎn)品分別相當(dāng)于臨床人體用量的20倍，10倍，3倍，每18天按體重調(diào)整1次劑量，每天注射1次；共注射72次(72天)。

觀察大鼠的一般狀況：對各組大鼠分別于用注射前、中及停止注射后24小時、20天測體重，查血常規(guī)、ALT(GPT)、BUN及大小便常規(guī)；停止注射24小時處死50％動物，取心、肺、肝、脾、胃、大小腸、腦、腸系膜淋巴結(jié)；其余動物停止注射20天全部處死，如上做病理檢查。

得出結(jié)果：一般地狀況及體重實驗期間各組大鼠一般狀況及外觀正常，注射前后其活動、進(jìn)食、毛色、體重、大小便均無明顯差異，體重均有明顯增加，與對照組比較亦無差異。說明該產(chǎn)品對動物的一般狀況及體重?zé)o影響。

血常規(guī)檢查：注射36天、72天、停止注射24小時及停止注射20天后各劑量組大鼠紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù)及分類、血紅蛋白、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)與對照組比較，差異均無顯著性。

ALT及BUN檢查：各檢測時點、各劑量組ALT、BUN與對照組比較，差異均無顯著性。

病理檢查：注射72天及停止注射20天處死的大鼠，解剖肉眼觀察均未見異常。所有送檢的臟器標(biāo)本樣品，經(jīng)病理檢查與對照組比較，差異均無顯著性。

根據(jù)該產(chǎn)品毒理學(xué)動物實驗資料結(jié)果，表明天然源植物抗生素是一種無毒、無副作用、而且安全的發(fā)明。

采用SPRIA法測定本發(fā)明天然源植物抗生素對乙肝表面抗原(HBsAg)的殺滅效果：

取0.1ml乙肝表面抗原(HBsAg)陽性血清(RPHA法1：2048)加于0.4ml不同濃度本發(fā)明植物抗生素，作用2分、5分、10分鐘后立即加中和劑作用30分鐘終止實驗。同時設(shè)陽性(不加植物抗生素而加生理鹽水)和陰性(不加乙肝表面抗原(HBsAg)陽性血清而加生理鹽水)。以P/N值≤2.1位陰性判為有效，≥2.1為陽性判為無效。

試驗結(jié)果表明，50～100％濃度，作用5～10分鐘對乙肝表面抗原(HBsAg)有消毒效果。

穩(wěn)定性試驗顯示：本發(fā)明天然源植物抗生素制劑原液經(jīng)37℃恒溫存放90天后，對白色念珠菌的殺滅作用無影響。