本發(fā)明涉及生物材料領域，尤其是涉及一種溫度控釋溶栓藥物的納米制劑的制備方法。

背景技術：

血栓會阻塞冠狀動脈管腔，從而誘發(fā)急性心肌梗死導致死亡。近年來，心肌梗死在中國的發(fā)病率呈上升趨勢，每年新發(fā)至少50萬例。目前治療心肌梗死最直接有效的辦法是經皮冠狀動脈介入治療（pci），但是需要在一定時間內將患者送至擁有pci條件的醫(yī)院，具有一定的時間局限性。對于急性心肌梗死患者，通過靜脈注射溶栓藥物則能及時有效的緩解病情，使患者有充足的時間前往具有pci條件的醫(yī)院進一步治療。但是，靜脈注射溶血栓藥物極易引發(fā)顱內出血，并且溶血栓藥物（例如：組織型纖溶酶原激活劑tpa）會快速被血液中的纖溶酶原激活物抑制劑中和從而失效。采用藥物輸送系統安全定向的輸送溶血栓藥物至血栓處，已引起科學界與臨床醫(yī)學界的廣泛關注。

納米顆粒由于其獨特的物理化學性能，已被廣泛研究并用于藥物的輸送。其中，溶栓藥物納米制劑已成為溶栓藥物輸送領域的研究熱點。溶栓藥物可通過化學交聯等方式接枝于納米顆粒表面，該類溶栓藥物納米制劑部分提高了溶栓藥物的血液循環(huán)周期。例如：張皓教授等將尿激酶通過離子交聯方式修飾于殼聚糖納米顆粒表面；顧臻教授等通過生物素-鏈霉親和素的作用將tpa接枝于高分子納米顆粒表面；christophalexiou等通過氨基與活化的酯鍵反應將tpa修飾于聚丙烯酸-馬來酸修飾的磁性四氧化三鐵納米顆粒表面。然而，當溶栓藥物被修飾在載體表面時，裸露的溶栓藥物在輸送過程中仍有可能被血液中的纖溶酶原激活劑抑制劑中和，從而失去活性，降低溶栓效率。最近，研究者們報道了一類對凝血酶濃度敏感的溶栓藥物控釋系統。該類系統將溶栓藥物包裹/封堵于藥物載體中，并利用對凝血酶濃度變化響應的蛋白作為溶栓藥物的釋放開關，實現溶栓藥物的應激釋放。在這類體系中，溶栓藥物的裝載方式使其在輸送過程中避免與血液直接接觸，而且只有當體內凝血酶升高時，溶栓藥物才被釋放，這樣就提高了溶栓藥物的血液循環(huán)周期及安全性。但是內源性生物信號往往受體內環(huán)境多方面因素影響，致使藥物釋放的可控性及精確性受到限制。因此，有必要構建通過外源性信號刺激釋放的溶栓藥物控釋體系，實現可控性及精確性高的溶栓藥物釋放。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種溫度控釋溶栓藥物的納米制劑的制備方法，該制備方法首先將磁性四氧化三鐵納米顆粒裝載至溫敏性脂質體的雙層膜結構中，構建溫敏性磁性脂質體作為溶栓藥物的輸送載體，可利用外界磁場靶向作用將溫敏性磁性脂質體定向輸送至血栓病灶處，并利用交變磁場對磁性四氧化三鐵納米顆粒的磁熱作用，控制溶栓藥物的釋放，以實現溶栓藥物的安全輸送及可控釋放。

本發(fā)明的目的是這樣實現的：

一種溫度控釋溶栓藥物的納米制劑的制備方法，特征是：

a、利用熱分解法合成疏水性的磁性四氧化三鐵納米顆粒：將10.8gfecl3·6h2o和36.5g油酸鈉置于燒瓶內，加入80ml無水乙醇，60ml二蒸水和140ml正己烷，超聲混勻之后在70℃的水浴鍋中反應4h；反應結束后，上述混合溶液倒進分液漏斗中，加入30ml的二蒸水分離洗滌上層的有機層，反復10次得到油酸修飾的磁性顆粒；之后將該磁性顆粒與5.7g的油酸、200ml的1-十八碳烯混合，溫度以每分鐘3.3℃的速率上升直至320℃，并且在320℃時保持30min；然后開始冷卻，溫度冷卻至室溫后，再加入無水乙醇，所得沉淀則是磁性四氧化三鐵納米顆粒；

b、采用脂質膜水化法和擠壓法合成溫敏性磁性脂質體：將二棕櫚酰磷脂酰膽堿：二硬脂?；字Ｄ憠A：二硬脂磷酸乙醇胺-氮-聚乙二醇2000以1:1:8的配比置于圓底燒瓶中，加入氯仿混合均勻；加入分散在氯仿中的磁性四氧化三鐵顆粒，利用旋轉蒸發(fā)儀在n2的環(huán)境下合成溫敏性脂質體，得到一層薄薄的脂質體薄膜后，室溫保存12小時；往裝有脂質體薄膜的圓底燒瓶中加入10mmtris緩沖液（ph7.4），置于60℃的水浴鍋中水合15min；之后，得到的溶液使用200nm和100nm的聚碳酸酯過濾器各擠壓過濾；所得溶液再通過裝有葡聚糖凝膠g-50的凝膠柱，并施加氣壓，進一步純化去除多余的磁性四氧化三鐵顆粒；最后，利用強磁鐵分離得到所需要的溫敏性磁性脂質體；

c、組織型纖溶酶原激活劑的裝載：在得到脂質體薄膜后，往裝有脂質體薄膜的圓底燒瓶中加入10mmtris緩沖液（ph7.4）和5000u組織型纖溶酶原激活劑，置于60℃的水浴鍋中水合15min；得到的溶液使用100nm的聚碳酸酯過濾器擠壓過濾；所得溶液葡聚糖凝膠g-50的凝膠柱去除多余的磁性四氧化三鐵顆粒；最后，利用強磁鐵分離得到產品：裝載組織型纖溶酶原激活劑的溫敏性磁性脂質體。

與現有溶栓藥物的納米制劑相比，該發(fā)明具有以下有益效果：

1、將已通過食品藥品監(jiān)督管理局認證的溫敏性磁性脂質體作為藥物載體，具有良好的生物相容性；

2、該納米制劑可通過外界交變磁場控制溶栓藥物的釋放；

3、該納米制劑可利用磁場導向作用被定向輸送至血栓病灶處；

4、交變磁場誘導磁性四氧化三鐵納米顆粒所產生的過熱可促進血栓的溶解。

附圖說明

圖1為所構建的納米制劑結構及工作原理示意圖；

圖2為所構建的納米制劑的掃描電鏡（a）及透射電鏡圖（b）。

具體實施方式

下面結合實施例并對照附圖對本發(fā)明進行進一步詳細說明，但應理解本發(fā)明的范圍非僅限于這些實施例的范圍；

實施例1：

一種溫度控釋溶栓藥物的納米制劑的制備方法，通過以下技術路線實現：

a、利用熱分解法合成疏水性的磁性四氧化三鐵納米顆粒：將10.8gfecl3·6h2o和36.5g油酸鈉置于燒瓶內，加入80ml無水乙醇，60ml二蒸水和140ml正己烷，超聲混勻之后在70℃的水浴鍋中反應4h；反應結束后，上述混合溶液倒進分液漏斗中，加入30ml的二蒸水分離洗滌上層的有機層，反復10次得到油酸修飾的磁性顆粒；之后將該磁性顆粒與5.7g的油酸、200ml的1-十八碳烯混合，溫度以每分鐘3.3℃的速率上升直至320℃，并且在320℃時保持30min；然后開始冷卻，溫度冷卻至室溫后，再加入無水乙醇，所得沉淀則是磁性四氧化三鐵納米顆粒；

b、采用脂質膜水化法和擠壓法合成溫敏性磁性脂質體：將二棕櫚酰磷脂酰膽堿：二硬脂?；字Ｄ憠A：二硬脂磷酸乙醇胺-氮-聚乙二醇2000以1:1:8配比置于圓底燒瓶中，加入氯仿混合均勻；加入分散在氯仿中的磁性四氧化三鐵顆粒，利用旋轉蒸發(fā)儀在n2的環(huán)境下合成溫敏性脂質體，得到一層薄薄的脂質體薄膜后，室溫保存12小時；往裝有脂質體薄膜的圓底燒瓶中加入10mmtris緩沖液（ph7.4），置于60℃的水浴鍋中水合15min；之后，得到的溶液使用200nm和100nm的聚碳酸酯過濾器各擠壓過濾；所得溶液再通過裝有葡聚糖凝膠g-50的凝膠柱，并施加氣壓，進一步純化去除多余的磁性四氧化三鐵顆粒；最后，利用強磁鐵分離得到所需要的溫敏性磁性脂質體；

c、組織型纖溶酶原激活劑的裝載：在得到脂質體薄膜后，往裝有脂質體薄膜的圓底燒瓶中加入10mmtris緩沖液（ph7.4）和5000u組織型纖溶酶原激活劑，置于60℃的水浴鍋中水合15min；得到的溶液使用100nm的聚碳酸酯過濾器擠壓過濾；所得溶液葡聚糖凝膠g-50的凝膠柱去除多余的磁性四氧化三鐵顆粒；最后，利用強磁鐵分離得到產品：裝載組織型纖溶酶原激活劑的溫敏性磁性脂質體。