本發(fā)明涉及口腔種植
技術領域：
，尤其是涉及一種鹿茸多肽的應用、牙種植體及其表面處理方法。
背景技術：
：自1965年瑞典科學家Branemark教授提出種植體骨結合理論至今，在50多年間，口腔種植修復技術有了迅猛的發(fā)展，其臨床應用取得了令人矚目的成就，口腔種植修復技術已成為了一種常規(guī)的治療手段。在過去的幾十年里，口腔種植的應用，不僅改善了牙齒修復的效果、提高了患者的生活質量，也深刻的影響了口腔科學的發(fā)展和未來?？谇环N植修復的方法，可以簡單概括為以下步驟：首先，要進行必要的口腔檢查、輔助放射影像檢查及全身生化指標檢驗，以了解患者具體情況，醫(yī)生根據患者的缺牙情況、骨質條件、咬合關系及其他種植修復相關指標，給出綜合種植手術及后期修復方案；體檢合格后，麻醉切開缺牙區(qū)黏骨膜，暴露牙槽骨，在缺牙相應部位的牙槽骨上逐級備洞，植入種植體；植入種植體后，每隔1～2個月復查，通過放射影像等方法觀察骨結合狀況是否正常，骨結合期長短因人、種植系統(tǒng)、骨質條件而異，一般為3～6個月，有的患者甚至需等待半年以上，該過程也是影響整個治療周期的關鍵因素；在種植體骨結合后，需要在種植體上安置基臺，將基臺伸向牙齦外部，構成貫穿牙齦部分，用以固定義齒或者其他矯正物，安置基臺后需等待軟組織成形，此過程需2～3周；待種植體周圍牙齦組織愈合6～8周后，卸除愈合基臺，裝上轉移桿，取印模，制作上部牙冠并佩戴，由此完成口腔種植修復；最后，口腔種植修復結束后，還需根據患者自身情況定期進行術后隨訪?？谇环N植修復作為牙體缺失治療的方法之一，其種植牙的功能和美觀基本與自然牙基本無差別，具有牢固、舒適、無痛等多種優(yōu)點。但隨之而來的也有諸多缺點，例如以上提到的，牙種植體種植于牙槽骨后，種植體與骨的結合緩慢，需要等待數(shù)月、甚至一年之久，此外治療步驟繁瑣等原因，也同樣導致治療周期過長，對患者的治療造成了極大的困擾。因此，研究科學合理的方法，以促進種植體的骨結合速度，進而縮短治療療程，具有很重要的意義。因此，特提出本發(fā)明。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供鹿茸多肽在口腔種植中的應用，以加快口腔種植時牙種植體骨結合的速度、縮短治療療程。本發(fā)明提供了鹿茸多肽在口腔種植修復中的應用。進一步的，所述應用的方法包括：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，制成鹿茸多肽溶液，將所述鹿茸多肽溶液涂抹在牙種植體的表面，將所述牙種植體種植于牙槽骨。進一步的，所述鹿茸多肽溶液的濃度為90-110μg/mL。進一步的，所述鹿茸多肽溶液的濃度為100μg/mL。另外，本發(fā)明的第二個目的在于提供鹿茸多肽在制備牙種植體中的應用，加快口腔種植時牙種植體骨結合的速度、縮短治療療程。本發(fā)明提供了鹿茸多肽在制備牙種植體中的應用。另外，本發(fā)明的第三個目的在于提供一種牙種植體的表面處理方法，以獲得能夠促進骨結合的速度、縮短治療療程的牙種植體。本發(fā)明提供了一種牙種植體的表面處理方法，所述表面處理方法包括：在牙種植體基體表面涂抹鹿茸多肽溶液，使所述鹿茸多肽附著于牙種植體表面。進一步的，所述鹿茸多肽溶液的制備方法為：將所述鹿茸多肽溶于三蒸水中，制成所述鹿茸多肽溶液。進一步的，所述鹿茸多肽溶液的濃度為90-110μg/mL，優(yōu)選100μg/mL。進一步的，所述牙種植體基體為鈦材質、鈦合金材質或者非金屬材質。另外，本發(fā)明還提供了按照所述表面處理方法處理得到的牙種植體。本發(fā)明提供了鹿茸多肽在口腔種植、牙種植體制備中的應用，通過使用鹿茸多肽在牙種植體表面形成一層活性膜，有助于牙種植體與骨的結合速度，縮短治療療程。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明具體實施方式或現(xiàn)有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1a為本發(fā)明成骨細胞遷移實驗的對照組0h時實驗數(shù)據圖；圖1b為本發(fā)明功能驗證的實驗組0h時實驗數(shù)據圖；圖1c為本發(fā)明成骨細胞遷移實驗的對照組48h時實驗數(shù)據圖；圖1d為本發(fā)明成骨細胞遷移實驗的實驗組48h時實驗數(shù)據圖；圖2為本發(fā)明成骨細胞活性檢測的實驗數(shù)據圖；圖3a為本發(fā)明動物實驗的實驗組六周后的切片染色情況；圖3b為本發(fā)明動物實驗的對照組六周后的切片染色情況；圖3c為本發(fā)明動物實驗的實驗組兩周后的切片染色情況；圖3d為本發(fā)明動物實驗的對照組兩周后的切片染色情況。具體實施方式下面將結合附圖對本發(fā)明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。本發(fā)明提供了鹿茸多肽在口腔種植修復中的應用，發(fā)明人通過細胞實驗和動物實驗，驗證了鹿茸多肽具有增強骨細胞活性，促進牙種植體骨結合的效果。在一個優(yōu)選的實施方式中，應用方法包括：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，制成鹿茸多肽溶液，然后將鹿茸多肽溶液涂抹在牙種植體的表面，將牙種植體種植于牙槽骨。在另一個優(yōu)選的實施方式中，鹿茸多肽溶液的濃度為90-110μg/mL，例如可以為90μg/mL、95μg/mL、100μg/mL、105μg/mL或者110μg/mL。另外，本發(fā)明還提供了鹿茸多肽在制備牙種植體中的應用。另外，本發(fā)明還提供了一種牙種植體的制備方法，包括：在牙種植體基體表面涂抹鹿茸多肽溶液形成活性膜。在一個優(yōu)選的實施方式中，鹿茸多肽溶液的制備方法為：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，制成鹿茸多肽溶液。在另一個優(yōu)選的實施方式中，鹿茸多肽溶液的濃度為90-110μg/mL，例如可以為90μg/mL、95μg/mL、100μg/mL、105μg/mL或者110μg/mL。在另一個優(yōu)選的實施方式中，牙種植體基體為鈦或者鈦合金材質。另外，本發(fā)明還提供了應用上述方法制得的牙種植體。為了有助于更清楚的理解本發(fā)明，現(xiàn)結合具體的實施方式詳細介紹如下。需要注意的是，如未特別指出，實施例中用到的方法為常用的手術方法。鹿茸多肽的氨基酸序列為E-P-T-V-L-D-E-V-C-L-A-H-G-P(SEQIDNO：1)，是一種具有活性的小肽。在本發(fā)明提供的實施例中，鹿茸多肽由上海吉爾生化有限公司合成。實施例1鹿茸多肽在口腔種植修復中的應用鹿茸多肽在口腔種植修復中的應用方法：(1)將鹿茸多肽溶于三蒸水中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液；(2)根據牙種植體的表面積，計算所需鹿茸多肽溶液的體積，確保鹿茸多肽溶液能夠覆蓋牙種植體表面。(3)按照常規(guī)方法，將牙種植體種植于患者的牙槽骨中。實施例2牙種植體及其表面處理方法在牙種植體基體表面涂抹由鹿茸多肽組成的活性膜，處理方法包括：(1)配置鹿茸多肽溶液：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液；(2)在牙種植體基體的表面涂抹步驟(1)中的鹿茸多肽溶液，制得表面覆有鹿茸多肽活性膜的牙種植體。以上步驟均需在無菌條件下進行。此外，在本實施例中，牙種植體基體由鈦材質組成，在其他實施方式中，牙種植體基體的材質還可以為鈦合金或者非金屬。實施例3牙種植體及其表面處理方法在牙種植體基體表面涂抹由鹿茸多肽組成的活性膜，處理方法包括：(1)配置鹿茸多肽溶液：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液；(2)用去離子水清洗鈦材質的牙種植體基體的表面3次，在牙種植體基體的表面涂抹步驟(1)中的鹿茸多肽溶液，形成活性膜；在本步驟中，可以直接將牙種植體基體浸泡于鹿茸多肽溶液中，形成均勻的活性膜；也可以用高壓噴涂槍將鹿茸多肽溶液噴涂在牙種植體基體上；其中步驟(2)可以重復多次。(3)在步驟(2)中的活性膜表面涂抹納米二氧化鈦抗菌涂層，制得牙種植體。以上步驟均需在無菌條件下進行。此外，在本實施例中，牙種植體基體由鈦材質組成，在其他實施方式中，牙種植體基體的材質還可以為鈦合金或者非金屬。另外，鹿茸多肽是一種具有活性的小肽，在本發(fā)明提供的實施例中的鹿茸多肽溶液配置時，最優(yōu)選現(xiàn)用現(xiàn)配，以保證較好的活性。鹿茸多肽作用的功能驗證如未特別指出，實驗中涉及的方法為常規(guī)實驗操作方法，涉及的試劑為市售常規(guī)試劑。一、成骨細胞遷移實驗實驗細胞：Saos-2細胞。完全培養(yǎng)基：10％FBS，90％McCoy's5A培養(yǎng)基，100μg/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素。100μg/mL鹿茸多肽溶液配置：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液。實驗方法：將Saos-2細胞在完全培養(yǎng)基中，置于含有5％CO2，37℃的孵箱中培養(yǎng)。取對數(shù)生長期各組細胞，常規(guī)消化后分別等量加入裝有鈦片的12孔板中，每孔加入約1.1×105個細胞，將12孔隨機分為2組：空白對照組、鹿茸多肽組，放入37℃5％CO2培養(yǎng)箱。培養(yǎng)24h后，用槍頭比著直尺，垂至于孔底劃痕(在鈦片上劃痕)，用PBS洗細胞3次，去處劃下的細胞，然后鹿茸多肽組加入100μg/mL鹿茸多肽溶液，對照組加入相同體積的完全培養(yǎng)基。放入37℃5％CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。并于藥物干預后的第0h和48h觀察細胞并拍照。結果如圖1a-d所示。本實驗以Saos-2成骨細胞和鈦片，模擬了口腔種植修復中，將含鈦材質基體的牙種植體種植于牙槽骨的過程。由圖1a、1b、1c和1d可以看出，實驗組經鹿茸多肽干預48h后(圖1d)，細胞有明顯的遷移，遷移細胞基本已完全覆蓋劃痕區(qū)域；而對照組48h后(圖1c)的細胞則遷移緩慢。二、成骨細胞活性檢測實驗細胞：Saos-2細胞。完全培養(yǎng)基：10％FBS，90％McCoy's5A培養(yǎng)基，100μg/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素。100μg/mL鹿茸多肽溶液配置：將鹿茸多肽溶于完全培養(yǎng)基中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液。ALP試劑盒：購自于Sigma公司。試驗方法：Saos-2細胞在完全培養(yǎng)基中，置于含有5％CO2，37℃的孵箱中培養(yǎng)。取對數(shù)生長期各組細胞，常規(guī)消化后分裝在2個培養(yǎng)瓶中，2個培養(yǎng)瓶分別為空白對照組和鹿茸多肽組，鹿茸多肽組加入100μg/mL鹿茸多肽溶液，空白對照組加入等體積的完全培養(yǎng)基。繼續(xù)5％CO2，37℃培養(yǎng)24h后，常規(guī)消化，分別裝入15mL離心管中，取培養(yǎng)基上清分別加入96孔板中，參照ALP試劑盒中說明書的使用方法，使用酶標儀測定吸光度值，并將實驗結果整理如圖2所示。由圖2數(shù)據可知，經過鹿茸多肽處理后，Saos-2細胞的增殖活性有明顯的提高。三、動物實驗將12只西雙版納小型豬隨機分為實驗組和對照組，其中實驗組6只，對照組6只，把種植體植入小型豬的下頜牙槽骨上。實驗組所種植的牙種植體的表面涂抹有鹿茸多肽溶液，對照組患者所種植的牙種植體的表面涂抹有等體積的三蒸水(實驗組和對照組使用相同的牙種植體系統(tǒng))。在植入2周和6周后分別處死實驗組和對照組小型豬，并一并切取下頜骨包括種植體及周圍約0.5cm的骨組織，并切片甲苯胺藍染色，圖3a為實驗組六周后的切片染色情況，圖3b為對照組六周后的切片染色情況，圖3c為實驗組兩周后的切片染色情況，圖3d為對照組兩周后的切片染色情況。由上述結果可以發(fā)現(xiàn)，實驗組種植體周圍成骨細胞數(shù)目較對照組高。以上細胞實驗和動物實驗均表明，鹿茸多肽能夠促進成骨細胞的活性和遷移，預示著鹿茸多肽能夠促進口腔種植修復中，牙種植體的骨結合速度，縮短治療療程。此外，為了充分說明鹿茸多肽的作用及實際應用，現(xiàn)結合臨床治療數(shù)據，進行詳細介紹。臨床統(tǒng)計一、研究對象納入標準納入標準：(1)患者年齡≥18歲；(2)各項體檢指標符合口腔種植手術標準；(3)能夠保證定期復查。參照上述標準，于2013年-2015年期間，共納入口腔種植手術患者83例，其中，男性45例，女性38例，年齡為22～43歲，共83枚牙種植體。二、試劑準備鹿茸多肽溶液：將鹿茸多肽溶于三蒸水中，配置成濃度為100μg/mL的鹿茸多肽溶液。三、手術方法及分組將上述83例患者隨機分為實驗組和對照組，其中實驗組42例，男性23例，女性19例；對照組41例，其中男性22例，女性19例。實驗組患者所種植的牙種植體的表面涂抹有鹿茸多肽溶液，對照組患者所種植的牙種植體的表面涂抹有等體積的三蒸水(實驗組和對照組使用相同的牙種植體系統(tǒng))。四、數(shù)據收集及結果分析對實驗組和對照組患者采用相同的常規(guī)方法進行口腔種植修復手術，在種植牙種植體后的一個月、兩個月、三個月后進行復查，利用共振頻率分析儀(Osstel)，參照Osstel的標準測量方法，測量牙種植體骨結合穩(wěn)定系數(shù)(ISQ)，并計算平均值，結果如表1所示(組內并未見顯著性差異)。表1實驗組和對照組的穩(wěn)定系數(shù)術后ISQ實驗組對照組一個月61.16±0.1959.46±0.20兩個月67.38±0.1362.93±0.09三個月78.19±0.1471.62±0.15通過臨床數(shù)據發(fā)現(xiàn)，在植入牙種植體后的一個月、兩個月和三個月復查時，實驗組的牙種植體骨結合穩(wěn)定系數(shù)，均高于同一時期對照組的牙種植體骨結合穩(wěn)定系數(shù)，表明實驗組的牙種植體骨結合速度較對照組要快，這表明鹿茸多肽具有促進牙種植體骨結合速度的作用，能夠有效的縮短治療療程。本發(fā)明提供了鹿茸多肽在口腔修復及牙種植體制備中的應用，以及利用鹿茸多肽制備的一種具有活性膜的牙種植體，以促進牙種植體與骨結合的速度，進而縮短治療療程，并且通過實驗驗證了鹿茸多肽的上述作用，并通過臨床應用進一步驗證了鹿茸多肽的實際作用。最后應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發(fā)明各實施例技術方案的范圍。SEQUENCELISTING<110>昆明醫(yī)科大學<120>鹿茸多肽的應用、牙種植體及其表面處理方法<160>1<170>PatentInversion3.5<210>1<211>14<212>PRT<213>人工序列<400>1GluProThrValLeuAspGluValCysLeuAlaHisGlyPro當前第1頁1 2 3