本發(fā)明涉及化合物的新用途，尤其是一種川芎嗪茋類衍生物的新用途。

背景技術(shù)：

高血壓是威脅人類健康的常見疾病之一，表現(xiàn)為體循環(huán)動(dòng)脈收縮壓升高。其也是造成其他很多疾病的危險(xiǎn)因素，治療不及時(shí)可損傷腎臟、心臟等器官。治療高血壓首先要控制血壓，以預(yù)防心血管疾病及并發(fā)癥。盡管降壓藥物層出不窮，但如何尋求理想的、療效好的、不良反應(yīng)小、安全性高的降壓藥物及方法，仍是擺在我們面前的一項(xiàng)艱巨任務(wù)。

川芎為傘形科藁本屬植物川芎Ligusttcum chuanxiong Hort.的根莖。主產(chǎn)于四川、貴州、云南，以四川產(chǎn)者優(yōu)。系人工栽培。川芎主要含生物堿(如川芎嗪-四甲基吡嗪TMP)，酚類物質(zhì)(如阿魏酸)，揮發(fā)油，內(nèi)脂素等。川芎嗪(Ligustrazine)是從川芎中提取的生物堿，即四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine,TMP)，是川芎的有效成分之一。川芎嗪通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞膜、拮抗Ca²⁺內(nèi)流，降低細(xì)胞通透性、抗細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)損傷、增加NO水平、抑制血細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮的黏附和損傷、調(diào)節(jié)血管張力，從而改善細(xì)胞缺氧缺血狀況，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)高血壓具有良好的治療效果。

目前臨床常用的川芎嗪制劑有磷酸川芎嗪片、注射用磷酸川芎嗪、鹽酸川芎嗪注射液等。川芎嗪毒副作用少、程度輕、發(fā)生率低，數(shù)十年的臨床應(yīng)用少見不良反應(yīng)，但國(guó)內(nèi)也有關(guān)于川芎嗪引起嚴(yán)重低血壓、上消化道出血、血管神經(jīng)性水腫、藥疹、哮喘致死、過(guò)敏反應(yīng)等不良反應(yīng)的報(bào)道，針對(duì)川芎嗪半衰期短、代謝快、生物利用度低等存在的缺點(diǎn)，開發(fā)出高效低毒的川芎嗪衍生物(降壓藥物)，并深入對(duì)川芎嗪衍生物進(jìn)行研究，為臨床高血壓的防治以及川芎嗪的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種川芎嗪茋類衍生物的新用途。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種川芎嗪茋類衍生物在制備舒張血管藥物方面的應(yīng)用，所述川芎嗪茋類衍生物具有如下(Ⅰ)所示結(jié)構(gòu)式，

上述川芎嗪茋類衍生物的化合物名稱為

(E)-2-(2,3-dimethoxystyryl)-3,5,6-trimethylpyrazine[(E)-2-(2,3-二甲氧基苯乙烯基)-3,5,6-三甲基吡嗪]，簡(jiǎn)稱C_26b。

C_26b可通過(guò)發(fā)明專利(CN 103864768 A/CN 104086491 A)中所述方法獲得，具體制備步驟如下：在室溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)下依次向燒瓶中加入川芎嗪和干燥的四氫呋喃,攪拌溶解。在-25℃的低溫下向反應(yīng)混合物中加入相同的物質(zhì)的量的丁基鋰的己烷溶液，然后加入乙?；F的四氫呋喃溶液，在室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)1小時(shí)，之后向上述反應(yīng)混合物中加入醋酸-醋酐溶液，在120℃加熱反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后向燒瓶中加入水，靜置分層，分出有幾層，水層用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相依次用飽和碳酸氫鈉溶液、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓除去溶劑，粗產(chǎn)物用硅膠柱層析提純或用乙酸乙酯重結(jié)晶得黃色結(jié)晶，即得。C26b的核磁共振數(shù)據(jù)如下：1H NMR(CDC13,δppm):2.51(3H,s,CH3)，2.55(3H,s,CH3)，2.61(3H,s,CH3)，3.89(3H,s,OCH3)，3.90(3H,s,OCH3)，6.88(1H,d,ArH，J＝8.0Hz)，7.05～7.08(1H,m,ArH)，7.25(1H,d,ArH，J＝8.0Hz)，7.36(1H,d,CH＝，J＝15.8Hz)，8.00(1H,d,CH＝，J＝15.8Hz)；13C NMR(CDC13,δppm):153.17,149.41,149.19,147.70,145.75,131.21,128.99,124.87,124.03,119.20,112.16,60.98,55.87,21.79,21.70,21.02。

優(yōu)選的，上述川芎嗪茋類衍生物的應(yīng)用，所述舒張血管是指對(duì)內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮血管環(huán)的舒張作用。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明所述川芎嗪茋類衍生物，通過(guò)篩選63個(gè)新的川芎嗪茋類衍生物的血管活性，采用血管環(huán)離體灌流的方法研究其舒張血管的藥理機(jī)制，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述C_26b的血管舒張活性具有顯著內(nèi)皮依賴性，通過(guò)eNOS途徑介導(dǎo)；其平滑肌介導(dǎo)的血管舒張主要與抑制VOCC開放引起的外鈣離子內(nèi)流和鈣激活鉀通道(K_Ca)、內(nèi)向整流型鉀通道(K_IR)的開放相關(guān)，后期可用于制備舒張血管藥物。

附圖說(shuō)明

圖1是劑量效應(yīng)曲線圖，其中：

圖1(A)乙酰膽堿(Ach)的劑量效應(yīng)曲線：乙酰膽堿(Ach)(10^-8～10^-6mol/L)濃度依賴性的舒張去甲腎上素(NE)(10^-6mol/L)預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的血管環(huán)；

圖1(B)去甲腎上素(NE)的劑量效應(yīng)曲線：NE(10^-8～10^-6mol/L)濃度依賴性收縮血管環(huán)；

圖1(C)硝普鈉(SNP)的劑量效應(yīng)曲線：SNP(10^-9～10^-7mol/L)濃度依賴性的舒張去甲腎上素(NE)(10^-6mol/L)預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的血管環(huán)；

圖2是63種川芎嗪茋類衍生物血管環(huán)活性篩選圖；

圖3是C_26b舒張內(nèi)皮完整(E+)血管環(huán)的劑量曲線：C_26b(10^-6～10^-4mol/L)對(duì)10^-6mol/L的去甲腎上素(NE)預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的血管環(huán)的舒張作用曲線；

圖4是C_26b對(duì)去甲腎上素/氯化鉀(NE/KCl)預(yù)收縮血管的舒張作用圖；

圖5是C_26b對(duì)高鉀誘導(dǎo)的外鈣內(nèi)流的影響：C_26b(3×10^-5mol/L)預(yù)處理對(duì)60mmol/L的高鉀環(huán)境下，累積濃度的CaCl₂誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮的影響圖；

圖6是C_26b對(duì)去甲腎上素(NE)誘導(dǎo)內(nèi)鈣釋放的影響：C_26b(3×10^-5mol/L)預(yù)處理，對(duì)累積濃度的去甲腎上素(NE)誘導(dǎo)的內(nèi)鈣釋放收縮血管環(huán)的影響圖；

圖7是C_26b對(duì)去甲腎上素(NE)誘導(dǎo)外鈣內(nèi)流的影響：C_26b(3×10^-5mol/L)預(yù)處理，對(duì)10^-6mol/L的去甲腎上素(NE)誘導(dǎo)外鈣內(nèi)流收縮血管環(huán)的影響圖；

圖8是鉀通道阻斷劑C_26b舒張血管作用的影響：3μmol/L三磷酸腺苷敏感性鉀通道(GLB)，10mmol/L鈣激活鉀通道(TEA)，30μmol/L內(nèi)向整流型鉀通道(BaCl₂)，1mmol/L電壓激活鉀通道(4-AP)預(yù)處理血管環(huán)，C_26b(3×10^-5mol/L)舒張10^-6mol/LNE(去甲腎上素)預(yù)收縮血管環(huán)的影響圖；

圖9是L-NAME對(duì)C_26b舒張血管作用的影響：10^-4mol/L的一氧化氮合酶抑制劑(L-NAME)預(yù)處理對(duì)C_26b誘導(dǎo)內(nèi)皮完整血管環(huán)舒張作用曲線圖；

圖10是環(huán)氧合酶抑制劑(INDO)對(duì)C_26b舒張血管作用的影響：10^-5mol/L的環(huán)氧合酶抑制劑(INDO)預(yù)處理對(duì)C_26b誘導(dǎo)內(nèi)皮完整血管環(huán)舒張作用曲線圖。

具體實(shí)施方式

為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。

本發(fā)明利用氯化鉀(KCl)、去甲腎上素(NE)、乙酰膽堿(Ach)、硝普鈉(SNP)建立離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)模型，系統(tǒng)評(píng)價(jià)了63種川芎嗪茋類衍生物對(duì)去甲腎上素(NE)預(yù)收縮血管環(huán)的作用。對(duì)篩選出的血管舒張活性最強(qiáng)的C_26b進(jìn)一步確定其對(duì)內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮血管環(huán)的舒張作用，并使用一氧化氮合酶抑制劑(L-NAME)和環(huán)氧合酶抑制劑(INDO)預(yù)處理血管環(huán)，確定內(nèi)皮相關(guān)機(jī)制。C26b預(yù)處理無(wú)鈣高鉀K-H液中的血管環(huán)，觀察對(duì)CaCl₂誘導(dǎo)血管環(huán)收縮的影響；C26b預(yù)處理無(wú)鈣K-H液中的血管環(huán)，觀察對(duì)去甲腎上素(NE)(10^-8～10^-6mol/L)和CaCl₂(0.5～2.5mmol/L)誘導(dǎo)血管環(huán)收縮的影響。選擇性鉀離子通道阻斷劑鈣激活鉀通道(TEA)、三磷酸腺苷敏感性鉀通道(GLB)、內(nèi)向整流型鉀通道(BaCl₂)、電壓激活鉀通道(4-AP)預(yù)處理血管環(huán)，觀察不同鉀離子通道對(duì)C_26b舒張血管活性的影響。

實(shí)施例1

一.動(dòng)脈環(huán)模型的建立

在離體組織水平利用Powerlab 8通道組織-器官浴槽系統(tǒng)，通過(guò)去甲腎上素(NE)、乙酰膽堿(Ach)、硝普鈉(SNP)三種陽(yáng)性藥建立離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)收縮和舒張反應(yīng)模型，確定誘導(dǎo)血管環(huán)收縮的去甲腎上素(NE)最適濃度和檢驗(yàn)血管內(nèi)皮完整度的乙酰膽堿(Ach)的濃度。

實(shí)驗(yàn)方法：

1.完整內(nèi)皮動(dòng)脈環(huán)制備

①SD雄性大鼠稱重后，按0.4mL/100g腹腔注射10％水合氯醛，以麻醉大鼠；

②小心打開胸腔，撥開心肺，小心取出胸主動(dòng)脈，迅速置于95％O₂+

5％CO₂混合標(biāo)準(zhǔn)氣體飽和的4℃預(yù)冷K-H溶液中；

③將血管外圍的脂肪及結(jié)締組織去除后截取3mm長(zhǎng)的血管環(huán)。

2.去內(nèi)皮動(dòng)脈環(huán)制備

①將針灸針柄輕輕摩擦血管環(huán)內(nèi)壁3～4次；

②待血管平衡完成，10^-6mol/L的去甲腎上素(NE)預(yù)收縮后經(jīng)10^-6mol/L的乙酰膽堿(Ach)檢測(cè)，血管舒張反應(yīng)小于5％認(rèn)為去內(nèi)皮成功。

3.動(dòng)脈環(huán)模型指標(biāo)的建立

張力記錄系統(tǒng)將記錄血管張力的變化曲線，以去甲腎上素(NE)(終濃度10^-6mol/L)誘導(dǎo)引起的最大收縮幅度為標(biāo)準(zhǔn)(即看做100％)，給藥乙酰膽堿(Ach)和硝普鈉(SNP)后一段時(shí)間內(nèi)的血管張力曲線的平均值與最大收縮幅度的平均值之百分比值表示血管舒張度，每次實(shí)驗(yàn)至少設(shè)置兩條平行血管環(huán)，來(lái)自至少3只不同大鼠的血管環(huán)重復(fù)至少3次后，記錄，繪制劑量效應(yīng)曲線，結(jié)果見圖1。

4.血管完整性檢驗(yàn)

KC1(60mmol/L)刺激三次血管環(huán)，平衡10min，給予去甲腎上素(NE)10^-6mol/L達(dá)到最大收縮，加入乙酰膽堿(Ach)10^-6mol/L，有內(nèi)皮的血管環(huán)將出現(xiàn)不同程度的舒張，計(jì)算血管最大舒張度，選取舒張度≥60％的血管環(huán)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)施例2

川芎嗪茋類衍生物血管活性篩選

選取內(nèi)皮完整血管環(huán)，10^-6mol/L NE預(yù)收縮至最大張力時(shí)，分別給予

3×10^-5mol/L川芎嗪茋類衍生物，記錄不同血管環(huán)不同藥物的張力變化曲線，結(jié)果表明：通過(guò)篩選血管活性，發(fā)現(xiàn)大部分川芎嗪茋類衍生物并沒有顯著的血管活性，63種川芎嗪茋類衍生物中有17種舒張血管活性比較明顯(舒張率＞20％)，最適舒張血管的單體成為C_26b，累積給予濃度10^-6mol/L～10^-4mol/L，C_26b無(wú)明顯的劑量依賴性舒張，最適濃度為3×10^-5mol/L，舒張率為44.97％，如圖2，圖3所示。

實(shí)施例3

C_26b舒張血管的鈣通道機(jī)制研究

1.按照實(shí)施例1中方法得無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)，備用。

2.C_26b對(duì)去甲腎上素/氯化鉀(NE/KCl)預(yù)收縮的血管環(huán)的舒張作用

取無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)，分別用10^-6mol/L/60mmol/L的NE/KCl預(yù)收縮，達(dá)到最大收縮后給予3×10^-5mol/L C_26b，記錄血管環(huán)在20min內(nèi)的張力變化曲線，見圖4。

3.C_26b對(duì)高鉀誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流的影響

選取無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)，用無(wú)鈣K-H溶液連續(xù)沖洗兩次后，用3×10^-5mol/L C_26b處理無(wú)鈣高鉀60mmol/L K-H溶液中血管環(huán)20min，依次累積給予CaCl₂達(dá)到(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5)mmol/L，不同濃度CaCl₂誘導(dǎo)的收縮度均與60mmol/L KCl在正常K-H溶液誘導(dǎo)的最大收縮的百分比表示，見圖5。

4.C_26b對(duì)NE誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流的影響

選取無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)，均用無(wú)鈣K-H溶液連續(xù)沖洗三次，3×10^-5mol/L C_26b預(yù)處理20min，依次累積給予NE達(dá)到(10^-8、3×10^-8、10^-7、3×10^-7、10^-6)mol/L，待血管環(huán)張力穩(wěn)定后依次累積給予CaCl₂達(dá)到(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5)mmol/L。不同濃度NE和CaCl₂誘導(dǎo)的收縮度均用與10^-6mol/L NE在正常K-H溶液中誘導(dǎo)的血管最大收縮的百分比表示，見圖6，圖7。結(jié)果顯示C_26b舒張血管涉及到對(duì)鈣通道的抑制，主要通過(guò)阻斷VDCC的Ca²⁺內(nèi)流，對(duì)ROCC(受體操控性鈣通道)和SOCC(鈣庫(kù)操控性鈣離子通道)沒有影響。

實(shí)施例4

C_26b舒張血管的鉀通道機(jī)制研究

采用離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)模型，選擇去內(nèi)皮的血管環(huán)，預(yù)先使用不同的鉀離子通道阻斷劑阻斷相應(yīng)的鉀通道，然后給予C_26b，通過(guò)不同的血管反應(yīng)確定C_26b舒張血管涉及到的鉀通道的研究。

鉀通道阻斷劑對(duì)C_26b舒張血管的影響

選取無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)，分別給予終濃度為3μmol/L GLB，10mmol/L TEA，30μmol/L BaCl₂，1mmol/L 4-AP處理20min，待10^-6mol/L NE預(yù)收縮血管環(huán)后，給予3×10^-5mol/L C_26b。記錄血管環(huán)在20min內(nèi)的張力變化曲線，見圖8。結(jié)果表明鉀離子通道的開放對(duì)C_26b的舒張血管的作用也有很大貢獻(xiàn)，主要包括K_Ca和K_IR的開放。

實(shí)施例5

C_26b舒張血管內(nèi)皮機(jī)制研究

采用離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)模型，選擇內(nèi)皮完整血管環(huán)，分別預(yù)先給予10^-4mol/L L-NAME和10^-5mol/L INDO處理，待血管環(huán)收縮至最大張力后給予

C_26b，記錄其舒張血管張力變化曲線。

1.按照實(shí)施例1中方法得內(nèi)皮完整的血管環(huán)，備用。

2.L-NAME/INDO對(duì)C_26b舒張血管的影響

選取內(nèi)皮完整的血管環(huán)，分別給予10^-4mol/L L-NAME或者10^-5mol/L

INDO處理20min后，10^-6mol/L NE預(yù)收縮血管環(huán)達(dá)最大張力，給予3×10^-5mol/L C_26b，記錄20min內(nèi)不同血管環(huán)的張力變化曲線，見圖9，圖10。

結(jié)果表明C_26b舒張血管的作用具有內(nèi)皮依賴性，通過(guò)eNOS途徑實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，從63種川芎嗪衍生物中篩選出的化合物C_26b對(duì)內(nèi)皮完整血管環(huán)有更好的舒張作用，L-NAME能阻斷內(nèi)皮完整的血管環(huán)的舒張，但是吲哚米莘(INDO)不能,說(shuō)明C_26b舒張血管的作用具有部分內(nèi)皮依賴性，這種內(nèi)皮依賴性通過(guò)一氧化氮合酶途徑，而不是通過(guò)環(huán)氧合酶途徑實(shí)現(xiàn)；C_26b能夠舒張NE預(yù)收縮的血管環(huán)，而對(duì)KCl預(yù)收縮的血管環(huán)沒有顯著舒張作用；無(wú)鈣高鉀K-H溶液中，C_26b預(yù)處理血管環(huán)能夠抑制CaCl₂誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮；無(wú)鈣K-H溶液中，C_26b預(yù)處理血管環(huán)不影響累積給藥的NE誘導(dǎo)的收縮，而對(duì)外加CaCl₂誘導(dǎo)的收縮有明顯的抑制作用，說(shuō)明C_26b舒張血管和VDCC有關(guān)，與細(xì)胞內(nèi)鈣的釋放無(wú)關(guān)，主要與抑制VDCC開放引起的鈣離子內(nèi)流相關(guān)；4-AP和BaCl₂對(duì)C_26b誘導(dǎo)的血管舒張有明顯的抑制作用,說(shuō)明鉀通道的開放也對(duì)C_26b舒張血管有關(guān)，主要是鈣激活鉀通道(K_Ca)和內(nèi)向整流型鉀通道(K_IR)的開放。

上述參照具體實(shí)施方式對(duì)該川芎嗪茋類衍生物的新用途進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。