發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的免疫綴合物,其包含至少一個(gè)與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,及其生成和使用方法。發(fā)明背景與b細(xì)胞形成對(duì)比,t細(xì)胞識(shí)別經(jīng)主要組織相容性復(fù)合物(mhc)的自體細(xì)胞表面分子在細(xì)胞表面上呈遞的自已加工抗原衍生的肽。經(jīng)mhcii類(mhcii)的抗原呈遞的當(dāng)前想法是外源蛋白經(jīng)由吞噬和胞吞接近mhcii,而內(nèi)源蛋白經(jīng)由自噬接近mhcii?？乖庸こ蛇m宜長(zhǎng)度(～10-16個(gè)氨基酸)的肽抗原(肽表位),結(jié)合吞噬體,內(nèi)體或自噬體中的mhcii分子。未加載的mhciiαβ鏈二聚體在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(er)中作為與不變鏈(ii)的九聚復(fù)合物裝配,不變鏈(ii)針對(duì)前溶酶體隔室中的過(guò)早肽或蛋白質(zhì)相互作用提供保護(hù)。這種復(fù)合物運(yùn)輸至溶酶體mhcii隔室,在那里不變鏈進(jìn)行順序蛋白水解。最終的切割產(chǎn)物,一種稱作ii類相關(guān)ii肽(clip)的肽,占據(jù)肽結(jié)合溝且必須在給mhcii分子加載高親和力肽(mhcii限制肽)之前釋放(wearschpandcreswellp,nat.rev.immunol.:antigenprocessingandpresentation,posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。通過(guò)引發(fā)幼稚cd4t細(xì)胞極化成效應(yīng)t細(xì)胞(th1,th2,th17)或記憶t細(xì)胞,幼稚cd4t細(xì)胞對(duì)細(xì)胞表面上加載了肽的mhcii的結(jié)合介導(dǎo)針對(duì)抗原的免疫接種?；蛘?取決于apc的微環(huán)境中的局部環(huán)境(例如細(xì)胞因子平衡)，通過(guò)引發(fā)幼稚cd4t細(xì)胞極化成調(diào)節(jié)t細(xì)胞(treg)，幼稚cd4t細(xì)胞對(duì)加載了肽的mhcii的結(jié)合可介導(dǎo)針對(duì)抗原的免疫耐受。雖然mhcii分子在正常情況下只發(fā)生在抗原呈遞細(xì)胞上,但是與巨噬細(xì)胞,b細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞一樣,mhci類(mhci)發(fā)生在所有有核細(xì)胞上。經(jīng)mhci類(mhci)的抗原呈遞的當(dāng)前假設(shè)機(jī)制是內(nèi)源抗原,諸如在細(xì)胞內(nèi)部生成的病毒蛋白或自體蛋白,在胞質(zhì)溶膠內(nèi)部由蛋白酶體和胞質(zhì)溶膠蛋白酶加工成肽。然后這些肽經(jīng)由稱作抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(tap)復(fù)合物的特異性泵轉(zhuǎn)運(yùn)入er,在那里它們由er氨肽酶(erap)進(jìn)一步修整以生成8-12個(gè)氨基酸的肽。已經(jīng)證明內(nèi)在化入細(xì)胞,優(yōu)選專門抗原呈遞細(xì)胞(apc),像樹(shù)突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的外源蛋白的肽表位也能由mhci呈遞。這歸于外源蛋白中包含的支持所述蛋白自吞噬體或內(nèi)體逆轉(zhuǎn)運(yùn)并由此將該蛋白引導(dǎo)入細(xì)胞的胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)域的存在(donnellyjjetal.procnatlacadsciusa.1993apr15；90(8):3530-4；wearschpandcreswellp,nat.rev.immunol.:antigenprocessingandpresentation，posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。mhci重鏈-β2-微球蛋白異二聚體與短肽的裝配由肽加載復(fù)合物協(xié)調(diào),肽加載復(fù)合物由tapasin和erp57的二硫化物連接的二聚體,鈣網(wǎng)蛋白(crt)和tap分子構(gòu)成。tapasin也支持肽編輯以選擇穩(wěn)定的肽-mhci復(fù)合物在細(xì)胞表面上的呈遞(wearschpandcreswellp,nat.rev.immunol.:antigenprocessingandpresentation,posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。一旦肽加載到mhci分子上,肽加載復(fù)合物分解且加載了肽的mhci經(jīng)由分泌途徑離開(kāi)er以到達(dá)細(xì)胞表面。在er的內(nèi)腔中未能結(jié)合mhci分子的肽經(jīng)sec61通道自er去除而進(jìn)入胞質(zhì)溶膠,在那里它們可能進(jìn)行尺寸上的進(jìn)一步修整,而且可能由tap轉(zhuǎn)運(yùn)回入er,結(jié)合mhci分子(koopmannjo,albringj,hütere,etal.(july2000)immunity,13(1):117-27.；albringj,koopmannjo,gj,momburgf(january2004),mol.immunol.40(10):733-41)。細(xì)胞表面上的mhci分子將它們加載的肽呈遞給細(xì)胞毒性cd8t淋巴細(xì)胞(cd8t細(xì)胞,也稱作ctl)。ctl觸發(fā)經(jīng)mhci呈遞肽表位的細(xì)胞通過(guò)凋亡進(jìn)行編程性細(xì)胞死亡。由此,mhci介導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫,它是免疫系統(tǒng)解決細(xì)胞內(nèi)病原體，也是解決表達(dá)突變型或異常蛋白的自身細(xì)胞的主要手段。過(guò)去幾年里研究的一個(gè)焦點(diǎn)是利用誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)對(duì)多種不受細(xì)胞內(nèi)病原體影響的患病細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)的殺傷。由于所有有核細(xì)胞均表達(dá)mhci,因此誘導(dǎo)經(jīng)mhci呈遞細(xì)胞內(nèi)病原體的抗原是一種有希望的對(duì)患病細(xì)胞群體,例如腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)經(jīng)ctl的編程性細(xì)胞死亡的辦法。在這點(diǎn)上，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種辦法,通過(guò)由結(jié)合靶細(xì)胞的結(jié)合配偶和細(xì)胞內(nèi)病原體的肽部分構(gòu)成的免疫綴合物將自細(xì)胞內(nèi)病原體,例如病毒衍生的抗原投遞至某種患病細(xì)胞群體以誘導(dǎo)所投遞肽的已加工片段經(jīng)mhci在患病細(xì)胞的表面上的呈遞。然后患病細(xì)胞會(huì)被ctl清除。一種辦法披露于ep0659439a1。ep0659439a1披露了一種免疫綴合物,其中病毒衍生肽(已修飾流感基質(zhì)肽57-68)或細(xì)菌衍生肽(伯格氏瘧原蟲(chóng)(plasmodiumbergei)肽249-260)與靶細(xì)胞結(jié)合抗體偶聯(lián)。通過(guò)添加n端半胱氨酸殘基及隨后經(jīng)spdp接頭交聯(lián)至抗體,各肽與抗體偶聯(lián)以生成免疫綴合物。一旦內(nèi)在化,包括所添加的n端半胱氨酸殘基的各肽自綴合物分離,在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工并由mhci呈遞。然而,該免疫綴合物的ic50值很高(0.5μmol/l)。如依照ep0659439a1的辦法中描述的,一項(xiàng)主要挑戰(zhàn)是刺激針對(duì)外源抗原的mhci限制性ctl應(yīng)答。在外源提供抗原的大多數(shù)情況中,它沒(méi)有傳送至胞質(zhì),從那里它能轉(zhuǎn)運(yùn)至mhci途徑。ep0659439a1提出了一種方法學(xué)來(lái)改善包括一旦加工能經(jīng)mhci呈遞的肽的免疫綴合物的ic50值。在這里,推薦在免疫綴合物中包括轉(zhuǎn)運(yùn)域從而經(jīng)逆轉(zhuǎn)運(yùn)將免疫綴合物傳送至胞質(zhì)。然而,ep0659439a1沒(méi)有顯示關(guān)于這種方法學(xué)的結(jié)果。因此,仍然需要改良的辦法,通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫來(lái)誘導(dǎo)對(duì)靶細(xì)胞的殺傷。發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種免疫綴合物,其包含至少一個(gè)經(jīng)可切割鍵與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在免疫綴合物內(nèi),可切割鍵安排成使得一旦切割,經(jīng)mhci類分子直接可呈遞的所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種免疫綴合物,其中t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種免疫綴合物,其中t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種免疫綴合物,其中可切割鍵是在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)可切割的。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種免疫綴合物,其中免疫綴合物不包含轉(zhuǎn)運(yùn)域。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種免疫綴合物,其中在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞后少于12小時(shí)內(nèi),t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子在靶細(xì)胞的表面上呈遞。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種藥物組合物,其包含與藥學(xué)可接受載劑組合的依照本發(fā)明的免疫綴合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的用途。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種用于生成依照本發(fā)明的免疫綴合物的方法,其包含下述步驟:a)提供重組靶細(xì)胞結(jié)合模塊,b)提供t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,并c)經(jīng)可切割鍵偶聯(lián)至少一個(gè)所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與所述靶細(xì)胞結(jié)合模塊。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種用于生成免疫綴合物的方法,其中未修飾的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用作藥物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊的依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用于治療癌癥。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用于治療傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患疾病的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。依照本發(fā)明,自免疫綴合物切割的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽能在沒(méi)有進(jìn)一步加工或在靶細(xì)胞內(nèi)修整的情況下經(jīng)mhci類分子直接呈遞。一旦免疫綴合物內(nèi)在化，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)自免疫綴合物切割,而且肽在內(nèi)體隔室中直接(即在沒(méi)有進(jìn)一步加工或修整的情況下)加載到mhci類分子并轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞表面用于經(jīng)mhci類呈遞。令人驚訝地,達(dá)到了與本領(lǐng)域已知辦法相比可觀更低的ic50值。附圖簡(jiǎn)述圖1:已修飾cmv肽中降低的t細(xì)胞激活,如使用不同腫瘤細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基通過(guò)ifnγ-elispot測(cè)量的。a)mda-mb231細(xì)胞在rpmi+中,b)mda-mb231細(xì)胞在aim-v中,c)hct-116細(xì)胞在rpmi+中,d)hct-116細(xì)胞在aim-v中，e)t2細(xì)胞在rpmi+中。如標(biāo)示的,使用肽濃度13,245μm或1,3245μm實(shí)施分析。圖2:依照本發(fā)明的免疫綴合物的提議作用模式。a:免疫綴合物結(jié)合靶細(xì)胞。b:免疫綴合物內(nèi)在化入內(nèi)體隔室。c:在內(nèi)體隔室中t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放。d:在內(nèi)體隔室中給mhci分子加載所釋放的肽。e:加載了肽的mhci分子傳送至靶細(xì)胞表面。f:肽特異性cd8t細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞表面上加載了肽的mhci分子,在靶細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。圖3:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的抗cdcp1抗體的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cdcp1的mda-mb231細(xì)胞的結(jié)合。圖4:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的抗cd19抗體的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cd19的rl細(xì)胞的結(jié)合。圖5:使用依照本發(fā)明的免疫綴合物關(guān)于肽特異性t細(xì)胞激活的ifn-γelispot的結(jié)果。標(biāo)示的濃度指肽濃度。a)用包含單克隆抗cdcp-1抗體和hla-a2限制性ebv肽的免疫綴合物處理表達(dá)cdcp-1的hct-116細(xì)胞。b)用包含單克隆抗cd19抗體和hla-a2限制性ebv肽的免疫綴合物處理表達(dá)cd19的hla-a2陽(yáng)性rl和hla-a2陰性ramos細(xì)胞。c)用包含單克隆抗cdcp-1抗體和hla-a2限制性ebv肽的免疫綴合物處理不同的表達(dá)cdcp-1的腫瘤細(xì)胞。圖6:通過(guò)xcelligence和ldh釋放測(cè)定法評(píng)估的對(duì)標(biāo)示腫瘤細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞殺傷。(a)由包含與hla-a2限制性ebv肽偶聯(lián)的抗cdcp1抗體的免疫綴合物介導(dǎo)的對(duì)hla-a2陽(yáng)性mda-mb231細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞殺傷。(b)由包含與具有非末端半胱氨酸殘基的hla-a2限制性ebv肽偶聯(lián)的抗cdcp1抗體的免疫綴合物介導(dǎo)的對(duì)a-375細(xì)胞的特異性殺傷。(c)由包含與具有非末端半胱氨酸殘基的hla-a2限制性ebv肽偶聯(lián)的抗cdcp1抗體的免疫綴合物介導(dǎo)的對(duì)hla-a2陽(yáng)性mda-mb231細(xì)胞的特異性殺傷。標(biāo)示的濃度指肽濃度。圖7:由包含hla-a1限制性flu肽的免疫綴合物介導(dǎo)的對(duì)hla-a1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞殺傷。a-c)6,10和18小時(shí)后通過(guò)xcelligence測(cè)定法測(cè)量的結(jié)果。d-f)通過(guò)ldh釋放測(cè)定法測(cè)量的結(jié)果。a和d)a-375細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞比(e:t)為1∶1和1∶2,b和e)hct-116細(xì)胞,c和f)pc3細(xì)胞。圖8:包含單克隆抗cdcp1抗體的依照本發(fā)明的免疫綴合物在靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移hupbmc的mda-mb231皮下模型中的抗腫瘤活性。測(cè)試方案(圖8a)和結(jié)果(圖8b)。圖9:包含單克隆抗cdcp1抗體的依照本發(fā)明的免疫綴合物與抗pd1治療組合在靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移hupbmc的已建立mda-mb231皮下模型中的抗腫瘤活性。測(cè)試方案(圖9a)和腫瘤生長(zhǎng)抑制(圖9b)和t細(xì)胞增多(圖9c)的結(jié)果。發(fā)明詳述1.定義如本文中使用的,術(shù)語(yǔ)“免疫綴合物”指與異源功能性分子偶聯(lián)的靶細(xì)胞結(jié)合模塊(例如特異性結(jié)合靶細(xì)胞的抗體或結(jié)合它在靶細(xì)胞上的受體的配體)。依照本發(fā)明的免疫綴合物中本質(zhì)上存在的功能性分子是t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。另外,可以采用別的功能性分子,像細(xì)胞毒劑。如本文中使用的,“靶細(xì)胞結(jié)合模塊”指特異性結(jié)合靶細(xì)胞的模塊。該術(shù)語(yǔ)包括能夠特異性結(jié)合靶細(xì)胞的抗體以及其它天然(例如受體,配體)或合成(例如darpin)分子。如本文中使用的,“特異性結(jié)合靶細(xì)胞”表示所述模塊優(yōu)先結(jié)合復(fù)雜混合物內(nèi)的靶細(xì)胞。靶細(xì)胞結(jié)合模塊對(duì)靶細(xì)胞的結(jié)合的親和力通過(guò)術(shù)語(yǔ)ka(蛋白質(zhì)自蛋白質(zhì)/靶細(xì)胞復(fù)合物解離的速率常數(shù)),kd(解離常數(shù)),和kd(kd/ka)來(lái)定義。在一個(gè)實(shí)施方案中,其中靶細(xì)胞結(jié)合模塊是抗體,特異性結(jié)合靶細(xì)胞表示10-8mol/l或更少,在一個(gè)實(shí)施方案中,10-8m至10-13mol/l的結(jié)合親和力(kd)。術(shù)語(yǔ)“抗體”在本文中以最廣義使用且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu),包括但不限于單克隆抗體,多克隆抗體,多特異性抗體(例如雙特異性抗體),和抗體片段,只要它們展現(xiàn)期望的抗原結(jié)合活性。術(shù)語(yǔ)“配體”在本文中用于與靶細(xì)胞上的生物分子形成復(fù)合物以滿足生物學(xué)目的的分子,優(yōu)選蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中,配體是具有結(jié)合限定類型的受體的傾向的選擇性配體。如本文中使用的,“肽”是通過(guò)肽鍵連接的氨基酸單體的短鏈。結(jié)合mhci類的肽典型地長(zhǎng)度為8至12個(gè)氨基酸。如本文中使用的,術(shù)語(yǔ)“經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽”指經(jīng)mhci類分子可呈遞的但并非經(jīng)mhcii可呈遞的且觸發(fā)cd8t細(xì)胞應(yīng)答的肽。為了簡(jiǎn)化,該術(shù)語(yǔ)在本文中也可以僅僅稱作“t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽”。在本發(fā)明的范圍內(nèi)使用的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽典型地衍生自非自身(即非人)病原體來(lái)源。在這種語(yǔ)境中的術(shù)語(yǔ)“衍生自”表示t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與非自身病原體來(lái)源的天然發(fā)生t細(xì)胞表位同一(即分享相同的氨基酸序列)。換言之,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列與非自身病原體來(lái)源的蛋白質(zhì)抗原的氨基酸序列的部分序列同一。雖然t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的病原體來(lái)源可以是病毒或細(xì)菌起源的,但是mhci可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽典型地衍生自細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外病原體。細(xì)胞內(nèi)病原體包括病毒,細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌或寄生物。細(xì)胞外病原體包括寄生物和細(xì)菌。雖然用于本發(fā)明的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生t細(xì)胞表位分享相同氨基酸序列,但是依照本發(fā)明的免疫綴合物的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽典型地是合成起源的。在本領(lǐng)域中,用于誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的自細(xì)胞內(nèi)病原體衍生的肽偶爾通過(guò)氨基酸替代或添加而修飾以改善它們的生理學(xué)特性,例如它們的溶解性。然而,對(duì)于本發(fā)明,只使用天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽(即不包括進(jìn)一步氨基酸序列修飾的分享野生型病原體肽的氨基酸序列的肽)。如本文中使用的,“天然發(fā)生”表示與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽分享(即由其組成)對(duì)應(yīng)的經(jīng)mhci類可呈遞的非自身病原體t細(xì)胞表位的氨基酸序列。換言之,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由與通過(guò)在靶細(xì)胞內(nèi)切割對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生非自身病原體可生成的氨基酸序列同一的氨基酸序列組成。因而,在本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)內(nèi),“天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽”或“經(jīng)mhci類可呈遞的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽”可以是合成起源的,然而它的氨基酸序列與通過(guò)切割對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生非自身病原體可生成的肽相比不包含任何氨基酸修飾,特別是沒(méi)有氨基酸添加,刪除或替代。再一次換言之,與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列與非自身病原體的蛋白質(zhì)抗原的氨基酸序列的部分序列(在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,長(zhǎng)8至12個(gè)氨基酸)同一。陳述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽“天然包含”獨(dú)特氨基酸殘基表示在對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽內(nèi)的相同位置處存在獨(dú)特氨基酸殘基。因而,天然包含半胱氨酸殘基的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽表示自非自身病原體衍生的肽,其中非自身病原體的蛋白質(zhì)抗原的氨基酸序列中與所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的部分序列包含相同位置處的半胱氨酸殘基。當(dāng)指出提供就野生型病原體t細(xì)胞表位而言“沒(méi)有氨基酸序列修飾的”t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽時(shí),表示肽的氨基酸序列與對(duì)應(yīng)的非自身病原體的天然可衍生t細(xì)胞表位(即通過(guò)切割對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生非自身病原體可生成的t細(xì)胞表位)的氨基酸序列是同一的。特別地,肽的氨基酸序列與天然發(fā)生肽相比不包括氨基酸殘基的添加,刪除或替代。如本文中使用的,術(shù)語(yǔ)“氨基酸”表示擁有位于羧基基團(tuán)的α位置的氨基模塊的有機(jī)分子。氨基酸的例子包括:精氨酸,甘氨酸,鳥(niǎo)氨酸,賴氨酸,組氨酸,谷氨酸,天冬氨酸,異亮氨酸,亮氨酸,丙氨酸,苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸,甲硫氨酸,絲氨酸,脯氨酸。所采用的氨基酸在每一種情況中任選是l型。氨基酸可以依照共同側(cè)鏈特性來(lái)分組:(1)疏水性:正亮氨酸,met,ala,val,leu,ile；(2)中性親水性:cys,ser,thr,asn,gln；(3)酸性:asp,glu；(4)堿性:his,lys,arg；(5)影響鏈取向的殘基:gly,pro；(6)芳香族的:trp,tyr,phe。表–具有特定特性的氨基酸“表位”是蛋白質(zhì)抗原中受到免疫系統(tǒng),例如受到抗體,b細(xì)胞或t細(xì)胞識(shí)別的部分?！皌細(xì)胞表位”在細(xì)胞的表面上呈遞,在那里它結(jié)合至mhc分子。通過(guò)mhci可呈遞的t細(xì)胞表位能受到細(xì)胞毒性cd8t淋巴細(xì)胞(cd8t細(xì)胞或ctl)的t細(xì)胞受體結(jié)合。通過(guò)mhci可呈遞的t細(xì)胞表位典型地是長(zhǎng)度為8至12個(gè)氨基酸的肽。因而,如本文中提到的,“經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽”表示不需要在靶細(xì)胞中加工(例如通過(guò)切割一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基)就能夠結(jié)合mhci復(fù)合物(但不結(jié)合mhcii)的病原體衍生肽(在一個(gè)實(shí)施方案中,由8至12個(gè)氨基酸殘基組成的肽)。在本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)內(nèi),“可切割鍵”涉及免疫綴合物內(nèi)安排在靶細(xì)胞結(jié)合模塊和t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽之間,容許t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽分離以由mhci類分子直接呈遞的鍵?？汕懈铈I的定位與t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽直接聯(lián)接。自免疫綴合物切割t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽導(dǎo)致釋放具有它的原始氨基酸序列且沒(méi)有任何另外的氨基酸殘基的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。取決于可切割鍵的類型,一旦“無(wú)痕跡”或“非無(wú)痕跡”切割,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放。如本文中使用的,“非無(wú)痕跡”釋放表示所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包括接頭的痕跡(即處于除氨基酸之外的化學(xué)模塊的形式的痕跡),前提是所述痕跡不干擾mhci類結(jié)合。明確提到，在本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)內(nèi)，如本文中提到的,“非無(wú)痕跡釋放”不包括釋放包括另外的氨基酸殘基的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。如本文中使用的,“無(wú)痕跡”釋放表示所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽不包括接頭的任何痕跡?！皃h依賴性切割”表示切割可切割鍵是由ph的變化而觸發(fā)的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,ph依賴性切割是在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)存在的ph觸發(fā)的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,ph依賴性切割是在ph5.5-6.5觸發(fā)的。如本文中使用的,“酶促切割”表示蛋白水解切割免疫綴合物,其一般通過(guò)水解肽鍵而發(fā)生。酶促切割是由蛋白酶,例如弗林蛋白酶來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在免疫綴合物內(nèi)創(chuàng)建通過(guò)酶促切割而可切割的可切割鍵可以例如通過(guò)經(jīng)肽接頭將t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽結(jié)合至靶細(xì)胞結(jié)合模塊來(lái)實(shí)現(xiàn)。t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊的結(jié)合可以通過(guò)二硫鍵,酯鍵，化學(xué)接頭，肽接頭或通過(guò)非共價(jià)結(jié)合(例如通過(guò)生物素/鏈霉親合素，生物素/茶堿)來(lái)實(shí)現(xiàn)。t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊的“共價(jià)偶聯(lián)”或“共價(jià)結(jié)合”表示通過(guò)化學(xué)鍵的偶聯(lián)，其牽涉在t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的一個(gè)原子和靶細(xì)胞結(jié)合模塊的一個(gè)原子之間分享電子對(duì)。t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊的“非共價(jià)偶聯(lián)”或“非共價(jià)結(jié)合”表示不牽涉分享電子的偶聯(lián)。非共價(jià)偶聯(lián)的例子包括免疫學(xué)結(jié)合或經(jīng)生物素/親合素，生物素/鏈霉親合素等等的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中,免疫學(xué)結(jié)合是經(jīng)免疫綴合物中包括的抗體實(shí)現(xiàn)的偶聯(lián),其中抗體特異性結(jié)合結(jié)合至t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的有機(jī)分子。為了在內(nèi)在化之后釋放t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,在這個(gè)實(shí)施方案中,經(jīng)可切割鍵將t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與所述有機(jī)分子偶聯(lián)。有機(jī)分子優(yōu)選是分子量高至900da的小分子。此類有機(jī)分子的例子包括生物素和茶堿。如本文中使用的,“肽接頭”或“接頭肽”指具有優(yōu)選合成起源的氨基酸序列的肽?；蚴潜疚闹惺褂玫碾慕宇^包含包括切割位點(diǎn)(在一個(gè)實(shí)施方案中,蛋白酶切割位點(diǎn))的功能性域,或是肽接頭在融合至t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽時(shí)創(chuàng)建切割位點(diǎn)(在一個(gè)實(shí)施方案中,蛋白酶切割位點(diǎn))。本文中使用的肽接頭的氨基酸序列典型地具有8至50個(gè)氨基酸殘基的長(zhǎng)度。在一個(gè)實(shí)施方案中,本文中使用的肽接頭包含弗林蛋白酶切割位點(diǎn)且肽接頭的氨基酸序列包含:-r-x-r-r,其中x是任何氨基酸殘基,或-r-x-k-r,其中x是任何氨基酸殘基。在本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)內(nèi),“轉(zhuǎn)運(yùn)域”是負(fù)責(zé)使得能夠到達(dá)胞質(zhì)溶膠的膜轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)構(gòu)蛋白域或所述蛋白域的功能性部分。轉(zhuǎn)運(yùn)域的一個(gè)例子是來(lái)自綠膿假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)外毒素a的域ii。術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”指其形式使得允許其中含有的活性組分的生物學(xué)活性為有效,且不含對(duì)會(huì)接受組合物施用的受試者有不可接受的毒性的另外的成分的制備物。本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法來(lái)施用。正如技術(shù)人員會(huì)領(lǐng)會(huì)的，施用的路徑和/或模式會(huì)隨期望的結(jié)果而變化。為了通過(guò)某些施用路徑來(lái)施用依照本發(fā)明的免疫綴合物,可能必須用防止它失活的材料給免疫綴合物包衣或與防止它失活的材料共施用免疫綴合物。例如,可以在適宜的載劑,例如脂質(zhì)體，或稀釋劑中將免疫綴合物施用于受試者。藥學(xué)可接受稀釋劑包括鹽水和水性緩沖溶液。“藥學(xué)可接受載劑”指藥物配制劑中除活性組分之外的對(duì)受試者無(wú)毒的組分。藥學(xué)可接受載劑包括生理學(xué)相容的任何和所有溶劑,分散介質(zhì),涂層,抗細(xì)菌和抗真菌劑,等張和吸收延遲劑,等等。優(yōu)選地,載劑適合于靜脈內(nèi),肌肉內(nèi),皮下,胃腸外,脊柱或表皮施用(例如通過(guò)注射或輸注)。依照本發(fā)明的藥物組合物還可以含有佐劑,諸如防腐劑,潤(rùn)濕劑,乳化劑和分散劑。防止存在微生物可以通過(guò)滅菌規(guī)程,見(jiàn)上文及通過(guò)包括各種抗細(xì)菌和抗真菌劑,例如對(duì)羥基苯甲酸酯,氯丁醇,苯酚,山梨酸,等等二者來(lái)確保。可能還想要在組合物中包括等張劑,諸如糖,氯化鈉,等等。另外,可注射藥物形式延長(zhǎng)的吸收可以通過(guò)包括延遲吸收的藥劑,諸如單硬脂酸鋁和明膠來(lái)實(shí)現(xiàn)。如本文中使用的,短語(yǔ)“胃腸外施用”表示除腸和表面施用之外的施用模式，通常通過(guò)注射，而且包括但不限于靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，鞘內(nèi)，囊內(nèi)，眶內(nèi)，心內(nèi)，真皮內(nèi)，腹膜內(nèi)，經(jīng)氣管，皮下，表皮下，關(guān)節(jié)內(nèi)，囊下,蛛網(wǎng)膜下,脊柱內(nèi),硬膜外和胸骨內(nèi)注射和輸注。不管所選擇的施用路徑,通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的常規(guī)方法將可以以合適的水合形式使用的本發(fā)明的免疫綴合物和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成藥學(xué)可接受的劑量形式。本發(fā)明的藥物組合物中活性組分的實(shí)際劑量水平可以變化,從而獲得在對(duì)患者無(wú)毒的情況下對(duì)特定患者,組合物,和施用模式有效實(shí)現(xiàn)期望的治療性響應(yīng)的量的活性組分。所選擇的劑量水平會(huì)取決于多個(gè)藥動(dòng)學(xué)因素,包括所采用的本發(fā)明的特定組合物的活性,施用的路徑,施用的時(shí)間,所采用的特定化合物的排泄速率,治療的持續(xù)時(shí)間,與所采用的特定組合物組合使用的其它藥物,化合物和/或材料,所治療的患者年齡,性別,重量,狀況,一般健康和之前的醫(yī)學(xué)史,及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域公知的類似因素。組合物必須是無(wú)菌的且流動(dòng)性達(dá)到通過(guò)注射器可投遞組合物的程度。在水以外,載劑優(yōu)選是等張緩沖鹽水溶液。適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可以例如通過(guò)使用涂層諸如卵磷脂,在分散的情況中通過(guò)維持所需粒度及通過(guò)使用表面活性劑來(lái)維持。在許多情況中,優(yōu)選在組合物中包括等張劑,例如糖,多元醇諸如甘露醇或山梨醇,和氯化鈉。如本文中使用的,術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒劑”指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒劑包括但不限于放射性同位素(例如at211,i131,i125,y90,re186,re188,sm153,bi212,p32,pb212和lu的放射性同位素)；化療劑或化療藥物(例如甲氨蝶呤,阿霉素,長(zhǎng)春花生物堿(長(zhǎng)春新堿,長(zhǎng)春堿,依托泊苷),多柔比星,美法侖,絲裂霉素c,苯丁酸氮芥,柔紅霉素或其它嵌入劑)；生長(zhǎng)抑制劑；酶及其片段,諸如溶核酶；抗生素；毒素諸如小分子毒素或細(xì)菌,真菌,植物或動(dòng)物起源的酶活性毒素,包括其片段和/或變體；和下文公開(kāi)的各種抗腫瘤劑或抗癌劑。如本文中使用的,術(shù)語(yǔ)“癌”或“癌癥”指增殖性疾病,諸如淋巴瘤,淋巴細(xì)胞性白血病,肺癌,非小細(xì)胞肺(nscl)癌,支氣管肺泡細(xì)胞肺癌,骨癌,胰腺癌,皮膚癌,頭或頸癌,皮膚或眼內(nèi)黑素瘤,子宮癌,卵巢癌,直腸癌,肛門區(qū)癌,胃癌,胃的癌,結(jié)腸癌,乳腺癌,子宮癌,輸卵管癌,子宮內(nèi)膜癌,宮頸癌,陰道癌,外陰癌,霍奇金氏病,食管癌,小腸癌,內(nèi)分泌系統(tǒng)癌,甲狀腺癌,甲狀旁腺癌,腎上腺癌,軟組織肉瘤,尿道癌,陰莖癌,前列腺癌,膀胱癌,腎或輸尿管癌,腎細(xì)胞癌,腎盂癌,間皮瘤,肝細(xì)胞癌,膽癌,中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)贅生物,脊柱軸腫瘤,腦干膠質(zhì)瘤,多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤,星形細(xì)胞瘤,施萬(wàn)細(xì)胞瘤,室管膜瘤,髓母細(xì)胞瘤,腦膜瘤,鱗狀細(xì)胞癌,垂體腺瘤和尤因氏肉瘤,包括任何上述癌癥的頑固性型式,或一種或多種上述癌癥的組合。術(shù)語(yǔ)“半最大抑制性濃度”(“ic50”)表示特定化合物或分子在體外獲得50％抑制生物學(xué)過(guò)程所需濃度。ic50值可以對(duì)數(shù)換算成pic50值(-logic50),其中較高的值指示指數(shù)上較大的效力。ic50值不是絕對(duì)值,而是依賴于實(shí)驗(yàn)條件,例如所采用的濃度。ic50值可以使用cheng-prusoff方程(biochem.pharmacol.(1973)22:3099)換算成絕對(duì)抑制常數(shù)(ki)?！爸亟M蛋白”是由重組改造的宿主細(xì)胞生成的蛋白質(zhì)。它任選是分離的或純化的。在靶細(xì)胞結(jié)合模塊是蛋白質(zhì)的情況中,靶細(xì)胞結(jié)合蛋白優(yōu)選是通過(guò)重組手段生成的。用于重組生成蛋白質(zhì)的方法是現(xiàn)有技術(shù)廣泛知道的,而且包括在原核和真核細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì),隨后分離蛋白質(zhì),且通常純化至藥學(xué)可接受純度。為了在宿主細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法將編碼蛋白質(zhì)或其部分的核酸插入表達(dá)載體。在適宜的原核或真核宿主細(xì)胞,像cho細(xì)胞，ns0細(xì)胞，sp2/0細(xì)胞,hek293細(xì)胞,cos細(xì)胞,per.c6細(xì)胞,酵母,或大腸桿菌細(xì)胞中實(shí)施表達(dá),并自細(xì)胞(上清液或裂解后的細(xì)胞)回收蛋白質(zhì)。用于重組生成抗體的一般方法是現(xiàn)有技術(shù)公知的,而且記載于例如綜述性論文makrides,s.c.,proteinexpr.purif.17(1999)183-202；geisse,s.,etal.,proteinexpr.purif.8(1996)271-282；kaufman,r.j.,mol.biotechnol.16(2000)151-161；werner,r.g.,drugres.48(1998)870-880。2.本發(fā)明的實(shí)施方案的詳細(xì)描述自ep0659437a1知道包含t細(xì)胞特異性病原體肽和特異性結(jié)合靶細(xì)胞上的表面受體的蛋白的綴合物。然而,細(xì)胞表面上mhci類肽呈遞和t細(xì)胞活化的效率在ep0659437a1披露的辦法中較低。本發(fā)明的發(fā)明人觀察到,不受這種理論束縛,這種作用因ep0659437a1披露的含肽綴合物需要在靶細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工這一事實(shí)而發(fā)生。這受到在大多數(shù)情況中外源提供的抗原沒(méi)有傳送至胞質(zhì)(它在那里受到蛋白酶體加工并進(jìn)一步轉(zhuǎn)運(yùn)至mhci類途徑及在細(xì)胞表面上呈遞)的問(wèn)題限制。另一個(gè)推測(cè)另外發(fā)生的作用會(huì)是抗原加工機(jī)構(gòu)和呈遞過(guò)程(尤其是在腫瘤細(xì)胞內(nèi))是有缺陷的(ferrones.,advancesincancerresearch,93(2005)189-234)。本發(fā)明提供一種辦法來(lái)改善t細(xì)胞特異性病原體肽的mhci類呈遞。依照本發(fā)明,在免疫綴合物內(nèi)在化后在內(nèi)體隔室中自免疫綴合物釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽直接適合于經(jīng)結(jié)合至mhci類復(fù)合物而呈遞(不需要在靶細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工或修整)。t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在內(nèi)體隔室中結(jié)合至mhci類分子,在mhci類的背景中通過(guò)內(nèi)體再循環(huán)途徑行進(jìn)至靶細(xì)胞的表面(donaldsonj.g.,natrevmolcellbiol.sep2009；10(9):597-608)且不需要轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)溶膠中的抗原加工機(jī)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)的進(jìn)一步加工。由此,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)可切割鍵彼此偶聯(lián)從而釋放(在切割之后)由它的原始氨基酸序列組成的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。換言之,當(dāng)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物切割時(shí),它與天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列相比不包含另外的任何氨基酸殘基或缺少任何氨基酸殘基(即所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽長(zhǎng)度相同)。因此,依照本發(fā)明的免疫綴合物是更好的適合的候選來(lái)介導(dǎo)cd8t細(xì)胞活化及誘導(dǎo)靶細(xì)胞中的細(xì)胞死亡。憑借依照本發(fā)明的免疫綴合物,(a)以可觀降低的所需量的免疫綴合物且(b)更快地誘導(dǎo)靶細(xì)胞裂解,具體是與所分離的肽需要在靶細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工的構(gòu)建物相比。本發(fā)明涉及一種免疫綴合物,其包含至少一個(gè)經(jīng)可切割鍵與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其中可切割鍵安排成使得一旦切割,經(jīng)mhci類分子(直接)可呈遞的所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室中釋放。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是在沒(méi)有在靶細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工的情況下經(jīng)mhci類可呈遞的。本發(fā)明還涉及一種免疫綴合物,其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列與天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列同一。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列與同靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列同一。本發(fā)明還涉及一種免疫綴合物,其包含至少一個(gè)經(jīng)可切割鍵與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其中可切割鍵安排成使得一旦切割,所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放,其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由與同靶細(xì)胞結(jié)合蛋白偶聯(lián)的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽同一數(shù)目的氨基酸組成且其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽適合于經(jīng)mhci類復(fù)合物呈遞。本發(fā)明還涉及一種免疫綴合物，其包含至少一個(gè)經(jīng)可切割鍵與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的由8-12個(gè)氨基酸殘基組成的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其中可切割鍵安排成使得一旦切割,所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放,其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由與結(jié)合至靶細(xì)胞結(jié)合模塊的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽同一數(shù)目的氨基酸組成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由8至12個(gè)氨基酸組成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含n或c端半胱氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是包含n或c端半胱氨酸殘基的天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含它的氨基酸序列的n端位置(自n端至c端方向的位置1)處的半胱氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽天然包含它的氨基酸序列的n端位置(自n端至c端方向的位置1)處的半胱氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含它的氨基酸序列自n端至c端方向的位置2處的亮氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽天然包含它的氨基酸序列自n端至c端方向的位置2處的亮氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由8-12個(gè)氨基酸殘基組成且天然包含它的氨基酸序列自n端至c端方向的位置2處的亮氨酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物包括多至五個(gè)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物包括多至十個(gè)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自受到靶細(xì)胞的宿主生物體的免疫細(xì)胞識(shí)別的非自身病原體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外病原體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自細(xì)胞內(nèi)病原體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自病毒細(xì)胞內(nèi)病原體。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽選自seqidno:2至seqidno:5。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自埃巴二氏病毒。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自埃巴二氏病毒且選自seqidno:2和seqidno:4。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自人皰疹病毒5。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自人皰疹病毒5且是seqidno:5的。在一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自甲型流感。在一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自甲型流感且是seqidno:3的。在一個(gè)實(shí)施方案中,與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽氨基酸序列與非自身病原體(在一個(gè)實(shí)施方案中,細(xì)胞內(nèi)病原體)的蛋白質(zhì)抗原的氨基酸序列的部分序列同一,優(yōu)選長(zhǎng)8至12個(gè)氨基酸。t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)可切割鍵結(jié)合至靶細(xì)胞結(jié)合模塊。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，可切割鍵是通過(guò)化學(xué)，ph依賴性或酶促切割可切割的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵是在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后可切割的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵是在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)可切割的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵是在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)可切割的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵容許t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物無(wú)痕跡釋放。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊共價(jià)偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)二硫鍵,酯鍵,肽鍵或經(jīng)接頭模塊共價(jià)偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵選自二硫鍵和酯鍵。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割鍵是二硫鍵。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基且可切割鍵是二硫鍵。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是蛋白質(zhì)且在t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的半胱氨酸殘基和靶細(xì)胞結(jié)合蛋白的半胱氨酸殘基之間形成二硫鍵。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,在靶細(xì)胞結(jié)合模塊和t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽之間存在肽接頭。在這種情況中,在t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的半胱氨酸殘基和肽接頭的半胱氨酸殘基之間形成二硫鍵。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)可切割接頭模塊偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)肽接頭或經(jīng)化學(xué)接頭偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)肽接頭偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)氨基酸序列長(zhǎng)度為8至50個(gè)氨基酸殘基的肽接頭偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含蛋白酶切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含在靶細(xì)胞的內(nèi)體或溶酶體隔室中可切割的蛋白酶切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含弗林蛋白酶切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,包含蛋白酶切割位點(diǎn)的可切割接頭模塊是肽接頭。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,包含蛋白酶切割位點(diǎn)的可切割接頭模塊是包含所述蛋白酶切割位點(diǎn)的肽接頭。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,包含蛋白酶切割位點(diǎn)的可切割接頭模塊是包含所述弗林蛋白酶切割位點(diǎn)的肽接頭。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含ph依賴性切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室中可切割的ph依賴性切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,可切割接頭模塊包含在ph5.5-6.5可切割的ph依賴性切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,包含ph依賴性切割位點(diǎn)的可切割接頭模塊是化學(xué)接頭。在一個(gè)實(shí)施方案中,包含ph依賴性切割位點(diǎn)的可切割接頭模塊選自腙,肟,馬來(lái)酸酰胺和縮酮,如下所示:在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊非共價(jià)偶聯(lián)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,非共價(jià)偶聯(lián)是通過(guò)免疫學(xué)結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,免疫學(xué)結(jié)合是通過(guò)特異性結(jié)合免疫綴合物內(nèi)包含的有機(jī)分子的抗體而實(shí)現(xiàn)的。然后對(duì)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的結(jié)合是在抗體和與t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽偶聯(lián)的所述有機(jī)分子之間實(shí)現(xiàn)的。為了實(shí)現(xiàn)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的無(wú)痕跡釋放,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)可切割鍵與所述有機(jī)分子偶聯(lián)。如此,在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物包含-靶細(xì)胞結(jié)合模塊,其處于包含靶細(xì)胞結(jié)合模塊和特異性結(jié)合有機(jī)分子,優(yōu)選生物素或茶堿的第二模塊(在一個(gè)實(shí)施方案中,抗體)的多特異性,優(yōu)選雙特異性實(shí)體(在一個(gè)實(shí)施方案中,重組融合蛋白)的形式,和-t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其經(jīng)可切割鍵與能受到第二蛋白特異性結(jié)合的有機(jī)分子偶聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方案中,有機(jī)分子是分子量高至900da的小分子。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,有機(jī)分子是生物素或茶堿。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,有機(jī)分子是茶堿。在另一個(gè)實(shí)施方案中,非共價(jià)偶聯(lián)是通過(guò)高親和力結(jié)合,在一個(gè)實(shí)施方案中,通過(guò)生物素-親合素結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的。在另一個(gè)實(shí)施方案中,非共價(jià)偶聯(lián)是通過(guò)受到靶細(xì)胞結(jié)合模塊中存在的第二結(jié)合模塊(例如fab片段)識(shí)別的肽標(biāo)簽之間的高親和力結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的,其中在t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和肽標(biāo)簽之間存在可切割鍵。如此,在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物包含-靶細(xì)胞結(jié)合模塊,其處于包含靶細(xì)胞結(jié)合模塊和特異性結(jié)合肽標(biāo)簽,優(yōu)選flag或v5的第二模塊(在一個(gè)實(shí)施方案中,抗體)的多特異性,優(yōu)選雙特異性實(shí)體(在一個(gè)實(shí)施方案中,重組融合蛋白)的形式,和-t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其經(jīng)可切割鍵與能受到第二蛋白特異性結(jié)合的肽標(biāo)簽偶聯(lián)。依照本發(fā)明的免疫綴合物包含靶細(xì)胞結(jié)合模塊以將t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽傳送至靶細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊能夠內(nèi)在化入靶細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊結(jié)合靶細(xì)胞的細(xì)胞表面抗原。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,其中靶細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞,靶細(xì)胞結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合表面表達(dá)的腫瘤特異性抗原(tsa,其只存在于腫瘤細(xì)胞上且不存在于其它細(xì)胞上)或表面表達(dá)的腫瘤相關(guān)抗原(taa,其存在于腫瘤細(xì)胞上且以較少的程度存在于一些其它細(xì)胞上)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞是與傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)中的疾病嚴(yán)重程度有關(guān)的細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合蛋白是重組蛋白。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合蛋白是特異性結(jié)合靶細(xì)胞的抗體或結(jié)合它在靶細(xì)胞上的受體的配體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合蛋白選自抗體,細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cd19或cdcp-1。在一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cd19。在一個(gè)實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cdcp-1。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cd19或cdcp-1的抗體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cd19的抗體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cdcp-1的抗體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物能夠內(nèi)在化入靶細(xì)胞。依照本發(fā)明,t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是通過(guò)mhci類直接可呈遞的且不需要在靶細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工。因此,在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物不包含轉(zhuǎn)運(yùn)域。憑借本發(fā)明,提供了一種免疫綴合物,其容許釋放經(jīng)mhci類直接可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。因?yàn)樗尫诺膖細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽不需要投遞至胞質(zhì)溶膠中的抗原加工機(jī)構(gòu)，所以t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在短時(shí)間內(nèi)呈遞在靶細(xì)胞的表面上。因而，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于12小時(shí)內(nèi),t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子呈遞在靶細(xì)胞的表面上。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于6小時(shí)內(nèi),t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子呈遞在靶細(xì)胞的表面上。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物能夠在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于6小時(shí)內(nèi)介導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種藥物組合物,其包含依照本發(fā)明的免疫綴合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是一種藥物組合物,其包含與藥學(xué)可接受載劑組合的依照本發(fā)明的免疫綴合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是上文進(jìn)一步描述和限定的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽用于生成依照本發(fā)明的免疫綴合物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的用途。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的經(jīng)cd8t細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞且t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)自免疫綴合物釋放。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于12小時(shí)內(nèi),t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子呈遞在靶細(xì)胞的表面上。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于6小時(shí)內(nèi),t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子呈遞在靶細(xì)胞的表面上。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,免疫綴合物用于在免疫綴合物內(nèi)在化入靶細(xì)胞之后少于6小時(shí)內(nèi)介導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種用于生成依照本發(fā)明的免疫綴合物的方法，其包含下述步驟:a)提供重組靶細(xì)胞結(jié)合模塊,b)提供t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,和c)經(jīng)可切割鍵偶聯(lián)至少一個(gè)所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與所述靶細(xì)胞結(jié)合模塊。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種用于生成免疫綴合物的方法,其中偶聯(lián)未修飾的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊。換言之,本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種用于生成免疫綴合物的方法,其中提供沒(méi)有氨基酸序列修飾的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽并與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種用于生成依照本發(fā)明的用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的經(jīng)cd8t細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)免疫的免疫綴合物的方法,其包含下述步驟:a)提供重組靶細(xì)胞結(jié)合模塊，b)提供t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽，和c)經(jīng)可切割鍵偶聯(lián)至少一個(gè)所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與所述靶細(xì)胞結(jié)合模塊。在一個(gè)實(shí)施方案中,偶聯(lián)未修飾的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與靶細(xì)胞結(jié)合模塊。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于制造藥物組合物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是一種用于制造包含依照本發(fā)明的免疫綴合物的藥物組合物的方法,其包括配制與至少一種藥學(xué)可接受載劑組合的依照本發(fā)明的免疫綴合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用作藥物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊的依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用于治療癌癥。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用于治療傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的免疫綴合物,其用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的經(jīng)cd8t細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)免疫。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的藥物組合物，其用作藥物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的藥物組合物,其中藥物組合物中包含的免疫綴合物包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊,其用于治療癌癥。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的藥物組合物,其用于治療傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是依照本發(fā)明的藥物組合物，其用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的經(jīng)cd8t細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于制造藥物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于制造用于治療癌癥的藥物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于制造用于治療傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)的藥物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是依照本發(fā)明的免疫綴合物用于制造用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的經(jīng)cd8t細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的藥物的用途。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患疾病的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患癌癥患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊的依照本發(fā)明的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患疾病的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的藥物組合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患癌癥的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的藥物組合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種治療罹患傳染病,自身免疫病,糖尿病或變態(tài)反應(yīng)的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照本發(fā)明的藥物組合物來(lái)進(jìn)行。3.本發(fā)明的具體實(shí)施方案下面列出本發(fā)明的具體實(shí)施方案。1.一種免疫綴合物,其包含至少一個(gè)經(jīng)可切割鍵與靶細(xì)胞結(jié)合模塊偶聯(lián)的經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,其中該可切割鍵安排成使得一旦切割,經(jīng)mhci類分子直接可呈遞的所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自該免疫綴合物釋放。2.依照實(shí)施方案1的免疫綴合物,其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列與天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的氨基酸序列同一。3.依照實(shí)施方案2的免疫綴合物,其中所釋放的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽長(zhǎng)度相同。4.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽是天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。5.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基。6.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含n或c端半胱氨酸殘基。7.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物，其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含位置2(自n端至c端方向計(jì)數(shù))處的亮氨酸殘基。8.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其包含多至五個(gè)t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽。9.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽由8至12個(gè)氨基酸組成。10.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自埃巴二氏病毒,人皰疹病毒5或甲型流感。11.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自埃巴二氏病毒。12.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自人皰疹病毒5。13.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽衍生自甲型流感。14.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽選自seqidno:2至seqidno:5。15.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割鍵是通過(guò)化學(xué),ph依賴性或酶促切割可切割的。16.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割鍵是在該免疫綴合物內(nèi)在化入該靶細(xì)胞之后可切割的。17.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割鍵是在該靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)可切割的。18.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與該靶細(xì)胞結(jié)合模塊共價(jià)偶聯(lián)。19.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割鍵選自二硫鍵和酯鍵。20.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割鍵是二硫鍵。21.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽包含至少一個(gè)半胱氨酸殘基且該可切割鍵是二硫鍵。22.依照實(shí)施方案1至18任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽和該靶細(xì)胞結(jié)合模塊經(jīng)可切割接頭模塊偶聯(lián)。23.依照實(shí)施方案22的免疫綴合物,其中該可切割接頭模塊包含蛋白酶切割位點(diǎn)。24.依照實(shí)施方案23的免疫綴合物,其中該可切割接頭模塊包含弗林蛋白酶切割位點(diǎn)。25.依照實(shí)施方案22的免疫綴合物,其中該可切割接頭模塊包含ph依賴性切割位點(diǎn)。26.依照實(shí)施方案25的免疫綴合物,其中該ph依賴性切割位點(diǎn)是在ph5.5-6.5可切割的。27.依照實(shí)施方案22至26任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該可切割接頭模塊是化學(xué)接頭。28.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊能夠內(nèi)在化入該靶細(xì)胞。29.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊結(jié)合該靶細(xì)胞的細(xì)胞表面抗原。30.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。31.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊是蛋白質(zhì)。32.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合該靶細(xì)胞的抗體或結(jié)合它在該靶細(xì)胞上的受體的配體。33.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cd19或cdcp-1。34.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cd19。35.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合cdcp-1。36.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cd19或cdcp-1的抗體。37.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cd19的抗體。38.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該靶細(xì)胞結(jié)合模塊是特異性結(jié)合cdcp-1的抗體。39.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其能夠內(nèi)在化入該靶細(xì)胞。40.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中該免疫綴合物不包含轉(zhuǎn)運(yùn)域。41.依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物,其中在該免疫綴合物內(nèi)在化入該靶細(xì)胞后少于12小時(shí)內(nèi),該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子在該靶細(xì)胞的表面上呈遞。42.一種藥物組合物,其包含與藥學(xué)可接受載劑組合的依照前述實(shí)施方案任一項(xiàng)的免疫綴合物。43.經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽用于生成依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物的用途。44.依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的用途。45.依照實(shí)施方案44的用途,其中該免疫綴合物內(nèi)在化入該靶細(xì)胞且該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在該靶細(xì)胞的內(nèi)體隔室內(nèi)自該免疫綴合物釋放。46.依照實(shí)施方案44或45的用途,其中在該免疫綴合物內(nèi)在化入該靶細(xì)胞后少于12小時(shí)內(nèi),該t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽經(jīng)mhci類分子在該靶細(xì)胞的表面上呈遞。47.一種用于生成依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物的方法，其包含下述步驟:a)提供重組靶細(xì)胞結(jié)合模塊,b)提供t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽,c)經(jīng)可切割鍵偶聯(lián)至少一個(gè)所述t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與所述靶細(xì)胞結(jié)合模塊。48.依照實(shí)施方案47的方法,其中偶聯(lián)未修飾的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽與該靶細(xì)胞結(jié)合模塊。49.依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物，其用作藥物。50.包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊的依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物，其用于治療癌癥。51.依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物，其用于治療傳染病，自身免疫病，糖尿病或變態(tài)反應(yīng)。52.一種治療罹患疾病的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。53.一種治療罹患癌癥的患者的方法,其通過(guò)對(duì)需要此類治療的患者施用包含癌細(xì)胞結(jié)合模塊的依照實(shí)施方案1至41任一項(xiàng)的免疫綴合物來(lái)進(jìn)行。氨基酸序列的描述實(shí)施例提供下述實(shí)施例來(lái)幫助理解本發(fā)明,其真正范圍在所附權(quán)利要求中列出。理解的是,可以在不背離本發(fā)明的精神的情況下在所列規(guī)程中進(jìn)行修改。實(shí)施例1:cmv肽的c或n端修飾對(duì)mhci類(hla-a2)結(jié)合和cmv特異性t細(xì)胞激活的影響為了評(píng)估天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽中包括的c或n端氨基酸修飾的影響,對(duì)天然加工的氨基酸序列nlvpmvatv(seqidno.1)的cmv肽進(jìn)行下述修飾:使用標(biāo)準(zhǔn)fmoc化學(xué)合成肽。所使用的氨基酸均為l-異構(gòu)體。實(shí)施例1a自健康供體的外周血生成cmv肽特異性t細(xì)胞經(jīng)五聚物染色在facs中調(diào)查自健康供體新鮮分離的pbmc中或t細(xì)胞培養(yǎng)物中cmv肽特異性cd8t細(xì)胞的頻率。簡(jiǎn)言之,用bdfacs緩沖液清洗3-5x10e05個(gè)t細(xì)胞培養(yǎng)物或自hla-a2匹配的健康供體新鮮分離的pbmc的小樣并與包含5μl人trustainfcx(biolegend,422302)的100μlbdfacs緩沖液一起于室溫溫育15分鐘。之后添加包含10μl生物素綴合的cmv五聚物(proimmune,f008-4,1∶10)的90μlbdfacs緩沖液并于4℃溫育1小時(shí)。用bdfacs緩沖液清洗后將細(xì)胞在100μl含fitc標(biāo)記的抗cd8a單抗(克隆lt8,proimmune)以及鏈霉親合素-apc綴合物的bdfacs緩沖液中于4℃染色20分鐘。3次用bdfacs緩沖液清洗及離心后在200μl含有1μg/mldapi的bdfacs緩沖液中重懸浮細(xì)胞并通過(guò)bdbiosciencesfacscantoii流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)。使用來(lái)自hla-a1供體的細(xì)胞來(lái)評(píng)估四聚物的非特異性結(jié)合。在分離那天如下用cmv衍生肽nlvpmvatv(seqidno:1)使用新鮮分離的pbmc進(jìn)行刺激:將2x10e5個(gè)細(xì)胞每96孔在200μl含有1μm肽的rpmi+培養(yǎng)基中在96孔板中溫育3天。在第3天將板以300g離心2分鐘,自孔取出160μl上清液,并用含有1μm肽和100u/mlil-2的新鮮rpmi+培養(yǎng)基替換。在第8和10天再次如第3天所述替換培養(yǎng)基。在第14天在沒(méi)有用肽刺激的情況下分拆培養(yǎng)細(xì)胞。在第16天如下對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物用自體pbmc(以11戈瑞照射)再刺激并用cmv肽脈沖:12x10e6個(gè)t細(xì)胞每孔,在含有1μm肽加8.7x10e6個(gè)經(jīng)照射pbmc每孔的2000μlrpmi+培養(yǎng)基中,在6孔板中。在第19,21和25天再次分拆培養(yǎng)物并在第30天如上所述刺激。在第35,37,41天分拆培養(yǎng)物并在第44天依照方案再刺激。對(duì)培養(yǎng)物測(cè)試cmv肽特異性細(xì)胞的頻率,在第51天用于ldh細(xì)胞毒性測(cè)定法并在第54天用于elispot測(cè)定法(針對(duì)加載了標(biāo)示cmv肽的細(xì)胞的特異性)。實(shí)施例1b用游離cmv肽處理腫瘤細(xì)胞后cmv肽特異性t細(xì)胞激活通過(guò)ifnγ-elispot的評(píng)估在表面上表達(dá)不同水平的有關(guān)mhci分子的不同腫瘤細(xì)胞系上通過(guò)ifnγ-elispot評(píng)估hla-a2限制性cmv肽特異性t細(xì)胞激活:-mda-mb231:hla-a2高-hct-116:hla-a2低-t2:一種在細(xì)胞的表面上不表達(dá)未加載mhci類分子的tap缺陷細(xì)胞系簡(jiǎn)言之，分別在500個(gè)實(shí)施例1a中獲得的cmv特異性cd8t細(xì)胞存在下用不同濃度的游離已修飾cmv肽(ccmv，cmvc，rccmv，cmvrc，cmvpen)或天然發(fā)生，未修飾cmv肽(濃度為13.245μm或1.3245μm)處理10,000個(gè)腫瘤細(xì)胞。在相同條件下,作為對(duì)照,在游離肽缺失下溫育腫瘤細(xì)胞和t細(xì)胞,并且作為又一個(gè)對(duì)照,單獨(dú)溫育t細(xì)胞。使用含有血清的rpmi+培養(yǎng)基或無(wú)血清aim-v培養(yǎng)基任一進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如下實(shí)施ifnγ-elispot:在第1天,用無(wú)菌pbs清洗板。隨后，每孔添加50μlrpmi+培養(yǎng)基并將板溫育20-30分鐘。隨后,在50μlrpmi+中將肽添加至各自孔。使用accutase收獲各自腫瘤細(xì)胞。在各自孔中在100μlrpmi+中添加10,000個(gè)腫瘤細(xì)胞每孔。溫育20分鐘后將板在黑暗中溫育約6小時(shí)。將t細(xì)胞過(guò)濾穿過(guò)40μm網(wǎng)并在rpmi+中清洗一次(以300g離心2分鐘)。添加含有500個(gè)肽特異性cd8t細(xì)胞的50μlrpmi+培養(yǎng)基。將板溫育過(guò)夜。在第2天,倒空板并用pbs清洗。在經(jīng)過(guò)濾的pbs/0.5％fcs中1∶200稀釋抗人ifn-γ單克隆抗體(mabtech7-b6-alp)。每孔添加100μlpf稀釋的抗體并溫育2小時(shí)。隨后,用pbs清洗板。將底物溶液(bcip/nbt-plus)過(guò)濾穿過(guò)0.45μm濾器。每孔添加100μl底物溶液并顯色直至出現(xiàn)明晰的點(diǎn)。通過(guò)在自來(lái)水中清洗來(lái)停止顯色后,在黑暗中使板干燥。在elispot讀數(shù)儀(cellulartechnologyltd.)中使用“immunospot5.0professionaldc”軟件分析板。rpmi+培養(yǎng)基的組成如下:結(jié)果標(biāo)示于圖1。觀察到cmv肽的n端修飾引起t細(xì)胞激活喪失。c端修飾降低t細(xì)胞激活。另外,cmv肽的氨基酸序列內(nèi)天然存在的氨基酸的側(cè)鏈的修飾引起t細(xì)胞激活喪失。因而,能得出結(jié)論,天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽內(nèi)的修飾可能影響(即降低)mhci類分子上的加載及因而t細(xì)胞激活。然而,當(dāng)使用天然發(fā)生t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽時(shí),能確保最佳的mhci類結(jié)合和加載。實(shí)施例2:依照本發(fā)明的免疫綴合物的提議作用模式圖2展示依照本發(fā)明的免疫綴合物的一種提議作用模式。例示地,顯示一種抗體作為靶細(xì)胞結(jié)合模塊,然而其它模塊同等合適。在穩(wěn)態(tài)中,靶細(xì)胞表面(例如腫瘤細(xì)胞的表面)裝飾有靶細(xì)胞結(jié)合模塊特異性結(jié)合的靶抗原。另外,呈遞自身肽的mhci類分子在細(xì)胞表面上表達(dá)。不受這種理論束縛,免疫綴合物結(jié)合靶抗原(a)引起靶抗原-免疫綴合物復(fù)合物內(nèi)在化(b)及隨后在早期內(nèi)體隔室中t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽自免疫綴合物釋放(c)。重要的是,所釋放的肽由與其對(duì)應(yīng)的天然發(fā)生肽同一的氨基酸序列組成且不包含任何氨基酸修飾,具體是沒(méi)有c或n端氨基酸修飾。在內(nèi)體隔室內(nèi)mhci類分子上存在的自身肽與非自身肽(即自免疫綴合物切下的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽)被動(dòng)交換(d)。加載了肽的mhci類分子經(jīng)內(nèi)體運(yùn)輸傳送至細(xì)胞表面(e),引起t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在mhci類的背景中呈遞在靶細(xì)胞表面上。肽特異性cd8t細(xì)胞識(shí)別并結(jié)合靶細(xì)胞上加載了肽的mhci類分子(f),引起針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的特異性誘導(dǎo)。實(shí)施例3:單克隆抗cdcp1抗體與至少一個(gè)經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的綴合為了生成依照本發(fā)明的免疫綴合物,將特異性結(jié)合含cub域蛋白1(cdcp1,也稱作cd318,披露于ep1396501a1)的單克隆抗體(單抗)與下述病原體衍生肽任一偶聯(lián):-埃巴二氏病毒(ebv)肽426-434(seqidno:2,clgglltmv),或-甲型流感np(flu)肽44-52(seqidno:3,ctelklsdy)。使用標(biāo)準(zhǔn)fmoc化學(xué)合成肽。所使用的氨基酸均為l-異構(gòu)體。實(shí)施例3a:包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv和/或flu肽的免疫綴合物的生成,其中肽經(jīng)可切割s-s鍵與抗體偶聯(lián)為了生成依照本發(fā)明的免疫綴合物的例子,其中免疫綴合物包含二硫鍵以在內(nèi)在化入靶細(xì)胞后釋放肽,如下將肽綴合至抗體:首先在10個(gè)當(dāng)量的3-(2-吡啶基二硫代)-丙酸n-琥珀酰亞胺基酯(spdp,pierce)存在下在ph7.2的0.1m磷酸鉀緩沖液中使抗cdcp1單抗衍生化。2小時(shí)反應(yīng)時(shí)間后通過(guò)凝膠過(guò)濾將已衍生化抗體純化入ph7.0的含有10mmedta的0.1m磷酸鉀緩沖液。為了生成包含ebv或flu肽任一的免疫綴合物,將10個(gè)當(dāng)量的各自肽添加至已衍生化抗體并反應(yīng)過(guò)夜。通過(guò)凝膠過(guò)濾來(lái)純化依照本發(fā)明的免疫綴合物。為了生成包含ebv和flu肽的免疫綴合物,使已衍生化抗體與5個(gè)當(dāng)量的每種ebv和flu肽反應(yīng)過(guò)夜。通過(guò)凝膠過(guò)濾來(lái)純化依照本發(fā)明的免疫綴合物。所生成的依照本發(fā)明的免疫綴合物在本文中如下提及:-<cdcp1-ss-pebv>包含通過(guò)二硫鍵與ebv肽426-434偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物-<cdcp1-ss-pflu>包含通過(guò)二硫鍵與flu肽44-52偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物-<cdcp1-ss-pebv/flu>包含通過(guò)各自二硫鍵與ebv肽426-434和flu肽44-52偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物實(shí)施例3b(比較):包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv或flu肽的免疫綴合物的生成,其中肽經(jīng)非可切割硫醚鍵與抗體偶聯(lián)為了比較性分析,以非可切割方式經(jīng)硫醚鍵將肽綴合至抗體:首先在10個(gè)當(dāng)量的n-ε-馬來(lái)酰亞胺基己?；?氧基琥珀酰亞胺酯(emcs,pierce)存在下在ph7.2的0.1m磷酸鉀緩沖液中使抗cdcp1單抗衍生化。2小時(shí)反應(yīng)時(shí)間后通過(guò)凝膠過(guò)濾將已衍生化抗體純化入ph7.0的含有10mmedta的0.1m磷酸鉀緩沖液。之后將10個(gè)當(dāng)量的各自肽添加至已衍生化抗體并反應(yīng)過(guò)夜。通過(guò)凝膠過(guò)濾來(lái)純化免疫綴合物。用于比較的所生成的免疫綴合物在本文中如下提及:-<cdcp1-s-pebv>包含通過(guò)硫醚鍵與ebv肽425-433偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物-<cdcp1-s-pflu>包含通過(guò)硫醚鍵與flu肽44-52偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物實(shí)施例3c:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物的ms分析學(xué)和穩(wěn)定性評(píng)估通過(guò)lc-esi質(zhì)譜術(shù)分析實(shí)施例3a和3b中形成的免疫綴合物的標(biāo)記率。樣品制備:在測(cè)量之前用n-糖苷酶f將igg或經(jīng)標(biāo)記igg脫糖基化?；蛘咴诿撎腔笥胻cep還原igg或經(jīng)標(biāo)記igg以分開(kāi)測(cè)量輕鏈和重鏈。使用帶有反相柱及水:乙腈梯度和esi-tof-ms測(cè)量和檢測(cè)的lc-esi-ms(waters)hplc系統(tǒng)實(shí)施分析學(xué)。使用masslynx軟件(waters)實(shí)施ms數(shù)據(jù)分析。分析顯示平均而言0.8個(gè)肽偶聯(lián)至每個(gè)抗體分子(數(shù)據(jù)未顯示)。為了檢查免疫綴合物的穩(wěn)定性,評(píng)估儲(chǔ)備溶液內(nèi)的和細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)的穩(wěn)定性。通過(guò)旋轉(zhuǎn)柱(分子量截留50kda)過(guò)濾免疫綴合物的儲(chǔ)備溶液并通過(guò)lc-ms分析。沒(méi)有檢測(cè)到游離肽。通過(guò)lc-ms分析摻有免疫綴合物的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基。沒(méi)有檢測(cè)到游離肽。作為陽(yáng)性對(duì)照,細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基摻有游離肽。實(shí)施例3d:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cdcp1的mda-mb231細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)合研究為了評(píng)估免疫綴合物對(duì)它們各自抗原的結(jié)合,在基于facs的結(jié)合測(cè)定法中評(píng)估實(shí)施例3a和3b的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cdcp1的mda-mb231細(xì)胞的結(jié)合。簡(jiǎn)言之,mda-mb231細(xì)胞經(jīng)accutase處理而解離,通過(guò)離心與解離培養(yǎng)基分開(kāi),并以4x10e06個(gè)細(xì)胞/ml的濃度在mda-mb231細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮。將50μl細(xì)胞小樣與免疫綴合物或未綴合抗cdcp1抗體(親本抗cdcp1抗體)的連續(xù)稀釋液(20μg/ml–0.02μg/ml免疫綴合物，在bdfacs緩沖液中)一起于4℃溫育30分鐘。用bdfacs緩沖液清洗后將細(xì)胞用fitc標(biāo)記的抗人iggh+l(invitrogena11013；10μg/ml,在bdfacs緩沖液中)于4℃染色30分鐘。清洗和離心后通過(guò)bdbiosciencesfacscanto流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)(圖3)。圖3中所示來(lái)自基于facs的細(xì)胞結(jié)合研究的結(jié)果證明所有免疫綴合物均以相當(dāng)?shù)姆绞浇Y(jié)合表達(dá)cdcp1的mda-mb231腫瘤細(xì)胞。實(shí)施例3e:通過(guò)表面等離振子共振包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物對(duì)cdcp1的胞外域(ecd)的結(jié)合研究使用biacoret100儀器(gehealthcare)通過(guò)表面等離振子共振調(diào)查實(shí)施例3a和3b的免疫綴合物對(duì)人cdcp1-ecd的生物化學(xué)結(jié)合。使用由gehealthcare供應(yīng)的胺偶聯(lián)試劑盒于ph5.0在cm4芯片(gehealthcare,br-1005-34)上偶聯(lián)2000個(gè)響應(yīng)單位(ru)左右的捕捉系統(tǒng)(10μg/ml山羊抗人iggfc片段特異性；jacksonimmunoresearch)。用于固定化的運(yùn)行緩沖液是hbs-nph7.4(10mmhepes,150mmnacl,ph7.4,gehealthcare,br-1006-70)。對(duì)于下面的動(dòng)力學(xué)測(cè)定法,運(yùn)行和稀釋緩沖液是hbs-pph7.4(10mmhepes,150mmnacl,0.05％表面活性劑p20,ph7.4,gehealthcare,br-1006-71)。流動(dòng)室設(shè)為25℃-且樣品塊設(shè)為12℃-并用運(yùn)行緩沖液試行兩次。通過(guò)以10μl/min流注射1μg/ml溶液60秒來(lái)捕捉免疫綴合物和用于比較的親本抗cdcp1單抗抗體(ro5464169-000-0004)。通過(guò)以30μl/min流注射多種濃度的人cdcp1-ecd溶液180秒來(lái)測(cè)量結(jié)合,始于1350nm,接著是一次1:1.5稀釋和進(jìn)一步的多次1:3稀釋。監(jiān)測(cè)解離期高至300秒并通過(guò)將樣品溶液轉(zhuǎn)換至運(yùn)行緩沖液來(lái)觸發(fā)。通過(guò)用以10μl/min流速兩次連續(xù)注射甘氨酸ph1.7溶液60秒清洗來(lái)再生表面。通過(guò)減去自山羊抗人iggfc表面獲得的響應(yīng)來(lái)修正整體折射率(bulkrefractiveindex)差異。還減去空白注射(＝雙重參照)。為了計(jì)算kd和其它動(dòng)力學(xué)參數(shù),使用langmuir1∶1模型。結(jié)果顯示于表1:表1:通過(guò)評(píng)估的免疫綴合物對(duì)cdcp1的結(jié)合免疫綴合物kd[s-1]親本抗cdcp1單抗5.6e-03<cdcp1-ss-pebv>4.6e-03<cdcp1-ss-pflu>5.5e-03<cdcp1-ss-pebv/flu>5.2e-03<cdcp1-s-pebv>5.0e-03<cdcp1-s-pflu>5.1e-03表1中所示來(lái)自biacore研究的的結(jié)果證明所有免疫綴合物均以與親本抗cdcp1參照抗體相當(dāng)?shù)姆绞浇Y(jié)合cdcp1-ecd。實(shí)施例3f:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物內(nèi)在化入表達(dá)cdcp1的人腫瘤細(xì)胞(mda-mb231)的研究為了與親本抗cdcp1單抗比較來(lái)評(píng)估所生成的免疫綴合物的內(nèi)在化能力,用表達(dá)cdcp1的人腫瘤細(xì)胞系mda-mb231實(shí)施基于facs的內(nèi)在化測(cè)定法。簡(jiǎn)言之,mda-mb231細(xì)胞經(jīng)accutase處理而解離，通過(guò)離心與解離培養(yǎng)基分開(kāi)，并以3x10e06個(gè)細(xì)胞/ml的濃度在mda-mb231細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基(rpmi/2mm谷氨酰胺/10％fcs)中懸浮。將50μl細(xì)胞小樣與免疫綴合物或親本抗體(5μg/ml,在mda-mb231細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中)一起于4℃溫育30分鐘。2次用冷的mda-mb231細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基(rpmi/2mm谷氨酰胺/10％fcs)清洗后將細(xì)胞在100μl培養(yǎng)基中于4℃或37℃溫育30,60,120，240分鐘和過(guò)夜[23小時(shí)]。所述時(shí)間點(diǎn)后清洗細(xì)胞，離心并用alexa488標(biāo)記的抗人iggh+l(invitrogena11013；10μg/ml,在bdfacs緩沖液中)于4℃染色30分鐘。2次清洗和離心后在100μlbd細(xì)胞固定緩沖液中保持細(xì)胞并通過(guò)bdbiosciencesfacscanto流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)。于4℃溫育后沒(méi)有檢測(cè)到內(nèi)在化。于37℃的內(nèi)在化研究的結(jié)果顯示于表2。表2:于37℃包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物進(jìn)入表達(dá)cdcp1的人腫瘤細(xì)胞(mda-mb231)的內(nèi)在化來(lái)自基于facs的內(nèi)在化研究的結(jié)果顯示所測(cè)試的所有免疫綴合物均與親本抗cdcp1參照抗體(ro5464169-000-0004)相當(dāng)?shù)貎?nèi)在化入表達(dá)cdcp1的mda-mb231腫瘤細(xì)胞。實(shí)施例4:單克隆抗cd19抗體與至少一個(gè)經(jīng)mhci類可呈遞的t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的綴合實(shí)施例4a:包含單克隆抗cd19抗體和ebv和/或flu肽的免疫綴合物的生成,其中肽與抗體經(jīng)可切割s-s鍵偶聯(lián)將一種特異性結(jié)合cd19的單抗(自雜交瘤上清液純化的內(nèi)部制備物)與實(shí)施例3a中使用的肽任一偶聯(lián)。為了生成依照本發(fā)明的免疫綴合物的例子,其中免疫綴合物包含二硫鍵以在內(nèi)在化入靶細(xì)胞后釋放肽,如實(shí)施例3a中所述經(jīng)二硫鍵將肽綴合至抗體。所生成的依照本發(fā)明的免疫綴合物在本文中如下提及:-<cd19-ss-pebv>包含通過(guò)二硫鍵與ebv肽426-434偶聯(lián)的抗cd19單抗的免疫綴合物-<cd19-ss-pflu>包含通過(guò)二硫鍵與flu肽44-52偶聯(lián)的抗cd19單抗的免疫綴合物-<cd19-ss-pebv/flu>包含通過(guò)二硫鍵與ebv肽426-434和flu肽44-52偶聯(lián)的抗cd19單抗的免疫綴合物實(shí)施例4b:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cd19抗體的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cd19的rl非霍奇金氏淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)合研究為了評(píng)估免疫綴合物對(duì)它們各自抗原的結(jié)合，在基于facs的結(jié)合測(cè)定法中評(píng)估實(shí)施例4a的免疫綴合物對(duì)表達(dá)cd19的rl細(xì)胞的結(jié)合。簡(jiǎn)言之,在體外在rpmi/2mm谷氨酰胺/10％fcs(低igg)培養(yǎng)基中培養(yǎng)rl細(xì)胞。將rl細(xì)胞懸浮液(4x10e06個(gè)細(xì)胞/ml)的50μl小樣與免疫綴合物(2μg/ml,在bdfacs緩沖液中)一起于4℃溫育30分鐘。用bdfacs緩沖液清洗后將細(xì)胞用alexa488標(biāo)記的抗小鼠iggh+l(invitrogen65e1-1；10μg/ml,在bdfacs緩沖液中)于4℃染色30分鐘。清洗和離心后通過(guò)bdbiosciencesfacscanto流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)。結(jié)果顯示于圖4。圖4中所示來(lái)自基于facs的細(xì)胞結(jié)合研究的結(jié)果證明所有免疫綴合物均以相當(dāng)?shù)姆绞浇Y(jié)合表達(dá)cd19的rl細(xì)胞。實(shí)施例4c:包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cd19抗體的免疫綴合物內(nèi)在化入表達(dá)cd19的人非霍奇金氏淋巴瘤細(xì)胞(rl細(xì)胞)和人伯基特氏淋巴瘤細(xì)胞系(ramos細(xì)胞)的研究為了與親本抗cd19單抗比較來(lái)評(píng)估所生成的免疫綴合物的內(nèi)在化能力,用表達(dá)cd19的細(xì)胞系rl和ramos實(shí)施基于facs的內(nèi)在化測(cè)定法。簡(jiǎn)言之,在體外在rpmi/2mm谷氨酰胺/10％fcs(低igg)培養(yǎng)基中培養(yǎng)rl和ramos細(xì)胞。將rl和ramos細(xì)胞懸浮液(4x10e06個(gè)細(xì)胞/ml)的50μl小樣與免疫綴合物或親本抗cd19單抗(5μg/ml,在rl細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中)一起于4℃溫育30分鐘。2次用冷的rl細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基清洗后將細(xì)胞在100μl培養(yǎng)基中于4℃或37℃溫育30,60,120，240和360分鐘和過(guò)夜[23小時(shí)]。所述時(shí)間點(diǎn)后清洗細(xì)胞,離心并用alexa488標(biāo)記的抗人iggh+l(jacksonimmuno715-116-150lot90812；2,5μg/ml,在bdfacs緩沖液中)于4℃染色30分鐘。2次清洗和離心后在100μlbd細(xì)胞固定緩沖液中保持細(xì)胞并通過(guò)bdbiosciencesfacscanto流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)。于4℃溫育后沒(méi)有檢測(cè)到內(nèi)在化。于37℃的內(nèi)在化研究的結(jié)果顯示于表3。表3:于37℃包含與ebv和/或flu肽偶聯(lián)的單克隆抗cd19抗體的免疫綴合物進(jìn)入表達(dá)cd19的人腫瘤細(xì)胞(rl)的內(nèi)在化來(lái)自基于facs的內(nèi)在化研究的結(jié)果顯示所測(cè)試的免疫綴合物均與親本抗cd19參照抗體相當(dāng)?shù)貎?nèi)在化入表達(dá)cd19的rl細(xì)胞。實(shí)施例5:用包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的免疫綴合物和包含單克隆抗cd19抗體和ebv肽的免疫綴合物處理腫瘤細(xì)胞后cd8t細(xì)胞的激活實(shí)施例5a:自健康供體的外周血生成ebv肽特異性t細(xì)胞經(jīng)五聚物染色在facs中調(diào)查自健康供體新鮮分離的pbmc中或t細(xì)胞培養(yǎng)物中ebv肽特異性cd8t細(xì)胞的頻率。簡(jiǎn)言之,用bdfacs緩沖液清洗4-5x10e05個(gè)t細(xì)胞培養(yǎng)物或自hla-a2匹配的健康供體新鮮分離的pbmc的小樣并與包含5μl人trustainfcx(biolegend,422302)的100μlbdfacs緩沖液一起于室溫溫育15分鐘。之后添加包含10μl生物素綴合的ebv五聚物(proimmune,f042-84a-e)的90μlbdfacs緩沖液并于4℃溫育1小時(shí)。用bdfacs緩沖液清洗后將細(xì)胞在100μl含fitc標(biāo)記的抗cd8a單抗(克隆lt8,proimmune)以及鏈霉親合素-apc綴合物的bdfacs緩沖液中于4℃染色20分鐘。3次用bdfacs緩沖液清洗及離心后在200μlbdfacs緩沖液中重懸浮細(xì)胞并通過(guò)bdbiosciencesfacscantoii流式細(xì)胞儀分析染色細(xì)胞的mfi信號(hào)。使用來(lái)自hla-a1供體的細(xì)胞來(lái)評(píng)估四聚物的非特異性結(jié)合。依照實(shí)施例1關(guān)于cmv衍生肽描述的方案生成ebv肽特異性t細(xì)胞,區(qū)別在于在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用依照seqidno:2的ebv肽進(jìn)行刺激。實(shí)施例5b:用包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的免疫綴合物和包含單克隆抗cd19抗體和ebv肽的免疫綴合物處理hct-116腫瘤細(xì)胞后ebv肽特異性t細(xì)胞激活通過(guò)ifnγ-elispot的評(píng)估使用在實(shí)施例5a中獲得的cd8t細(xì)胞存在下用來(lái)自實(shí)施例3a，3b(包含抗-cdcp1和ebv肽的免疫綴合物)和4a(包含抗cd19和ebv肽的免疫綴合物)的免疫綴合物(ic)處理的hct-116腫瘤細(xì)胞通過(guò)ifnγ-elispot評(píng)估ebv肽特異性t細(xì)胞激活。為了比較性分析,用游離肽(pebv,陽(yáng)性對(duì)照)及用由與實(shí)施例3a中所述ebv肽偶聯(lián)的抗dig抗體構(gòu)成的對(duì)照免疫綴合物(稱作<dig-ss-pebv>,陰性對(duì)照)同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。依照實(shí)施例1b中描述的通用方案實(shí)施ifnγ-elispot。結(jié)果顯示于圖5a。來(lái)自ifnγ-elispot的結(jié)果證明在所測(cè)試免疫綴合物中只有包含經(jīng)可切割鍵偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的免疫綴合物(<cdcp1-ss-ebv>)在內(nèi)在化入腫瘤細(xì)胞后充分激活cd8t細(xì)胞,而包含經(jīng)非可切割鍵偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的免疫綴合物(<cdcp1-s-ebv>)不能激活肽特異性cd8t細(xì)胞。包含不結(jié)合靶細(xì)胞的抗體的免疫綴合物(<dig-ss-ebv>和<cd19-ss-ebv>)不激活t細(xì)胞。而且,依照本發(fā)明的免疫綴合物能夠以甚至少于1nmol/l的低量激活cd8t細(xì)胞。實(shí)施例5c:用包含單克隆抗cd19抗體和ebv肽的免疫綴合物處理rl和ramos細(xì)胞后ebv肽特異性t細(xì)胞激活通過(guò)ifnγ-elispot的評(píng)估為了證明腫瘤細(xì)胞殺傷限于表達(dá)能夠呈遞各自t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽的hla亞型的靶細(xì)胞,使用在實(shí)施例5a中獲得的cd8t細(xì)胞存在下用來(lái)自實(shí)施例4a(包含抗cd19和hla-a2限制性ebv肽的免疫綴合物)的免疫綴合物(ic)處理的表達(dá)hla-a2的rl細(xì)胞和不表達(dá)hla-a2的ramos細(xì)胞通過(guò)ifnγ-elispot評(píng)估ebv肽特異性t細(xì)胞激活。為了比較性分析,用游離肽(pebv,陽(yáng)性對(duì)照)同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。依照實(shí)施例1b中描述的通用方案實(shí)施ifnγ-elispot。結(jié)果顯示于圖5b,指示僅僅在rl細(xì)胞中而非ramos細(xì)胞中觀察到腫瘤細(xì)胞殺傷。實(shí)施例6:提供包含經(jīng)可切割二硫鍵與ebv肽偶聯(lián)的單克隆抗cdcp1抗體的免疫綴合物，其中ebv肽天然包含非末端半胱氨酸殘基及通過(guò)ifnγ-elispot評(píng)估cd8t細(xì)胞激活雖然在實(shí)施例3和4中提供了免疫綴合物，其中t細(xì)胞應(yīng)答引發(fā)肽在末端連接各自抗體以形成免疫綴合物,但是在這個(gè)實(shí)施例中,在肽的非末端半胱氨酸殘基和抗體之間形成可切割二硫鍵。為此,提供氨基酸序列g(shù)lctlvaml(seqidno:4)的ebv肽并如實(shí)施例3a中所述與抗cdcp1抗體偶聯(lián)。在表達(dá)不同水平的mhci的不同腫瘤細(xì)胞系上通過(guò)ifnγ-elispot評(píng)估肽特異性t細(xì)胞激活:-mda-mb231,hla-a2高,和-a375,hla-a2低。簡(jiǎn)言之，在500個(gè)如實(shí)施例5b中所述獲得的肽特異性cd8t細(xì)胞存在下分別用不同濃度的免疫綴合物處理10,000個(gè)腫瘤細(xì)胞,然而使用ebv肽glctlvaml代替。在相同條件下,作為對(duì)照,在免疫綴合物缺失下溫育腫瘤細(xì)胞和t細(xì)胞,并且作為又一個(gè)對(duì)照,單獨(dú)溫育t細(xì)胞。所生成的依照本發(fā)明的免疫綴合物在本文中如下提及:-<cdcp1-ss-pebv(glc)>包含通過(guò)二硫鍵與ebv肽glctlvaml偶聯(lián)的抗cdcp1單抗的免疫綴合物ifnγ-elispot的結(jié)果顯示于圖5c。對(duì)于依照本發(fā)明的免疫綴合物對(duì)所測(cè)試的兩種腫瘤細(xì)胞系均觀察到劑量依賴性方式的肽特異性t細(xì)胞激活。實(shí)施例7:通過(guò)ldh釋放測(cè)定法和xcelligence評(píng)估的用包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的依照本發(fā)明的免疫綴合物處理的mda-mb231腫瘤細(xì)胞中cd8t細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的介導(dǎo)以效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞比3∶1在實(shí)施例5a中獲得的cd8t細(xì)胞存在下使用用不同濃度的來(lái)自實(shí)施例3a，3b(包含抗cdcp1和ebv肽的免疫綴合物)的免疫綴合物(ic)處理的mda-mb231腫瘤細(xì)胞通過(guò)ldh釋放測(cè)定法及通過(guò)xcelligence測(cè)定法評(píng)估ebv肽特異性t細(xì)胞激活和腫瘤細(xì)胞殺傷。為了比較性分析,用游離肽(pebv,陽(yáng)性對(duì)照)同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用下述通用方法在xcelligence系統(tǒng)中經(jīng)由動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖和存活力來(lái)實(shí)施對(duì)加載有病毒肽的腫瘤細(xì)胞因免疫綴合物處理所致殺傷的評(píng)估:每個(gè)孔添加50μl腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基并在rtca儀器(rocheappliedsciences)中實(shí)施初始背景測(cè)量(步驟1)。將在50μl腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮的物質(zhì)添加入e板。使用accutase收獲腫瘤細(xì)胞,在50μl腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮各自細(xì)胞數(shù),并將培養(yǎng)基添加入e板。將下述細(xì)胞數(shù)用于不同腫瘤細(xì)胞系:a-375∶10,000個(gè)細(xì)胞；hct-116:20,000個(gè)細(xì)胞；pc-3:10,000個(gè)細(xì)胞；mda-mb231:10,000個(gè)細(xì)胞。于室溫10分鐘后將板置于rtca儀器中并實(shí)施步驟2(間隔10分鐘,200個(gè)間隔)。隨后,將板溫育約24小時(shí)。次日,在aim-v培養(yǎng)基中清洗t細(xì)胞并在aim-v培養(yǎng)基中懸浮。將t細(xì)胞添加至板至終體積200μl。將板置于rtca儀器中以實(shí)施步驟3(間隔5分鐘,300個(gè)間隔)。將板溫育過(guò)夜。將樣品用于后續(xù)ldh釋放分析。為了ldh釋放評(píng)估,通過(guò)添加1％tritonx-100來(lái)裂解細(xì)胞。將上清液轉(zhuǎn)移至v底96孔板,并通過(guò)離心和再次將無(wú)細(xì)胞殘骸的上清液轉(zhuǎn)移至平底96孔板來(lái)去除細(xì)胞殘骸。使用ldh細(xì)胞毒性測(cè)定法(roche,#11644793001)依照制造商的說(shuō)明書(shū)分析ldh釋放。簡(jiǎn)言之,混合催化劑和染料溶液,將100μl所得反應(yīng)混合物添加入每個(gè)孔,并在黑暗中于室溫溫育。以t＝15-45分鐘(通常30分鐘)使用tecanelisa讀數(shù)儀測(cè)量492nm(參照:620nm)處的吸光度。結(jié)果顯示于圖6a并指示使用依照本發(fā)明的免疫綴合物能在皮摩爾濃度觀察到有力的腫瘤細(xì)胞殺傷。實(shí)施例8:通過(guò)ldh釋放測(cè)定法和xcelligence評(píng)估的用包含單克隆抗cdcp1抗體和天然包含非末端半胱氨酸殘基的ebv肽的依照本發(fā)明的免疫綴合物處理的mda-mb231和a-375腫瘤細(xì)胞中cd8t細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的介導(dǎo)以效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞比3:1在依照實(shí)施例5a獲得的肽特異性cd8t細(xì)胞存在下使用用不同濃度的實(shí)施例6(包含抗cdcp1和天然包含非末端半胱氨酸殘基的ebv肽的免疫綴合物)的免疫綴合物(ic)處理的mda-mb231和a-375腫瘤細(xì)胞通過(guò)ldh釋放測(cè)定法及通過(guò)xcelligence測(cè)定法和ldh釋放評(píng)估來(lái)評(píng)估ebv肽特異性t細(xì)胞激活和腫瘤細(xì)胞殺傷,然而使用ebv肽glctlvaml代替刺激。為了比較性分析,以兩種不同肽濃度用游離肽(pebv)同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如實(shí)施例7中所述實(shí)施xcelligence測(cè)定法和ldh釋放評(píng)估。結(jié)果顯示于圖6b(對(duì)于a-375細(xì)胞)和6c(對(duì)于mda-mb231細(xì)胞),xcelligence測(cè)定法的數(shù)據(jù)是在13.5小時(shí)后測(cè)量的。結(jié)果指示只有依照本發(fā)明的免疫綴合物能夠介導(dǎo)所測(cè)試的腫瘤細(xì)胞經(jīng)肽特異性t細(xì)胞的特異性殺傷。與之對(duì)比,使用等摩爾濃度的游離ebv肽沒(méi)有觀察到特異性腫瘤細(xì)胞殺傷。實(shí)施例9:通過(guò)ldh釋放測(cè)定法和xcelligence評(píng)估的用包含單克隆抗cdcp1抗體和flu肽的依照本發(fā)明的免疫綴合物處理的腫瘤細(xì)胞中cd8t細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的介導(dǎo)在flu特異性cd8t細(xì)胞存在下使用含有hla-a1限制性flu肽的免疫綴合物(cdcp1-ss-pflu,如實(shí)施例3a中獲得的)處理不同腫瘤細(xì)胞系(a-375,pc-3,hct-116)來(lái)評(píng)估依照本發(fā)明的免疫綴合物的腫瘤細(xì)胞殺傷。如實(shí)施例7中所述通過(guò)ldh釋放測(cè)定法及通過(guò)xcelligence測(cè)定法評(píng)估肽特異性t細(xì)胞激活和腫瘤細(xì)胞殺傷。所測(cè)試的細(xì)胞系就hla亞型和表達(dá)及靶物(cdcp-1)表達(dá)而言提供下述特征:細(xì)胞系腫瘤類型hla-a亞型cdcp-1(mfi)hla-a1,a11,a26/a1,a36(mfi)pc-3前列腺hla-a14348824452/1336hct-116腸hla-a1,a24767824679/1747a-375皮膚hla-a1,a2173621758/710來(lái)自xcelligence分析的結(jié)果顯示于圖7a-c。來(lái)自ldh釋放測(cè)定法的結(jié)果顯示于圖7d-f。用免疫綴合物處理腫瘤細(xì)胞后對(duì)所測(cè)試的所有腫瘤細(xì)胞系均觀察到有效的腫瘤細(xì)胞殺傷。與使用游離肽相比,免疫綴合物比濃度高100倍的游離肽更加有效地介導(dǎo)t細(xì)胞激活。用免疫綴合物處理后6小時(shí)就已經(jīng)能觀察到由免疫綴合物介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷,指示肽不需要轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)溶膠中的抗原加工機(jī)構(gòu)來(lái)經(jīng)mhci類呈遞。另外,觀察到腫瘤細(xì)胞殺傷隨時(shí)間過(guò)程的升高,與之對(duì)比,由游離肽介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷通常在更高的溫育時(shí)間中降低。在不同腫瘤細(xì)胞系中觀察到相似的作用,指示作用不依賴于靶細(xì)胞中mhci類表達(dá)的水平。xcelligence分析的結(jié)果得到ldh釋放測(cè)定法的結(jié)果確認(rèn)。實(shí)施例10:概念i的體內(nèi)證據(jù)包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的依照本發(fā)明的免疫綴合物在靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移hupbmc(包含ebv特異性cd8t細(xì)胞)的mda-mb231皮下模型中的抗腫瘤活性在第0天經(jīng)皮下注射給nog小鼠異種移植人腫瘤細(xì)胞(5x106個(gè)mda-mb231)。經(jīng)靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移10x106在第0天和第20天應(yīng)用兩次人pbmc刺激(～10％clg肽ebv特異性cd8t細(xì)胞)(見(jiàn)圖8a中的詳情)?？贵w/免疫綴合物的處理日程表如下:<cdcp1>-igg4-ss-clg肽(如實(shí)施例3中所述生成,具有igg4恒定鏈):5mg/kg(在第0,3,6,9,13,16,20,23,27,30天)對(duì)照抗體:<cdcp1>-igg4(igg4恒定鏈):5mg/kg(在第0,3,6,9,13,16,20,23,27,30天)測(cè)試方案和結(jié)果顯示于圖8a和b。結(jié)果證明包含單克隆抗cdcp1抗體的依照本發(fā)明的免疫綴合物在具有過(guò)繼轉(zhuǎn)移clg特異性hupbmc的mda-mb231皮下異種移植物模型中的體內(nèi)功效。實(shí)施例11:概念ii的體內(nèi)證據(jù)包含單克隆抗cdcp1抗體和ebv肽的依照本發(fā)明的免疫綴合物與抗pd-1處理組合在靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移hupbmc(包含ebv特異性cd8t細(xì)胞)的已建立mda-mb231皮下模型中的抗腫瘤活性在第0天經(jīng)皮下注射給nog小鼠異種移植人腫瘤細(xì)胞(5x106mio個(gè)mda-mb231)。經(jīng)靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移10x106在第20天和第32天應(yīng)用兩次人pbmc刺激(～10％clg肽ebv特異性cd8t細(xì)胞)(見(jiàn)圖8a中的詳情)。測(cè)試綴合物<cdcp1>-igg1-pglala-ss-clg肽(如實(shí)施例3中所述生成,具有帶fc部分中的突變l234a,l235a和p329g(kabateu索引)的igg1恒定鏈)的測(cè)試組和對(duì)照抗體<cdcp1>-igg1pglala的對(duì)照組的處理日程表如下(兩組均添加抗pd1抗體):測(cè)試方案和結(jié)果顯示于圖9a和b。結(jié)果證明包含單克隆抗cdcp1抗體的依照本發(fā)明的免疫綴合物加抗pd-1療法在具有過(guò)繼轉(zhuǎn)移ebvclg特異性hupbmc的mda-mb231異種移植物模型中的組合效果。顯示了用atpp與抗pd-1抗體組合處理后腫瘤中clg特異性t細(xì)胞的強(qiáng)烈增多。序列表<110>豪夫邁·羅氏有限公司（f.hoffmann-larocheag）<120>用于特異性誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的t細(xì)胞細(xì)胞毒性的免疫綴合物<130>p32622-wo<150>ep15155598<151>2015-02-18<150>ep15199306<151>2015-12-10<160>10<170>patentinversion3.5<210>1<211>9<212>prt<213>人皰疹病毒5<220><221>混雜特征<223>人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503<400>1asnleuvalprometvalalathrval15<210>2<211>9<212>prt<213>埃巴二氏病毒<220><221>混雜特征<223>埃巴二氏病毒(ebv)肽lmp-2426-434<400>2cysleuglyglyleuleuthrmetval15<210>3<211>9<212>prt<213>甲型流感病毒<220><221>混雜特征<223>甲型流感病毒(flu)肽np44-52<400>3cysthrgluleulysleuserasptyr15<210>4<211>9<212>prt<213>埃巴二氏病毒<220><221>混雜特征<223>埃巴二氏病毒(ebv)肽blmf-1280-288<400>4glyleucysthrleuvalalametleu15<210>5<211>9<212>prt<213>人皰疹病毒5<220><221>混雜特征<223>人皰疹病毒5(cmv)肽309-317<400>5cysargvalleucyscystyrvalleu15<210>6<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>經(jīng)修飾人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503(ccmv肽)<400>6cysasnleuvalprometvalalathrval1510<210>7<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>經(jīng)修飾人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503(cmvc肽)<400>7asnleuvalprometvalalathrvalcys1510<210>8<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>經(jīng)修飾人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503(rccmv肽)<400>8cysleuvalprometvalalathrval15<210>9<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>經(jīng)修飾人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503(cmvrc肽)<400>9asnleuvalprometvalalathrcys15<210>10<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>經(jīng)修飾人皰疹病毒5(cmv)肽pp65495-503(cmvpen肽)<220><221>混雜特征<223>xaa是青霉胺<220><221>混雜特征<222>(9)..(9)<223>xaa可以是任何天然發(fā)生氨基酸<400>10asnleuvalprometvalalathrxaa15當(dāng)前第1頁(yè)12