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對FAP?α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)的制備方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號:12343595閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng),其特征在于,阿霉素通過二硫鍵作為連接臂與聚酰胺胺相連形成還原敏感型納米粒,然后將此納米粒通過對FAP-α敏感的多肽連接臂相連形成對FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng),所述的二硫鍵為3,3’-二硫代二丙酸或2,2’-二硫代二乙酸,多肽連接臂為蘇氨酸-絲氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺或AC-天冬氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸或丙氨酸-絲氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺或蘇氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸。

2.權(quán)利要求1所述的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)合成還原敏感型的納米粒:

①稱取作為連接臂的二硫鍵3,3’-二硫代二丙酸或2,2’-二硫代二乙酸10mg-2g,分別加入2.0~15.0ml乙酰氯,置于燒瓶中,在65℃油浴下回流2~6h,將反應(yīng)物進行濃縮后加入3~4倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐或2,2’-二硫代二乙酸酐;

②稱取0.01~1.0mmol阿霉素、0.01~1.0mmol4-二甲氨基吡啶和0.01~1.0mmol步驟①中制得的酸酐分別溶解于0.5~15.0ml反應(yīng)溶劑中,將阿霉素和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入20~200μl三乙胺,向上述溶液中加入酸酐溶液,在25~45℃下避光反應(yīng)8~24h,反應(yīng)停止后加入3~4倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③稱取羧基化的阿霉素20~100mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺100~250mg和羥基琥珀酰亞胺60~180mg分別溶解于5~25mL反應(yīng)溶劑中,先將羧基化的阿霉素和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液混合,反應(yīng)0.5~3h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液,反應(yīng)0.5~4h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺10~150mg溶解于3~12mL反應(yīng)溶劑中,加10~200μl三乙胺,再將活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在20~45℃下氮氣保護反應(yīng)6~26h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每3~6小時換一次水,冷凍干燥,得還原敏感型的納米粒;

所述的反應(yīng)溶劑為二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺的一種或兩種的混合物;

(2)合成對FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的納米粒:

稱取作為連接臂的多肽鏈2~100mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺 20~200mg和羥基琥珀酰亞胺 15~180mg分別溶解于2~20mL反應(yīng)溶劑中,然后將多肽連接臂和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液混合,反應(yīng)0.5~2.5h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液,反應(yīng)0.5~3.5h,得活化的多肽連接臂,取負載了阿霉素的還原敏感型的納米粒10~200mg溶解于5~25mL反應(yīng)溶劑中,再將活化的多肽連接臂和上述納米粒溶液混合,在20~40℃下氮氣保護8~25h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500~8000的透析袋透析2天,透析液為超純水,每3~6h換一次水,冷凍干燥,得FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的納米粒;即對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng);

所述的反應(yīng)溶劑為二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺的一種或兩種的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)合成還原敏感型的納米粒:

①稱取作為連接臂的2,2’-二硫代二乙酸109mg和乙酰氯3ml置于燒瓶中,在65℃油浴下回流2h,將反應(yīng)物進行濃縮后加入3倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得2,2’-二硫代二乙酸酐;

②稱取0.3mmol阿霉素、0.3mmol4-二甲氨基吡啶和0.3mmol2,2’-二硫代二乙酸酐分別溶解于5mlN,N-二甲基甲酰胺中;將阿霉素和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入20μl三乙胺,向上述溶液中加入2,2’-二硫代二乙酸酐溶液,在35℃下避光反應(yīng)8h,反應(yīng)停止后加入3倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③稱取羧基化的阿霉素(羧基化的阿霉素)20mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺100mg和羥基琥珀酰亞胺80mg分別溶解于6mL二甲基亞砜中,然后將羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)0.5h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)1h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺30mg溶解于3mL 二甲基亞砜中,加20μl三乙胺,再將活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在25℃下避光反應(yīng)8h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每4小時換一次水,冷凍干燥,得還原敏感型的納米粒;

(2)合成對FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的納米粒:

稱取作為連接臂的多肽鏈蘇氨酸-絲氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺5mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺 30mg和羥基琥珀酰亞胺 25mg分別溶解于4mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后將多肽連接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)0.5h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)1h,得活化的多肽連接臂,取還原敏感型的納米粒30mg溶解于7mL N,N-二甲基甲酰胺中,再將活化的多肽連接臂和上述納米粒溶液混合,在20℃下避光反應(yīng)12h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每4小時換一次水,冷凍干燥,得FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)合成還原敏感型的納米粒:

①稱取作為連接臂的3,3’-二硫代二丙酸252mg和乙酰氯6.0ml置于燒瓶中,在65℃油浴下回流4h,將反應(yīng)物進行濃縮后加入3.5倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐;

②稱取0.6mmol阿霉素、0.6mmol4-二甲氨基吡啶和0.6mmol3,3’-二硫代二丙酸酐分別溶解于9mlN,N-二甲基甲酰胺中;然后將阿霉素溶液和4-二甲氨基吡啶溶液混合,再加入60μl三乙胺溶液,最后加入3,3’-二硫代二丙酸酐溶液,在40℃下避光反應(yīng)12h,反應(yīng)停止后加入3.5倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③稱取羧基化的阿霉素40mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺180mg和羥基琥珀酰亞胺120mg分別溶解于12mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后將羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)1h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)2h,得活化的羧基化阿霉素;取聚酰胺胺60mg溶解于6mL N,N-二甲基甲酰胺中,加60μl三乙胺,再將活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在30℃下氮氣保護反應(yīng)12h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每5小時換一次水,冷凍干燥,得還原敏感型的納米粒;

(2)合成對FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的納米粒:

稱取作為連接臂的多肽鏈AC-天冬氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸20mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺 100mg和羥基琥珀酰亞胺 80mg分別溶解于6mL二甲基亞砜中,然后將多肽連接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)1h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)2h,得活化的多肽連接臂;取還原敏感型的納米粒100mg溶解于15mL 二甲基亞砜中,再將活化的多肽連接臂和上述納米粒溶液混合,在25℃下反應(yīng)24h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每5小時換一次水,冷凍干燥,得FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)合成還原敏感型的納米粒:

①稱取作為連接臂的3,3’-二硫代二丙酸420mg和乙酰氯9ml置于燒瓶中,在65℃油浴下回流5h,將反應(yīng)物進行濃縮后加入4倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐;

②稱取0.9mmol阿霉素、0.9mmol4-二甲氨基吡啶和0.9mmol3,3’-二硫代二丙酸酐分別溶解于14ml二甲基亞砜中;將阿霉素溶液和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入80μl三乙胺,向上述溶液中加入3,3’-二硫代二丙酸酐溶液,在45℃下避光反應(yīng)24h,反應(yīng)停止后加入4倍預(yù)冷的乙醚,冷卻析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③稱取羧基化的阿霉素70mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺250mg和羥基琥珀酰亞胺180mg分別溶解于18mL二甲基亞砜中,然后將羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)2h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)1.5h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺80mg溶解于9mL 二甲基亞砜中,加80μl三乙胺,再將活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在35℃下避光反應(yīng)24h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液為超純水,每6小時換一次水,冷凍干燥,得還原敏感型的納米粒;

(2)合成對FAP-α、還原環(huán)境雙敏感的納米粒:

稱取作為連接臂的多肽鏈蘇氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸30mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺 180mg和羥基琥珀酰亞胺 150mg分別溶解于9mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后將多肽連接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺溶液反應(yīng)1.5h,再加入羥基琥珀酰亞胺溶液反應(yīng)3h,得活化的多肽連接臂,取還原敏感型的納米粒160mg溶解于20mL N,N-二甲基甲酰胺中,再將活化的多肽連接臂和上述納米粒溶液混合,在30℃下避光反應(yīng)24h,反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量7000的透析袋透析2天,透析液為超純水,每6小時換一次水,冷凍干燥,得FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)。

6.權(quán)利要求1所述的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求2-5任一項所述的制備方法制備的對FAP-α酶、還原環(huán)境雙敏感的粒徑收縮型的腫瘤滲透性納米系統(tǒng)在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

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