本發(fā)明屬中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病是心血管疾病和腦血管疾病的統(tǒng)稱，泛指由于高脂血癥、血液黏稠、動脈粥樣硬化、高血壓等所導(dǎo)致的心臟、大腦及全身組織發(fā)生缺血性或出血性的疾病，包括高血壓、 動脈粥樣硬化、 冠心病 、心絞痛、 腦缺血、 腦血栓、 腦梗塞、腦出血等。目前， 我國心腦血管疾病患者2.5億人，每年死萬人數(shù)約420 萬人， 因病致殘人數(shù)6500萬人。因此，開發(fā)安全、高效的心腦血管疾病藥物，事關(guān)人類健康福祉，意義十分重大。
在防治心腦血管疾病方面，中醫(yī)藥由于具有毒副作用小，組方靈活，標(biāo)本兼治，多通道整體性治療的特點(diǎn)，發(fā)揮著越來越重要的作用。然而，目前防治心腦血管疾病的中成藥如復(fù)方丹參片、冠心寧片等，大多以原藥材或粗提物為原料，有效成分、無效成分甚至有害成分一并入藥，存在處方劑量大，服用不方便，療效和安全性低等問題。另一方面，一些以有效部位如三七總皂苷、銀杏內(nèi)酯、燈盞花素、丹參總酚酸等為主要活性成分的現(xiàn)代中成藥，由于物質(zhì)基礎(chǔ)基本明確，作用機(jī)理相對清楚，療效確切，安全性高，愈來愈受到人們的歡迎和重視。這些治療心腦血管疾病的各種中藥有效部位，它們的功效各有不同和側(cè)重，臨床上存在聯(lián)合用藥的巨大需求。因此，提供物質(zhì)基礎(chǔ)基本明確，作用機(jī)理相對清楚，療效確切，安全性高的中藥有效部位組合藥物具有重要的社會意義和廣闊的市場前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物，其各有效部位具有協(xié)同作用，療效提高，能滿足臨床上治療心腦血管疾病聯(lián)合用藥的需求。
本發(fā)明通過如下技術(shù)方案予以實(shí)施。
本發(fā)明治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物，由龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片四種原料組成。
其中，四種原料的重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 5-87份，
三七總皂苷提取物 2- 41份，
丹參總酚酸提取物 1-34份，
冰片 0.01-5份。
優(yōu)選地，四種原料的重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 9-73份，
三七總皂苷提取物 5- 32份，
丹參總酚酸提取物 2-25份，
冰片 0.02-2.50份。
更為優(yōu)選地，本發(fā)明組合物的四種原料重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
冰片 0.03份。
龍血竭為百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹Dracaenacochinchinensis ( Lour. ) S. C. Chen的含脂木材經(jīng)提取得到的干燥樹脂 ，具有活血散瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效。迄今已從龍血竭中分離檢測出130 多種化合物，主要分為黃酮類、有機(jī)酸類、甾體、三萜類等有效活性成分。其中，黃酮類成分近90余種，按結(jié)構(gòu)大致可分為查兒酮、二氫查耳酮、黃酮、黃烷、聚合黃酮、色原酮等類型，具有降血糖、降血脂、抗氧化，消除體內(nèi)自由基等多種生理活性，是龍血竭活血化瘀的主要有效部位。
三七為五加科人參屬植物三七Panaxno toginseng (Burk)F .H .Chen的干燥根，具有活血止血、消腫定痛的顯著功效，為我國傳統(tǒng)名貴藥材?，F(xiàn)代研究表明，三七主要含有皂苷、黃酮、揮發(fā)油、氨基酸、多糖及微量元素等有效活性成分，其中，三七總皂苷（PNS）具有抗血凝、抑制血小板聚集、抗血栓等藥理作用，是三七活血化瘀的主要有效部位。
丹參為唇形科植物丹參 Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根，其化學(xué)成分主要由脂溶性成分和水溶性成分兩部分組成。其中，脂溶性成分主要為丹參酮型的二萜類化合物，是丹參中的主要抗腫瘤、 抗菌消炎活性成分；水溶性成分主要為丹參總酚酸，包括丹參酚酸A、B、C、D，丹參酚，丹參酸甲、乙、丙，原兒茶酸，丹參素，迷迭香酸和原紫草酸等多種酚酸類化學(xué)成分。藥理研究表明，丹參酚酸類化合物具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化、抗血栓、改善血液循環(huán)等作用，丹參酚酸A和B的活性最強(qiáng)，對缺血缺氧，缺血再灌注引起的心腦細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用。
冰片又名龍腦、龍腦香，味辛、苦，微寒，歸心、肝、肺經(jīng)，具有開竅醒神、清熱止痛、舒心通腦之功效。本發(fā)明中，冰片作為方中的使藥發(fā)揮重要作用，能顯著提高組方藥物的藥理功效和臨床療效。
本發(fā)明的中藥有效部位組合物，由龍血竭、三七、丹參的活血化瘀有效部位（龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物）和冰片組成，各組份具有協(xié)同作用，能更好地滿足臨床上治療心腦血管疾病聯(lián)合用藥的需求。
本發(fā)明中，所述龍血竭總黃酮提取物的總黃酮含量≥50%，所述三七總皂苷提取物的總皂苷含量為55-100%，所述丹參總酚酸提取物的總酚酸含量為60-100%。
本發(fā)明所用的原料龍血竭總黃酮提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：
稱取龍血竭原料，加入10倍重量的體積濃度為80-90%的乙醇，于70-80℃回流提取三次，每次提取時間1小時，提取液合并，濾過，濾液減壓濃縮至原體積的1/4, 室溫靜置沉降8小時，濾過, 濾液過50-100目聚酰胺吸附柱，用上柱液10-12重量倍的50%乙醇洗脫，洗脫液體棄去，繼用上柱液30-40重量倍的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-60℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明所用的原料三七總皂苷提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：
三七粉碎過10目篩，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時，以每千克藥材每分鐘7-10ml的速度滲漉，收集藥材重量10倍的滲漉液，減壓濃縮至原體積的1/3，靜置沉降8小時，濾過，濾液過D101大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，洗滌水棄去，用體積濃度為70-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-70℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明所用的原料丹參總酚酸提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：
丹參粉碎過10目篩， 用體積濃度為30-50%的乙醇于50-80℃下超聲提取三次，提取液合并，過濾，濾液減壓濃縮至密度為1.05-1.10g/ml，加入體積濃度為85-95%的乙醇于50-70℃加熱攪拌0.5小時，靜置降溫沉降8-12小時，過濾，濾液于50-70℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明中，所述冰片可以是人工合成冰片，也可以是天然冰片，均可從市場中直接購得。
本發(fā)明的中藥有效部位組合物，可采用一般方法，將龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片四種原料混合均勻后得到。也可以在此組合物的基礎(chǔ)上，與任何一種或一種以上的藥劑學(xué)上的輔料或助劑成分，如淀粉、糊精、纖維素、葡萄糖、硬脂酸鎂、甘露醇等混合制成各種劑型或臨床制劑，包括口服制劑、注射制劑和外用制劑等。所述的口服制劑包括散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液和丸劑等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中藥有效部位組合物由龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物等三種中藥的活血化瘀有效部位與冰片共同配比組成，各組分具有協(xié)同作用，療效較單一組分或其它組方藥物顯著提高，能滿足臨床上治療心腦血管疾病聯(lián)合用藥的需要。
本發(fā)明中藥組合物的療效由下面的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)所證明：
本發(fā)明采用大鼠心肌缺血模型，比較了本發(fā)明中藥組合物與血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物的抗心肌缺血作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明中藥組合物具有明顯的抗心肌缺血作用，其療效優(yōu)于單獨(dú)使用原料丹參總酚酸有效部位提取物、龍血竭總黃酮有效部位提取物、三七總皂苷有效部位提取物中的任何一種，也優(yōu)于它們?nèi)魏蝺煞N或三種構(gòu)成的組合物，表明本發(fā)明中藥組合物具有良好的協(xié)同作用，能發(fā)揮整體性的治療效果。
本發(fā)明還采用大鼠腦缺血模型，比較了本發(fā)明中藥組合物與血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物的抗腦缺血作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明中藥組合物具有明顯的抗腦缺血作用，其療效優(yōu)于單獨(dú)使用原料丹參總酚酸有效部位提取物、龍血竭總黃酮有效部位提取物、三七總皂苷有效部位提取物中的任何一種，也優(yōu)于它們?nèi)魏蝺煞N或三種構(gòu)成的組合物，表明本發(fā)明中藥組合物具有良好的協(xié)同作用，能發(fā)揮整體性的治療效果。
本發(fā)明中藥組合物原料來源易得，質(zhì)量穩(wěn)定可控，藥物成分和作用機(jī)理明確，具有高效，安全，低劑量，使用方便等顯著特點(diǎn)，可更好滿足臨床用藥。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本發(fā)明治療心腦血管疾病的中藥有效部位組合物，由龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片四種原料組成。
其中，四種原料的重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 5-87份，
三七總皂苷提取物 2- 41份，
丹參總酚酸提取物 1-34份，
冰片 0.01-5份。
優(yōu)選地，四種原料的重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 9-73份，
三七總皂苷提取物 5- 32份，
丹參總酚酸提取物 2-25份，
冰片 0.02-2.50份。
更為優(yōu)選地，本發(fā)明組合物的四種原料重量份數(shù)配比為：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
冰片 0.03份。
本發(fā)明中，所述龍血竭總黃酮提取物的總黃酮含量≥50%，所述三七總皂苷提取物的總皂苷含量為55-100%，所述丹參總酚酸提取物的總酚酸含量為60-100%。
本發(fā)明所用的原料龍血竭總黃酮提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：稱取龍血竭原料，加入10倍重量的體積濃度為80-90%的乙醇，于70-80℃回流提取三次，每次提取時間1小時，提取液合并，濾過，濾液減壓濃縮至原體積的1/4, 室溫靜置沉降8小時，濾過, 濾液過50-100目聚酰胺吸附柱，用上柱液10-12重量倍的50%乙醇洗脫，洗脫液體棄去，繼用上柱液30-40重量倍的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-60℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明所用的原料三七總皂苷提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：三七粉碎過10目篩，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時，以每千克藥材每分鐘7-10ml的速度滲漉，收集藥材重量10倍的滲漉液，減壓濃縮至原體積的1/3，靜置沉降8小時，濾過，濾液過D101大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，洗滌水棄去，用體積濃度為70-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-70℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明所用的原料丹參總酚酸提取物，可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求從市場上直接購得，也可以按照如下方法和步驟制得：丹參粉碎過10目篩， 用體積濃度為30-50%的乙醇于50-80℃下超聲提取三次，提取液合并，過濾，濾液減壓濃縮至密度為1.05-1.10g/ml，加入體積濃度為85-95%的乙醇于50-70℃加熱攪拌0.5小時，靜置降溫沉降8-12小時，過濾，濾液于50-70℃下真空噴粉干燥，即得。
本發(fā)明的中藥有效部位組合物，可采用一般方法，將龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片四種原料混合均勻后得到。也可以在此組合物的基礎(chǔ)上，與任何一種或一種以上的藥劑學(xué)上的輔料或助劑成分，如淀粉、糊精、纖維素、葡萄糖、硬脂酸鎂、甘露醇等混合制成各種劑型或臨床制劑，包括口服制劑、注射制劑和外用制劑等。
本發(fā)明的應(yīng)用為所述的藥物組合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：
實(shí)施例1 龍血竭總黃酮提取物的制備
稱取龍血竭10kg，加入100 kg體積濃度為85%的乙醇，于70-80℃下回流提取三次，每次提取時間1小時，提取液合并，濾過，濾液減壓濃縮至原體積的1/4, 室溫靜置沉降8小時，濾過, 濾液過100目聚酰胺吸附柱，用上柱液11重量倍的50%乙醇洗脫，洗脫液體棄去，繼用上柱液35重量倍的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-60℃下真空噴粉干燥，即得。
實(shí)施例2 龍血竭總黃酮提取物的制備
稱取龍血竭5kg，加入50 kg體積濃度為80%的乙醇，于70-80℃下回流提取三次，每次提取時間1小時，提取液合并，濾過，濾液減壓濃縮至原體積的1/3, 室溫靜置沉降8小時，濾過, 濾液過85目聚酰胺吸附柱，用上柱液10重量倍的50%乙醇洗脫，洗脫液體棄去，繼用上柱液30重量倍的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-60℃下真空噴粉干燥，即得。
實(shí)施例3 龍血竭總黃酮提取物的制備
稱取龍血竭20kg，加入200 kg體積濃度為90%的乙醇，于70-80℃下回流提取三次，每次提取時間1小時，提取液合并，濾過，濾液減壓濃縮至原體積的1/5, 室溫靜置沉降8小時，濾過, 濾液過50目聚酰胺吸附柱，用上柱液12重量倍的50%乙醇洗脫，洗脫液體棄去，繼用上柱液40重量倍的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-60℃下真空噴粉干燥，即得。
實(shí)施例4 龍血竭總黃酮提取物的含量成分檢測
1、供試樣品：
提取物1：按實(shí)施例1制備
提取物2: 按實(shí)施例2制備
提取物3：按實(shí)施例3制備
2、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
UV-2700紫外分光光度計（日本島津公司）；AB204-N型電子天平（瑞士Mettler公司）。蘆丁對照品，由中國生物制品檢驗(yàn)所提供；其他試劑均為分析純，水為去離子水。
3、測定方法
對照品溶液的制備：精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加60%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備： 精密量稱取供試樣品10mg，置50ml量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ml，分別置10ml量瓶中，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘。分別加入10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，再加入1mol/L氫氧化鈉溶液4ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘。同時取供試品溶液5ml，加60%乙醇稀釋至10ml，作為空白。照分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅴ B），在505nm波長處測定吸收度，減去校正，計算，即得。本品總黃酮含量以無水蘆?。–27H30O16）計，結(jié)果見表1。
4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本發(fā)明龍血竭總黃酮提取物的成分檢測結(jié)果見表1。
表1 本發(fā)明龍血竭總黃酮提取物的成分檢測結(jié)果
實(shí)施例5 三七總皂苷提取物的制備
稱取三七10kg，粉碎過10目篩，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時，以每千克藥材每分鐘8ml的速度滲漉，收集藥材重量10倍的滲漉液100kg，減壓濃縮至原體積的1/3，靜置沉降8小時，濾過，濾液過D101大孔吸附樹脂柱，用水30 kg洗滌，洗滌水棄去，用100 kg體積濃度為75%的乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-70℃下真空噴粉干燥，即得三七總皂苷提取物。
實(shí)施例6 三七總皂苷提取物的制備
稱取三七15kg，粉碎過10目篩，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時，以每千克藥材每分鐘10ml的速度滲漉，收集藥材重量10倍的滲漉液150kg，減壓濃縮至原體積的1/4，靜置沉降8小時，濾過，濾液過D101大孔吸附樹脂柱，用水60 kg洗滌，洗滌水棄去，用120 kg體積濃度為80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，于50-55℃下真空噴粉干燥，即得三七總皂苷提取物。
實(shí)施例7 三七總皂苷提取物的制備
稱取三七20kg，粉碎過10目篩，用70%乙醇作溶劑，浸漬24小時，以每千克藥材每分鐘7ml的速度滲漉，收集藥材重量10倍的滲漉液200kg，減壓濃縮至原體積的1/5，靜置沉降8小時，濾過，濾液過D101大孔吸附樹脂柱，用水70 kg洗滌，洗滌水棄去，用180 kg體積濃度為80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，于55-60℃下真空噴粉干燥，即得三七總皂苷提取物。
實(shí)施例8 三七總皂苷提取物的含量成分檢測
1、供試樣品：
提取物1：按實(shí)施例5制備
提取物2: 按實(shí)施例6制備
提取物3：按實(shí)施例7制備
2、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
Agilent1200 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；B204-N型電子天平（瑞士Mettler公司）。人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品、三七皂苷R1對照品，由中國生物制品檢驗(yàn)所提供；其他試劑均為分析純，水為去離子水。
3、測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；流速1.5ml/min, 柱溫25℃，檢測波長為203nm；理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計算應(yīng)不低于6000。
對照品溶液的制備：取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品和三七皂苷R1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg1 0.4mg、人參皂苷Rb1 0.4mg、三七皂苷R1 0.1mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備：取供試樣品0.2 g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，放置過液，置80℃水浴上加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
本品三七總皂苷含量以人參皂苷Rg1（C42H72O14）、人參皂苷Rb1（C54H92O23）和三七皂苷R1（C47H80O118）的總量計。
4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本發(fā)明三七總皂苷提取物的成分檢測結(jié)果見表2 。
表2 本發(fā)明三七總皂苷提取物的成分檢測結(jié)果
實(shí)施例9 丹參總酚酸提取物的制備
稱取丹參10kg，粉碎過10目篩， 用體積濃度為30%的乙醇于50℃下超聲提取三次。第一次提取，溶劑用量為藥材重量的10倍量，提取時間2小時；第二次提取，溶劑用量為藥材重量的8倍量，提取時間1小時；第三次提取，溶劑用量為藥材重量的5倍量，提取時間0.5小時。上述三次提取液合并， 過濾，濾液減壓濃縮至密度為1.05-g/ml，加入12倍重量的體積濃度為85%的乙醇，于50℃加熱攪拌0.5小時，靜置降溫沉降8小時，過濾，于50-55℃下真空噴粉干燥，即得丹參總酚酸提取物。
實(shí)施例10 丹參總酚酸提取物的制備
稱取丹參10kg，粉碎過10目篩， 用體積濃度為30%的乙醇于50℃下超聲提取三次。第一次提取，溶劑用量為藥材重量的10倍量，提取時間2小時；第二次提取，溶劑用量為藥材重量的8倍量，提取時間1小時；第三次提取，溶劑用量為藥材重量的5倍量，提取時間0.5小時。上述三次提取液合并， 過濾，濾液減壓濃縮至密度為1.05-1.10g/ml，加入12倍重量的體積濃度為85%的乙醇，于50℃加熱攪拌0.5小時，靜置降溫沉降8小時，過濾，于50-55℃下真空噴粉干燥，即得丹參總酚酸提取物。
實(shí)施例11 丹參總酚酸提取物的制備
稱取丹參10kg，粉碎過10目篩， 用體積濃度為30%的乙醇于50℃下超聲提取三次。第一次提取，溶劑用量為藥材重量的10倍量，提取時間2小時；第二次提取，溶劑用量為藥材重量的8倍量，提取時間1小時；第三次提取，溶劑用量為藥材重量的5倍量，提取時間0.5小時。上述三次提取液合并， 過濾，濾液減壓濃縮至密度為1.05-1.10g/ml，加入12倍重量的體積濃度為85%的乙醇，于50℃加熱攪拌0.5小時，靜置降溫沉降8小時，過濾，于50-55℃下真空噴粉干燥，即得丹參總酚酸提取物。
實(shí)施例12 丹參總酚酸提取物的含量成分檢測
1、供試樣品：
提取物1：按實(shí)施例5制備
提取物2: 按實(shí)施例6制備
提取物3：按實(shí)施例7制備
2.實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
UV-2700紫外分光光度計（日本島津公司）；AB204-N型電子天平（瑞士Mettler公司）。丹酚酸B對照品，由中國生物制品檢驗(yàn)所提供；其他試劑均為分析純，水為去離子水。
3、測定方法
對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品，用甲醇溶解制成每1ml含0.02mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備： 精密量稱取供試樣品10mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法：分別取對照品溶液與供試品溶液，以甲醇為空白，照分光光度法（中國藥典2010版一部附錄VA）,在288 nm波長處測定吸收度，計算，即得。本品丹參總酚酸含量以丹酚酸B（C36H30O16）計，結(jié)果見表1。
4．實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本發(fā)明丹參總酚酸提取物的成分檢測結(jié)果見表3。
表3 本發(fā)明丹參總酚酸提取物的成分檢測結(jié)果
實(shí)施例13 組合物1
1、原料
龍血竭總黃酮提取物：按實(shí)施例1制備
三七總皂苷提取物 ：按實(shí)施例5制備
丹參總酚酸提取物： 按實(shí)施例9制備
冰片：由云南省一心堂中草藥有限公司提供
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 5份
三七總皂苷提取物 41份
丹參總酚酸提取物 1份
冰片 5份
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片 ，混合均勻，即得組合物1。
實(shí)施例14 組合物2
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 87份
三七總皂苷提取物 2 份
丹參總酚酸提取物 34份
冰片 0.01份
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片 ，混合均勻，即得組合物2。
實(shí)施例15 組合物3
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 9份，
三七總皂苷提取物 5份，
丹參總酚酸提取物 25份，
冰片 2.5份。
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片 ，混合均勻，即得組合物3。
實(shí)施例16 組合物4
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 73份，
三七總皂苷提取物 32份，
丹參總酚酸提取物 2份，
冰片 0.02份。
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片，混合均勻，即得組合物4。
實(shí)施例17 組合物5
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
冰片 0.03份。
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片 ，混合均勻，即得組合物5。
實(shí)施例18 組合物6
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物，混合均勻，即得組合物6。
實(shí)施例19 組合物7
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
冰片 0.03份。
制備方法：按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、三七總皂苷提取物和冰片，混合均勻，即得組合物7。
實(shí)施例20 組合物8
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
冰片 0.03份，
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物、丹參總酚酸提取物和冰片，混合均勻，即得組合物8。
實(shí)施例21 組合物9
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份 ，
冰片 0.03份，
3、制備方法：
按上述處方量稱取三七總皂苷提取物、丹參總酚酸提取物和冰片，混合均勻，即得組合物9。
實(shí)施例22 組合物10
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
三七總皂苷提取物 11份，
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物和三七總皂苷提取物，混合均勻，即得組合物10。
實(shí)施例23 組合物11
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
丹參總酚酸提取物 9份，
3、制備方法：
按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物和丹參總酚酸提取物，混合均勻，即得組合物11。
實(shí)施例24 組合物12
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
龍血竭總黃酮提取物 34份，
冰片 0.03份。
制備方法：按上述處方量稱取龍血竭總黃酮提取物和冰片，混合均勻，即得組合物12。
實(shí)施例25 組合物13
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
三七總皂苷提取物 11份，
丹參總酚酸提取物 9份，
3、制備方法：
按上述處方量稱取三七總皂苷提取物和丹參總酚酸提取物，混合均勻，即得組合物13。
實(shí)施例26 組合物14
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
三七總皂苷提取物 11份，
冰片 0.03份。
3、制備方法：
按上述處方量稱取三七總皂苷提取物和冰片，混合均勻，即得組合物14。
實(shí)施例27 組合物15
1、原料：
同實(shí)施例13。
2、處方：
丹參總酚酸提取物 9份，
冰片 0.03份。
3、制備方法：
按上述處方量稱取丹參總酚酸提取物和冰片，混合均勻，即得組合物15。
實(shí)施例28 中藥組合物對心肌缺血作用的對比實(shí)驗(yàn)研究
1.供試樣品
組合物1-組合物15：按實(shí)施例13- 實(shí)施例27制備；
龍血竭總黃酮提取物：按實(shí)施例1制備
三七總皂苷提取物 ：按實(shí)施例5制備
丹參總酚酸提取物：按實(shí)施例9制備
2.實(shí)驗(yàn)動物
SD 大鼠，185-225g，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。
3.實(shí)驗(yàn)方法
取SD 大鼠190只，隨機(jī)分為19 組:模型組、龍血竭總黃酮提取物組、三七總皂苷提取物組、丹參總酚酸提取物組、組合物1-組合物15組，每組10只。造模前1周，各藥物組灌胃給藥50mg/kg，模型組灌胃給予等量的蒸餾水，每天1次，連續(xù)7天。末次給藥2 小時后，取各組大鼠，用10％的烏拉坦1ml/kg 腹腔注射麻醉，仰位固定大鼠，標(biāo)準(zhǔn)II 導(dǎo)聯(lián)心電圖檢測，連接氣管插管待開胸后聯(lián)接人工呼吸機(jī)。剪去胸部的鼠毛，在胸骨左緣旁0.5cm 處縱行切開第3-5 根肋骨，剪開心包，暴露心臟，結(jié)扎冠狀動脈前降支，同時將一根直徑2mm 塑料管置于結(jié)扎線與冠狀動脈之間，拉緊結(jié)扎線使塑料管壓迫引起冠脈閉塞，造成急性心肌缺血，當(dāng)出現(xiàn)T-ST 幅度增高( ＞ 0.2mV)，即大鼠心肌缺血模型成功。缺血30min 后，抽去塑料管，進(jìn)行再灌注60min。待結(jié)扎冠脈24h 后，取心臟，-80℃冰凍5min，在結(jié)扎線下平行于冠狀溝將左心室橫切5 片，在1％ TTC 溶液37℃染色6min，染色后吸干水分，測量心肌梗死區(qū)面積，計算心肌梗死百分率。心肌梗死百分率（%）=心肌梗死區(qū)面積/心室面積×100%。
4.實(shí)驗(yàn)方法
表4 藥物組合物對心肌缺血作用的對比實(shí)驗(yàn)研究
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 本發(fā)明藥物組合物具有明顯的抗心肌缺血作用，其療效優(yōu)于單獨(dú)使用原料丹參總酚酸有效部位提取物、龍血竭總黃酮有效部位提取物、三七總皂苷有效部位提取物中的任何一種，也優(yōu)于它們?nèi)魏蝺煞N或三種構(gòu)成的組合物，表明本發(fā)明中藥組合物具有良好的協(xié)同作用，能發(fā)揮整體性的治療效果。
實(shí)施例29 中藥組合物對腦缺血作用的對比實(shí)驗(yàn)研究
1.供試樣品
組合物1~組合物15：按實(shí)施例1~實(shí)施例15制備；
龍血竭總黃酮提取物：按實(shí)施例1制備
三七總皂苷提取物 ：按實(shí)施例5制備
丹參總酚酸提取物 ：按實(shí)施例9制備
2.實(shí)驗(yàn)動物
SD 大鼠，185-225g，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。
3.實(shí)驗(yàn)方法
取SD 大鼠190只，隨機(jī)分為19 組:模型組、龍血竭總黃酮提取物組、三七總皂苷提取物組、丹參總酚酸提取物組、組合物1-組合物15組，每組10只。造模前一周，各藥物組灌胃給藥50mg/kg，模型組灌胃給予等量的蒸餾水，每日一次，連續(xù)7天。末次給藥2 小時后，取各組大鼠，用3.5％水合氯醛15ml/kg 腹腔注射麻醉，仰位固定，用手術(shù)剪從頸正中縱向剪開一約3cm 長口，銳鈍結(jié)合分離頸部筋膜，用鑷子分離出右側(cè)頸總動脈(CCA)，繞CCA 穿兩根手術(shù)線，以備結(jié)扎，沿著CCA 向頭部方向分離出頸外動脈(ECA) 和頸內(nèi)動脈(ICA)，繞ECA 穿一根手術(shù)線，分別用細(xì)線結(jié)扎CCA 和ECA，用眼科剪在CCA 近心端開一小口，開口處離ECA 和ICA 分叉處約0.5cm，從切口處插入魚線，插入深度約18mm，此時感覺有阻力感時停止進(jìn)線，阻塞大腦中動脈導(dǎo)致腦缺血，結(jié)扎固定魚線，消毒，逐層縫合肌肉和皮膚。造模24 小時后，斷頭取腦，-80℃冷凍10min，冠狀平均切成厚約2mm 的腦片，迅速放入4％ TTC 染液中，37℃避光孵育30min，隔15min 翻動一次，翻動第二次后取出，置4％多聚甲醛液中避光保存24 小時。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。仔細(xì)挖下白色區(qū)域，稱重，計算腦梗塞百分率。腦梗塞百分率(％ ) ＝ 梗死腦重/ 腦總重×100％ 。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表5 藥物組合物抗腦缺血作用的對比實(shí)驗(yàn)研究
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 本發(fā)明藥物組合物具有明顯的抗腦缺血作用，其療效優(yōu)于單獨(dú)使用原料丹參總酚酸有效部位提取物、龍血竭總黃酮有效部位提取物、三七總皂苷有效部位提取物中的任何一種，也優(yōu)于它們?nèi)魏蝺煞N或三種構(gòu)成的組合物，表明本發(fā)明藥物組合物具有良好的協(xié)同作用，能發(fā)揮整體性的治療效果。
實(shí)施例30 片劑
本發(fā)明中藥有效部位組合物 45%
淀粉 48%
羧甲基淀粉鈉 7%
將上述本發(fā)明中藥有效部位組合物、淀粉、羧甲基淀粉鈉混合后于壓片機(jī)上壓片，即得。
實(shí)施例31 膠囊
本發(fā)明中藥有效部位組合物 52%
淀粉 43%
硬脂酸鎂 5%
將上述本發(fā)明中藥有效部位組合物、淀粉和硬脂酸鎂，混合后填充入硬明膠膠囊中，即得。