本發(fā)明屬于醫(yī)藥和/或保健品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及琥珀酸曲格列汀的新應(yīng)用，即其在制備促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)藥物和/或保健品方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
葡萄糖從細(xì)胞外液順濃度梯度進(jìn)入細(xì)胞需要糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT）協(xié)助運(yùn)輸。根據(jù)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白序列同源性和相似性可以分為三類：第一類，GLUTs 1-4轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖；第二類，GLUTs 5,7,9,11轉(zhuǎn)運(yùn)果糖；第三類，GLUTs 6,8,10,12機(jī)制尚不清楚。脂肪細(xì)胞內(nèi)膜上存在的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）在脂肪細(xì)胞外液葡萄糖濃度升高時(shí)，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）會(huì)轉(zhuǎn)移到脂肪細(xì)胞外膜，從而將脂肪細(xì)胞外液中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是為了提供一種琥珀酸曲格列汀的新應(yīng)用，即其在制備促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)藥物和/或保健品方面的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
琥珀酸曲格列汀，結(jié)構(gòu)式：
分子式：C22H26FN5O6
分子量：475.45
性狀：白色固體。
琥珀酸曲格列汀在制備促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)藥物和/或保健品方面的應(yīng)用。也就是說(shuō)琥珀酸曲格列汀能夠提高脂肪細(xì)胞外液葡萄糖向脂肪細(xì)胞內(nèi)部的轉(zhuǎn)移度。
具體的，所述的應(yīng)用為：琥珀酸曲格列汀通過(guò)增加脂肪細(xì)胞外膜葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT4的含量來(lái)促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)。
琥珀酸曲格列汀還可以與本領(lǐng)域常規(guī)輔料復(fù)配制成具有促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)的復(fù)方制劑。所述復(fù)方制劑的劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑或注射劑等。
本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了琥珀酸曲格列汀的新用途，其能夠促進(jìn)對(duì)脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)作用，其通過(guò)增加脂肪細(xì)胞外膜葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT4的含量來(lái)促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)。因此，被用作制備促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)藥物和/或保健品。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。
實(shí)施例1促進(jìn)葡萄糖由脂肪細(xì)胞外液轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)
以大鼠附睪和腎周脂肪細(xì)胞為細(xì)胞模型，培養(yǎng)液中加入琥珀酸曲格列汀培養(yǎng)，考察琥珀酸曲格列汀對(duì)脂肪細(xì)胞外液上清中葡萄糖的影響。
儀器材料：LRH-150恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）；電熱恒溫震蕩水槽（上海一恒科技有限公司，DKZ-2系列）；超凈工作臺(tái)（吳江市凈化設(shè)備總廠）；TGL-16gR型高速冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；Power Gen125 組織勻漿機(jī)（Fisher Scientific）；Multiskan Go全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Thermo fisher scientificoy Ratastie2,F1-01620 vantaa,Finland）；CS-H1型混合器（北京博勵(lì)陽(yáng)科技公司）；葡萄糖測(cè)定試劑盒（上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，20150804147）；GLu標(biāo)準(zhǔn)品（南京建成生物工程研究所）；Hanks平衡鹽溶液（MACCGENE,E11R1090）；Ⅰ型膠原蛋白酶（CSAnumer：9007-34-5）；胰島素（CAS NO 11070-73-8）；胎牛血清（浙江天航科技股份有限公司，20150514）；D-葡萄糖（北京希凱創(chuàng)新科技有限公司，2265C297）；琥珀酸曲格列汀、腎上腺素、青霉素鏈霉素混合液（solarbio，20151029）、TES緩沖液（上海華藍(lán)化學(xué)科技有限公司）；Rat FFA ELISA kit（南京森貝伽生物科技有限公司，201616）；Rat GluT4 ELISA kit（南京森貝伽生物科技有限公司，201616）。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)的SD大鼠，雄性，體重：180 g±20 g，由河南省動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（豫）2015-0004。
實(shí)驗(yàn)方法：大鼠脫頸處死，乙醇浴5 min，無(wú)菌開(kāi)腹取附睪及腎周脂肪組織。于含有青鏈霉素（青霉素100U/mL、鏈霉素100μg/mL，下同）的Hanks平衡鹽溶液中剔除附帶血管，并用Hanks平衡鹽溶液漂洗脂肪組織2次。剪碎，8000r/min研磨組織3min，加入1.5倍體積的0.1%Ⅰ型膠原酶于37℃電熱恒溫震蕩水槽中水浴消化1.5 h。然后加入2—3倍體積的胎牛血清終止消化，1200g離心10 min，棄下層，留上層。上層脂肪細(xì)胞用Hanks平衡鹽溶液洗滌2次（轉(zhuǎn)速1200g，時(shí)間10min）。加入3mL Hanks平衡鹽溶液，過(guò)0.075mm細(xì)胞篩，調(diào)細(xì)胞濃度：2×107。脂肪細(xì)胞分為三組：空白組、胰島素陽(yáng)性對(duì)照組、給藥組。其中，以8U胰島素作為陽(yáng)性對(duì)照，Hanks平衡鹽溶液作為空白對(duì)照，Hanks平衡鹽溶液作為溶劑。
6孔培養(yǎng)板中，加入400μL樣品溶液、1000μL細(xì)胞懸液、300μL 1mg/mL D-葡萄糖溶液和300μL胎牛血清建成2000μL反應(yīng)體系，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，加入10-5 mol/L腎上腺素500μL繼續(xù)培養(yǎng)3 h，冰浴終止反應(yīng)。取上清2μL用葡萄糖測(cè)定試劑盒測(cè)定葡萄糖含量。結(jié)果見(jiàn)表1。
葡萄糖轉(zhuǎn)移度=空白組葡萄糖濃度—給藥組/陽(yáng)性對(duì)照組葡萄糖濃度。
數(shù)據(jù)處理：結(jié)果采用均值±SD值表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS19.0軟件單因素方差分析法（One-Way ANOVA）比較其顯著性差異。
表1、琥珀酸曲格列汀對(duì)脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的影響：
注：與空白組相比，***P<0.001 or, 0.001<**P<0.01
由表1可知，8U胰島素組能夠降低脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。低劑量琥珀酸曲格列汀組能夠降低脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。說(shuō)明低劑量琥珀酸曲格列汀能夠降低脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的含量。由葡萄糖轉(zhuǎn)移度可知，低、中劑量琥珀酸曲格列汀能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞外液葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪細(xì)胞內(nèi)。
實(shí)施例2 提高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量
實(shí)驗(yàn)方法：脂肪細(xì)胞制備和給藥方法同實(shí)施例1，脂肪細(xì)胞外膜蛋白制備方法如下：
冰浴終止反應(yīng)后，每孔棄去1800μL上清，剩余200μL下層細(xì)胞混懸液，合并于1.5mL EP管。每孔加入200μL TES緩沖液，洗滌下六孔板上貼附的細(xì)胞合并到另一個(gè)1.5mL EP管。1200g離心10min，棄下層。合并上層脂肪細(xì)胞于1.5ml EP管，TES緩沖液洗滌細(xì)胞3次，細(xì)胞凍存于-40℃冰箱。15 h后取出立即放入37℃恒溫培養(yǎng)箱解凍。組織勻漿機(jī)30000r/min冰上破碎細(xì)胞，1000g離心20min，棄沉淀，留上清。上清10000g 4℃離心20min，收集沉淀，即為脂肪細(xì)胞外膜蛋白。
于每組得到的脂肪細(xì)胞外膜蛋白中，加入30μL TES緩沖液溶解，用GLUT4酶聯(lián)免疫測(cè)定試劑盒測(cè)定脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2、琥珀酸曲格列汀對(duì)脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的影響
注：與空白組相比，***P<0.001 or, 0.001<**P<0.01 or,*P<0.05
由表2可知，8U胰島素組能夠提高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。低劑量琥珀酸曲格列汀組能夠升高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。說(shuō)明低劑量琥珀酸曲格列汀能夠升高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量。
由表1、表2可知，低劑量時(shí)，琥珀酸曲格列汀能夠降低脂肪細(xì)胞外液葡萄糖含量，升高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4含量，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢酝茰y(cè)，曲格列汀是通過(guò)提高脂肪細(xì)胞外膜GLUT4的含量而促進(jìn)脂肪細(xì)胞對(duì)脂肪細(xì)胞外液葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)。