本發(fā)明屬于健康產(chǎn)品領(lǐng)域，涉及一種蓯蓉提取物的制備方法，及其在抗疲勞方面的應(yīng)用。本發(fā)明的提取物可以作為食品、保健食品、或藥品使用。
背景技術(shù)：
：疲勞是機體經(jīng)過復(fù)雜的生理生化變化過程所導(dǎo)致的結(jié)果。從中樞神經(jīng)系統(tǒng)到骨骼肌細胞再到細胞內(nèi)的物質(zhì)代謝過程，中間任何一個環(huán)節(jié)或者過程的綜合變化都可造成疲勞。疲勞不但降低了機體原有的工作能力，而且提示著機體發(fā)展到一定程度的傷病狀態(tài)。人體產(chǎn)生疲勞狀態(tài)后，假如得不到及時的治療和消除，將會逐漸積累，最終導(dǎo)致過勞，出現(xiàn)慢性疲勞綜合征?，F(xiàn)代社會許多人因為過度疲勞處于亞健康狀態(tài)，嚴重影響了工作效率和生活質(zhì)量。因此，尋找有效的抗疲勞藥物是近年來衛(wèi)生保健人員和科學(xué)工作者關(guān)注的熱點。由于化學(xué)合成藥品干擾人體的生理生化代謝，引起嚴重的毒副反應(yīng)且研究代價昂貴，世界各國正把重點轉(zhuǎn)向天然藥物。在“人類回歸大自然”的國際潮流中，我國悠久的傳統(tǒng)藥物學(xué)理論基礎(chǔ)和實踐經(jīng)驗以及豐富的中草藥資源更是為世界矚目，從中草藥中尋找毒副作用小、安全有效的抗疲勞藥物己成為藥學(xué)界的研究熱點。本發(fā)明旨在尋找一種具有較好抗疲勞功效的植物提取物，是以肉蓯蓉為原料，肉蓯蓉CistancheHerba又名金筍、地精、蓯蓉、大蕓，為列當科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、青海等地。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其后古典《本草經(jīng)疏》、《本草匯言》、《月華子本草》等多有記載。李時珍曰：“此物補而不峻，故有從容之兮”。肉蓯蓉味甘、咸，性溫，具有補腎陽、益精血、潤腸通便的功能，在我國已有兩千多年的使用歷史?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明，肉蓯蓉除作為傳統(tǒng)的補腎壯陽中藥外，更兼具有抗衰老、增強記憶、提高免疫力等多種功能。本發(fā)明使用特殊工藝制備得到蓯蓉提取物，經(jīng)體內(nèi)生物活性實驗證實其具有顯著的抗疲勞功效。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明公開了一種蓯蓉提取物的制備方法及其用途，將肉蓯蓉肉質(zhì)莖晾干粉碎后，使用酶提取法獲得具有生物活性的蓯蓉提取物，該提取物可以用作食品、保健食品以及藥品。本發(fā)明種的制備工藝是經(jīng)過長期的科學(xué)研究而總結(jié)出來的，其特點在于工藝簡單、經(jīng)濟，綠色環(huán)保，同時用于大規(guī)模生產(chǎn)。為達到上述目的，本發(fā)明是通過下述方法實現(xiàn)的：一種肉蓯蓉提取物，其通過下述方法制備得到：將肉蓯蓉鮮品或干品與水混合，進行酶提取，提取液濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經(jīng)干燥得到提取物。肉蓯蓉選用地上或地下部分，其中地上部分優(yōu)選自葉、花、莖或種子。優(yōu)選地，肉蓯蓉肉質(zhì)莖部分晾干后，粉碎、過篩，加水攪拌，調(diào)節(jié)溫度和pH，加入生物蛋白酶進行酶解提取，提取完成后，煮沸，離心、過濾，上清液經(jīng)濃縮干燥，得到土黃色蓯蓉提取物。優(yōu)選地，(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網(wǎng)從而獲得蓯蓉藥粉。(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質(zhì)量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質(zhì)量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調(diào)節(jié)pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h；(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用；(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經(jīng)干燥得到土黃色蓯蓉提取物；所述蓯蓉提取物的收率不低于40％。優(yōu)選步驟(3)中的濾液濃縮前為50～60℃優(yōu)選地，所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優(yōu)選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物；優(yōu)選地，所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮；優(yōu)選地，所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。本發(fā)明還提供了一種肉蓯蓉提取物的提取方法，其包括下述步驟：將肉蓯蓉鮮品或干品與水混合，進行酶提取，提取液濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經(jīng)干燥得到提取物。優(yōu)選地，所述提取方法包括下述步驟：(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網(wǎng)從而獲得蓯蓉藥粉；(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質(zhì)量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質(zhì)量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調(diào)節(jié)pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h；(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用；(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經(jīng)干燥得到土黃色蓯蓉提取物；所述蓯蓉提取物的收率不低于40％。優(yōu)選地，所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優(yōu)選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物；優(yōu)選地，所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮；優(yōu)選地，所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。本發(fā)明還提供了一種組合物，其含有上述提取物，和可藥用或食用輔料；可為任意劑型，優(yōu)選其是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、微丸劑、滴丸劑、糖漿劑、散劑、浸膏劑、煎膏劑、口服液體制劑及其他藥學(xué)上可以接受的劑型。所述提取物和組合物可提高生物體體內(nèi)乳酸代謝從而起到抗疲勞的作用。所述的組合物可用于制備預(yù)防、治療或者減輕因疲勞引起的相關(guān)疾病的藥物、食品或保健品。優(yōu)選地，本發(fā)明的蓯蓉提取物的制備方法，其包括下述步驟：肉蓯蓉肉質(zhì)莖部分晾干后，粉碎、過篩，加水攪拌，將溫度和pH調(diào)至生物蛋白酶酶提取的最佳條件后，加入一定量的生物蛋白酶進行酶解提取，提取完成后，煮沸滅活，離心、過濾，上清液經(jīng)濃縮干燥，得到土黃色蓯蓉提取物，具體制備方法如下：(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網(wǎng)從而獲得蓯蓉藥粉。(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質(zhì)量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質(zhì)量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調(diào)節(jié)pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h。(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經(jīng)干燥得到土黃色蓯蓉提取物。所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優(yōu)選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物。所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮。所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。所述蓯蓉提取物的收率在40～60％。本發(fā)明還提供了一種組合物，其含有所述蓯蓉提取物，藥物或食品上可接受的助劑。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可以與常規(guī)預(yù)防或治療疲勞疾病的藥物如黃精、枸杞等復(fù)配組合。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可以與藥用輔料組合，其是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、微丸劑、滴丸劑、糖漿劑、散劑、浸膏劑、煎膏劑、口服液體制劑及其他藥學(xué)上可以接受的劑型。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可提高體內(nèi)乳酸代謝從而起到抗疲勞的作用，用于制備預(yù)防、治療或者減輕因疲勞引起的相關(guān)疾病的藥物、食品或保健品方面的用途。經(jīng)研究表明，本發(fā)明的蓯蓉提取物能促進斑馬魚體內(nèi)乳酸代謝，改善其運動能力，因此，可以預(yù)期本發(fā)明的蓯蓉提取物或含有它的藥物組合物可以用于預(yù)防、治療或者減輕因疲勞引起的相關(guān)疾病的藥物、食品或保健品方面的用途。實施例下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實施例所述方法僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明制備方法的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。如無特別說明，實施例中用到的所有原料和溶劑均購自SigmaBiochemicalandOrganicCompoundsforResearchandDiagnosticClinicalReagents公司。實施例1：將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分(和田天力沙生藥物開發(fā)有限責任公司，其它商購產(chǎn)品亦可)晾干并粉碎，過60目篩網(wǎng)備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質(zhì)量比為1∶10混合，加入200g中性蛋白酶(酶活力為30萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至7～8，保持溫度為45～50℃。攪拌提取3h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05g/mL，經(jīng)噴霧干燥機進行干燥，進風溫度為160～170℃，出風溫度為70～80℃，干燥完成后，得到49kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-1)。實施例2：將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分(和田天力沙生藥物開發(fā)有限責任公司，其它商購產(chǎn)品亦可)晾干并粉碎，過40目篩網(wǎng)備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質(zhì)量比為1∶15混合，加入100g堿性蛋白酶(酶活力為40萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至8～9，保持溫度為40～45℃。攪拌提取4h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.10g/mL，經(jīng)真空干燥箱進行干燥，溫度為60～65℃，負壓為0.08～0.1MPa，干燥12h后，得到56kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-2)。實施例3：將肉蓯蓉藥材中的肉質(zhì)莖部分(和田天力沙生藥物開發(fā)有限責任公司，其它商購產(chǎn)品亦可)晾干并粉碎，過40目篩網(wǎng)備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質(zhì)量比為1∶20混合，加入150g木瓜蛋白酶(酶活力為50萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至7.5～8.5，保持溫度為50～55℃。攪拌提取4h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.08g/mL，經(jīng)噴霧干燥機進行干燥，進風溫度為160～170℃，出風溫度為70～80℃，干燥完成后，得到42kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-3)。實施例4：組合物對斑馬魚運動的影響評價實驗動物為野生型AB品系，每個實驗組為均30尾斑馬魚，在28℃培養(yǎng)箱中孵育。正常對照組為養(yǎng)魚水處理正常斑馬魚；用亞硫酸鈉誘導(dǎo)斑馬魚，以此作為斑馬魚缺氧疲勞模型；取濃度為2mg/mL蓯蓉提取物(批號為C-1)進行評價，是以水溶給樣方式處理模型組斑馬魚，并以中華跌打丸為陽性對照組。處理結(jié)束后，每個實驗組隨機選擇的10尾斑馬魚，測定斑馬魚的運動總距離(S)(實驗結(jié)果如表1)，對運動能力影響評價的計算公式如下：運動改善率(％)＝[(S提取物-S模型)/(S正常-S模型)]×100％表1組合物對斑馬魚運動改善作用定量結(jié)果組別濃度(mg/mL)總運動距離(mm，Mean±SE)運動改善作用(％)正常對照組/7635±703/模型對照組/2950±202/中華跌打丸19088±447131.0提取物C-128647±417121.6注：與模型對照組比較：p＜0.001。模型對照組斑馬魚總運動距離(2950mm)與正常對照組(7635mm)比較p＜0.001，提示模型構(gòu)建成功；陽性藥中華跌打丸組(1mg/mL)，斑馬魚總運動距離為9088mm，與模型對照組比較p＜0.001，運動改善作用為131.0％，提示中華跌打丸對亞硫酸鈉誘發(fā)的斑馬魚缺氧疲勞具有極顯著的抗疲勞作用。蓯蓉提取物在2mg/mL濃度下，斑馬魚總運動距離分別為：8647mm，其運動改善作用為121.6％，與模型對照組比較p＜0.001，提示蓯蓉提取物明顯改善亞硫酸鈉誘發(fā)的斑馬魚缺氧疲勞的運動能力，因而具有顯著的抗疲勞作用。實施例4：組合物對斑馬魚乳酸代謝的影響評價實驗動物為野生型AB品系，每個實驗組為均80尾斑馬魚，在28℃培養(yǎng)箱中孵育。正常對照組為養(yǎng)魚水處理正常斑馬魚；用亞硫酸鈉誘導(dǎo)斑馬魚，以此作為斑馬魚缺氧疲勞模型；取濃度為2mg/mL蓯蓉提取物(C-1)進行評價，是以水溶給樣方式處理模型組斑馬魚，并以中華跌打丸為陽性對照組。處理結(jié)束后，測定每個實驗組斑馬魚體內(nèi)的乳酸含量(C)(實驗結(jié)果如表2)，對乳酸代謝改善作用計算公式如下：乳酸代謝促進率(％)＝[(C模型-C提取物)/(C模型-C正常)]×100％表2組合物對斑馬魚乳酸代謝促進作用定量結(jié)果組別濃度(mg/mL)乳酸含量(mmol/gprot，Mean±SE)乳酸促進作用(％)正常對照組/0.196±0.0007模型對照組/0.377±0.0017中華跌打丸10.301±0.000441.9提取物C-120.335±0.000723.3注：與模型對照組比較：p＜0.001。模型對照組斑馬魚體內(nèi)乳酸含量(0.377mmol/gprot)與正常對照組(0.196mmol/gprot)比較p＜0.001，提示模型構(gòu)建成功；陽性藥中華跌打丸組(1mg/mL)，斑馬魚體內(nèi)乳酸含量為0.301mmol/gprot，與模型對照組比較p＜0.001，其乳酸代謝促進作用為41.9％，提示中華跌打丸顯著促進亞硫酸鈉誘發(fā)的斑馬魚缺氧疲勞斑馬魚體內(nèi)的乳酸代謝。蓯蓉提取物在2mg/mL濃度下，斑馬魚體內(nèi)乳酸含量為0.335mmol/gprot，乳酸代謝促進作用為23.3％，與模型對照組比較p＜0.001，提示蓯蓉提取物可顯著促進亞硫酸鈉誘發(fā)的斑馬魚缺氧疲勞斑馬魚體內(nèi)的乳酸代謝。當前第1頁1 2 3