本發(fā)明涉及一種生物制品領(lǐng)域，具體涉及一種凍干疫苗耐熱保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：凍干保護(hù)劑可能影響生物制品的質(zhì)量、效價(jià)和穩(wěn)定性，耐熱凍干保護(hù)劑有免疫活性而無藥理活性，它不僅具有保護(hù)制品生物學(xué)活性的作用，而且具有賦形劑和抗氧化劑的作用，直接與疫苗的滴度和穩(wěn)定性相關(guān)聯(lián)，可在凍干和保存時(shí)維持疫苗的穩(wěn)定性，確保制品在2～8℃條件下，保存期可長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月，效價(jià)無明顯下降，即使在37℃條件下也可以保存十天以上，從而解決了常規(guī)疫苗在長(zhǎng)途運(yùn)輸、長(zhǎng)期保存和使用過程中不耐熱、儲(chǔ)存溫度低、保存期短和苛刻的冷凍條件造成大量能源浪費(fèi)等難題。但國(guó)內(nèi)疫苗企業(yè)常用的凍干保護(hù)劑組方簡(jiǎn)單，保護(hù)性能差。如果在2～8℃條件下保存，保存期只有短短的3～6個(gè)月，大多需要在-15℃條件下保存。這就要求疫苗在保存、運(yùn)輸和使用過程中盡可能在低溫條件下進(jìn)行，否則疫苗的效價(jià)就會(huì)大打折扣。而在疫苗生產(chǎn)、運(yùn)輸和使用過程中，如果任何一個(gè)環(huán)節(jié)的冷鏈系統(tǒng)控制不當(dāng)，高溫環(huán)境就會(huì)導(dǎo)致疫苗效力下降，最終因免疫失敗而造成疫病流行。因此，提供耐熱型的疫苗就具有重要的意義。近年來，耐熱保護(hù)劑在獸用生物制品的凍干疫苗中得到了廣泛應(yīng)用，給凍干疫苗的運(yùn)輸和保存帶來了極大的方便，同時(shí)保證了疫苗的質(zhì)量。通過大量研究者的努力，我國(guó)現(xiàn)階段已具備多種病毒的耐熱保護(hù)劑，少部分已達(dá)到國(guó)際水平。然而，一種耐熱保護(hù)劑適用于不同病毒的保護(hù)劑研究較少。不同的病毒需要不同的耐熱保護(hù)劑，同時(shí)需要不同的凍干工藝，這給疫苗企業(yè)的生產(chǎn)帶來了極大的不便。因此，一種凍干疫苗耐熱保護(hù)劑能適用于兩種及以上病毒的凍干就顯得尤為重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是解決上述現(xiàn)有技術(shù)問題，提供一種凍干疫苗耐熱保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用。[技術(shù)方案]為了達(dá)到上述的技術(shù)效果，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：一種凍干疫苗耐熱保護(hù)劑，它包括以下質(zhì)量百分比的原料：0.3～0.6％的L-谷氨酸鈉、8～14％的蔗糖、2～5％的D-山梨醇、1～3％的牛血清白蛋白、0.1～0.3％的聚乙烯吡咯烷酮、0.2～1％的硫脲、3～5％的NZ-AmineAS、0.8～1.5％的水解明膠，余量為pH7.2的PBS。一種上述的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑的制備方法，它包括以下步驟：A，組方Ⅰ的配制：按配比稱取L-谷氨酸鈉、蔗糖、D-山梨醇、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲和NZ-AmineAS，分別用PBS充分溶解后混合均勻，然后經(jīng)0.22μm除菌濾器過濾后，4℃保存?zhèn)溆?；B，組方Ⅱ的配制：按配比稱取水解明膠，用PBS在70℃條件下充分溶解后，經(jīng)115℃滅菌20min，然后置37℃保存?zhèn)溆?；C，用PBS調(diào)節(jié)組方Ⅰ與組方Ⅱ的體積比為3：1，然后將組方Ⅰ和組方Ⅱ混合均勻后，得到所述的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑。上述的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑的應(yīng)用，該凍干疫苗耐熱保護(hù)劑用于豬偽狂犬病毒或豬繁殖培養(yǎng)液與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液的凍干。根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述豬偽狂犬病毒為Bartha-k61株，豬繁殖與呼吸綜合征病毒為JXA1-R株。根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述凍干的工藝包括以下步驟：(1)將凍干疫苗耐熱保護(hù)劑與豬偽狂犬病毒培養(yǎng)液或豬繁殖與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液混合配苗；然后按2mL/瓶進(jìn)行分裝；(2)將分裝好的豬偽狂犬病毒培養(yǎng)液或豬繁殖與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液依次經(jīng)預(yù)凍階段、一次干燥和解析干燥，密封后完成凍干，得到豬偽狂犬疫苗凍干產(chǎn)品或豬繁殖與呼吸綜合征疫苗凍干產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案，在所述凍干的工藝的步驟(2)中，凍干疫苗耐熱保護(hù)劑與豬偽狂犬病毒培養(yǎng)液按體積比為1:3進(jìn)行配苗；或者將凍干疫苗耐熱保護(hù)劑與豬繁殖與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液按體積比為1:4進(jìn)行配苗。根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案，在所述凍干的工藝的步驟(2)中，所述預(yù)凍階段是指在1h內(nèi)將病毒培養(yǎng)液從常溫降至-42℃后，維持該溫度放置3h；所述一次干燥是將經(jīng)預(yù)凍階段的病毒培養(yǎng)液的溫度在0.5h從-42℃升溫至-5℃，維持該溫度并控制壓力為0.12mbar放置2h；接著10min將病毒培養(yǎng)液的溫度從-5℃升溫至0℃，維持該溫度并控制壓力為0.12mbar放置12h；最后10min將病毒培養(yǎng)液的溫度從0℃升溫至10℃，維持該溫度并控制壓力為0.12mbar放置1.5h；所述解析干燥是至將經(jīng)一次干燥的病毒培養(yǎng)液的溫度在0.5h從10℃升溫至30℃，維持該溫度并控制壓力為0.22mbar放置5h；然后1min將病毒培養(yǎng)液的溫度從30℃降溫至28℃，維持該溫度并控制壓力為0.00mbar放置1h。下面將詳細(xì)地說明本發(fā)明。本發(fā)明中，NZ胺(NZ-AmineAS)，又稱為酪蛋白的酶促水解物。蔗糖具有滲透作用，能抑制有害微生物生長(zhǎng)，延長(zhǎng)產(chǎn)品保藏期，具有很好的水溶性；可提高微生物存活率，形成均一懸液，起到水分緩解作用，可防止活性組分變性；蔗糖與聚乙烯吡咯酮(PVP)聯(lián)合使用，可起到良好的低溫、干燥保護(hù)劑作用；同時(shí)，蔗糖、聚乙烯吡咯酮(PVP)可作為凍干劑，能防止和減少冷凍過程結(jié)晶水的形成；明膠、山梨醇可防止有效成分隨水蒸氣一起升華逸散，并對(duì)微生物有保護(hù)作用，可促進(jìn)升華形成耐熱骨架，阻斷熱傳導(dǎo)和熱輻射；此外，牛血清白蛋白、明膠均為高分子化合物，能夠?qū)ξ⑸锲鸨Ｗo(hù)作用，促進(jìn)升華形成耐熱骨架阻斷熱傳導(dǎo)和熱輻射；硫脲作為抗氧化劑可以通過抑制氧化酶的活性而防止凍干樣品的氧化變質(zhì)；PBS緩沖液的主要目的是為了保證病毒培養(yǎng)液加入凍干疫苗耐熱保護(hù)劑后，可以有效保證pH值不產(chǎn)生較大的波動(dòng)，以避免引起病毒蛋白的變性，此外，由于本發(fā)明中PVP的添加，可以有效抑制PBS緩沖液中磷酸氫二鈉的結(jié)晶，從而抑制了這個(gè)混合液中的pH降低；L-谷氨酸鈉是作為氨基酸類保護(hù)劑可用于病毒微生物的保護(hù)。本發(fā)明制備的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑可以用于兩種病毒培養(yǎng)液的凍干，因此需要合理配比各種原料的質(zhì)量百分含量，保證豬偽狂犬病毒培養(yǎng)液或豬繁殖與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液兩種培養(yǎng)液在進(jìn)行凍干過程中都有較好的效果，以使制備得到疫苗凍干產(chǎn)品效果好。將本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑應(yīng)用于豬偽狂犬病毒或豬繁殖培養(yǎng)液與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液的凍干，得到的凍干疫苗放置于37℃7日后，測(cè)定病毒含量，與放置前相比病毒含量降低不超過1個(gè)滴度。[有益效果]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下的有益效果：本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑配方簡(jiǎn)單，制備容易，適于大規(guī)模生產(chǎn)，對(duì)疫苗具有良好的保護(hù)功效。制得的疫苗無菌安全，且性狀穩(wěn)定，具有耐熱、保存時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，解決了疫苗在運(yùn)輸過程中需要低溫冷凍、貯存不便等問題。本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑可以使兩種耐熱活疫苗在2～8℃條件下均能保存24個(gè)月，且疫苗效價(jià)達(dá)標(biāo)。此外，兩種疫苗的凍干工藝一致，為凍干疫苗的生產(chǎn)帶來了極大的便利。提高了凍干疫苗的產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力和影響力。具體實(shí)施方式下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述和說明。實(shí)施例11.豬偽狂病毒的培養(yǎng)及收獲Vero細(xì)胞的傳代及培養(yǎng)：待培養(yǎng)瓶中Vero細(xì)胞長(zhǎng)滿單層時(shí)，棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，用含0.25％胰酶的細(xì)胞消化液消化細(xì)胞，待培養(yǎng)瓶中消化細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察呈圓縮狀時(shí)，立即向培養(yǎng)瓶中加入細(xì)胞生長(zhǎng)液，振蕩培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，將消化后的細(xì)胞按1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞下一個(gè)代次的培養(yǎng)。病毒的增殖培養(yǎng)及收獲：從-70℃超低溫冰箱中取PRVBartha-k61株濕毒，按1％(V/V)接毒比例接種已長(zhǎng)滿單層的Vero細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，接種繼續(xù)培養(yǎng)觀察，待細(xì)胞出現(xiàn)病變達(dá)80％以上時(shí)進(jìn)行收獲，將培養(yǎng)瓶于-20℃凍融1次后收集病毒液，將收集的病毒液于-70℃保存?zhèn)溆谩?.凍干疫苗耐熱保護(hù)劑的制備按照表1的配方進(jìn)行凍干疫苗耐熱保護(hù)劑的制備：表1為凍干疫苗耐熱保護(hù)劑個(gè)配方的配方表組方Ⅰ的配制：將表1中的L-谷氨酸鈉、蔗糖、D-山梨醇、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲和NZ-AmineAS按配比分別用PBS充分溶解后混合，經(jīng)0.22μm除菌濾器過濾后，37℃保存?zhèn)溆茫唤M方Ⅱ的配制：將水解明膠按上述配比用PBS在70℃條件下充分溶解后，經(jīng)115℃，20min滅菌后，37℃保存?zhèn)溆?；用PBS調(diào)節(jié)組方Ⅰ與組方Ⅱ的體積比為3：1，然后將組方Ⅰ和組方Ⅱ混合均勻后，得到所述的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑A、B、C。3.豬偽狂病耐熱保護(hù)劑活疫苗的制備收獲的豬偽狂犬病毒培養(yǎng)液經(jīng)無菌和病毒含量測(cè)定合格后，與上述制備的耐熱保護(hù)劑3個(gè)配方(A、B、C)分別按體積比為3:1進(jìn)行配苗，2.0ml/瓶進(jìn)行分裝，然后利用冷凍真空干燥機(jī)進(jìn)行凍干，同時(shí)設(shè)立牛奶蔗糖保護(hù)劑(常規(guī)保護(hù)劑)為對(duì)照組。凍干工藝如下：預(yù)凍階段：常溫進(jìn)箱，1小時(shí)內(nèi)將制品降至-42℃并維持3小時(shí)；一次干燥：0.5小時(shí)將制品從-42℃升至-5℃，維持2小時(shí)，壓力0.12mbar；10分鐘將制品溫度從-5℃升至0℃，維持13小時(shí)，壓力0.12mbar；10分鐘將制品溫度從0℃升至10℃，維持1.5小時(shí)，壓力0.12mbar；解析干燥：0.5小時(shí)將制品溫度從10℃升至30℃，維持5小時(shí)，壓力0.22mbar；1分鐘將制品溫度從30℃降至28℃，維持1小時(shí)，壓力0.00mbar；最后加塞出箱完成凍干。4.豬偽狂犬病耐熱保護(hù)劑活疫苗凍干后檢測(cè)將耐熱保護(hù)劑的配方A、配方B、配方C及對(duì)照組凍干的成品按照現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》要求進(jìn)行檢測(cè)，包括物理性狀、無菌檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、真空度檢驗(yàn)、剩余水分含量檢測(cè)，所有檢測(cè)項(xiàng)目均合格。病毒含量測(cè)定：將疫苗用無血清DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋為1頭份/ml，再做10倍系列稀釋，取10-3、10-4、10-5、10-6共4個(gè)稀釋度，分別接種已長(zhǎng)成良好單層、棄去細(xì)胞培養(yǎng)液的96孔Vero細(xì)胞培養(yǎng)板，每個(gè)稀釋度接種6孔，每孔0.1ml，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。置37℃、含5％CO2培養(yǎng)箱中吸附1小時(shí)后，每孔補(bǔ)加含4％新生牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液0.1ml。置37℃、含5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察5日，根據(jù)Reed-Muench法計(jì)算TCID50。每頭份病毒含量應(yīng)≥105.5TCID50。各配方凍干前后病毒含量見表2。從表中可以看出耐熱保護(hù)劑配制的苗凍干前后病毒含量損失最大為0.12個(gè)滴度，然而常規(guī)保護(hù)劑損失達(dá)到0.41個(gè)滴度。表2為豬偽狂犬病活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方的病毒含量(TCID50/頭份)測(cè)定結(jié)果狀態(tài)配方A配方B配方C對(duì)照凍干前106.25106.25106.25106.25凍干后106.13106.16106.13105.84耐老化試驗(yàn)：將制備的3批疫苗及對(duì)照組各取5瓶在37℃放置7日，然后各隨機(jī)取3瓶，測(cè)定PRV的TCID50。結(jié)果見表3。表3豬偽狂犬病活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方耐老化結(jié)果(病毒含量：TCID50/頭份)配方放置前37℃放置7日后下降滴度配方A106.13105.75、105.69、105.64分別下降0.38、0.44、0.49配方B106.16105.84、105.75、105.84分別下降0.32、0.41、0.32配方C106.13105.69、105.64、105.5分別下降0.44、0.49、0.63對(duì)照組105.84104.24、104.16、104.0分別下降1.60、1.68、1.84從表中可以看出，耐熱保護(hù)劑配方制備的苗耐老化后病毒含量下降滴度均不超過0.7，而常規(guī)保護(hù)劑下降滴度為1.6以上。保存期試驗(yàn)：將制備的3批疫苗及對(duì)照組各取7瓶，放置于2～8℃保存，分別在放置后第1、3、6、12、18、24、30個(gè)月各取其中1瓶測(cè)定病毒含量，觀察該疫苗的保存期。具體結(jié)果見表4。從表中可以看出，耐熱保護(hù)劑配方凍干的疫苗在2～8℃保存條件下，均可以保存24個(gè)月。然而，常規(guī)保護(hù)劑凍干疫苗的保存期則只有6個(gè)月。表4為豬偽狂犬病活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方保存期結(jié)果(病毒含量：TCID50/頭份)實(shí)施例21.豬繁殖與呼吸綜合征病毒的培養(yǎng)及收獲細(xì)胞的傳代及培養(yǎng)：待細(xì)胞培養(yǎng)瓶中Marc-145細(xì)胞長(zhǎng)滿單層時(shí)，棄掉生長(zhǎng)液，用含0.25％胰酶的消化細(xì)胞，待培養(yǎng)瓶中消化細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察呈圓縮狀時(shí)，立即向培養(yǎng)瓶中加入細(xì)胞生長(zhǎng)液，振蕩培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，將消化后的細(xì)胞按1:4的比例進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。病毒的增殖培養(yǎng)及收獲：從-70℃冰箱中取PRRSVJXA1-R株種毒，按0.5％(V/V)接毒比例接種已長(zhǎng)滿單層的Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，接種后繼續(xù)培養(yǎng)觀察，待細(xì)胞出現(xiàn)病變達(dá)75％以上時(shí)收獲，將培養(yǎng)瓶于-20℃凍融1次后收集病毒液，將收集的病毒液于-70℃保存?zhèn)溆谩?.凍干疫苗耐熱保護(hù)劑的制備該實(shí)例的耐熱保護(hù)劑配方見表1。組方I的配制：將上述L-谷氨酸鈉、蔗糖、D-山梨醇、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲和NZ-AmineAS按表1的配比分別用PBS充分溶解后混合，經(jīng)0.22μm除菌濾器過濾后，37℃保存?zhèn)溆?；組方Ⅱ的配制：將水解明膠按上述配比用PBS在70℃條件下充分后，經(jīng)115℃，20min滅菌后，37℃保存?zhèn)溆谩Ｓ肞BS調(diào)節(jié)組方Ⅰ與組方Ⅱ的體積比為3：1，然后將組方Ⅰ和組方Ⅱ混合均勻后，得到所述的凍干疫苗耐熱保護(hù)劑A、B、C。3.豬繁殖與呼吸綜合征耐熱保護(hù)劑活疫苗的制備收獲的豬繁殖與呼吸綜合征病毒培養(yǎng)液經(jīng)無菌檢驗(yàn)和病毒含量測(cè)定合格后，與上述制備的耐熱保護(hù)劑3個(gè)配方分別按體積比為4:1進(jìn)行配苗，2.0ml/瓶進(jìn)行分裝，然后利用冷凍真空干燥機(jī)進(jìn)行凍干，同時(shí)設(shè)立牛奶蔗糖保護(hù)劑為對(duì)照組。凍干工藝如下：預(yù)凍階段：常溫進(jìn)箱，1小時(shí)內(nèi)將制品降至-42℃并維持3小時(shí)；一次干燥：0.5小時(shí)將制品從-42℃升至-5℃，維持2小時(shí)，壓力0.12mbar；10分鐘將制品溫度從-5℃升至0℃，維持13小時(shí)，壓力0.12mbar；10分鐘將制品溫度從0℃升至10℃，維持1.5小時(shí)，壓力0.12mbar；解析干燥：0.5小時(shí)將制品溫度從10℃升至30℃，維持5小時(shí)，壓力0.22mbar；1分鐘將制品溫度從30℃降至28℃，維持1小時(shí)，壓力0.00mbar；最后加塞出箱完成凍干。4.豬繁殖與呼吸綜合征耐熱保護(hù)劑活疫苗凍干后檢測(cè)將耐熱保護(hù)劑的配方A、配方B、配方C及對(duì)照組凍干的成品按照現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》要求進(jìn)行檢測(cè)，包括物理性狀、無菌檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、真空度檢驗(yàn)、剩余水分含量檢測(cè)，所有檢測(cè)項(xiàng)目均合格。病毒含量測(cè)定：將疫苗用無血清DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋為1頭份/ml，再做10倍系列稀釋，取10-3、10-4、10-5、10-64個(gè)稀釋度，分別接種已長(zhǎng)成良好單層、棄去細(xì)胞培養(yǎng)液的96孔Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)板，每個(gè)稀釋度接種6孔，每孔0.1ml，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。置37℃、含5％CO2培養(yǎng)箱中吸附1小時(shí)后，每孔補(bǔ)加含4％新生牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液0.1ml。置37℃、含5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察5日，根據(jù)Reed-Muench法計(jì)算TCID50。每頭份病毒含量應(yīng)≥105.5TCID50。各配方凍干前后病毒含量見表5，表中數(shù)據(jù)表明采用耐熱保護(hù)劑的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗凍干前后病毒含量損失最大為0.2個(gè)滴度，常規(guī)保護(hù)劑凍干前后病毒含量損失達(dá)到0.36個(gè)滴度。表5豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方的病毒含量(TCID50/頭份)測(cè)定結(jié)果狀態(tài)配方A配方B配方C對(duì)照凍干前106.36106.36106.36106.36凍干后106.25106.20106.16106.0耐老化試驗(yàn)：將制備的3批疫苗及對(duì)照組各取5瓶在37℃放置7日，然后各取3瓶，測(cè)定PRRSV的TCID50。結(jié)果見表6。表中顯示：耐熱保護(hù)劑配方制備的苗耐老化后病毒含量下降滴度均不超過0.6，而常規(guī)保護(hù)劑下降滴度為1.6以上。表6豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方耐老化結(jié)果(病毒含量：TCID50/頭份)配方放置前37℃放置7日后下降滴度配方A106.25105.84、105.75、105.75分別下降0.41、0.5、0.5配方B106.20105.69、105.64、105.88分別下降0.51、0.56、0.32配方C106.16105.64、105.69、105.64分別下降0.52、0.47、0.52對(duì)照組106.0104.31、104.25、104.36分別下降1.69、1.75、1.64保存期試驗(yàn)：將制備的3批疫苗及對(duì)照組各取7瓶，放置于2～8℃保存，分別在放置后第1、3、6、12、18、24、30個(gè)月各取其中1瓶測(cè)定病毒含量，觀察該疫苗的保存期。具體結(jié)果見表7。表中數(shù)據(jù)顯示：耐熱保護(hù)劑配方凍干的疫苗在2～8℃保存條件下，均可以保存24個(gè)月。然而，常規(guī)保護(hù)劑凍干疫苗的保存期則只有3個(gè)月。表7豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗各耐熱保護(hù)劑配方保存期結(jié)果(病毒含量：TCID50/頭份)綜上所述，本發(fā)明的保護(hù)劑經(jīng)過無菌處理后應(yīng)用于豬偽狂犬病活疫苗和豬繁殖與呼吸道綜合征活疫苗的凍干。兩種病毒采用同樣的耐熱保護(hù)劑和凍干工藝，凍干損失低于0.2個(gè)滴度，37℃放置7日，病毒含量滴度降低小于1個(gè)滴度，能在2～8℃保存24個(gè)月。為凍干疫苗的生產(chǎn)提供了便利，同時(shí)也提高了產(chǎn)品質(zhì)量及競(jìng)爭(zhēng)力。盡管這里參照本發(fā)明的解釋性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，上述實(shí)施例僅為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，應(yīng)該理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)出很多其他的修改和實(shí)施方式，這些修改和實(shí)施方式將落在本申請(qǐng)公開的原則范圍和精神之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3