本發(fā)明涉及成分血制備領域，具體而言，涉及一種制備冷沉淀凝血因子的方法，特別是溫控微波制備冷沉淀凝血因子的方法。
背景技術：
冷沉淀凝血因子(簡稱“冷沉淀”(cryoprecipitate))是指保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿(ffp)，在1℃～6℃封閉狀態(tài)融化后，在1℃～6℃無菌條件下分離出沉淀在血漿中的冷不溶解物質(zhì)并在1h內(nèi)凍結而制成的成分血(中華人民共和國國家標準：全血及成分血質(zhì)量要求[s].gb18469-2012：5.18)。
冷沉淀因制劑容量小，濃度純度高，治療效果好的特點，是臨床上常用的一種血液成分。其主要含有了血漿中大部分的凝血因子viii，纖維蛋白原、vw因子、凝血因子xiii，以及纖維結合蛋白等成分(王培華，主編.輸血技術學[m]北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：33,34)，主要用于兒童甲型血友病、vwd、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥患者，由于冷沉淀中含有豐富的纖維蛋白原，因此也常用于手術后出血，嚴重外傷及彌散性血管內(nèi)凝血等患者的治療(田兆嵩，主編.臨床輸血學[m]北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：55)。血站應為臨床提供優(yōu)質(zhì)高效的冷沉淀凝血因子，以保證其臨床療效和更好地發(fā)揮其重要功能。
由于冷沉淀中的凝血因子如viii因子是不穩(wěn)定的凝血因子，隨著制備時間的延長和溫度的升高，viii因子損耗將隨之增加。為了 確保冷沉淀凝血因子的質(zhì)量、提高臨床療效，因此選擇好的制備方法尤為關鍵。
冰箱融化離心法(簡稱“冰箱法”，也稱pool法)和水浴虹吸法(簡稱“虹吸法”)為現(xiàn)在我國血站系統(tǒng)制備冷沉淀凝血因子的方法，也是《血站技術操作規(guī)程》(2012版)中推薦的方法。但此兩種方法各自均存在不足，現(xiàn)逐一進行說明。
冰箱融化離心法：取出待制備的冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置4±2℃冰箱中過夜融化或在4±2℃水浴裝置中融化。當血漿基本融化時，取出血漿，在4±2℃的環(huán)境下離心，將大部分上層血漿移至空袋，制成冰凍血漿，將留下的20-30ml血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。
冰箱融化離心法的缺點：該方法用時太長，viii因子會有一定的衰減。
虹吸法：將新鮮冰凍血漿袋置于4±2℃水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。血漿融化后，隨時被虹吸至空袋中，當融化至剩下40-50ml血漿與沉淀物時，閉合導管，阻斷虹吸。將血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。
虹吸法的缺點：該方法需要專人制備，但成分制備工作種類繁多，難免會出現(xiàn)一人多職的現(xiàn)象，這樣就有可能出現(xiàn)血漿過多融化、冷沉淀凝血因子流入空袋的現(xiàn)象。另外，在應用虹吸法制備過程中，所應用的水浴箱是按照一定頻率左右晃動的，以此來加速融化的速度。但也存在弊端，因為在晃動的同時必將造成底部冷沉淀凝血因子的上浮，從而隨著血漿流到轉移袋內(nèi)。使得制備得到的冷沉淀凝 血因子中的有效成分(viii因子、纖維蛋白原)流失，輸注后的臨床效果不顯著。
微波爐是一種應用微波加熱食品的現(xiàn)代化烹調(diào)灶具。微波爐由電源、磁控管、控制電路和烹調(diào)腔等部分組成。微波是指頻率為300mhz～300ghz的電磁波，是無線電波中一個有限頻帶的簡稱，即波長在1毫米～1米之間的電磁波，是分米波、厘米波、毫米波的統(tǒng)稱。微波頻率比一般的無線電波頻率高，通常也稱為"超高頻電磁波"。微波的基本性質(zhì)通常呈現(xiàn)為穿透、反射、吸收三個特性。對于玻璃、塑料和瓷器，微波幾乎是穿越而不被吸收。微波透入介質(zhì)時，由于微波能與介質(zhì)發(fā)生一定的相互作用，以微波頻率2450兆赫茲，使介質(zhì)的分子每秒產(chǎn)生24億五千萬次的震動，介質(zhì)的分子間互相產(chǎn)生摩擦，引起的介質(zhì)溫度的升高，使介質(zhì)材料內(nèi)部、外部幾乎同時加熱升溫，形成體熱源狀態(tài)，大大縮短了常規(guī)加熱中的熱傳導時間，且在條件為介質(zhì)損耗因數(shù)與介質(zhì)溫度呈負相關關系時，理論上物料內(nèi)外加熱均勻一致。
但是，傳統(tǒng)微波爐是以50赫茲固定頻率輸出恒定的功率，如果需要輸出不同功率(例如低功率解凍)，只能通過開/關的時間間隔長短來模擬控制，這樣會出現(xiàn)被加熱物品(如食品)的某處被重復加熱，而另一處卻加熱不足的不均勻現(xiàn)象。傳統(tǒng)微波爐在不同功率尤其是低功率解凍時，實際上是脈沖輻射加熱，即加熱(開)/停止(關)的脈沖加熱方式，并不是連續(xù)加熱。因此，傳統(tǒng)微波爐的低功率并不是真正的低功率，是通過脈沖輻射時間間隔長短來模擬低功率，在脈沖輻射加熱的加熱脈沖(開)期間，仍然是高功率的恒定的功率。
因此，微波輻射技術用于快速融化供輸注的新鮮冰凍血漿早有報告，但對該技術用于制冷沉淀，尚有爭議。microwave-thawedplasmaforcryoprecipitateproduction.bassh,trenchardpm,mustowmj.voxsang.1985；48(2):65-71(微波融化血漿制備冷沉淀物，bassh，etal，voxsang1985，48(2):65-71)的作者使用的是一種輸出功率650w，輻射頻率2450mhz的家用微波爐。將冰凍血漿袋懸掛在爐中央可轉動的丙烯腈架子上，輻射開始后，每隔1分鐘記錄1次血漿袋的底、中、頂各部的溫度，并翻動血漿袋使整個袋子的溫度盡量保持一致，由此決定微波輻射的合適時間。試驗結果表明，當血漿量為220-250ml時，以輻射4個1分鐘為宜(開微波爐“煮”檔(全功率的50％)輻射1分鐘，再開“解凍”檔脈沖輻射1分鐘，3次)，若輻射5分鐘，則底部溫度大大超過4℃。輻射4分鐘后袋子中的血漿尚未完全融化，將其從微波爐內(nèi)取出置于4℃冰箱內(nèi)繼續(xù)融化1小時，待殘存的冰塊幾乎全部融化后，經(jīng)3500g，4℃離心10分鐘收集冷沉淀，并將其上清液部分移至另一袋中。然后將冷沉淀置37℃水浴溶解10分鐘，即得冷沉淀制劑。
但bassh的方法仍然非常繁瑣，需要翻動血漿袋使整個袋子的溫度盡量保持一致，必須間歇加熱，最后仍然需要冰箱內(nèi)繼續(xù)融化1小時，才能使冰塊完全融化。由于傳統(tǒng)微波爐輸出不同功率輸時，會不可避免地出現(xiàn)加熱不均勻現(xiàn)象，在制備冷沉淀時非常容易出現(xiàn)局部過熱而破壞對溫度極為敏感的冷沉淀凝血因子。該方法也無法實現(xiàn)精確控溫，很容易出現(xiàn)溫度過高情況。因而bass的方法存在巨大風險，可重復性差，并不實用。國家標準中沒有采用微波法，這就是重要的原因之一。
因此，目前尚無利用微波或微波爐制備冷沉淀凝血因子的實用方法的報道。
如上所述，血站技術操作規(guī)程中冷沉淀的制備方法有兩種，一種為冰箱融化離心法；一種為改良水浴虹吸法。這兩種方法耗時分別為15-20小時和2-3小時，給繁忙的成分制備工作帶來很大的負擔。bassh的方法也需要1個小時以上的時間，且步驟繁瑣，因風險高、無法精確控溫、穩(wěn)定性差等實質(zhì)性缺陷，并未在本領域廣泛應用。因此，需要一種耗時短、效率高、方法簡單、安全穩(wěn)定的制備冷沉淀凝血因子的方法。但長期以來，本領域并沒有出現(xiàn)這樣的方法，成為本領域一直渴望解決但始終未能獲得成功的技術難題。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種制備冷沉淀凝血因子的方法，特別是溫控微波制備冷沉淀凝血因子的方法。該方法設備簡單，操作方便。具有制備時間短，制備的容量準確；獲得的viii因子含量多，臨床輸注效果好等優(yōu)點。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：一種制備冷沉淀凝血因子的方法，包括以下步驟：
a)提供新鮮冰凍血漿；
b)解凍步驟：采用變頻微波加熱裝置將新鮮冰凍血漿微波解凍到解凍溫度，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
優(yōu)選的，本發(fā)明的方法包括以下步驟：
a)提供新鮮冰凍血漿；
a1)測量新鮮冰凍血漿的重量；
a2)在變頻微波加熱裝置中設定解凍溫度和新鮮冰凍血漿的重量，其中變頻微波加熱裝置具有溫控功能；
b)解凍步驟：基于新鮮冰凍血漿的重量，采用變頻微波加熱裝置將新鮮冰凍血漿微波解凍到解凍溫度，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
優(yōu)選地，變頻微波加熱裝置是程控變頻微波加熱裝置，b)解凍步驟采用變頻微波加熱裝置的解凍程序進行。
優(yōu)選地，在b)解凍步驟，微波解凍的同時，通入蒸汽。
優(yōu)選地，解凍溫度為1℃～6℃。
優(yōu)選地，解凍溫度為4℃～6℃。
優(yōu)選地，解凍溫度為5℃。
優(yōu)選地，c)分離步驟采用冷凍離心機進行。
優(yōu)選地，c)分離步驟的溫度為1℃～6℃。
優(yōu)選地，c)分離步驟的溫度為2℃±2℃。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：
(1)設備簡單，操作方便；
(2)制備時間短，制備的容量準確；
(3)獲得的viii因子含量多，臨床輸注效果好。
具體實施方式
本發(fā)明一個方面是提供一種制備冷沉淀凝血因子的方法，特別是，采用變頻微波加熱裝置(例如變頻微波爐)制備冷沉淀凝血因子的方法。本發(fā)明的方法可以簡稱為微波法或微波爐法。
本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，變頻微波爐可以方便地實現(xiàn)新鮮冰凍血漿(ffp)解凍精確控溫和均勻加熱，能夠滿足制備冷沉淀制 備對溫度的苛刻要求，并且解凍時間短。不受理論限制，可能原因是變頻微波爐通過改變頻率來控制不同的輸出功率，從而達到自由控制功率強弱的效果，使被加熱物品(如食品)得到全方位均勻加熱。變頻微波爐能夠在不同功率下尤其是低功率下持續(xù)加熱，實現(xiàn)微波解凍。
在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供一種制備冷沉淀凝血因子的方法，包括以下步驟：
a)提供新鮮冰凍血漿；
b)解凍步驟：采用變頻微波加熱裝置將新鮮冰凍血漿微波解凍到解凍溫度，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
優(yōu)選的，本發(fā)明的方法包括以下步驟：
a)提供新鮮冰凍血漿；
a1)測量新鮮冰凍血漿的重量；
a2)在變頻微波加熱裝置中設定解凍溫度和新鮮冰凍血漿的重量，其中變頻微波加熱裝置具有溫控功能；
b)解凍步驟：基于新鮮冰凍血漿的重量，采用變頻微波加熱裝置將新鮮冰凍血漿微波解凍到解凍溫度，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
優(yōu)選地，b)解凍步驟同時采用微波和蒸汽進行。優(yōu)選地，在b)解凍步驟，微波解凍的同時，通入蒸汽。
微波可以由變頻微波加熱裝置提供。例如，變頻微波加熱裝置可以是微波爐。變頻微波加熱裝置可以是程控變頻微波加熱裝置， 例如程控微波爐或電腦型微波爐。優(yōu)選地，在步驟b)中，基于重量可以確定加熱時間，從而精確加熱到解凍溫度。由于變頻微波加熱裝置可以在低功率下連續(xù)加熱，因而解凍過程加熱均勻，不會出現(xiàn)局部過熱現(xiàn)象。換句話說，變頻微波加熱裝置微波解凍時是真實的低功率微波加熱。
蒸汽可以由蒸汽產(chǎn)生裝置提供。優(yōu)選地，蒸汽產(chǎn)生裝置可以集成到微波加熱裝置中。優(yōu)選地，微波加熱裝置為具有蒸汽產(chǎn)生裝置的微波加熱裝置，例如具有蒸汽產(chǎn)生裝置的微波爐，或者具有蒸汽解凍功能的微波爐。帶有蒸汽功能的微波爐，在微波解凍時會噴入蒸汽，使被加熱物品(例如食物)水分子包圍著均勻受熱，解凍的時間大大縮短，進一步避免了外熱內(nèi)冷(外熟內(nèi)生)的情況。
優(yōu)選地，變頻微波加熱裝置為具有溫度控制的微波加熱裝置，如具有溫度控制的微波爐，例如松下-nn-cs957s微波爐。
優(yōu)選地，b)解凍步驟的解凍溫度為1℃～6℃，優(yōu)選4℃～6℃，更優(yōu)選5℃。
優(yōu)選地，c)分離步驟為：通過離心從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。優(yōu)選地，c)分離步驟采用離心法進行，優(yōu)選采用冷凍離心機進行。優(yōu)選地，離心力為1000～5000g，優(yōu)選1000～4500g，更優(yōu)選2000～4500g，最優(yōu)選3800g。優(yōu)選地，離心時間為1～25min，優(yōu)選3～20min，更優(yōu)選5～15min，最優(yōu)選10min。
優(yōu)選地，c)分離步驟的溫度為0～6℃，優(yōu)選1℃～6℃，優(yōu)選2℃℃±2℃。
在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供一種應用微波制備冷沉淀凝血因子的方法，步驟如下：
a)提供新鮮冰凍血漿；
b)解凍步驟：采用變頻微波加熱裝置(優(yōu)選同時通入蒸汽)加熱對新鮮冰凍血漿進行解凍，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：通過離心從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供一種微波制備冷沉淀凝血因子的方法，尤其是采用微波加熱裝置制備冷沉淀凝血因子的方法，步驟如下：
a)提供新鮮冰凍血漿，并測量新鮮冰凍血漿的重量；
a1)設定變頻微波加熱裝置解凍溫度，
a2)輸入新鮮冰凍血漿的重量，
b)解凍步驟：根據(jù)新鮮冰凍血漿的重量，采用變頻微波加熱裝置(優(yōu)選同時微波和蒸汽)加熱對新鮮冰凍血漿進行解凍，得到冰渣狀混合物；
c)分離步驟：優(yōu)選通過離心，從冰渣狀混合物分離出沉淀的冷不溶解物質(zhì)，得到冷沉淀凝血因子。
在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供一種應用微波爐制備冷沉淀凝血因子的方法，步驟如下：
1：將5袋新鮮冰凍血漿在電子天平上稱重并計算出總的重量(g)；
2：打開變頻微波爐開關，將5袋新鮮冰凍血漿平鋪于變頻微波爐內(nèi)，選擇溫控功能，設定溫度(5℃)；
3：選擇蒸汽解凍程序輸入重量，按開始進行解凍；
4：解凍完成后的冰渣狀混合物放入冷凍離心機中以溫度為2℃±2℃，離心力為3800g，離心10min；分離出上層血漿，剩余的冷不融部分即為冷沉淀凝血因子。
冷沉淀質(zhì)量受溫度、時間、以及其他各種因素影響(參見：陳興智，李聚林，許建榮；《冷沉淀制劑的制備質(zhì)量與應用效果分析》[j]；重慶醫(yī)學，2011年4月40卷12期：1228-1230)。viii因子是一種極不穩(wěn)定的凝血因子，在體外半衰期為12～24h。ffp融化后，viii因子活性隨時間的改變而有明顯的降低，12h后其活性衰減了41.17％，24h后其活性衰減了42.82％(參見：楊江存，李芒會，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時間凝血因子的變化[j].中國輸血雜志，2005，18(3)：2011-2012)。冰箱融化離心法和水浴虹吸法耗時較長，viii因子有一定的衰減。且虹吸法需要專人制備，但由于成分科工作繁重，難免會出現(xiàn)一人多職的現(xiàn)象，這樣工作人員很有可能無法及時觀察判定冷沉淀的容量，造成血漿過度融化、冷沉淀凝血因子流入空袋中的后果。而本發(fā)明的方法制備冷沉淀用時大約為：15分鐘融化5袋血漿。用時較短，因而極大地避免了viii因子的喪失，而且離心使得冷沉淀凝血因子都保留在血袋的底部，雖仍需經(jīng)過分離出上清的步驟，但流失很少，從而獲得較高的viii因子含量。另外，分離出上清的這個過程工作人員能夠很直觀和認真的控制冷沉淀的容量，保證冷沉淀凝血因子嚴格按照國家標準制備完成。
臨床需要輸注冷沉淀凝血因子的患者多為危重的需迅速止血的患兒，因此當冷沉淀容量較多且viii因子含量較少時，將給患者特別是患兒增加心臟負荷，從而影響治療效果。
下面將結合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實施例
1材料與方法
1.1儀器、材料與試劑
1.1.1儀器與材料：
微波爐(松下-nn-cs957s)；
dlm12l超大容量冷凍離心機(長沙湘智)；
水浴式低溫融化器(達科為生物技術有限公司)；
冰箱(海爾公司)；
高效熱合機(深圳市達科為醫(yī)療科技有限公司)；
電子秤(上海精天電子儀器有限公司)；
be-thrombotimer4血凝儀(德國be公司)；
400ml五聯(lián)袋保存液為cpda-1抗凝劑(山東威高)。
1.1.2試劑：
ibs緩沖液，批號036n-d064a；factorviii，批號11237812；aptt-ea，批號109130410；cacl2，批號11108071；纖維蛋白原測定試劑盒，批號11129124；全套試劑均為德國美創(chuàng)公司提供。
1.1.3原料血漿：
隨機選取20袋采血順利、血流通暢、無凝塊；血液采集時間≤5分鐘的400ml全血，6h內(nèi)經(jīng)兩次離心，分離出新鮮液體血漿(flp)。將每袋新鮮液體血漿平均分成兩袋(明確標識)，熱合但不分離留樣 辮。使其成為40小袋新鮮冰凍血漿(每袋容量約110ml)。放入-50℃速凍機快速速凍后，置入-20℃以下的冰箱保存，冷凍24h以上制備成的新鮮冰凍血漿(ffp)用于制備冷沉淀(參見：血站技術操作規(guī)程(2012)[s])。每次實驗隨機選取10袋(20小袋)新鮮冰凍血漿進行制備冷沉淀和進行實驗測定。
1.2方法：
按血站技術操作規(guī)范要求于采血后6小時內(nèi)制備出新鮮冰凍血漿原料漿。
1.2.1取樣：
將事先留取的20袋(40小袋)新鮮冰凍血漿取出。
實驗一：取10袋新鮮冰凍血漿(編號為a1至a10)(每個為等量的兩小袋，每袋容量約110ml)，剪斷留樣辮，使其成為兩組血漿樣本。分別采用改良水浴虹吸法和微波爐融化離心法制備冷沉淀。
實驗二：取另外10袋新鮮冰凍血漿(編號為b1至b10)(每個為等量的兩小袋，每袋容量約110)，剪斷留樣辮，使其成為兩組血漿樣本。分別采用4℃冰箱融化離心法和微波爐融化離心法制備冷沉淀。
1.2.2冷沉淀制備方法
(1)對比例1：4℃冰箱融化離心法(簡稱冰箱法)
將10份ffp置于4±2℃冰箱中過夜融化，第二天當血漿基本融化時，取出，在4±2℃冷凍離心機中以3800g離心10分鐘。將上層大部分血漿移至空袋，剩下的20-30ml血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。
(2)對比例2：改良水浴融化虹吸法(簡稱虹吸法)
將10份ffp置室溫中約5分鐘，待雙聯(lián)袋導管(連接管)變軟后，置于4℃±2℃水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。血漿融化后，隨時被虹吸到空袋中，當融化至剩下40-50ml血漿及冷沉淀物時，閉合導管，阻斷虹吸。將血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子，將冰凍血漿袋與冷沉淀凝血因子袋熱合斷離(血站技術操作規(guī)程(2012)[s])。注意：融化時觀察水溫的變化，使ffp始終保持在4℃±2℃的溫度下融化。
(3)實施例1：微波爐融化離心法(本發(fā)明)：
將10份ffp每5個為一組，稱重，打開微波爐開關，將5袋新鮮冰凍血漿平鋪于微波爐的箱內(nèi)，選擇溫控功能，設定溫度：5℃，選擇蒸汽解凍程序，輸入重量，開始解凍。解凍完成后的冰渣狀混合物放入冷凍離心機中以溫度為2℃±2℃，離心力為3800g，離心10min。分離出上層血漿，20-30ml剩余部分即為冷沉淀。
1.2.3.viii因子和纖維蛋白原的檢測方法：
嚴格按照be公司生產(chǎn)的血凝儀操作使用說明書和德國美創(chuàng)試劑說明書進行。
1.2.4容量：
用電子秤稱量。
1.2.5質(zhì)量標準：
來源于200ml全血的冷沉淀：viii因子含量≥40iu，纖維蛋白原含量≥75mg，符合質(zhì)量標準者為合格。
1.2.6統(tǒng)計學方法：
應用spss17.0統(tǒng)計軟件分析。
2結果
2.1比較
三種方法制備冷沉淀凝血因子的viii因子和纖維蛋白原的含量比較，(viii因子單位為iu，纖維蛋白原單位為：mg。)見下表：
表1：實驗一：虹吸法(對比例2)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀凝血因子viii、纖維蛋白原含量比較
應用spss統(tǒng)計軟件：應用虹吸法(對比例2)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀viii因子含量兩者獨立樣本t檢驗結果為：t＝19.258，p<0.01,表示兩種方法有十分顯著的差異。應用虹吸法(對比例2)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀纖維蛋白原含量兩者獨立樣本t檢驗結果為：t＝6.232，p<0.01。
表2：實驗二：冰箱法(對比例1)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀凝血因子viii、纖維蛋白原含量比較
應用spss統(tǒng)計軟件：冰箱法(對比例1)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀viii因子含量兩者獨立樣本t檢驗結果為：t＝9.018,p<0.01,表示兩種方法有十分顯著的差異；冰箱法(對比例1)和微波爐法(實施例1)制備的冷沉淀纖維蛋白原含量兩者獨立樣本t檢驗結果為：t＝3.009，p<0.015，表示兩種方法有顯著的差異。
3討論
實驗檢測結果表明，應用本發(fā)明的微波爐法制備的冷沉淀獲得的viii因子含量和纖維蛋白原含量明顯優(yōu)于改良水浴虹吸法(對比例2)和冰箱融化離心法(對比例1)。冰箱融化離心法和水浴虹吸法耗時較長，viii因子有一定的衰減；且虹吸法需要專人制備，但由于成分科工作繁重，難免會出現(xiàn)一人多職的現(xiàn)象，這樣工作人員很有可能無法及時觀察判定冷沉淀的容量，造成血漿過度融化、冷沉淀凝血因子流入空袋中的后果。而本發(fā)明的微波爐法制備冷沉淀用時大約為：15分鐘融化5袋血漿。用時較短，因而極大地避免了viii因子的喪失。當采用離心法分離時，經(jīng)過3800g，離心10min使得冷沉淀凝血因子都保留在血袋的底部，雖仍需經(jīng)過分離出上清的步驟，但流失很少，從而獲得較高的viii因子含量。另外，分離出上清的這個過程工作人員能夠很直觀和認真的控制冷沉淀的容量，保證冷沉淀凝血因子嚴格按照國家標準制備完成。
具有溫度控制功能的變頻微波加熱裝置(例如微波爐，如松下-nn-cs957s微波爐)能夠使融化物的溫度達到設定的溫度。發(fā)明人利用這一功能融化血漿，即能夠達到用時短、嚴格控制溫度且融化效果好的目的。
由上可知，本發(fā)明的微波法和冰箱融化離心法、水浴虹吸法相比，本發(fā)明的微波爐法所需設備簡單，操作方便，制備時間短，并 且制備的冷沉淀容量準確，獲得的viii因子含量多。值得推廣使用。值得提出的是，實驗使用的微波爐容量小，不能一次性融化更多的新鮮冰凍血漿，如果采用大容量微波爐，應用于血站系統(tǒng)，將成為血液成分制備工作革命性的突破。
盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。