本發(fā)明涉及材料技術(shù)領(lǐng)域，一種腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

光聲成像是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型無(wú)損生物醫(yī)學(xué)成像方法。光聲成像結(jié)合了純光學(xué)成像高對(duì)比度特性和純超聲成像高穿透深度特性的優(yōu)點(diǎn)，從原理上避開(kāi)了光散射的影響，突破了高分辨率光學(xué)成像深度“軟極限”(～1mm)，可實(shí)現(xiàn)50mm的深層活體內(nèi)分子成像。由于腫瘤組織和正常組織對(duì)光吸收的差異(在近紅外激光的照射下，癌變組織和周?chē)＝M織的光吸收差異至少5倍以上)和不同生理狀態(tài)的生物組織對(duì)光的吸收不同，利用光聲成像就可以反映了組織的結(jié)構(gòu)特征，同時(shí)還可能反映組織的代謝狀態(tài)、病變特征、甚至神經(jīng)活動(dòng)。因此，光聲成像目前生物無(wú)損檢測(cè)技術(shù)的研究熱點(diǎn)。

碳納米管(cnts)獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)決定了它具有優(yōu)異的力學(xué)、熱學(xué)、光學(xué)以及電磁性能，近年來(lái)，碳納米管在生物醫(yī)學(xué)方向的潛在應(yīng)用逐漸成為新的熱點(diǎn)。cnts在近紅外光區(qū)能有效吸收光，然后產(chǎn)生熱，是光聲成像良好的造影劑，可以在復(fù)雜的生物體環(huán)境中被檢測(cè)，但是要求碳管本身結(jié)構(gòu)完整，同時(shí)需要呈單分散，而碳納米管之間π-π相互作用，易于團(tuán)聚，難以分散，并且缺乏功能基團(tuán)，不利于功能化，這就在一定程度上限制了其應(yīng)用，而且純的碳納米管在生物體有一定的毒性。

clic1蛋白在正常組織/細(xì)胞，原位膽囊癌組織/細(xì)胞及膽囊癌轉(zhuǎn)移組織/細(xì)胞中的表達(dá)水平依次遞增，且與臨床預(yù)后密切相關(guān)，clic1在高轉(zhuǎn)移潛能的膽囊癌細(xì)胞及膽囊癌轉(zhuǎn)移灶中高表達(dá)，其在在多種腫瘤細(xì)胞中也表現(xiàn)出表達(dá)異常，并且其可能在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、演進(jìn)、異質(zhì)化、增殖、細(xì)胞周期、侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥性等惡性生物學(xué)行為方面扮演重要角色。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是為了克服現(xiàn)有的碳納米管材料易于團(tuán)聚、分散度不高，缺乏功能基團(tuán)，不利于功能化以及對(duì)生物體具有一定毒性的缺點(diǎn)，提供了一種腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑及其制備方法。

本發(fā)明技術(shù)方案之一：一種腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)伴隨超聲、攪拌，將羧基化多壁碳納米管(mwcnts)分散體系逐滴加入多胺基陽(yáng)離子聚合物溶液中，滴加完成后超聲10-30min，攪拌30-60min，之后在60℃-90℃保溫20-36小時(shí)，冷卻到15℃-30℃，離心，洗滌并分散沉淀，制得多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系；

(2)向2-(n-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中加入n-羥基琥珀酸亞胺溶液，攪拌，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亞胺鹽酸鹽溶液反應(yīng)，然后加入腫瘤靶向抗體反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物加入到步驟(1)所得的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系中繼續(xù)反應(yīng)，洗滌后重新分散，制得含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇(peg-dspe)溶液逐滴滴加到步驟(2)所得的含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管的分散體系中，伴隨超聲攪拌反應(yīng)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

本發(fā)明中，步驟(1)為：伴隨超聲、攪拌，將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入多胺基陽(yáng)離子聚合物溶液中，滴加完成后超聲10-30min，攪拌30-60min，之后在60℃-90℃保溫20-36小時(shí)，冷卻到15℃-30℃，離心，洗滌并分散沉淀，制得多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系。

步驟(1)中，所述羧基化多壁碳納米管的羧基含量較佳地為0.5-3％，更佳地為1.23％，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度較佳地為0.5-2μm，直徑較佳地為20-30nm，所述羧基化多壁碳納米管分散體系的濃度較佳地為0.3-1.3mg/ml，更佳地為0.6mg/ml。所述多胺基陽(yáng) 離子聚合物為本領(lǐng)域常規(guī)的多胺基陽(yáng)離子聚合物，較佳地為支化聚乙烯亞胺(branched-pei)、聚丙烯胺、聚丙烯酰胺(pam)、四乙烯五胺(tepa)或三乙烯四胺(teta)，更佳地為支化聚乙烯亞胺。所述多胺基陽(yáng)離子聚合物分子量可以為本領(lǐng)域多胺基陽(yáng)離子聚合物的常規(guī)的分子量，較佳地為mn10000-mn1800。所述多胺基陽(yáng)離子聚合物的制備方法為本領(lǐng)域常規(guī)制備方，或市售可得。所述多胺基陽(yáng)離子聚合物溶液的濃度較佳地為1-22mg/ml，更佳地為1-5mg/ml，最佳地為1mg/ml。所述羧基化多壁碳納米管與所述多胺基陽(yáng)離子聚合物的質(zhì)量比較佳地為1∶1-1∶50，更佳地為1∶3-1∶20，進(jìn)一步更佳地為1∶5-1∶10，最佳地為1∶10。

步驟(1)中，所述超聲的方法為本領(lǐng)域常規(guī)的超聲分散方法，所述滴加完成后超聲的強(qiáng)度為常規(guī)的超聲強(qiáng)度，較佳地為200w。所述超聲的時(shí)間為10-30min，較佳地為30min。所述攪拌的時(shí)間為30-60min，較佳地為60min。所述攪拌的速度可以為本領(lǐng)域常規(guī)的速度，較佳地為150rpm。所述保溫的溫度為60℃-90℃，較佳地為65℃-90℃，更佳地為65℃-85℃，進(jìn)一步更佳地為65℃-75℃，最佳地為65℃。所述保溫的時(shí)間為20-36小時(shí)，較佳地為36小時(shí)。所述離心的轉(zhuǎn)速可以為本領(lǐng)域常規(guī)的轉(zhuǎn)速，較佳地為10000r/min。所述離心的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為15min。所述洗滌較佳地用去離子水洗滌，更佳地為用去離子水抽濾洗滌。所述分散可以用本領(lǐng)域常規(guī)的溶劑進(jìn)行分散，如用pbs緩沖液或去離子水分散，較佳地用去離子水分散。

本發(fā)明中，步驟(2)為：向2-(n-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中加入n-羥基琥珀酸亞胺溶液，攪拌，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亞胺鹽酸鹽溶液反應(yīng)，然后加入腫瘤靶向抗體進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物加入到步驟(1)所得的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系中繼續(xù)反應(yīng)，洗滌后重新分散，制得含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系。

步驟(2)中，所述2-(n-嗎啉代)乙磺酸緩沖液的濃度可以為本領(lǐng)域常規(guī)的濃度，較佳地為1mg/ml；所述n-羥基琥珀酸亞胺溶液的濃度可以為 本領(lǐng)域常規(guī)的濃度，較佳地為0.5-2mg/ml，更佳地為2mg/ml；所述2-(n-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中加入n-羥基琥珀酸亞胺溶液的ph值可以為本領(lǐng)域常規(guī)的ph值，較佳地為4.5；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液的濃度可以為本領(lǐng)域常規(guī)的濃度，較佳地為0.5-2mg/ml，更佳地為1mg/ml；所述腫瘤靶向抗體可以為本領(lǐng)域常規(guī)的能夠靶向腫瘤的抗體，較佳地為clic1抗體。所述clic1抗體的濃度可以為常規(guī)的濃度，較佳地為2.5-10mg/ml，更佳地為5mg/ml。所述多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管與n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)的質(zhì)量比可以為本領(lǐng)域常規(guī)的比例，較佳地為1∶1-10∶1，更佳地為2∶1-8∶1，進(jìn)一步更佳地為3∶1-6∶1，最佳地為4∶1；所述多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)的質(zhì)量比可以為本領(lǐng)域常規(guī)的比例，較佳地為1∶1-12∶1，進(jìn)一步較佳地為2∶1-10∶1，更佳地為3∶1-7∶1，進(jìn)一步更佳地為4∶1-5∶1，最佳地為4∶1。多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管與所述腫瘤靶向抗體的質(zhì)量比可以為本領(lǐng)域常規(guī)的比例，較佳地為5∶1-1000∶1，進(jìn)一步較佳地為10∶1-500∶1，更佳地為20∶1-300∶1，進(jìn)一步更佳地為50∶1-100∶1，最佳地為50∶1。

步驟(2)中，向2-(n-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中加入n-羥基琥珀酸亞胺溶液后的所述攪拌的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為15min；所述加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亞胺鹽酸鹽溶液反應(yīng)的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為5min；所述加入腫瘤靶向抗體進(jìn)行反應(yīng)的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為30min；所述加入到步驟(1)所得的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系中繼續(xù)反應(yīng)的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為24h。所述洗滌可以為本領(lǐng)域常規(guī)的洗滌，較佳地為離心洗滌。所述離心洗滌的轉(zhuǎn)速可以為本領(lǐng)域常規(guī)的轉(zhuǎn)速，較佳地為10000r/min。所述重新分散可以用本領(lǐng)域常規(guī)的溶劑進(jìn)行重新分散，較佳地用去離子水進(jìn)行重新分散。

本發(fā)明中，步驟(3)為：將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴滴加到步驟(2) 所得的含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系中，伴隨超聲攪拌反應(yīng)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

步驟(3)中，所述磷脂化聚乙二醇中的聚乙二醇的分子量可以為本領(lǐng)域常規(guī)的分子量，較佳地為0.5-20kda。所述磷脂化聚乙二醇溶液的濃度較佳地為0.05-20mg/ml，更佳地為0.05-0.1mg/ml，最佳地為0.1mg/ml。所述含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比較佳地為1∶10-3∶1，更佳地為1∶5-2∶1，進(jìn)一步更佳地為1∶3-1∶1，最佳地為1∶2。其中所述超聲的方法為本領(lǐng)域常規(guī)的超聲分散方法，所述超聲的強(qiáng)度為常規(guī)的超聲強(qiáng)度，較佳地為200w。所述攪拌的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為45-50h，更佳地為50h。

步驟(3)較佳地還可以包括離心和洗滌，所述離心和洗滌在所述伴隨超聲攪拌反應(yīng)后進(jìn)行。所述離心的轉(zhuǎn)速可以為本領(lǐng)域常規(guī)的轉(zhuǎn)速，較佳地為10000r/min。所述洗滌可以為本領(lǐng)域常規(guī)的洗滌方式，只要吸取多余的磷脂化聚乙二醇即可，較佳地為抽濾洗滌。

本發(fā)明較佳地還可以包括步驟(4)，所述步驟(4)為將步驟(3)所得的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的分散體系離心洗滌，將所得沉淀干燥。步驟(4)中，所述離心洗滌的轉(zhuǎn)速可以為本領(lǐng)域常規(guī)的轉(zhuǎn)速，較佳地為10000r/min。所述干燥可以為本領(lǐng)域常規(guī)的干燥方法，較佳地為真空干燥。所述干燥的時(shí)間可以為本領(lǐng)域常規(guī)的時(shí)長(zhǎng)，較佳地為24h。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案之二為：一種腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑，其是通過(guò)如前所述的制備方法所制得的。

本發(fā)明中，所述腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑較佳地是由羧基化多壁碳納米管、多胺基陽(yáng)離子聚合物、磷脂化聚乙二醇和腫瘤靶向抗體通過(guò)物理吸附結(jié)合化學(xué)共價(jià)結(jié)合而成。所述多胺基陽(yáng)離子聚合物可以為本領(lǐng)域常規(guī)的多胺基陽(yáng)離子聚合物，較佳地為支化聚乙烯亞胺、聚丙烯胺、聚丙烯酰胺、四乙烯五胺或三乙烯四胺，更佳地為支化聚乙烯亞胺。所述羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度較佳地為0.5-2μm，直徑較佳地為20-30nm，羧基含量較佳地為 0.5％-3％，更佳地為0.5％，所述百分比為質(zhì)量百分比。其中所述磷脂化聚乙二醇中的聚乙二醇的分子量較佳地為0.5-20kda。所述含有腫瘤靶向抗體的多胺基陽(yáng)離子聚合物-碳納米管分散體系與所述磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比較佳地為1∶10-3∶1，更佳地為1∶5-2∶1，進(jìn)一步更佳地為1∶3-1∶1，最佳地為1∶2。

在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明公開(kāi)的制備方法是以碳納米管、聚乙烯亞胺等多胺基陽(yáng)離子聚合物、磷脂化聚乙二醇和腫瘤靶向抗體作為原料，采用三步法合成納米復(fù)合材料，該制備方法不僅操作簡(jiǎn)便，而且具有綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明所述腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑在水中的分散性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，具有良好的生物相容性，易于耦合生物抗體，能夠靶向識(shí)別腫瘤組織，并能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的光聲信號(hào)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑制備示意圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的透射電鏡圖。

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑在pbs緩沖液(ph＝7.4)中穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果。

圖4為本發(fā)明實(shí)施例4的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的對(duì)腫瘤識(shí)別光響應(yīng)圖。

圖5為本發(fā)明所述相同制備方法但沒(méi)有包含clic1抗體的碳納米管光聲造影劑的對(duì)腫瘤識(shí)別光響應(yīng)圖，其中a是未注射造影劑荷瘤裸鼠光聲成像，b是注射造影劑后荷瘤裸鼠光聲成像。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說(shuō)明書(shū)選擇。其中所述室溫為常規(guī)，若無(wú)特別說(shuō)明為15～35℃。

clic1抗體、聚乙烯亞胺、聚丙烯酰胺、三乙烯四胺、四乙烯五胺和支化聚丙烯酰胺購(gòu)買(mǎi)自sigma公司；羧基化多壁碳納米管購(gòu)買(mǎi)自成都有機(jī)化學(xué)有限公司；磷脂化聚乙二醇購(gòu)買(mǎi)自加拿大polymersource公司。

5-6周齡裸鼠購(gòu)自中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；膽囊癌noz細(xì)胞株、人肺成纖維細(xì)胞hfl1細(xì)胞株、人肝細(xì)胞qsg-7701細(xì)胞株、大鼠心肌h9c2細(xì)胞株購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心；dmem、rpml1640培養(yǎng)基購(gòu)買(mǎi)自gibco公司。

光聲檢測(cè)專(zhuān)用opo脈沖激光采用光聲檢測(cè)專(zhuān)用opo脈沖激光器opotekvibrant購(gòu)自美國(guó)opotek公司。

實(shí)施例1腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

支化聚乙烯亞胺(pei)溶液(mn＝10000)：將0.5g支化聚乙烯亞胺(pei)溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0322g羧基化多壁碳納米管分散在100ml去離子水中，該羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為0.5％，直徑為20nm，超聲20min，攪拌15min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為2μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂化聚乙二醇粉末溶于100ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為0.5kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到支化聚乙烯亞胺溶液溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與支化聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為1∶10。滴加完成后，200w超聲10min，攪拌30min使之充分混合，將 得到的混合體系在60℃，下油浴20小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得支化聚乙烯亞胺-碳納米管(pei-cnts)分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的支化聚乙烯亞胺-碳納米管分散體系中，其中支化聚乙烯亞胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為4∶1，支化聚乙烯亞胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為5∶1，支化聚乙烯亞胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為1000∶1，室溫反應(yīng)24h，10000r/min離心洗滌，以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌反應(yīng)45小時(shí)，其中包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶1，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-支化聚乙烯亞胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。具體流程圖見(jiàn)圖1。

實(shí)施例2腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

支化聚乙烯亞胺(mn＝10000)溶液：將2.1508g支化聚乙烯亞胺(pei)溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0644g羧基化多壁碳納米管分散在50ml去離子水中，所述羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為3％， 直徑為30nm，超聲30min，攪拌60min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為0.5μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂聚乙二醇粉末溶于50ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為20kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到支化聚乙烯亞胺溶液溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與支化聚乙烯亞胺的質(zhì)量比為1∶10；滴加完成后，200w超聲30min，攪拌60min使之充分混合，將得到的混合體系在65℃下油浴36小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得支化聚乙烯亞胺-碳納米管(pei-cnts)分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加到(1)中的支化聚乙烯亞胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中支化聚乙烯亞胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為6∶1，支化聚乙烯亞胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為7∶1，支化聚乙烯亞胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為500∶1，10000r/min離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌，反應(yīng)50小時(shí)，其中包含clic1抗體的支化聚乙烯亞胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶2，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-支化聚乙烯亞胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例3腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

四乙烯五胺溶液：將0.5g四乙烯五胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0322g羧基化多壁碳納米管分散在100ml去離子水中，該羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為0.5％，直徑為20nm，超聲20min，攪拌15min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為2μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂化聚乙二醇粉末溶于100ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為0.5kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到四乙烯五胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與四乙烯五胺的質(zhì)量比為1∶5；滴加完成后，200w超聲10min，攪拌30min使之充分混合，將得到的混合體系在65℃下油浴20小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得四乙烯五胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的四乙烯五胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中四乙烯五胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為10∶1，四乙烯五胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為12∶1，四乙烯五胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為100∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多 余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的四乙烯五胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的四乙烯五胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌，反應(yīng)45小時(shí)，其中包含clic1抗體的四乙烯五胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶3，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-四乙烯五胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例4腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

三乙烯四胺溶液：將2.1508g三乙烯四胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0644g羧基化多壁碳納米管分散在50ml去離子水中，所述羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為3％，直徑為30nm，超聲30min，攪拌60min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為0.5μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂聚乙二醇粉末溶于50ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為20kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到三乙烯四胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與三乙烯四胺的質(zhì)量比為1∶20；滴加完成后，200w超聲10min，攪拌30min使之充分混合，將得到的混合體系在65℃下油浴20小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得三乙烯四胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的三乙烯四胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中三乙烯四胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為3∶1，三乙烯四胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為4∶1，三乙烯四胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為50∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的三乙烯四胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的三乙烯四胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌，反應(yīng)50小時(shí)，其中包含clic1抗體的三乙烯四胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶5，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-三乙烯四胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例5腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

聚丙烯胺溶液：將0.5g聚丙烯胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0322g羧基化多壁碳納米管分散在100ml去離子水中，該羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為0.5％，直徑為20nm，超聲20min，攪拌15min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為2μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂化聚乙二醇粉末溶于100ml去 離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為0.5kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到聚丙烯胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與聚丙烯胺的質(zhì)量比為1∶3；滴加完成后，200w超聲10min，攪拌30min使之充分混合，將得到的混合體系在75℃下油浴20小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得聚丙烯胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的聚丙烯胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中聚丙烯胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為2∶1，聚丙烯胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為3∶1，聚丙烯胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為10∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌反應(yīng)45小時(shí)，其中包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶10，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-聚丙烯胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例6腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

聚丙烯胺溶液：將2.1508g聚丙烯胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0644g羧基化多壁碳納米管分散在50ml去離子水中，所述羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為3％，直徑為30nm，超聲30min，攪拌60min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為0.5μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂聚乙二醇粉末溶于50ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為20kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到聚丙烯胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與聚丙烯胺的質(zhì)量比為1∶1；滴加完成后，200w超聲30min，攪拌60min使之充分混合，將得到的混合體系在85℃下油浴36小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得聚丙烯胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的聚丙烯胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中聚丙烯胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為8∶1，聚丙烯胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為10∶1，聚丙烯胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為5∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌反應(yīng)50小時(shí)，其中包含clic1抗體的聚丙烯胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶3，10000r/min離 心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-聚丙烯胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例7腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

聚丙烯酰胺溶液：將0.5g聚丙烯酰胺胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0322g羧基化多壁碳納米管分散在100ml去離子水中，該羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為0.5％，直徑為20nm，超聲20min，攪拌15min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為2μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂化聚乙二醇粉末溶于100ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為0.5kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到三乙烯四胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與聚丙烯酰胺-碳納米管的質(zhì)量比為1∶50；滴加完成后，200w超聲10min，攪拌30min使之充分混合，將得到的混合體系在90℃下油浴20小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得聚丙烯酰胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的聚丙烯酰胺-碳納米管分散 體系中，室溫反應(yīng)24h，其中聚丙烯酰胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為2∶1，聚丙烯酰胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為1∶1，聚丙烯酰胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為20∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌反應(yīng)50小時(shí)，其中包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為2∶1，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-聚丙烯酰胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

實(shí)施例8腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

一、溶液的配制

聚丙烯酰胺溶液：將2.1508g聚丙烯酰胺溶于100ml的去離子水中，超聲、攪拌使之溶解；

羧基化多壁碳納米管分散體系：將0.0644g羧基化多壁碳納米管分散在50ml去離子水中，所述羧基化多壁碳納米管的羧基的質(zhì)量百分比含量為3％，直徑為30nm，超聲30min，攪拌60min使之分散，分散后體系中的羧基化多壁碳納米管的長(zhǎng)度為0.5μm；

磷脂化聚乙二醇溶液：將0.0052g磷脂聚乙二醇粉末溶于50ml去離子水中，攪拌使之溶解，磷脂化聚乙二醇的分子量為20kda。

二、腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的制備

(1)將羧基化多壁碳納米管分散體系逐滴加入到聚丙烯酰胺溶液中，伴隨超聲、攪拌，其中羧基化多壁碳納米管與聚丙烯酰胺的質(zhì)量比為1∶5；滴加完成后，200w超聲30min，攪拌60min使之充分混合，將得到的混合體 系在65℃下油浴36小時(shí)，冷卻至室溫，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，用去離子水充分抽濾洗滌，去離子水分散，制得聚丙烯酰胺-碳納米管分散體系；

(2)配制1ml濃度為1mg/ml、ph＝4.5的2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)緩沖液，磁力攪拌分散20分鐘后加入0.2ml2mg/mln-羥基琥珀酰亞胺(nhs)溶液，繼續(xù)攪拌15分鐘，加入0.5ml2mg/ml1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)溶液，反應(yīng)5分鐘后，加入clic1抗體1mg，反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，將其滴加入到(1)中的聚丙烯酰胺-碳納米管分散體系中，室溫反應(yīng)24h，其中聚丙烯酰胺-碳納米管與nhs的質(zhì)量比為1∶1，聚丙烯酰胺-碳納米管與edc的質(zhì)量比為2∶1，聚丙烯酰胺-碳納米管與clic1抗體的質(zhì)量比為300∶1，在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心洗滌以除去多余的nhs、edc和clic1抗體，用去離子水重新分散，得到包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管的分散體系；

(3)將磷脂化聚乙二醇溶液逐滴加入到(2)中包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管的分散體系，伴隨超聲攪拌，反應(yīng)50小時(shí)，其中包含clic1抗體的聚丙烯酰胺-碳納米管與磷脂化聚乙二醇的質(zhì)量比為3∶1，10000r/min離心10min，用去離子水充分抽濾洗滌除去多余的磷脂化聚乙二醇后用去離子水重新分散，制得含有clic1抗體的磷脂化聚乙二醇-聚丙烯酰胺-碳納米管分散體系；

(4)10000r/min離心洗滌，將離心所得沉淀真空干燥24小時(shí)，制得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑。

效果實(shí)施例1腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑體外毒性檢測(cè)

于dmem或rpml1640培養(yǎng)基中37℃，5％co2培養(yǎng)膽囊癌noz細(xì)胞株、人肺成纖維細(xì)胞hfl1細(xì)胞株、人肝細(xì)胞qsg-7701細(xì)胞株和大鼠心肌h9c2細(xì)胞株，細(xì)胞以96孔密度接種于培養(yǎng)皿，貼壁過(guò)夜。

設(shè)置對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組：對(duì)照組用pbs溶液作為對(duì)照加入各培養(yǎng)的細(xì)胞中，實(shí)驗(yàn)組將實(shí)施例1制備所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑，37℃孵育48 小時(shí)，檢測(cè)細(xì)胞存活率。采用梯度稀釋實(shí)施例1制備的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑，稀釋后的濃度分別是0.5mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.01mg/ml、0.005mg/ml、0.001mg/ml、0.0005mg/ml，每個(gè)濃度梯度重復(fù)5次。結(jié)果顯示與對(duì)照相比，細(xì)胞的存活率差異不大。

用實(shí)施例2-8所述制得的腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑重復(fù)上述試驗(yàn)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，細(xì)胞的存活率均相差不大。

因此本發(fā)明所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑毒性低，有較高的生物安全性。

效果實(shí)施例2碳納米管光聲造影劑分散性檢測(cè)

取羧基化多壁碳納米管和本發(fā)明實(shí)施例1-8所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑以25℃，超聲分散10分鐘，分散到pbs溶劑中，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)修飾的碳納米管光聲造影劑其分散度為0，完全不分散，而本發(fā)明所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的分散度為分散性好，其分散性有顯著提高，基本上呈單分散狀態(tài)，其中實(shí)施例2的鏡檢結(jié)果具體見(jiàn)圖2。從所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可見(jiàn)，本發(fā)明所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑具有分散性好的優(yōu)點(diǎn)。

效果實(shí)施例3腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑體外穩(wěn)定性檢測(cè)

取羧基化多壁碳納米管和本發(fā)明實(shí)施例1-8制備所得高分散碳納米管光聲造影劑，分散到溶劑中，其中羧基化多壁碳納米管的濃度是0.3mg/ml，本發(fā)明腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的濃度是0.5mg/ml，室溫儲(chǔ)存96小時(shí)，其中未經(jīng)修飾的碳納米管光聲造影劑在儲(chǔ)存24小時(shí)后即產(chǎn)生沉淀，而本發(fā)明腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑在同樣條件下儲(chǔ)存24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)和96小時(shí)后狀態(tài)仍然十分穩(wěn)定，其性狀均勻，未產(chǎn)生任何沉淀，其中本發(fā)明實(shí)施例1所制得的高分散碳納米管光聲造影劑的穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。從所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可見(jiàn)，本發(fā)明所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑的有顯著的提高。

效果實(shí)施例4腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑成像效果檢測(cè)

(1)飼養(yǎng)5-6周齡裸鼠；

(2)采用尾部靜脈方式將實(shí)施例4制備所得腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑通過(guò)尾部注射方式注入荷瘤裸鼠體內(nèi)，注射量為0.2ml，對(duì)照組注射pbs緩沖溶液和不含clic1抗體的碳納米管光聲造影劑；

(3)注射造影劑后，利用光聲成像實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)所得光聲造影劑的光聲響應(yīng)信號(hào)。采用光聲檢測(cè)專(zhuān)用opo脈沖激光器(美國(guó)opotek公司生產(chǎn)。)。以純水作為對(duì)照組，并以200－1000nm波段的連續(xù)波長(zhǎng)激光輻照試樣，通過(guò)對(duì)透射光的光譜分析，獲得試樣的光吸收譜。泵浦波長(zhǎng)532nm，脈寬<2ns，重復(fù)頻率10hz；采用的聚焦式超聲傳感器中心頻率為15mhz，帶寬80％。其結(jié)果顯示：在局部注射本發(fā)明光聲造影劑后荷瘤裸鼠的腫瘤部位出現(xiàn)明顯的成像增強(qiáng)效果(見(jiàn)圖4)。但是注射pbs緩沖溶液(見(jiàn)圖5a)和不含clic1抗體的碳納米管光聲造影劑(圖5b)腫瘤成像效果比較差，說(shuō)明本發(fā)明腫瘤靶向的碳納米管光聲造影劑具有腫瘤靶向功能。

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