本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品副產(chǎn)品高效綜合利用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及通過溶劑提取樹莓枝中的鞣花酸后除溶劑和提取助劑方法。

背景技術(shù)：

我國早有樹莓用藥的記載，《千金食治》中記載樹莓“味甘，平，無毒”，“入肝、腎二經(jīng)”具有補(bǔ)肝腎、縮小便，助陽，固精，明目，治陽痿，遺精，遺弱，虛勞，目暗的作用，是苗族的傳統(tǒng)民間用藥。其根、蓮、葉皆可入藥，根性味略苦，具有祛風(fēng)活血、解毒斂拖功效，主治銅疾、蛇咬、閉經(jīng)痛經(jīng)、濕疫、風(fēng)濕腰痛等癥。截至到2012年我國樹莓的種植面積已經(jīng)達(dá)到18萬畝，并且近三年樹莓種植面積迅速增加。根據(jù)2012年樹莓種植面積每年樹莓平茬后廢棄的樹莓枝葉達(dá)到3萬多噸，并且逐年遞增，到目前為止僅有少量的樹莓葉被收購用于樹莓茶的制作，大部分被廢棄于田野或焚燒而造成環(huán)境的污染。根據(jù)本課題組研究發(fā)現(xiàn)樹莓含有多種功能性成分，主要有花青素、鞣花酸和黃酮類等酚類物質(zhì)、水楊酸、抗壞血酸和樹莓苷等，這些功能性成分具有特殊的生理功能和生物學(xué)活性，其中樹枝中鞣花酸的含量是果實(shí)中的50多倍。因此，對樹莓枝葉進(jìn)行功能性成分的提取，對于提高樹莓種植的經(jīng)濟(jì)效益具有非常重要的意義。

目前，我國的樹莓加工品全部依賴進(jìn)口，只有在大城市的超市才能買到，例如北京燕莎、賽特所出售的樹莓飲料、果醬、酸奶等產(chǎn)品全部是進(jìn)口貨，價(jià)格昂貴，被稱之為“貴族消費(fèi)”品。國外關(guān)于樹莓加工的報(bào)導(dǎo)也不是很多，但對樹莓中的功效成分的研究比較活躍，做了大量的基礎(chǔ)研究工作，為樹莓的深層次開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。中央電視臺報(bào)道，日本從樹莓籽中提取樹莓類黃酮，用于替代辣椒素作消脂劑，減肥消脂功效是辣椒素的十倍。日本已利用樹莓為原料開發(fā)出全天然高級護(hù)膚用品。我國只是在近幾年，黑龍江、吉林、天津、江蘇、廣東等省市先后進(jìn)行了果酒、飲料、濃縮汁、果醬、罐頭及速凍食品的研究與利用；廣東與日本合作從甜葉懸鉤中提取出了比蔗糖甜300多倍的懸鉤酐。另外在醫(yī)藥利用方面也取得了一些進(jìn)展，如對茅莓、掌葉覆盆子等開展了藥理、藥物及成分方面的研究，開發(fā)出了有一定療效的中成藥，中山大學(xué)和廣州中藥總廠合作研制了有較好療效的“止血靈”注射液。開展樹莓枝果葉中活性成分的分離、提取和濃縮將有利于我國樹莓深加工產(chǎn)品的發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了實(shí)現(xiàn)樹莓枝葉得到充分利用，提高樹莓產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，本發(fā)明解決的技術(shù)問題通過如下方案實(shí)現(xiàn)。

（1）樹莓枝的處理：平茬后的樹莓枝風(fēng)干處理后，水分含量控制在7%以上后，用高速萬能粉碎機(jī)將干燥的樹莓枝粉碎，盛裝在塑封袋里置于陰涼干燥處，備用。

（2）鞣花酸的提?。簩Σ襟E（1）處理的樹莓枝，在鹽酸濃度1.2-2.0mol/l，乙醇濃度為50%，料液比1:55-60（m/v），85℃條件下回流時(shí)間120-160min，獲得鞣花酸粗提液。

（3）濃縮沉淀：將步驟（2）獲得粗提液在0.1mpa，75-90℃真空濃縮至提取液1/3后，測得提取液中的酒精含量為零，常溫冷卻至20-25℃后放入3.5-4.5℃冷藏12小時(shí)后大量沉淀產(chǎn)生，然后濾紙過濾，得到樹莓枝提取沉淀物。

（4）水洗至中性：對步驟（3）獲得樹莓枝提取沉淀物用蒸餾水進(jìn)行水洗，洗至水呈中性后干燥至水分含量6%以下，即為樹莓枝提取獲得的鞣花酸濃縮物。

鞣花酸的測定：

液相色譜條件。色譜柱為symmetryc18柱(4.6×250mm，5μm)；流動相為ch3cn－0.1%磷酸(體積比21：79)；流速為1ml/min；柱溫為35℃；檢測波長為253nm；

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。準(zhǔn)確稱取5.00mg鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品，至于50ml容量瓶中，用二甲基亞砜溶解定容至刻度線，得到濃度為100ppm的鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。再以此溶液為母液，用二甲基亞砜分別稀釋配成濃度為80ppm、60ppm、40ppm、20ppm、5ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，備用；

標(biāo)準(zhǔn)曲線建立。將上述制備的不同濃度的鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品上液相色譜儀，得到相對應(yīng)的色譜圖（見附圖1），以濃度x（ppm）為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=151.69x-1003（r²=0.9998）。該曲線方程表明鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.005~0.3mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，可用于分析樣品中的鞣花酸含量；

供試品溶液的制備。準(zhǔn)確稱取0.5g步驟（4）的鞣花酸濃縮物用二甲基亞砜溶解定容至50ml，用注射器吸取1~2ml過0.45μm微孔濾膜，上液相色譜儀測定（見附圖2）。

鞣花酸濃縮物的含量：經(jīng)液相測定樹莓枝鞣花酸濃縮物含量在16.9%~20.7%之間。

本發(fā)明的優(yōu)勢在于：

（1）已有文獻(xiàn)發(fā)明報(bào)道主要以樹莓果實(shí)為原料提取鞣花酸為主的產(chǎn)品，而本發(fā)明以樹莓枝葉為原料，成本低，并有利于農(nóng)產(chǎn)品廢棄物的利用；

（2）鞣花酸濃縮物制備后的初步凈化采用最為原始的沉淀清洗的方式獲得鞣花酸含量在16%以上的粉末制品，生產(chǎn)工藝簡單，投資成本低，易于規(guī)?；a(chǎn)；

（3）所制的鞣花酸濃縮物參照qb/t2489-2007食品原料用蘆薈制品相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)檢驗(yàn)砷、鉛、六六六、滴滴涕、菌落總數(shù)、大腸桿菌、霉菌和酵母菌、致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌）檢驗(yàn)均低于蘆薈粉。因此，該制品可以作為一種新型食品原料的備選和醫(yī)藥原料。

附圖說明

圖1本發(fā)明實(shí)驗(yàn)條件下鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖。

圖2本發(fā)明制的鞣花酸濃縮物的液相測定圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體事例對發(fā)明做詳細(xì)介紹：

本發(fā)明所用樹莓枝為夏秋兩季結(jié)果型樹莓品種海爾特茲（heritage）平茬枝葉，該品種遼寧省果樹科學(xué)研究所2003年從中國林業(yè)科學(xué)院引進(jìn)，原產(chǎn)美國。

如無特殊說明，本發(fā)明所用材料均為市售可得。食用級鹽酸，購于中山市高達(dá)化工有限公司；食用酒精，購于河南天冠企業(yè)集團(tuán)有限公司；鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品，購于成都曼思特生物科技有限公司，批號：must-14110807；二甲基亞砜（分析純），天津市富起化工有限公司；乙腈（色譜純，購買xingmakechemicals；磷酸，購于天津市進(jìn)豐化工有限公司；哇哈哈純凈水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司；

儀器設(shè)備：agilent-1100高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠，型號re-52a；電熱恒溫水浴鍋，北京市長風(fēng)儀器儀表公司，型號hwsy11-k；電子天平，余姚市金諾天平儀器有限公司，型號jf1004；高速萬能粉碎機(jī)，北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號fw100；回流提取裝置。

實(shí)施例1

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為6.8%，粉碎至40目，取20g樹莓枝粉末，加入1000ml的50%乙醇（含鹽酸1.2mol）溶液，于85℃提取150min后，0.1mpa，75℃濃縮至350ml，冷卻到23℃后放入4.8℃冰箱冷藏室中冷卻14小時(shí)后，用200目過濾后的沉淀物用30ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在53℃干燥至水分含量為6.8%，得到1.28g固體粉末，測得鞣花酸含量為16.9%。

實(shí)施例2

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為7.0%，粉碎至40目，取10g樹莓枝粉末，加入550ml的50%乙醇（含鹽酸0.82mol）溶液，于85℃提取140min后，0.1mpa，70℃濃縮至170ml，冷卻到20℃后放入4.3℃冰箱冷藏室中冷卻15小時(shí)后，用200目過濾后的沉淀物用18ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在53℃干燥至水分含量為7.2%，得到0.65g固體粉末，測得鞣花酸含量為17.2%。

實(shí)施例3

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為7.0%，粉碎至40目，取20g樹莓枝粉末，加入1200ml的50%乙醇（含鹽酸2.2mol）溶液，于84℃提取140min后，0.1mpa，70℃濃縮至380ml，冷卻到25℃后放入3.8℃冰箱冷藏室中冷卻16小時(shí)后，用200目過濾后的沉淀物用36ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在58℃干燥至水分含量為7.8%，得到1.4g固體粉末，測得鞣花酸含量為18.7%。

實(shí)施例4

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為7.0%，粉碎至40目，取15g樹莓枝粉末，加入800ml的50%乙醇（含鹽酸1.5mol）溶液，于83℃提取160min后，0.1mpa，78℃濃縮至270ml，冷卻到23℃后放入4.2℃冰箱冷藏室中冷卻18小時(shí)后，用200目過濾后的沉淀物用30ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量為7.1%，得到0.94g固體粉末，測得鞣花酸含量為18.3%。

實(shí)施例5

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為6.6%，粉碎至40目，取10g樹莓枝粉末，加入570ml的50%乙醇（含鹽酸1.09mol）溶液，85℃條件下回流時(shí)間150min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用24ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在52℃干燥至水分含量為7.2%，得到0.64g固體粉末，測得鞣花酸含量為20.1%。

實(shí)施例6

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為6.6%，粉碎至40目，取5g樹莓枝粉末，加入280ml的50%乙醇（含鹽酸0.5mol）溶液，87℃條件下回流時(shí)間150min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用12ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在50℃干燥至水分含量為7.8%，得到0.31g固體粉末，測得鞣花酸含量為19.8%。

實(shí)施例7

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為6.6%，粉碎至40目，取30g樹莓枝粉末，加入1800ml的50%乙醇（含鹽酸2.7mol）溶液，85℃條件下回流時(shí)間160min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用72ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在65℃干燥至水分含量為6.8%，得到1.72g固體粉末，測得鞣花酸含量為19.5%。

實(shí)施例8

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為6.6%，粉碎至40目，取30g樹莓枝粉末，加入1800ml的50%乙醇（含鹽酸2.7mol）溶液，85℃條件下回流時(shí)間150min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用72ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在65℃干燥至水分含量為6.8%，得到1.72g固體粉末，測得鞣花酸含量為19.5%。

實(shí)施例9

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為7.1%，粉碎至40目，取10g樹莓枝粉末，加入570ml的50%乙醇（含鹽酸1.03mol）溶液，86℃條件下回流時(shí)間150min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用24ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量為6.5%，得到0.62g固體粉末，測得鞣花酸含量為18.9%。

實(shí)施例10

將平茬的樹莓枝葉干燥至水分含量為7.1%，粉碎至40目，取20g樹莓枝粉末，加入1200ml的50%乙醇（含鹽酸1.7mol）溶液，83℃條件下回流時(shí)間150min，獲得鞣花酸粗提液用200目過濾后的沉淀物用24ml蒸餾水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量為6.8%，得到1.3g固體粉末，測得鞣花酸含量為18.7%。