本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域:
,涉及一種具有腦保護(hù)作用的藥物及制備方法,具體涉及一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法及其腦保護(hù)作用研究,包括對腦卒中后血小板聚集的抑制作用和神經(jīng)保護(hù)作用。
背景技術(shù):
:銀杏是古老的中生代植物,有裸子植物活化石之稱。其提取物近年來引起國際高度重視?,F(xiàn)代研究表明:銀杏葉中含有黃酮類、萜類、酚類、生物堿類、多糖等多種具有藥理活性的成分[K.Stromgaardetal,AngewChemIntEdEngl,43(2004),1640-1658.]。銀杏內(nèi)酯是銀杏葉中的萜類內(nèi)酯化合物,包括內(nèi)酯A,B,C,白果內(nèi)酯,K,L等。對于銀杏總內(nèi)酯以及常見單體內(nèi)酯的分離,目前已經(jīng)有很多報(bào)道,例如劉大偉等人利用溶劑萃取-柱層析方法,得到了純度較高的銀杏總內(nèi)酯[劉大偉等,科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào),25(2011)]。韓亞榮建立了合適的柱層析方法,得到了高純度的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C單體[韓亞榮等,亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,8(2009),第5卷第8期]。然而,對于銀杏內(nèi)酯中的稀有成分,如內(nèi)酯L的研究較少,對于內(nèi)酯L的制備方法,目前只有一個(gè)專利,一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法(CN104356141A),該方法以銀杏內(nèi)酯A為原料,經(jīng)過脫水反應(yīng),可以得到內(nèi)酯L。銀杏內(nèi)酯(萜類內(nèi)酯)被認(rèn)為是銀杏葉中腦保護(hù)的的主要活性成分。銀杏內(nèi)酯對血小板活化因子受體(PAF)有強(qiáng)大的特異性抑制作用,能有效的防止腦卒中后的血小板聚集和血栓的形成[K.Stromgaardetal,AngewChemIntEdEngl,43(2004),1640-1658.]。此外,研究還發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯具有減少腦缺血引起的神經(jīng)元調(diào)亡和壞死、發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[F.V.DeFeudisetal,CurrDrugTargets,1(2000),25-58.]。目前來講,對于銀杏內(nèi)酯的藥理活性研究已經(jīng)越來越深入,銀杏內(nèi)酯L在銀杏葉中含量極低,關(guān)于其藥理活性尚未有過研究報(bào)道,難以預(yù)期銀杏內(nèi)酯L是否能起到腦保護(hù)作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明公開了一種具有腦保護(hù)作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分。本發(fā)明公開了一種具有腦保護(hù)作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分,銀 杏內(nèi)酯L具備抗血小板聚集、抗凝血的作用和神經(jīng)保護(hù)作用。本發(fā)明公開了一種具有腦保護(hù)作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分,銀杏內(nèi)酯L具備對腦卒中后血小板聚集的抑制作用和神經(jīng)保護(hù)作用。本發(fā)明公開了一種抗血小板聚集的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分;銀杏內(nèi)酯L具備神經(jīng)保護(hù)作用,用于腦保護(hù)。本發(fā)明公開了一種抗凝血作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分;銀杏內(nèi)酯L具備神經(jīng)保護(hù)作用,用于腦保護(hù)。本發(fā)明公開了一種抗凝血作用的藥物,銀杏內(nèi)酯L用量范圍為5-320μM。本發(fā)明公開了一種具備神經(jīng)保護(hù)作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分;銀杏內(nèi)酯L具備抑制腦卒中后的血小板聚集作用,用于腦保護(hù)。本發(fā)明公開了一種具備神經(jīng)保護(hù)作用的藥物,以銀杏內(nèi)酯L為活性成分;銀杏內(nèi)酯L具備抗凝血作用,用于腦保護(hù)。本發(fā)明公開了一種具備神經(jīng)保護(hù)作用的藥物,銀杏內(nèi)酯L用量范圍為2-80μM。本發(fā)明公開了一種從銀杏總內(nèi)酯制備銀杏內(nèi)酯L的方法。本發(fā)明公開了一種具有良好的水溶性、穩(wěn)定性的銀杏內(nèi)酯L復(fù)合物。本發(fā)明公開了銀杏內(nèi)酯L及其復(fù)合物的醫(yī)藥用途。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的制備方法:是以銀杏內(nèi)酯L和堿性物質(zhì)制備得到:精氨酸、賴氨酸、組氨酸、甘氨酸等及其衍生物;甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、乙二胺、葡甲胺、尿素、鹽酸胍、1,2-乙二胺、乙醇胺等及其衍生物;甲酰胺、二甲基甲酰胺、羥泛酸、煙酰胺等酰胺類;烷基咪唑、烷基吡啶、烷基三甲基胺鹽、鹽酸硫胺等;金屬堿性物質(zhì)如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋇;分子中含有一個(gè)至八個(gè)碳原子的含氮有機(jī)物。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還提供了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的制備方法,銀杏內(nèi)酯L與堿性物質(zhì)以為1∶0.2~5的比例,在水和/或醇溶劑中形成復(fù)合物。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的制備方法,其步驟如下:取堿性物質(zhì),加水溶解,加熱至70-90℃,加入銀杏內(nèi)酯L,攪拌溶解,濃縮,干燥濃縮物,即得。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的制備方法,其特點(diǎn)是,其步驟如下:取堿性物質(zhì),加水與有機(jī)溶劑任意比混合溶液溶解,加熱至40-70℃,加入銀杏內(nèi)酯L的(甲醇、乙醇等)溶液,攪拌至溶解,過濾,濾液減壓濃縮,回收有機(jī)溶劑,干燥濃縮物,即得。本發(fā)明公開了堿性物質(zhì)是精氨酸、賴氨酸、葡甲胺。銀杏內(nèi)酯L總內(nèi)酯可以通過市售獲得,也可以通過已知方法獲得。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的分離制備方法,其特征在于:從銀杏總內(nèi)酯中制備了高純度的銀杏內(nèi)酯L單體,含量在98%以上。一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法:以銀杏總內(nèi)酯為原料,洗脫體系為:柱層析硅膠為100-300目,洗脫體系為石油醚+乙酸乙酯,洗脫梯度為300∶1-10∶1;柱層析硅膠為100-300目,洗脫體系為氯仿+甲醇,洗脫梯度為300∶1-10∶1;柱層析硅膠為100-300目,洗脫體系為石油醚+丙酮,洗脫梯度為300∶1-10∶1。一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法:以銀杏總內(nèi)酯為原料,選用200-300目硅膠,干法裝柱,稱取銀杏總內(nèi)酯20g,與100目硅膠混勻,干法上樣;選用氯仿-甲醇做為洗脫劑,比例為150∶1,100∶1,50∶1,20∶1遞減,梯度洗脫后,利用HPLC-ESI-Q/TOF-MS檢測洗脫液成分,得到含有銀杏內(nèi)酯L的洗脫液,旋干后得到淡黃色固體粉末,即為銀杏內(nèi)酯L。一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法:稱取10g銀杏總內(nèi)酯,選用200-300目硅膠,干法裝柱,稱取銀杏總內(nèi)酯20g,與100目硅膠混勻,干法上樣;選用氯仿-甲醇做為洗脫劑,比例為150∶1,100∶1,50∶1,20∶1遞減,梯度洗脫后,在50∶1時(shí)得到內(nèi)酯L的洗脫液,旋干后 得到淡黃色固體粉末,即為銀杏內(nèi)酯L。一種銀杏內(nèi)酯L的制備方法:稱取10g銀杏總內(nèi)酯,乙酸乙酯溶解,混合20g硅藻土,拌勻,揮干,研磨,過篩,選用200-300目硅膠,干法裝柱,選擇高50cm,內(nèi)徑6cm的層析柱,柱層析硅膠為500g,石油醚拌勻,待沉降穩(wěn)定后,柱高約35cm,選用石油醚-乙酸乙酯做為洗脫劑,比例為200∶1,100∶1,50∶1,20∶1遞減,每一個(gè)梯度用3倍柱體積的洗脫液洗脫,在20∶1時(shí)得到內(nèi)酯L的洗脫液,旋干后得到淡黃色固體粉末,即為銀杏內(nèi)酯L。本發(fā)明公開了銀杏內(nèi)酯L,用有機(jī)溶劑溶解,濃縮,重結(jié)晶至高純度銀杏內(nèi)酯L。本發(fā)明公開了銀杏內(nèi)酯L的重結(jié)晶的方法,在溶劑加熱、攪拌溶解,放冷析晶,濾過,沉淀洗滌,沉淀干燥恒重,最終得銀杏內(nèi)酯L結(jié)晶。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的組合物,制成膠囊、軟膠囊、片劑、滴丸、口服液、注射劑、凍干粉、輸液劑、脂質(zhì)體注射劑,靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑、控釋制劑。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的組合物,用于制備抗血小板聚集、抗凝血的作用、神經(jīng)保護(hù)、治療腦卒中,抗血栓、治療老年癡呆的藥物中的用途。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的組合物,制成膠囊、軟膠囊、片劑、滴丸、口服液、注射劑、凍干粉、輸液劑、脂質(zhì)體注射劑,靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑、控釋制劑。本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯L的復(fù)合物的組合物,用于制備抗血小板聚集、抗凝血的作用、神經(jīng)保護(hù)、治療腦卒中,抗血栓、治療老年癡呆的藥物中的用途。一種銀杏內(nèi)酯L的檢測方法實(shí)驗(yàn)儀器高效液相系統(tǒng)為Agilent1290seriesHPLCsystem(AgilentTechnologies,USA);質(zhì)譜分析采用Agilent6530HPLC-ESI-Q/TOF-MS系統(tǒng)(Agilent,德國),具電噴霧離子源(ESI),雙高壓泵、脫氣機(jī)、盤式自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和DAD 檢測器。SovallEvolutionRC型高速冷凍離心機(jī)(KENDRO,美國);BP211D十萬分之一電子天平(Sartorius);真空離心干燥/定量濃縮儀(GeneVacEZ-2,英國)。液相色譜條件色譜柱為AgilentZorbaxExtend-C18柱(2.1mm×150mm,5μm)。檢測波長203nm。色譜條件:流動(dòng)相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),洗脫梯度:0-11min,20%B-30%B;11-14min,30%B-35%B;14-18min,35%-100%B;18-21min,100%-100%B。柱溫:25℃,流速0.5mL/min。質(zhì)譜分析條件:Q-TOF-MS為Agilent6530HPLC-ESI-Q/TOF-MS系統(tǒng),使用ESI離子源,具體條件為:干燥氣(N2)流速,10L/min;干燥氣溫度350℃;正離子掃描,霧化壓力(N2),35psig;鞘氣溫度,350℃;鞘氣流速,11.0L/min;毛細(xì)管電壓,3500;錐孔電壓,65V;OCTRFV,750V;碎片電壓,120V;二級碰撞能量,10V,20V;采用全掃描模式,離子質(zhì)量數(shù)掃描范圍設(shè)置位m/z100-1100。正離子模式下采集數(shù)據(jù),參比離子包括m/z112.9859和1033.9881。數(shù)據(jù)采集與處理分別采用AgilentLC-Q-TOF-MSDataAcquisitionSoftwareVersionB.05.01及QualitativeAnalysisSoftwareVer.B.06.00分析軟件(AgilentTechnologies)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1-圖3:因此,本發(fā)明涉及的銀杏內(nèi)酯L的分離制備方法,操作簡單,得率高。一種銀杏內(nèi)酯L的血小板聚集的抑制作用儀器與試劑二水合檸檬酸三鈉(南京化學(xué)試劑有限公司);鹽酸丁卡因(浙江九旭藥業(yè)有限公司);二磷酸腺苷(ADP,美國Sigma-Aldrich公司);LBY-NJ4血小板聚集儀(北京普利生公司);Vortex-Genie2渦旋振蕩器(美國ScientificIndustries公司);80-2臺(tái)式低速離心機(jī)(上海醫(yī)療器械有限公司手術(shù)器械廠)。血漿樣品的制備家兔用丁卡因局部麻醉后,手術(shù)分離頸總動(dòng)脈取血,用3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝,以500r/min離心10min,制備富血小板血漿(PRP),剩余部分再以3000r/min離心10min,制備貧血小板血漿(PPP),用PPP調(diào)整血小板計(jì)數(shù)為4x108/ml。按比濁法進(jìn)行血小板聚集實(shí)驗(yàn)。血小板聚集率的測定比濁法檢測血小板聚集原理:比濁法(Turbidimetricplateletaggregometry,TPA)由Born于1962年最先應(yīng)用,是一種比較廣泛的檢測血小板聚集功能的方法。其原理是離心制備貧血小板血漿(plateletpoorplasma,PPP)和富血小板血漿(plateletrichplasma,PRP),將PPP所測得的透光率視為100%,PRP的透光率視為0%。將PRP置于比色管中,加入誘導(dǎo)劑,在攪拌的條件下,誘導(dǎo)劑與血小板膜受體之間相互作用,使膜表面糖蛋白受體IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)活化,與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合,引起血小板逐漸聚集,血漿濁度下降,透光率增加,光電池迅速將光濁度的信號轉(zhuǎn)換為電訊號,血小板聚集儀自動(dòng)地進(jìn)行動(dòng)態(tài)測量和記錄,從而描繪出血小板聚集曲線。此法利用血小板聚集儀能夠比較方便地獲得血小板聚集情況,從而評價(jià)血小板的聚集功能。操作步驟:以PPP調(diào)零,比濁管中加入PRP260μL,受試藥物30μL,溫孵5min,,以10μLPAF(終濃度1.5μmol/L)為誘導(dǎo)劑,比濁法測定在誘導(dǎo)劑加入5min內(nèi)血小板的最大聚集率,并計(jì)算血小板聚集抑制率。血小板聚集抑制率按下式計(jì)算:血小板聚集抑制率(%)=[1-對照組聚集百分率/給藥組聚集百分率)]x100本實(shí)驗(yàn)稱取銀杏內(nèi)酯L粉末溶于二甲基亞砜中,制成400mM的母液貯存,使用時(shí)稀釋至終濃度320μM、160μM、80μM、40μM、20μM、10μM、5μM,測定血 小板聚集抑制率。數(shù)據(jù)處理使用GraphPadPrism6.02軟件。表1:銀杏內(nèi)酯L對PAF誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制率濃度(μM)抑制率(%)SD55.4079884.898149106.8730494.2401272022.3394.6272354044.353141.8560178078.533662.71148416090.126762.35855932098.280151.193388抑制曲線見圖4,IC50為42.37μM。銀杏內(nèi)酯L的神經(jīng)保護(hù)作用儀器與試劑DMEM高糖培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素-鏈霉素溶液(美國LifeTechnologies公司);DMSO(美國Sigma公司);96孔板(美國Corning公司);多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekInstruments,USA);生物安全柜(ThermoFisherScientific,USA),CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(ThermoFisherScientific,USA)。細(xì)胞株本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用N2A細(xì)胞株是小鼠源性永生化神經(jīng)元細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)于正常含10%胎牛血清(fetalbovineserum,F(xiàn)BS)的DMEM(GIBCO,USA)的完全培養(yǎng)基中。氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧模型N2A細(xì)胞培養(yǎng)并接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中,進(jìn)行體外氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧模型(oxygen-glucosedeprivation,OGD)的制備,首先將完全培養(yǎng)基換成無糖的DMEM培養(yǎng)基。置入?yún)?shù)預(yù)先設(shè)置好的三氣培養(yǎng)箱(氣體參數(shù)設(shè)置為:1%O2,94%N2,5%CO2),O2濃度降至1.0%時(shí)開始計(jì)時(shí),穩(wěn)定4h后,將Eagles液換成含10%FBSDMEM的完全培養(yǎng)基,并置于正常(氣體參數(shù)設(shè)置為:21%O2,74%N2,5%CO2)的細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分組與給藥培養(yǎng)N2A細(xì)胞并接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中,隨機(jī)分為正常對照組、OGD組、OGD+藥組。將N2A細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucosedeprivation,OGD)4h,OGD完成后換正常培養(yǎng)基時(shí)繼續(xù)給予銀杏內(nèi)酯L,復(fù)糖復(fù)氧20h后檢測細(xì)胞活力。N2A細(xì)胞在正常狀態(tài)下,細(xì)胞透亮,呈類圓形,有突起;OGD1h復(fù)糖復(fù)氧24h后,細(xì)胞胞體增大,突起縮短。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用GraphPadPrism-6.02統(tǒng)計(jì)軟件(GraphPadSoftware,USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和圖表處理。空白組與模型兩組均數(shù)比較采用雙尾t檢驗(yàn),其余各組兩均數(shù)間比較采用單因素方差分析(ANOVA),以Dunnett’spost-hot檢驗(yàn)進(jìn)一步檢測組間顯著性差異。以P<0.05作為具有顯著性差異,P<0.001為具有非常顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:缺血性腦卒中血管堵塞后,神經(jīng)元細(xì)胞會(huì)缺氧損傷,卒中后腦血管再通后,神經(jīng)元細(xì)胞會(huì)復(fù)氧產(chǎn)生再灌注損傷。應(yīng)用體外培養(yǎng)的氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷后的神經(jīng)元細(xì)胞模型,如表2及圖5所示,模型組與空白組細(xì)胞存活率相比具有顯著性差異,說明造模成功(P<0.001)。在氧糖剝奪時(shí)和復(fù)糖復(fù)氧后給予銀杏內(nèi)酯L保護(hù)后,與模型組相比,銀杏內(nèi)酯L給藥20μM、40μM時(shí),神經(jīng)元細(xì)胞存活率較模型組顯著提高(P<0.001)。說明銀杏內(nèi)酯L可有效保護(hù)腦卒中引起的神經(jīng)元細(xì)胞損傷。表2:銀杏內(nèi)酯L抑制氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧模型誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞損傷附圖說明圖1:銀杏總內(nèi)酯的總離子流圖。圖2:銀杏內(nèi)酯L的總離子流圖。圖3:銀杏內(nèi)酯L的二級質(zhì)譜圖。圖4:GL的IC50曲線圖。圖5:GL能抑制氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧模型誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞損傷。圖1的具體解釋:銀杏總內(nèi)酯的總離子流圖。將總內(nèi)酯溶于丙酮中,配制成1mg/ml的溶液,按照上述色譜條件,進(jìn)樣1μl,如圖1。在圖1中,通過與銀杏內(nèi)酯L標(biāo)準(zhǔn)品比對的保留時(shí)間及質(zhì)譜信息可知,銀杏內(nèi)酯L在14.3min出峰,峰很小,幾乎觀察不到。圖2的具體解釋:銀杏內(nèi)酯L的總離子流圖。將分離所得的銀杏內(nèi)酯L標(biāo)準(zhǔn)品溶于丙酮,配成100μg/ml的溶液,按照上述色譜條件,進(jìn)樣1μl,如圖2。在圖2中,銀杏內(nèi)酯L于14.3min出峰。圖3的具體解釋:銀杏內(nèi)酯L的二級質(zhì)譜圖,如圖3。圖4的坐標(biāo)的具體解釋圖4的橫坐標(biāo)的中文含義:銀杏內(nèi)酯L的濃度(μM)的對數(shù)值。圖4的縱坐標(biāo)的中文含義:血小板聚集抑制率,單位(%)。圖5的坐標(biāo)的具體解釋圖5的橫坐標(biāo)的中文含義:給藥濃度(μM)。圖5的縱坐標(biāo)的中文含義:神經(jīng)元細(xì)胞存活率,單位(%)具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明,具體實(shí)施方式不限于實(shí)施例所述。實(shí)施例1一種銀杏內(nèi)酯L的分離制備方法:稱取10g銀杏總內(nèi)酯,選用200-300目硅膠,干法裝柱,稱取銀杏總內(nèi)酯20g,與100目硅膠混勻,干法上樣;選用氯仿-甲醇做為洗脫劑,比例為150∶1,100∶1,50∶1,20∶1遞減,梯度洗脫后,在50∶1時(shí)得到內(nèi)酯L的洗脫液,旋干后得到淡黃色固體粉末,即為銀杏內(nèi)酯L。實(shí)施例2稱取10g銀杏總內(nèi)酯,乙酸乙酯溶解,混合20g硅藻土,拌勻,揮干,研磨,過篩,選用200-300目硅膠,干法裝柱,選擇高50cm,內(nèi)徑6cm的層析柱,柱層析硅膠為500g,石油醚拌勻,待沉降穩(wěn)定后,柱高約35cm,選用石油醚-乙酸乙酯做為洗脫劑,比例為200∶1,100∶1,50∶1,20∶1遞減,每一個(gè)梯度用3倍柱體積的洗脫液洗脫,在20∶1時(shí)得到內(nèi)酯L的洗脫液,旋干后得到淡黃色固體粉末,即為銀杏內(nèi)酯L。實(shí)施例3一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物,取4克精氨酸,加乙醇100ml溶解,加熱至70℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例4.一種銀杏內(nèi)酯L·賴氨酸復(fù)合物,取賴氨酸2.5克,加乙醇20ml溶解,加熱至40℃,10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,過濾,濾液減壓濃縮,回收乙醇,干燥,即得銀杏內(nèi)酯L·賴氨酸復(fù)合物。實(shí)施例5一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物,取葡甲胺4克,加無水乙醇100ml溶解,加熱至70℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,過濾,濾液減壓濃縮,回收乙醇,干燥,即得。實(shí)施例6一種銀杏內(nèi)酯L·組氨酸復(fù)合物,取組氨酸2.0克,加25%乙醇100ml溶解,加熱至90℃,加入10銀杏內(nèi)酯L,攪拌溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例7一種銀杏內(nèi)酯L·丁胺復(fù)合物,取丁胺4克,加25%乙醇100ml溶解,加熱至75℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例8一種銀杏內(nèi)酯L·鹽酸胍復(fù)合物,取鹽酸胍4克,加25%乙醇80ml溶解,加熱至85℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例9一種銀杏內(nèi)酯L·乙醇胺復(fù)合物,取乙醇胺6克,加25%甲醇50ml溶解,加 熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例10一種銀杏內(nèi)酯L·乙二胺復(fù)合物,取乙二胺4克,加80%乙醇20ml溶解,加熱至45℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例11一種銀杏內(nèi)酯L·1,2-乙二胺復(fù)合物,取1,2-乙二胺4克,加80%乙醇20ml溶解,加熱至45℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例12一種銀杏內(nèi)酯L·甲酰胺復(fù)合物,取甲酰胺6克,加25%甲醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例13一種銀杏內(nèi)酯L·二甲基甲酰胺復(fù)合物,取二甲基甲酰胺6克,加10%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例14一種銀杏內(nèi)酯L·羥泛酸復(fù)合物,取羥泛酸6克,加10%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例15一種銀杏內(nèi)酯L·煙酰胺復(fù)合物,取煙酰胺6克,加10%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例16一種銀杏內(nèi)酯L·烷基咪唑復(fù)合物,取烷基咪唑6克,加40%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例17一種銀杏內(nèi)酯L·烷基吡啶復(fù)合物,取烷基吡啶6克,加40%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入10克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例18一種銀杏內(nèi)酯L·烷基三甲基胺鹽復(fù)合物,取烷基三甲基胺鹽2克,加40% 乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入5克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例19一種銀杏內(nèi)酯L·鹽酸硫胺復(fù)合物,取鹽酸硫胺2克,加70%乙醇50ml溶解,加熱至60℃,加入8克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例20一種銀杏內(nèi)酯L·氫氧化鈣復(fù)合物,取氫氧化鈣2克,加水500ml溶解,加熱至60℃,加入8克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例21一種銀杏內(nèi)酯L·氫氧化鋇復(fù)合物,取氫氧化鋇2克,加水500ml溶解,加熱至60℃,加入8克銀杏內(nèi)酯L,攪拌至溶解,濃縮,干燥,即得。實(shí)施例22一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的藥劑:取銀杏內(nèi)酯L溶于少量乙醇;微晶纖維素,甘露醇,羧甲基淀粉鈉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢?,使乙醇全部揮發(fā);2%羥乙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于40℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鈣混勻,灌膠囊。實(shí)施例23一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的藥劑:其制備方法如下:取銀杏內(nèi)酯L溶于少量乙醇;微晶纖維素,乳糖,羥丙基淀粉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢瑁挂掖既繐]發(fā);以2%羥丙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于50℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,壓片。實(shí)施例24一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的膠囊:取銀杏內(nèi)酯L、乙基纖維素、羥丙甲纖維素過60目篩混均,加入8%PVP無水乙醇溶液適量制軟材,過80目篩制粒。40℃烘箱鼓風(fēng)干燥,干顆粒過80目篩整粒,加入硬脂酸鎂,混合均勻,灌裝膠囊。實(shí)施例25一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:將銀杏內(nèi)酯L溶于少量乙醇;糊精,淀粉,羧乙基纖維素鈉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢瑁挂掖既繐]發(fā);以聚維酮溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于60℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干 顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,灌膠囊。實(shí)施例26一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L50g明膠10g大豆卵磷脂90g制備工藝:取銀杏內(nèi)酯L過100目篩,加明膠、大豆軟磷脂,用膠體磨混勻,抽真空脫氣,送入軟膠囊包裝機(jī)壓制。實(shí)施例27一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L20mg3.5%乙醇溶液5.0mg注射用水加至1000.0mL;將銀杏內(nèi)酯L溶于3.5%乙醇溶液,加注射用水調(diào)至總量1000ml,用無菌濾板下襯0.22um微孔濾膜過濾,分裝,即得。實(shí)施例28一種銀杏內(nèi)酯L的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L50.0g葡甲胺20.0gβ-環(huán)糊精130.0g制成5000ml注射液,分裝,凍干,即得;β-環(huán)糊精、葡甲胺加5000ml注射用水溶解,得溶液I,80℃保溫,備用;另取銀杏內(nèi)酯50克加適量丙酮使其溶解,再將其緩緩加入溶液I中進(jìn)行溶解,保溫60分鐘,然后放冷至室溫,濾過,再微孔濾膜過濾,分裝1000支,凍干,即得。凍干工藝為,先-15℃冷凍成型,再-40℃冷凍降溫,冷凍下真空干燥,36小時(shí)后,緩緩升溫,直至25℃封蓋,即得。實(shí)施例29一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的 藥劑:取一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物;微晶纖維素,甘露醇,羧甲基淀粉鈉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢瑁挂掖既繐]發(fā);2%羥乙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于40℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鈣混勻,灌膠囊。實(shí)施例30一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的藥劑:其制備方法如下:取一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物;微晶纖維素,乳糖,羥丙基淀粉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢?,使乙醇全部揮發(fā);以2%羥丙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于50℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,壓片。實(shí)施例31一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的膠囊:取銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物、乙基纖維素、羥丙甲纖維素過60目篩混均,加入8%PVP無水乙醇溶液適量制軟材,過80目篩制粒。40℃烘箱鼓風(fēng)干燥,干顆粒過80目篩整粒,加入硬脂酸鎂,混合均勻,灌裝膠囊。實(shí)施例32一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:將銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物、糊精,淀粉,羧乙基纖維素鈉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢瑁挂掖既繐]發(fā);以聚維酮溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于60℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,灌膠囊。實(shí)施例33一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物50g明膠10g大豆卵磷脂90g制備工藝:取銀杏內(nèi)酯L過100目篩,加明膠、大豆軟磷脂,用膠體磨混勻,抽真空脫氣,送入軟膠囊包裝機(jī)壓制。實(shí)施例34一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制 成:銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物20mg3.5%乙醇溶液5.0mg注射用水加至1000.0mL;將銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物溶于3.5%乙醇溶液,加注射用水調(diào)至總量1000ml,用無菌濾板下襯0.22um微孔濾膜過濾,分裝,即得。實(shí)施例35一種銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物50.0gβ-環(huán)糊精130.0g制成5000ml注射液,分裝,凍干,即得;β-環(huán)糊精加5000ml注射用水溶解,得溶液I,80℃保溫,備用;另取銀杏內(nèi)酯50克加適量丙酮使其溶解,再將其緩緩加入溶液I中進(jìn)行溶解,保溫60分鐘,然后放冷至室溫,濾過,再微孔濾膜過濾,分裝1000支,凍干,即得。凍干工藝為,先-15℃冷凍成型,再-40℃冷凍降溫,冷凍下真空干燥,36小時(shí)后,緩緩升溫,直至25℃封蓋,即得。實(shí)施例36一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的藥劑:取一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物;微晶纖維素,甘露醇,羧甲基淀粉鈉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢?,使乙醇全部揮 發(fā);2%羥乙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于40℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鈣混勻,灌膠囊。實(shí)施例37一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的藥劑:其制備方法如下:取一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物;微晶纖維素,乳糖,羥丙基淀粉分別過100目篩混合均勻,加入銀杏內(nèi)酯L乙醇溶液并充分?jǐn)嚢?,使乙醇全部揮發(fā);以2%羥丙基甲基纖維素溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于50℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,壓片。實(shí)施例38一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成的膠囊:取銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物、乙基纖維素、羥丙甲纖維素過60目篩混均,加入8%PVP無水乙醇溶液適量制軟材,過80目篩制粒。40℃烘箱鼓風(fēng)干燥,干顆粒過80目篩整粒,加入硬脂酸鎂,混合均勻,灌裝膠囊。實(shí)施例39一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:將銀杏內(nèi)酯L·葡甲胺復(fù)合物、糊精,淀粉,羧乙基纖維素鈉分別過100目篩混合均勻,加入乙醇溶液并充分?jǐn)嚢瑁挂掖既繐]發(fā);以聚維酮溶液為粘合劑制軟材,過80目篩制顆粒,濕顆粒于60℃烘箱鼓風(fēng)干燥;干顆粒過80目篩整粒,與硬脂酸鎂混勻,灌膠囊。實(shí)施例40一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物50g明膠10g大豆卵磷脂90g制備工藝:取銀杏內(nèi)酯L精氨酸復(fù)合物過100目篩,加明膠、大豆軟磷脂,用膠體磨混勻,抽真空脫氣,送入軟膠囊包裝機(jī)壓制。實(shí)施例41一種銀銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物20mg3.5%乙醇溶液5.0mg注射用水加至1000.0mL;將銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物溶于3.5%乙醇溶液,加注射用水調(diào)至總量1000ml,用無菌濾板下襯0.22um微孔濾膜過濾,分裝,即得。實(shí)施例42一種銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物的藥物制劑,它是由以下重量配比的原料制成:銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物50.0gβ-環(huán)糊精130.0g制成5000m1注射液,分裝,凍干,即得;β-環(huán)糊精、銀杏內(nèi)酯L·精氨酸復(fù)合物加5000ml注射用水溶解,得溶液I,80℃保溫,備用;另取銀杏內(nèi)酯50克加適量丙酮使其溶解,再將其緩緩加入溶液I中進(jìn)行溶解,保溫60分鐘,然后放冷至室溫,濾過,再微孔濾膜過濾,分裝1000支,凍干,即得。凍干工藝為,先-15℃冷凍成型,再-40℃冷凍降溫,冷凍下真空干燥,36小時(shí)后,緩緩升溫,直至25℃封蓋,即得。實(shí)施例43將銀杏內(nèi)酯L用乙醇-水(8∶2)加熱、攪拌溶解,放冷析晶,濾過,沉淀用純化水洗滌,沉淀干燥恒重,最終得到高純度的銀杏內(nèi)酯L,HLPC分析。當(dāng)前第1頁1 2 3