一種羅布麻葉提取物的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種羅布麻葉提取物的制備方法及應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明的目的是在羅布麻葉中提高槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷和槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%提取含量并在抑郁癥藥物中應(yīng)用的羅布麻葉提取物的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明提取物總黃酮含量為58~78%；其中所含黃酮成分包括：槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷5.0~25%、槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%、蘆丁0.5~20%、金絲桃苷5.0~25%、異槲皮素5.0~20%、槲皮素2.0~10%和山奈酚2.0~10%，其他黃酮類成分余量。本發(fā)明方便、高效、易于操作，且成本低廉，可滿足醫(yī)藥、食品領(lǐng)域的開發(fā)和利用，應(yīng)用、開發(fā)價(jià)值極大。
【專利說明】_種羅布麻葉提取物的制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 中藥羅布麻葉是一味傳統(tǒng)的平肝息風(fēng)藥，具有平肝安神、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗的作 用，現(xiàn)代藥理研宄發(fā)現(xiàn)其還具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化和肝保護(hù)等廣泛的藥理作用。近年 來，"羅布麻茶"等商品在市場上大量出現(xiàn)，臨床上常用于治療高血壓或輔助降血壓等，其有 效部位為黃酮類化合物。由于常用提取方法諸如"醇提一水沉"或"水提一醇沉"等提取羅 布麻葉時(shí)，由于受到植物細(xì)胞壁的阻擋，細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分較難被水或乙醇溶液提取出，此 夕卜，由于常用提取方法中蘆丁的含量很高，而槲皮素- 3-0- β - D-葡萄糖基-β - D-葡萄糖苷、篇蓄苷、槲皮素- 3-0- β -D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷、異槲皮素、槲皮素和 山奈酚等成分含量很低。因此，找到一種方便、且能提高槲皮素- 3-0- β -D -葡萄糖 基-β - D -葡萄糖苷、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷、異槲皮素、槲皮 素和山奈酚的提取方法具有重要研宄價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。
[0003] 目前常采用的制備羅布麻葉總黃酮的方法均為直接提取羅布麻葉，再經(jīng)純化 制得羅布麻葉總黃酮。李青山在發(fā)明專利《一種羅布麻提取物的提取方法》（申請?zhí)?200410064551. 0);《羅布麻有效部位的提取分離方法》（申請?zhí)?2110431. X)提出的羅布麻 有效部位即總黃酮的提取分離方法；在上述專利中，應(yīng)用常規(guī)提取純化方法對(duì)羅布麻葉中 的總黃酮進(jìn)行分離提取，具有方便快速等優(yōu)勢。在應(yīng)用上，周亞球和王先榮在發(fā)明專利《羅 布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、其制備及應(yīng)用》（申請?zhí)?00510123187)提出的羅布麻 屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、其制備及應(yīng)用；楊新波在發(fā)明專利《一種羅布麻提取物的制 備方法及其藥物制劑與肝病用途》（申請?zhí)?00610083809. 0)和發(fā)明專利《一種羅布麻提取 物的制備方法及其藥物制劑與應(yīng)用》（申請?zhí)?00610083809)提出的一種羅布麻提取物的 制備方法及其藥物制劑與治療肝病、抗衰老、抗腦缺血、促進(jìn)四氧嘧啶小鼠血糖及腎功能的 用途。中國專利《一種羅布麻葉提取物的制備方法》（申請?zhí)枺?00910067196. 5)，涉及羅布 麻葉的酸化乙醇提取方法，用硫酸或磷酸或鹽酸或醋酸調(diào)節(jié)提取液的酸度，可以提高抗抑 郁化合物的含量。其提取液的pH范圍為3~6 ;高效液相色譜的檢測波長為350nm ;沒有對(duì) 化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的定量分析。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是在羅布麻葉中提尚懈皮素 β - D-匍萄糖基-β - D-葡萄糖苷和槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷0. 5~10%提取含量并在抑郁癥藥物中應(yīng) 用的羅布麻葉提取物的制備方法及應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提取物總黃酮含量為58~78% ;其中所含黃酮成分包括：槲皮素-3 - 0-β - D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷5. 0~25%、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷 0. 5~10%、蘆丁 0. 5~20%、金絲桃苷5. 0~25%、異槲皮素5. 0~20%、槲皮素2. 0~10%和山奈酚 2. 0~10%，其他黃酮類成分余量。
[0006] 本發(fā)明的制備方法是： a、 將干燥的羅布麻葉粉碎過20~50目篩成藥粉，用5~20倍量的20?70%乙醇水溶液 提取，在提取液中加入硫酸或鹽酸，使上述酸的pH值為2. 5至3. 8,提取溫度為50~300 °C， 每次提取時(shí)間為〇. 5~2小時(shí)，同法提取1~3次，合并提取液，濾過，回收乙醇后將合并后的提 取溶液濃縮至原來體積的1/4~1/10,得到濃縮液，在提取過程中羅布麻葉與乙醇水溶液的 料液比為1 :1〇~1 :20 ; b、 將步驟a濃縮液靜止3~24小時(shí)，過濾，濾液以10000轉(zhuǎn)/分離心分離，取離心后所得 上清液上大孔樹脂柱，所述的干燥的大孔樹脂質(zhì)量與羅布麻葉的質(zhì)量比為1 :〇. 5~2，先用 水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用體積比為40。/『60%的乙 醇水溶液洗脫，洗脫至乙醇洗脫液無色澄清透明； c、 收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，得到干浸膏狀的羅布麻葉總黃酮含量 58-78%〇
[0007] 本發(fā)明步驟a中溶液浸濕酸化，時(shí)間為3~6小時(shí)。
[0008] 本發(fā)明步驟b中提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度40~80 °C。
[0009] 本發(fā)明步驟b中大孔樹脂是指DlOl或D130或AB8或NKA。
[0010] 本發(fā)明以羅布麻葉總黃酮提取物為藥物有效成分的中藥制劑，加入藥用輔料后制 成的片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、混懸劑。
[0011] 本發(fā)明的羅布麻葉總黃酮提取物作為藥物在治療抗抑郁疾病的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是： 1、本發(fā)明提供了一種羅布麻提取物的制備方法，得到干浸膏狀的一種藥材提取物。提 取物的重量為提取用羅布麻重量的6. 0~6. 8%，經(jīng)過紫外-可見分光光度計(jì)檢測得到干浸膏 狀的一種羅布麻葉提取物中總黃酮含量占提取物的58~78%。經(jīng)高效液相色譜檢測證明， 該提取方法獲得的羅布麻葉總黃酮中懈皮素 _3-0- β - D-匍萄糖基-β - D -匍萄 糖苷、槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷的含量比一般提取方法中增加了 5~30倍。此方法方便、高效、易于操作，且成本低廉，可滿足醫(yī)藥、食品領(lǐng)域的開發(fā)和利用， 應(yīng)用、開發(fā)價(jià)值極大。
[0013] 2、本發(fā)明羅布麻葉提取物以總黃酮含量、懈皮素-3 - β - D -匍萄糖基-β - D -葡萄糖苷、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷的含量對(duì)其進(jìn)行確切 的表征，以這一方式進(jìn)行表征的黃酮類物質(zhì)以及羅布麻葉總黃酮提取物具有顯著的抗抑郁 作用。
[0014] 3、本發(fā)明采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)和高效液相色譜法，對(duì)提取物中槲皮素-3 - β -D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷的黃 酮成分進(jìn)行明確定性和定量。
[0015] 4、本發(fā)明羅布麻葉提取物是以酸性乙醇的提取方法從羅布麻葉中提取所得，經(jīng)動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所得提取物可以縮短懸尾實(shí)驗(yàn)中小鼠的不動(dòng)時(shí)間及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中小 鼠的不動(dòng)時(shí)間；經(jīng)動(dòng)物體外活性評(píng)價(jià)試驗(yàn)證明，本發(fā)明所得提取物可以有效地保護(hù)皮質(zhì)酮 損傷的PC12細(xì)胞，表明其對(duì)于抑郁癥有可靠的療效，其抗抑郁效果可以與目前抗抑郁效果 較好的鹽酸氟西汀相媲美，由于本發(fā)明所得羅布麻葉總黃酮為中藥提取物，其副作用小，具 有廣闊的應(yīng)用前景?？蓱?yīng)用于制備及開發(fā)抗抑郁制劑。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1是羅布麻葉提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響； 圖2是羅布麻葉提取物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的影響； 圖3是羅布麻葉提取物對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響； 圖4是實(shí)施例1常規(guī)方法提取所得到的羅布麻葉黃酮類化合物的色譜圖； 圖5是本發(fā)明實(shí)施例2提取得到羅布麻葉總黃酮的色譜圖； 圖6是本發(fā)明實(shí)施例3提取得到羅布麻葉總黃酮的色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 本發(fā)明提取物總黃酮含量為58~78% ;其中所含黃酮成分包括：槲皮素-3 - 0-β - D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷5. 0~25%、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷 0. 5~10%、蘆丁 0. 5~20%、金絲桃苷5. 0~25%、異槲皮素5. 0~20%、槲皮素2. 0~10%和山奈酚 2. 0~10%，其他黃酮類成分余量。
[0018] 本發(fā)明的制備方法是： a、 將干燥的羅布麻葉粉碎過20~50目篩成藥粉，用5~20倍量的20?70%乙醇水溶液 提取，在提取液中加入硫酸或鹽酸，使上述酸的pH值為2. 5至3. 8,提取溫度為50~300 °C， 每次提取時(shí)間為〇. 5~2小時(shí)，同法提取1~3次，合并提取液，濾過，回收乙醇后將合并后的提 取溶液濃縮至原來體積的1/4~1/10,得到濃縮液，在提取過程中羅布麻葉與乙醇水溶液的 料液比為1 :1〇~1 :20 ; b、 將步驟a濃縮液靜止3~24小時(shí)，過濾，濾液以10000轉(zhuǎn)/分離心分離，取離心后所得 上清液上大孔樹脂柱，所述的干燥的大孔樹脂質(zhì)量與羅布麻葉的質(zhì)量比為1 :〇. 5~2，先用 水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用體積比為40。/『60%的乙 醇水溶液洗脫，洗脫至乙醇洗脫液無色澄清透明； c、 收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，得到干浸膏狀的羅布麻葉總黃酮含量 58-78%〇
[0019] 本發(fā)明步驟a中溶液浸濕酸化，時(shí)間為3~6小時(shí)。
[0020] 本發(fā)明步驟b中提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度40~80 °C。
[0021] 本發(fā)明步驟b中大孔樹脂是指DlOl或D130或AB8或NKA。
[0022] 本發(fā)明以羅布麻葉總黃酮提取物為藥物有效成分的中藥制劑，加入藥用輔料后制 成的片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、混懸劑。
[0023] 本發(fā)明的羅布麻葉總黃酮提取物作為藥物在治療抗抑郁疾病的應(yīng)用。
[0024] 現(xiàn)有技術(shù)采用試劑對(duì)原材料的固有成分進(jìn)行提取，并不能增加槲皮素-3- 0-β - D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷 的含量。應(yīng)用常規(guī)提取法提取羅布麻葉時(shí)，上述成分含量相對(duì)較低。
[0025] (一）利用本發(fā)明工藝得到的羅布麻葉總黃酮提取物的總黃酮含量及各組成成 分含量測定方法為： 1、羅布麻葉總黃酮提取物干燥后，總黃酮含量的測定采用NaNO2 - Al (NO2) 3 - NaOH絡(luò)合 比色法進(jìn)行測定，本品含總黃酮（以金絲桃苷計(jì)）為58~78%。
[0026] 2、干浸膏狀羅布麻葉總黃酮提取物，組成成分：槲皮素-3 - β - D -葡萄糖 基-β - D -葡萄糖苷、槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷、異槲皮素、槲皮 素和山奈酚的成分鑒別采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)；含量測定采用高效液相色譜法。
[0027] (二）選用皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞模型和小鼠行為絕望模型，評(píng)價(jià)羅布麻葉總黃 酮及各組分的抗抑郁活性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)的有效組分可應(yīng)用于制備及開發(fā)抗抑郁制劑。
[0028] 本發(fā)明選取1種經(jīng)典的細(xì)胞篩選實(shí)驗(yàn)和3種經(jīng)典的動(dòng)物抑郁行為實(shí)驗(yàn)，分別是皮 質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)、小鼠懸尾試驗(yàn)和大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)，結(jié)合 排除抗抑郁藥假陽性的小鼠開場活動(dòng)試驗(yàn)，從而綜合評(píng)價(jià)羅布麻葉總黃酮的抗抑郁作用。
[0029] 其中，小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)是將小鼠放入透明圓柱玻璃水缸中，小鼠會(huì)在水里掙扎 試圖逃脫，努力無效之后會(huì)放棄掙扎而漂浮在水面上呈不動(dòng)的"絕望"狀態(tài)，而抗抑郁藥物 可以減少小鼠的不動(dòng)時(shí)間，進(jìn)而提尚對(duì)應(yīng)激的耐受性。
[0030] 由小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)而衍生出小鼠懸尾試驗(yàn)指的是將小鼠尾部懸掛，此時(shí)小鼠會(huì) 努力掙扎試圖逃脫，努力無效后會(huì)放棄掙扎呈不動(dòng)的"絕望"狀態(tài)，而抗抑郁藥物可以減少 小鼠的不動(dòng)時(shí)間，進(jìn)而提尚對(duì)應(yīng)激的耐受性。
[0031] 實(shí)施例1 (現(xiàn)有方法提?。?將羅布麻葉藥材粉碎，稱取100 g，置提取容器中，加入IOOOml體積比為60%乙醇水溶 液，用100 °C的溫度提取，提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至原來體積的 1/5,濃縮液靜止10小時(shí)，上清液上100 g干燥的大孔樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至大孔樹脂 柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用體積比為50%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫至乙 醇溶液無色澄清透明，約5倍柱體積，收集乙醇水溶液的洗脫液，回收乙醇，干燥，得到干浸 膏狀的一種羅布麻葉提取物。提取物的重量為提取用羅布麻重量的6. 5%，經(jīng)過紫外-可見 分光光度計(jì)檢測得到干浸膏狀的一種羅布麻葉提取物總黃酮含量為61%。
[0032] 圖4為一般提取方法即實(shí)施例1所得到的羅布麻葉黃酮類化合物的色譜圖，該色 譜圖中峰1為槲皮素-3- β - D-葡萄糖基-β - D-葡萄糖苷，峰2為槲皮素- 3- β - D-葡萄糖醛酸苷，峰3為蘆丁，峰4為金絲桃苷，峰5為異槲皮素，峰6為槲皮素，峰 7為山奈酚。色譜圖中蘆丁的含量相對(duì)較高；異槲皮素-3 - β - D -葡萄糖基-β -D -葡萄糖苷和槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷的含量很低。
[0033] 實(shí)施例2 將羅布麻葉藥材粉碎，稱取200g，置提取容器中，加入2000ml體積比為60%乙醇水溶 液，在提取液中加入鹽酸，使鹽酸pH值為2. 5,用150°C的溫度提取，提取3次，每次1. 5小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至原來體積的1/5,濃縮液靜止12小時(shí)，上清液上200g干燥 的大孔樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用體 積比為60%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫至乙醇溶液無色澄清透明，約5倍柱體積，收集乙 醇水溶液的洗脫液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏狀的一種羅布麻葉提取物。提取物的重量 為提取用羅布麻重量的6. 8%，經(jīng)過紫外-可見分光光度計(jì)檢測得到干浸膏狀的一種羅布麻 葉提取物總黃酮含量為64%。
[0034] 圖5為本發(fā)明提供的提取方法實(shí)施例2提取得到羅布麻葉總黃酮的色譜圖。色譜 圖中峰1?7的成分同圖1。從圖2可以看出色譜峰3蘆丁含量降低，槲皮素-3-0- β - D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷，槲皮素-3 - β - D -葡萄糖醛酸苷，金絲桃苷，異槲 皮素，槲皮素和山奈酚的含量顯著提高。
[0035] 實(shí)施例3 將羅布麻葉藥材粉碎，稱取l〇〇g，置提取容器中，加入IOOOml體積比為60%乙醇水溶 液，在提取液中加入鹽酸，使鹽酸pH值為2. 7,用150°C的溫度提取，提取3次，每次1. 5小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至原來體積的1/5,濃縮液靜止12小時(shí)，上清液上IOOg干燥 的大孔樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用體 積比為60%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫至乙醇溶液無色澄清透明，約5倍柱體積，收集乙 醇水溶液的洗脫液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏狀的一種羅布麻葉提取物。提取物的重量 為提取用羅布麻重量的6. 8%，經(jīng)過紫外-可見分光光度計(jì)檢測得到干浸膏狀的一種羅布麻 葉提取物總黃酮含量為63%。
[0036] 圖6為本發(fā)明提供的提取方法實(shí)施例3提取得到羅布麻葉總黃酮的色譜圖。色譜 圖中峰丨? 7的成分同圖丨。此外，峰8為篇蓄苷。從圖3可以看出蘆丁含量進(jìn)一步降低， 槲皮素-3 - β - D -葡萄糖基-β - D -葡萄糖苷的含量顯著升高；并且生成了篇蓄 苷。但是，與圖2相比，槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的含量有所下降。
[0037] 實(shí)施例4 將羅布麻葉藥材粉碎，稱取150 g，置提取容器中，加入2000ml體積比為70%乙醇水溶 液，在提取液中加入硫酸，使硫酸pH值為2. 9,用140 °C的溫度提取，提取3次，每次1小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至原來體積的1/4,濃縮液靜止12小時(shí)，上清液上150 g干 燥的大孔樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用 體積比為50%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫至乙醇溶液無色澄清透明，約5倍柱體積，收集 乙醇水溶液的洗脫液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏狀的一種羅布麻葉提取物。提取物的重 量為提取用羅布麻重量的6. 3%，經(jīng)過紫外-可見分光光度計(jì)檢測得到干浸膏狀的一種羅布 麻葉提取物總黃酮含量為62%。
[0038] 實(shí)施例5 將羅布麻葉藥材粉碎，稱取150 g，置提取容器中，加入2000ml體積比為70%乙醇水溶 液，在提取液中加入硫酸，使硫酸pH值為3. 8,用140 °C的溫度提取，提取3次，每次1小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至原來體積的1/4,濃縮液靜止12小時(shí)，上清液上150 g干 燥的大孔樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，PH值為7,再用 體積比為50%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫至乙醇溶液無色澄清透明，約5倍柱體積，收集 乙醇水溶液的洗脫液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏狀的一種羅布麻葉提取物。提取物的重 量為提取用羅布麻重量的6. 3%，經(jīng)過紫外-可見分光光度計(jì)檢測得到干浸膏狀的一種羅布 麻葉提取物總黃酮含量為62%。
[0039] 活性試驗(yàn)： 1.在96孔板上培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞瘤株P(guān)Cl2細(xì)胞，待細(xì)胞長滿孔底后，吸去細(xì)胞液，換上含 有相應(yīng)濃度藥物及2X 10_4mol · Γ1皮質(zhì)酮的DMEM(對(duì)照組不含任何藥品），37 °C 5% CO2 培養(yǎng)48 h。吸去培養(yǎng)液，用D-Hanks液洗2遍，每孔加入含0. 5 g·!/1 MTT的無血清 DMEM培養(yǎng)4h后吸去培養(yǎng)液，每孔加入10%十二烷基硫酸鈉100 μ L，待藍(lán)色顆粒完全溶解 (約12?16 h)，用紫外可見分光光度計(jì)測定標(biāo)本在570 nm波長處的吸光度值（A57tlnm),用 于定量反映活細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增值率（RGR)，RGR= (A57tl M樣品組）/ (A 57(ι Μ對(duì)照組）。
[0040] 2.總黃酮及各單體化合物的抗抑郁活性評(píng)價(jià)：采用pcl2細(xì)胞抗抑郁實(shí)驗(yàn)，對(duì)羅布 麻葉總黃酮及各單體化合物和兩個(gè)混合物組分的抗抑郁活性進(jìn)行了比較研宄，本研宄對(duì)各 待測樣品均設(shè)置三個(gè)劑量組，分別為10 μ mol · L' 50 μ mol · Γ1和120 μ mol · L ―1，陰性對(duì) 照組的細(xì)胞相對(duì)增值率（RGR)為100%，皮質(zhì)酮組作為陽性對(duì)照，結(jié)果表明，皮質(zhì)酮組的RGR 為30. 33%，對(duì)pcl2細(xì)胞呈現(xiàn)較明顯的損傷行為。用本發(fā)明方法所獲得的羅布麻葉總黃酮及 各單體化合物和混合組分對(duì)高濃度皮質(zhì)酮損傷的pcl2細(xì)胞均有較明顯的保護(hù)作用。結(jié)果 如表1所示： 表1羅布麻葉黃酮及各單體化合物對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用（ X 土 S，η= 6 )

【權(quán)利要求】
1. 一種羅布麻葉提取物，其特征在于：提取物總黃酮含量為58~78% ;其中所含黃酮成 分包括：槲皮素_ 3 - 0 - D -葡萄糖基-0 - D -葡萄糖苷5. 0~25%、槲皮素-3 - 0- 0. D-葡萄糖醛酸苷0. 5~10%、蘆丁 0. 5~20%、金絲桃苷5. 0~25%、異槲皮素5. 0~20%、槲皮 素2. 0~10%和山奈酚2. 0~10%，其他黃酮類成分余量。
2. 權(quán)利要求1所述的羅布麻葉提取物的制備方法，其特征在于： a、 將干燥的羅布麻葉粉碎過20~50目篩成藥粉，用5~20倍量的20?70%乙醇水溶液 提取，在提取液中加入硫酸或鹽酸，使上述酸的pH值為2. 5至3. 8,提取溫度為50~300 °C， 每次提取時(shí)間為〇. 5~2小時(shí)，同法提取1~3次，合并提取液，濾過，回收乙醇后將合并后的提 取溶液濃縮至原來體積的1/4~1/10,得到濃縮液，在提取過程中羅布麻葉與乙醇水溶液的 料液比為1 :1〇~1 :20 ; b、 將步驟a濃縮液靜止3~24小時(shí)，過濾，濾液以10000轉(zhuǎn)/分離心分離，取離心后所得 上清液上大孔樹脂柱，所述的干燥的大孔樹脂質(zhì)量與羅布麻葉的質(zhì)量比為1 :〇. 5~2，先用 水洗脫，洗脫至大孔樹脂柱的流出液無色澄清透明，pH值為7,再用體積比為40。/『60%的乙 醇水溶液洗脫，洗脫至乙醇洗脫液無色澄清透明； c、 收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，得到干浸膏狀的羅布麻葉總黃酮含量 58-78%〇
3. 權(quán)利要求2所述的羅布麻葉提取物的制備方法，其特征在于：步驟a中溶液浸濕酸 化，時(shí)間為3~6小時(shí)。
4. 權(quán)利要求2所述的羅布麻葉提取物的制備方法，其特征在于：步驟b中提取液采用 真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度40~80 °C。
5. 權(quán)利要求2所述的羅布麻葉提取物的制備方法，其特征在于：步驟b中大孔樹脂是 指 D101 或 D130 或 AB8 或 NKA。
6. 權(quán)利要求1所述的羅布麻葉提取物，其特征在于：以羅布麻葉總黃酮提取物為藥物 有效成分的中藥制劑，加入藥用輔料后制成的片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、混懸劑。
7. 權(quán)利要求1所述羅布麻葉提取物作為藥物在治療抗抑郁疾病的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P25/24GK104490961SQ201410815900
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月25日
【發(fā)明者】劉春明, 李賽男, 張語遲, 唐英 申請人:長春師范大學(xué)