一種甘草黃酮的提取方法及其在制備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了從甘草中分離得到的甘草黃酮的方法及在治療糖尿病引起的肝腎損傷的應(yīng)用，屬于中草藥的提取應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明將甘草飲片浸入95%乙醇回流提取3次，每次1.5~2.5h，合并濾液，回收溶劑，得浸膏；再將所得浸膏通過(guò)30~60目聚酰胺柱層析，依次用水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應(yīng)檢測(cè)，合并鑒別反應(yīng)顯紅色或橙紅色的層析液，經(jīng)濃縮和冷凍干燥，得甘草黃酮。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明方法得到的甘草黃酮對(duì)糖尿病引起的肝腎臟損傷均具有較好的保護(hù)和修復(fù)作用，基于此，本發(fā)明以甘草黃酮為活性成分，按藥劑學(xué)的常規(guī)工藝和輔料制備成內(nèi)服或注射制劑，為傳統(tǒng)中藥治療肝腎損傷開(kāi)辟了一條新途徑。
【專利說(shuō)明】一種甘草黃酮的提取方法及其在制備治療糖尿病引起的肝 腎損傷藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種甘草黃酮的提取方法；本發(fā)明同時(shí)還涉及以所提取的甘草黃酮為 活性成分制備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物的應(yīng)用，屬于中草藥的提取應(yīng)用領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 中藥甘草為豆科植物甘草Fisch.)，脹果甘草 Bat.)或光果甘草L.)的干燥根及根莖。 我國(guó)是世界上認(rèn)識(shí)和研究甘草最早的國(guó)家，東漢的《神農(nóng)本草經(jīng)》中即有記載。其味甘，性 平，入心、肺、脾、胃經(jīng)。用于治療脾胃虛弱、中氣不足、咳嗽氣喘、癰疽瘡毒、腹中攣及作痛 等病癥和緩和藥物烈性、解藥毒?？茖W(xué)研究實(shí)驗(yàn)表明：甘草中富含甘草酸、甘草次酸、黃酮、 皂苷、生物堿和氨基酸等成分，具有抗病毒、抗菌、抗?jié)儭⒖寡趸?、抗腫瘤、解毒、保肝等功 效。近年來(lái)，隨著對(duì)甘草藥理作用的深入研究，表明甘草中的黃酮類成分具有抗病毒、抗菌、 抗?jié)儭⒖寡?、降血脂、?zhèn)痛等作用，是一類非常有效的活性成分，已成為中藥甘草研究的熱 點(diǎn)。對(duì)甘草黃酮類成分，常用的方法是甘草用乙醇提取，濃縮至干，用熱水溶解后依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液用堿液萃取，再將堿水提取液酸化，乙酸乙酯萃取 后減壓濃縮而得總黃酮提取物。該方法的不足之處是提取步驟復(fù)雜繁瑣，成本較高。
[0003] 文獻(xiàn)報(bào)道，甘草中的活性物質(zhì)對(duì)四氯化碳及化學(xué)致癌劑甲基偶氮苯所致的肝損傷 和肝癌有明顯的保護(hù)作用。馬濤等(沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002, 19 (4) : 275-277.)通過(guò)對(duì)大 鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甘草的水提取物對(duì)農(nóng)藥五氯硝基苯造成的肝損傷具有保護(hù)作用。王根生等(藥 學(xué)學(xué)報(bào)，1993，28(8) :572-576.)報(bào)道甘草黃酮可以明顯抑制小鼠肝臟MDA增高和谷胱甘 肽的消耗，并能抑制肝臟組織脂質(zhì)過(guò)氧化、提高小鼠肝臟SOD活性，并推測(cè)其保肝作用可能 與其抗脂質(zhì)過(guò)氧化的作用有關(guān)。但是，目前并未見(jiàn)甘草黃酮對(duì)糖尿病造成的肝腎損傷具有 保護(hù)作用的文獻(xiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單、成本低的提取活性甘草黃酮的方法； 本發(fā)明的另一目的是提供一種甘草黃酮新的醫(yī)藥活性--對(duì)糖尿病造成的肝腎損傷 具有保護(hù)作用； 本發(fā)明還有一個(gè)目的，提供一種用于治療糖尿病造成的肝腎損傷的制劑。
[0005] 一、甘草黃酮的提取 本發(fā)明甘草黃酮的提取方法：取甘草飲片，浸入95%乙醇(甘草與95%乙醇的體積比為 1:4)回流提取3次，每次I. 5~2. 5h，合并濾液，回收溶劑，得浸膏；將所得浸膏通過(guò)3(Γ60目 聚酰胺柱層析，依次用水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應(yīng)檢測(cè)，合并鑒別反應(yīng)顯紅 色或橙紅色的層析液，經(jīng)濃縮和冷凍干燥，得甘草黃酮。
[0006] 二、甘草黃酮對(duì)糖尿病造成的肝腎損傷的保護(hù) 1.甘草黃酮對(duì)糖尿病大鼠肝臟的保護(hù) 作為體內(nèi)重要的糖代謝調(diào)節(jié)器官，肝臟在糖尿病狀態(tài)下的損害情況一直受到人們的重 視，糖尿病性肝損害是常見(jiàn)的糖尿病慢性并發(fā)癥之一。血清中ALT、AST反映肝細(xì)胞變性、壞 死程度，也是檢查肝功能損害最常用、最敏感的指標(biāo)。
[0007] 1. 1實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠動(dòng)物模型的建立 取健康Wistar大鼠，體重18(T220g，雌雄各半，適應(yīng)環(huán)境3天后，于實(shí)驗(yàn)前禁食不 禁水12h，腹腔注射四氧嘧啶溶液200mg/kg，用生理鹽水新鮮配制，使四氧嘧啶的濃度為 2. 5%。注射后72h，禁食12h，斷尾取血，測(cè)定空腹血糖值，選取空腹血糖值 在16. 7mmol/L以上的為糖尿病大鼠。
[0008] 1.2分組與給藥 將糖尿病大鼠隨機(jī)分為3組，即模型對(duì)照組（Diabetic)，甘草黃酮組 (LFT+Acarbose)(70mg/kg)和拜糖蘋(píng)組（Diabetic+Acarbose)(劑量為 17. 5mg/kg)，每組 10 只，并設(shè)正常對(duì)照組10只（Control)。各組大鼠均于早晨8時(shí)灌胃給藥，容量為lml/lOOg 體重，每日1次，共14天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給等容量的蒸餾水。
[0009] 1.3實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 按前述分組與給藥進(jìn)行試驗(yàn)，分別于給藥〇w、lw、2w的末次給藥Ih后（采血前禁食 12h)，乙醚麻醉大鼠，心臟采血，離心分離血清。于自動(dòng)生化儀中分別測(cè)谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST) 及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT);末次采血結(jié)束后，取肝臟和腎臟，臟器一半固定于4%甲醛溶液中，用 于病理形態(tài)學(xué)分析。
[0010] 1.4試驗(yàn)結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)0天時(shí)糖尿病大鼠血清AST、ALT都顯著高于正常對(duì)照組，說(shuō)明肝臟受到嚴(yán)重 損傷。表1和圖1顯示了大鼠血清ALT的含量：給藥后，LFT組的血清ALT含量顯著降低 (P〈〇. 05)，與糖尿病模型組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p〈0. 005);并且在給藥的第7天 和第14天，均有顯著性差異（P〈0. 005)，說(shuō)明甘草黃酮對(duì)糖尿病大鼠具有較好的降低肝臟 ALT的作用。

【權(quán)利要求】
1. 一種甘草黃酮的提取方法，是將甘草飲片浸入95%乙醇回流提取3次，每次 1. 5~2. 5h，合并濾液，回收溶劑，得浸膏；再將所得浸膏通過(guò)3(Γ60目聚酰胺柱層析，依次用 水、95%乙醇洗脫；層析液以鹽酸-鎂粉反應(yīng)檢測(cè)，合并鑒別反應(yīng)顯紅色或橙紅色的層析液， 經(jīng)濃縮和冷凍干燥，得甘草黃酮。
2. 如權(quán)利要求1所述方法提取的甘草黃酮在制備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物中 的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求2所述甘草黃酮在制備治療糖尿病引起的肝腎損傷藥物的應(yīng)用，其特征 在于：以甘草黃酮為活性成分，按藥劑學(xué)的常規(guī)工藝和輔料制備成內(nèi)服或注射制劑。
【文檔編號(hào)】A61P13/12GK104288218SQ201410595491
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】王一杰, 倪京滿 申請(qǐng)人:王一杰, 倪京滿