專利名稱：甘草黃酮在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘草黃酮在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
炎性腸病(Inflammatory bowel disease IBD)是一種困擾醫(yī)生和科學(xué)家多年的頑疾，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克隆氏病(Crohn’s disease，CD)兩種，前者是一種慢性非特異性結(jié)腸炎癥，重者發(fā)生潰瘍甚至癌變，病變主要累及結(jié)腸粘膜及粘膜下層，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛和粘液膿血便，后者病變可累及到胃腸道各部位，是一種慢性肉芽舯性炎癥，呈階梯性分布，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、瘺管和不同程度的全身癥狀。第十屆歐洲胃腸病學(xué)年會(huì)上，歐洲克隆氏病與炎性腸病聯(lián)合會(huì)主席RodMitchell指出，目前在歐洲有100萬(wàn)IBD患者，在西方國(guó)家大部分地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率穩(wěn)定，最高到10例/10萬(wàn)人口。而克隆氏病的發(fā)病率在過(guò)去30年升高了600％，我國(guó)發(fā)病率也呈明顯的上升趨勢(shì)，此病癥可導(dǎo)致患者發(fā)生結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高，嚴(yán)重威脅人類的健康。盡管研究多年，人類目前仍然無(wú)法完全治愈該病。
目前常用的治療藥物為(1)氨基水楊酸類早在40年代就開(kāi)始于IBD的治療，效果較好的是水楊酸偶氮磺胺吡啶，但可造成急慢性腎中毒，副反應(yīng)多，長(zhǎng)期用藥忠者難以耐受；(2)皮質(zhì)類固醇類1955年，Truelove應(yīng)用強(qiáng)的松龍治療UC取得良效，至今皮質(zhì)類固醇類仍為治療IBD的主藥，對(duì)控制發(fā)作特別有效，對(duì)中重度患者和活動(dòng)期病例亦然，但有明顯的副作用，不易長(zhǎng)期使用，停藥后易復(fù)發(fā)；(3)免疫抑制劑臨床應(yīng)用免疫抑制劑始于1962年，目前已成為治療IBD的一種重要方法，常用藥物包括嘌呤類藥物、氨甲蝶呤及環(huán)孢菌素等，但可產(chǎn)生包括過(guò)敏及抑制造血等嚴(yán)重的不良反應(yīng)?？梢?jiàn)，研制新的安全、有效藥物，對(duì)人類最終攻克這一頑癥，有著重要的意義。我國(guó)傳統(tǒng)的天然藥物歷經(jīng)數(shù)千年臨床，為尋找有效藥物提供了豐富的藥源，因此從天然，傳統(tǒng)藥物中篩選治療炎癥性腸病的藥物不僅是可行的，而且可填補(bǔ)我國(guó)在這一領(lǐng)域的空白。
甘草黃酮目前主要應(yīng)用于食品添加劑、保健品、化妝品等領(lǐng)域，對(duì)人體的安全范圍極大，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，甘草黃酮還具有抗氧化、抗腫瘤、抗HIV、保肝、抗胃潰瘍、抗心律失常、治療糖尿病等作用，但甘草黃酮防治炎癥性腸病(IBD)的作用未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)上述問(wèn)題提供甘草黃酮在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用，用甘草黃酮制備的抗炎癥性腸病的藥物，具有療效確切，副作用少等特點(diǎn)。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是甘草黃酮在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明經(jīng)口及靜脈注射給予甘草黃酮，一天一次，10天后，可使炎癥性小鼠結(jié)腸臟器指數(shù)、結(jié)腸損傷系數(shù)明顯降低，結(jié)腸MPO活性明顯升高，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA明顯降低，SOD活性及GSH含量明顯升高，表明甘草黃酮可治療炎癥性腸病。
本發(fā)明經(jīng)口給予甘草黃酮390mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)下降25％、炎癥評(píng)分級(jí)別下降3倍，MPO活性升高1.74倍。
本發(fā)明經(jīng)注射給予甘草黃酮390mg/kg，一天一次，l0天后，結(jié)腸系數(shù)下降50.8％、炎癥評(píng)分級(jí)別下降2.7倍，MPO活性升高2.53倍。


附圖為本發(fā)明甘草黃酮處理10天對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護(hù)作用圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明中醫(yī)藥學(xué)在治療慢性、疑難疾病方面常能發(fā)揮重要作用，療效好、特別是毒副作用小等特點(diǎn)。本發(fā)明選擇甘草提取物-甘草黃酮作為抗炎癥性腸病的藥物，通過(guò)建立炎癥性腸病的動(dòng)物模型，探討甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病的影響及藥物作用機(jī)制。旨在選擇一種抗炎癥性腸病療效確切、毒性小的藥物。
本發(fā)明通過(guò)建立炎癥性腸病動(dòng)物模型等技術(shù)揭示了甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病的作用及機(jī)制。
材料與方法藥品及試劑 甘草黃酮，由平羅縣樂(lè)夏甘草制品公司提供；美莎拉秦緩釋顆粒劑(艾迪莎)，由法國(guó)愛(ài)的發(fā)制藥集團(tuán)提供；MPO檢測(cè)試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。牛血清白蛋白、DTNB及GSH標(biāo)準(zhǔn)品均由sigma公司提供。TBA、鄰苯三酚、乙酸、乙醚等試劑均為市售分析純?cè)噭?br> 動(dòng)物 健康成熟雄性昆明小鼠45只，體重18～22g，雌雄各半，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2003-2004。小鼠飼料，購(gòu)于武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
儀器TG328A型分析天平，紫外分光光度計(jì)，高速勻漿器等。
實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物分組與處理昆明小鼠隨機(jī)分組正常對(duì)照組(CON)，模型組(Model)，艾迪莎陽(yáng)性藥物對(duì)照組(ADS)，甘草黃酮口服組(GCHTP)，甘草黃酮注射組(GCHT-INJ)。艾迪莎組小鼠灌腸給予艾迪莎600mg/Kg，一日一次； 甘草黃酮口服組小鼠分別經(jīng)口給予甘草黃酮390mg/Kg，一日一次；甘草黃酮注射組小鼠腹腔注射給予甘草黃酮390mg/Kg，一日一次；正常對(duì)照組和模型組小鼠經(jīng)口給予等量的生理鹽水，一日一次。給藥7天后，除正常對(duì)照組外，其余各組均采用乙酸刺激造結(jié)腸炎模型，小鼠于第6日給藥后禁食，次日給藥后，乙醚吸入麻醉，用聚乙烯管給小鼠直腸注入乙酸，注入前先排清腸內(nèi)大便，將聚乙烯管插入小鼠肛門約1.5cm，注入0.1ml6％的乙酸，1min后用等張生理鹽水沖洗兩次，讓動(dòng)物保持平躺，自然蘇醒。正常對(duì)照組直腸注入等體積的生理鹽水。各組小鼠持續(xù)給藥至第10天，末次給藥后24h，頸椎脫臼處死，冰上解剖，取全段結(jié)腸，稱重，計(jì)算結(jié)腸臟器指數(shù)，進(jìn)行結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分。取結(jié)腸組織用Tris緩沖液制成5％的勻漿液，供檢測(cè)MPO、MDA、SOD、GSH。
檢測(cè)指標(biāo)結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)取全段結(jié)腸，沿腸系膜剪開(kāi)腸腔，肉眼觀察腹腔粘連及結(jié)腸潰瘍、充血情況，按表1進(jìn)行結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分。
髓過(guò)氧化物酶(MPO)準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量體積比為1∶19加入Tris緩沖勻漿液，高速勻漿后反復(fù)凍融，制成5％的腸勻漿液，Lowry法檢測(cè)蛋白量。按MPO檢測(cè)試劑盒嚴(yán)格操作。
脂質(zhì)過(guò)氧化物酶(MDA)采用TBA比色法檢測(cè)腸勻漿中MDA含量。
超氧化物歧化酶(SOD)采用鄰苯三酚法檢測(cè)腸勻漿中SOD活力。
谷胱甘肽(GSH)按GSH檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)腸勻漿中GSH的含量。
表1.結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加為總得分。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護(hù)作用由附圖可見(jiàn)，甘草黃酮經(jīng)口和注射給藥均可明顯的保護(hù)乙酸導(dǎo)致的小鼠結(jié)腸損傷，模型組可見(jiàn)重度粘連，潰瘍多于2處以上，評(píng)分級(jí)別7.5；陽(yáng)性對(duì)照組可見(jiàn)一處潰瘍，未見(jiàn)粘連，輕度紅腫，評(píng)分級(jí)別2.5級(jí)；甘草黃酮口服組、甘草黃酮注射組評(píng)分級(jí)別分別為2.5級(jí)、2.8級(jí)，表明甘草黃酮口服給藥及注射給藥對(duì)炎癥性腸病有明顯的保護(hù)作用。結(jié)果見(jiàn)附圖。
2.甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、損傷系數(shù)、MPO活性的影響可見(jiàn)甘草黃酮能明顯減輕炎癥性腸病小鼠結(jié)腸水腫，口服組、注射組腸臟器系數(shù)分別下降25％、50.8％，與陽(yáng)性對(duì)照藥的16.7％相比，效果更好；炎癥評(píng)分級(jí)別分別降低3倍、2.7倍，與陽(yáng)性對(duì)照藥相似；可使MPO活性明顯升高，口服組、注射組與模型組相比分別升高1.74倍、2.53倍，較陽(yáng)性對(duì)照藥升高的0.47倍相比作用更顯著，進(jìn)一步表明甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病的有益作用，結(jié)果見(jiàn)表2。
表.2甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、損傷系數(shù)、MPO活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比▲▲P＜0.013.甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、GSH含量及SOD活性的影響與正常組相比，模型組結(jié)腸組織中MDA的含量顯著升高(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性顯著下降；與模型組相比，甘草黃酮均可有效改善上述指標(biāo)，且較陽(yáng)性對(duì)照藥效果更好，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3甘草黃酮對(duì)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、GSH含量及SOD活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)論甘草黃酮能有效保護(hù)炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷，其機(jī)制可能與增強(qiáng)組織抗氧化能力有關(guān)，與目前主要治療炎癥性腸病的藥物—艾迪莎相比，療效更為顯著。甘草黃酮目前主要為食品添加劑，長(zhǎng)期應(yīng)用顯示其安全性好，毒副作用低。
權(quán)利要求
1.甘草黃酮在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘草黃酮在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。甘草黃酮可通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)及抗氧化作用達(dá)到抗炎癥性腸病的作用。用甘草黃酮制備的抗炎癥性腸病的藥物對(duì)炎癥性腸病具有療效好，安全范圍大等優(yōu)點(diǎn)，可以作為抗人炎癥性腸病的藥物。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1846725SQ20061001838
公開(kāi)日2006年10月18日 申請(qǐng)日期2006年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月20日
發(fā)明者丁虹, 馬瑤, 王黎, 付婷婷, 周惠萍, 金晶, 趙婷, 吳開(kāi) 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)