Ngf基因-pei衍生物納米顆粒復合物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物及其制備方法和應用。所述的納米顆粒復合物包含NGF基因物質和PEI衍生物，所述的PEI衍生物與NGF基因物質的質量比為15~80，所述的PEI為低分子量聚乙烯亞胺且重均分子量≤2000Da，X為苯二甲醛、吡啶二甲醛、噠嗪二甲醛或咪唑二甲醛。本發(fā)明的納米顆粒復合物毒性小、轉染效率高，可以在體內循環(huán)過程中兼顧到達靶細胞之前的穩(wěn)定性和進入靶細胞之后的生物響應性，聚陽離子自身可在體內完成無毒化的代謝，因此可通過顱內局部注射用于帕金森病及其并發(fā)癥的治療。
【專利說明】NGF基因 -PEI衍生物納米顆粒復合物及其制備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及非病毒基因載體【技術領域】，具體地說，涉及NGF基因 -PEI衍生物納米 顆粒復合物及其制備方法和應用。

【背景技術】
[0002] 在基因治療的發(fā)展過程中，基因運載系統(tǒng)即基因載體的研究始終是人們關注的焦 點，基因載體能否安全有效地運載基因到指定地點是基因治療是否能在臨床上應用的關鍵 所在?；蜉d體可分為病毒型載體和非病毒型載體兩大類。雖然目前使用最多的仍然是病 毒型載體，其轉染效率可達90%以上，但病毒載體存在自身難以克服的局限性，如能誘導宿 主免疫反應及潛在的致癌性，制備復雜，而且所能裝載的外源DNA大小有限，使其應用受到 很大限制。于是，人們開始著眼于非病毒型載體的研究。目前已有的非病毒型載體介導基因 轉染的方法有裸DNA注射、磷酸鈣介導、電轉移法、陽離子脂質體及陽離子聚合物介導等， 前三者雖然沒有病毒載體的缺點，但轉染效率不盡如人意。陽離子脂質體轉染效率較高、重 復性好，但轉染時需除血清，體內不穩(wěn)定一直是困擾醫(yī)學界的難題。從目前發(fā)展趨勢看，陽 離子聚合物載體在基因轉移方面呈現(xiàn)顯著優(yōu)勢。
[0003] 陽離子聚合物又稱聚陽離子，種類很多，目前研究較多的有多肽類：聚賴氨酸、 聚谷氨酸及其衍生物；多聚胺類：聚乙烯亞胺、聚丙烯亞胺樹狀物；聚甲基丙烯酸類：聚酰 胺-胺型樹狀物、聚甲基丙烯酸乙酯2 - (二甲胺);以及一些天然高分子如殼聚糖、明膠等。 這些聚合物結構上的一個共同特點是分子內含有許多氨基，在生理pH下會發(fā)生質子化，這 些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷，使DNA分子由伸展結構壓縮為體積相對 較小的DNA粒子，或將目的基因包裹在其中，使DNA免受核酸酶的降解，它們可以作為基因 載體。
[0004] 陽離子聚合物-DNA復合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細胞，形成內 含體（endosome)，DNA從內含體釋放，進入細胞質中，再進一步進入核內轉錄、表達。
[0005] PEI衍生物為聚陽離子中的一種，結構式為：

【權利要求】
1. 一種NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，它包含NGF基因物質和PEI 衍生物，所述的PEI衍生物與NGF基因物質的質量比為15~80。
2. 根據權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，所述的 PEI衍生物與NGF基因物質的質量比為20~30。
3. 根據權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，它是由 以下方法制備得到的： (1) 將PEI衍生物溶液快速加入到相同體積的NGF基因溶液中，混合均勻； (2) 將混合溶液于室溫下孵育15?25分鐘，即得NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合 物。
4. 根據權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，所述的 PEI衍生物結構式為：
其中，PEI為低分子量聚乙烯亞胺且重均分子量< 2000Da ;X為苯二甲醛、吡啶二甲醛、 噠嗪二甲醛或咪唑二甲醛。
5. 根據權利要求4所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，所述的 PEI重均分子量彡1500Da ;所述的苯二甲醛選自鄰苯二甲醛、間苯二甲醛或對苯二甲醒，所 述的吡啶二甲醛選自2, 4-吡啶二甲醛、2, 5-批啶二甲醛或2, 6-吡啶二甲醛，所述的噠嗪二 甲醛選自2, 5-噠嗪二甲醛或2, 6-噠嗪二甲醛，所述的咪唑二甲醛選自2, 5-咪唑二甲醛。
6. 根據權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物，其特征在于，所述的 NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物的粒徑為150?300納米。
7. 權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物的制備方法，其特征在于， 包括以下步驟： (1) 將PEI衍生物溶液快速加入到相同體積的NGF基因溶液中，混合均勻； (2) 將混合溶液于室溫下孵育15?25分鐘，即得NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合 物。
8. 根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述的PEI衍生物結構式為：
其中，PEI為低分子量聚乙烯亞胺且重均分子量< 2000Da ;X為苯二甲醛、吡啶二甲醛、 噠嗪二甲醛或咪唑二甲醛。
9. 根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆 粒復合物中，所述的PEI衍生物與NGF基因的質量比為1~100。
10. 權利要求1所述的NGF基因-PEI衍生物納米顆粒復合物在制備治療帕金森病或異 動癥藥物中的應用。
【文檔編號】A61K9/14GK104248771SQ201410509537
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權日:2014年9月28日
【發(fā)明者】袁偉恩, 劉振國, 原明璐, 車俊怡 申請人:上海交通大學醫(yī)學院附屬新華醫(yī)院