蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途及其制備方法，具體為蘋果多糖及其制劑在預(yù)防或治療腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌治療的藥品、保健品、食品中的應(yīng)用。蘋果多糖來(lái)源于蘋果或蘋果渣，如果使用蘋果渣提取蘋果多糖，一方面綠色環(huán)保，另一方面沒有副作用，并克服了直接服用蘋果所帶來(lái)的高糖、引起齲齒的副作用，同時(shí)克服了現(xiàn)有的來(lái)源于牛乳的低聚糖所帶來(lái)的腹瀉等產(chǎn)品的缺陷。
【專利說(shuō)明】蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途及其制備方 法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及功能性提取物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便 的蘋果多糖、制劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 腸道菌群紊亂與因腸道菌群紊亂導(dǎo)致的便秘與肥胖、胰島素抵抗、便秘、炎性腸 病、結(jié)腸癌、肝癌密切相關(guān)。研究表明，肥胖者腸道硬壁門菌豐度明顯升高，而擬桿菌門豐度 顯著減少，結(jié)腸癌患者糞便的具核梭菌顯著增多，炎性腸病患者的腸道菌群比例顯著失調(diào)。
[0003] 調(diào)節(jié)腸道菌群的紊亂可糾正肥胖、治療便秘，并改善II型糖尿病患者的胰島素抵 抗，預(yù)防腫瘤的發(fā)生。目前的研究表明，來(lái)源于牛乳的低聚半乳糖能被雙歧桿菌選擇性的酵 解利用，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡。
[0004] 蘋果具有潤(rùn)腸通便作用，但是物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制卻不清楚，蘋果是否具有調(diào)節(jié) 腸道菌群的作用尚無(wú)文獻(xiàn)記載，尤其是，蘋果多糖（低聚糖、寡糖）可調(diào)節(jié)腸道菌群并用于 改善便秘和肥胖的預(yù)防和治療尚無(wú)報(bào)道。提取蘋果中可調(diào)節(jié)腸道菌群、潤(rùn)腸通便的多糖(低 聚糖、寡糖）成分，并研究其在預(yù)防及治療便秘和肥胖、改善胰島素抵抗、預(yù)防腫瘤的發(fā)生等 臨床問(wèn)題中的應(yīng)用效果非常必要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的之一在于提供蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途。
[0006] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多糖的制 備方法。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，所述 蘋果多糖及其制劑在預(yù)防或治療腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸 病、結(jié)腸癌治療的藥品中的應(yīng)用。
[0008] 進(jìn)一步，所述蘋果多糖制成膠囊劑、或片劑、或顆粒劑、或口服液、或散劑；所述蘋 果多糖單獨(dú)使用或與其他成分配合使用，與其他成分配合使用時(shí)配方中蘋果多糖質(zhì)量含量 為50?90%。
[0009] 蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，所述蘋果多糖及其制劑在預(yù)防或 治療腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌的保健品及食品中 的應(yīng)用。
[0010] 進(jìn)一步，所述蘋果多糖的添加量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5(Γ90%。
[0011] 進(jìn)一步，所述的腸道菌群紊亂是指腸腔內(nèi)菌群的益生菌與有害菌比例失調(diào)而導(dǎo)致 的結(jié)腸功能紊亂，所述的肥胖是由于飲食導(dǎo)致腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的肥胖，所述的胰島素 抵抗是腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的胰島素抵抗。
[0012] 進(jìn)一步，所述蘋果多糖為多糖、低聚糖、寡糖中的一種或多種的混合物。
[0013] 用于調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多糖的制備方法，依次包括如下步驟： 步驟1)取新鮮蘋果榨汁后的蘋果漁，用體積比為509Γ100%的酒精浸泡:Γ30天，料液 比為3:1，單位g/L ; 步驟2)步驟1)中的浸提液采用回流塔濃縮，收集回流液；蘋果渣采用無(wú)水乙醇回流 3~7次，料液比為4:1，單位g/L，每次2~8h，收集上清液；殘?jiān)栏芍镣耆稍?，再用自?lái)水 或純凈水回流31次，料液比為4:1，單位g/L，每次:Γ8小時(shí)，收集并合并三次收集的回流 液； 步驟3)回流液采用回流塔濃縮，獲得濃縮液即蘋果多糖提取液；蘋果多糖提取液用體 積比為7(Γ85%的乙醇沉淀，收集沉淀并干燥，得到蘋果粗多糖； 步驟4)步驟3)中的蘋果粗多糖用水溶解，添加蘋果粗多糖質(zhì)量29Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶裝解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的 乙醇沉淀1飛次，收集沉淀并干燥，獲得分子量為300(Γ500000的蘋果低聚糖； 步驟5)步驟4)中的蘋果低聚糖用水溶解，添加蘋果低聚糖質(zhì)量19Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的乙 醇沉淀1、次，通過(guò)SephadexG-200裝填充柱，柱長(zhǎng)lCT200cm，柱內(nèi)徑為5?50cm，以0. 1?0. 5 當(dāng)量的氯化鈉溶液洗脫，分段收集，獲得分子量為50(Γ3000的蘋果寡糖。
[0014] 本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明的一種調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多糖，將 其制備成藥物制劑或應(yīng)用于保健品、特殊用途食品及普通食品，人服用后能夠有效的預(yù)防 或治療腸道菌群紊亂及便秘，或者因腸道菌群紊亂及便秘帶來(lái)的肥胖、胰島素抵抗、炎性腸 病、結(jié)腸癌等。且蘋果多糖來(lái)源于蘋果或蘋果渣，如果使用蘋果渣提取蘋果多糖(低聚糖、寡 糖)，一方面綠色環(huán)保，另一方面沒有副作用，并克服了直接服用蘋果所帶來(lái)的高糖、引起齲 齒的副作用，同時(shí)克服了現(xiàn)有的來(lái)源于牛乳的低聚糖所帶來(lái)的腹瀉等產(chǎn)品的缺陷。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，但它們不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限定。
[0016] 圖1、圖2為蘋果多糖對(duì)高脂飼料導(dǎo)致腸道菌群紊亂的調(diào)節(jié)作用。
[0017] 圖3、圖4為蘋果寡糖對(duì)高脂飼料導(dǎo)致腸道菌群紊亂的調(diào)節(jié)作用。
[0018] 圖5、圖6為蘋果低聚糖對(duì)高脂飼料導(dǎo)致腸道菌群紊亂的調(diào)節(jié)作用。
[0019]

【具體實(shí)施方式】： 蘋果多糖的制備和純化 實(shí)施例1用于調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多糖的制備方法，包括如下步 驟： 步驟1)取新鮮蘋果榨汁后的蘋果渣，用體積比為509Γ100%的酒精浸泡:Γ30天，料液 比為3:1，單位g/L ; 步驟2)步驟1)中的浸提液采用回流塔濃縮，收集回流液；蘋果渣采用無(wú)水乙醇回流 3~7次，料液比為4:1，單位g/L，每次2~8h，收集上清液；殘?jiān)栏芍镣耆稍铮儆米詠?lái)水 或純凈水回流31次，料液比為4:1，單位g/L，每次:Γ8小時(shí)，收集并合并三次收集的回流 液； 步驟3)回流液采用回流塔濃縮，獲得濃縮液即蘋果多糖提取液；蘋果多糖提取液用體 積比為7(Γ85%的乙醇沉淀，收集沉淀并干燥，得到蘋果多糖； 步驟4)步驟3)中的蘋果粗多糖用水溶解，添加蘋果粗多糖質(zhì)量29Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的乙 醇沉淀1飛次，收集沉淀并干燥，獲得分子量為300(Γ500000的蘋果低聚糖； 步驟5)步驟4)中的蘋果低聚糖用水溶解，添加蘋果低聚糖質(zhì)量19Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的乙 醇沉淀1、次，通過(guò)SephadexG-200裝填充柱，柱長(zhǎng)lCT200cm，柱內(nèi)徑為5?50cm，以0. 1?0. 5 當(dāng)量的氯化鈉溶液洗脫，分段收集，獲得分子量為50(Γ3000的蘋果寡糖。
[0020] 步驟1)中，蘋果渣為新鮮蘋果榨汁后的果渣，可以采用蘋果汁生產(chǎn)企業(yè)榨汁后的 副產(chǎn)物蘋果渣作為提取原料，來(lái)源穩(wěn)定且提高了蘋果渣的附加產(chǎn)值。
[0021] 步驟2)中沉淀采用無(wú)水乙醇回流3次，或4次，或5次，或6次，或7次，料液比為 4:1，單位g/L，每次2h，或3h，或4h，或5h，或6h，或7h，或8h，上清液濃縮收集待用。殘?jiān)?晾干后，用純凈水回流3次，或4次，每次3h，或4h，或5h，或6h，或7h，或8h，上清液濃縮收 集。作為一種優(yōu)選，沉淀采用無(wú)水乙醇回流3次，料液比為4:1，單位g/L，每次3h，上清液濃 縮收集待用。殘?jiān)栏珊螅眉儍羲亓?次，每次3h，上清液濃縮收集。
[0022] 步驟3)中采用體積分?jǐn)?shù)70%，或75%，或80%，或85%的乙醇沉淀，收集沉淀并干燥， 作為一種優(yōu)選，采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇沉淀3次，收集沉淀，冷凍干燥，得到蘋果多糖。
[0023] 步驟4)步驟3)中的蘋果粗多糖用水溶解，作為一種優(yōu)選，步驟3)中的蘋果粗多 糖用水恰好溶解，作為另一種優(yōu)選，步驟3)中的每一質(zhì)量份的蘋果粗多糖用1~10質(zhì)量份的 水溶解。
[0024] 添加半乳糖苷酶，添加量為蘋果粗多糖質(zhì)量為2%，或3%，或4%，或5%，或6%，或7%， 或 8%，或 9%，或 10%，溫度為 25°C，，或 30°C，或 35°C，或 40°C，或 45°C，或 50°C，孵育 30min， 或lh，或1. 5h，或2h，或2. 5h，或3h，或3. 5h，或4h，濃縮，采用體積分?jǐn)?shù)70%，或75%，或80%， 或85%的乙醇沉淀，沉淀次數(shù)為1次，或2次，或3次，或4次，或5次，獲得300(Γ500000分 子量的低聚糖，為蘋果低聚糖。
[0025] 作為一種優(yōu)選，步驟3)中獲得的蘋果多糖，采用半乳糖苷酶，添加量為5. 5%， 40°C，孵育lh，濃縮，采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇沉淀3次，獲得300(Γ500000分子量的低聚 糖，為3Ρ果低聚糖。
[0026] 步驟5)步驟4)中獲得的蘋果低聚糖用水溶解，作為一種優(yōu)選，步驟3)中的蘋果 粗多糖用水恰好溶解，作為另一種優(yōu)選，步驟3)中的每一質(zhì)量份的蘋果低聚糖用1~10質(zhì)量 份的水溶解。
[0027] 添加半乳糖苷酶，添加量為蘋果低聚糖質(zhì)量為1%，或2%，或3%，或4%，或5%，或6%， 或 7%，或 8%，或 9%，或 10%，溫度為 25°C，或 30°C，或 35°C，或 40°C，或 45°C，或 50°C，孵育 30min，或lh，或1. 5h，或2h，或2. 5h，或3h，或3. 5h，或4h，濃縮，采用體積分?jǐn)?shù)70%，或75%， 或80%，或85%的乙醇沉淀，沉淀次數(shù)為1次，或2次，或3次，或4次，或5次。作為一種優(yōu) 選，添加量為6. 5%，40°C，孵育lh，濃縮，采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇沉淀3次。
[0028] 通過(guò) SephadexG-200 (Pharmacia)裝填充柱，柱長(zhǎng) 10cm，或 50cm，或 100cm，或 150cm，或 200cm，柱內(nèi)徑為 5 cm，或 10 cm，或 20 cm，或 30 cm，或 40 cm，或 50cm，以 0.1 當(dāng) 量，或0. 2當(dāng)量，或0. 3當(dāng)量，或0. 4當(dāng)量，或0. 5當(dāng)量的氯化鈉溶液洗脫，分段收集，獲得分 子量為50(Γ3000的蘋果寡糖。
[0029] 步驟4)與步驟5)中，半乳糖苷酶可以為sigma，Amresco生產(chǎn)的β -半乳糖苷酶， 級(jí)別為BR，分子量100?850KDa，活力為250?600單位，活力定義為在37°C、ρΗ7· 3的條 件下，一個(gè)酶活力單位是指每分鐘可轉(zhuǎn)化1微摩爾底物的半乳糖苷酶量。
[0030] 應(yīng)用實(shí)施例 實(shí)施例2 蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，所述蘋果多糖及其制劑在預(yù)防或調(diào)節(jié) 腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌治療的藥品中的應(yīng)用。
[0031] 所述蘋果多糖制成膠囊劑、或片劑、或顆粒劑、或口服液、或散劑；所述蘋果多 糖單獨(dú)使用或與其他成分配合使用，與其他成分配合使用時(shí)配方中蘋果多糖質(zhì)量含量為 50?90%。
[0032] 所述蘋果多糖為多糖、低聚糖、寡糖中的一種或多種的混合物。
[0033] 所述的腸道菌群紊亂是指腸腔內(nèi)菌群的益生菌與有害菌比例失調(diào)而導(dǎo)致的結(jié)腸 功能紊亂，所述的肥胖是由于飲食導(dǎo)致腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的肥胖，所述的胰島素抵抗是 腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的胰島素抵抗。
[0034] 所述的潤(rùn)腸通便指防治大便干燥，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，防治便秘；所述的調(diào)節(jié)腸道菌群是 指調(diào)節(jié)腸道益生菌的豐度，降低有害菌的豐度，調(diào)節(jié)二者的豐度比例。
[0035] 本實(shí)施例中，所述的膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液、散劑為本領(lǐng)域常規(guī)所述的含有 蘋果多糖(寡糖、低聚糖）的相關(guān)劑型，市售可得或按照本領(lǐng)域常規(guī)方法由蘋果多糖(寡糖、 低聚糖）原料提取獲得。
[0036] 本實(shí)施例中含有蘋果多糖(寡糖、低聚糖）的膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液、散劑還 可以含有本領(lǐng)域常規(guī)膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液、散劑中常規(guī)添加的各種其他添加劑和 其他活性物質(zhì)，只要其沒有拮抗作用或不顯著影響本發(fā)明效果即可。
[0037] 本發(fā)明中含有蘋果多糖(寡糖、低聚糖）的膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液、散劑可按 本領(lǐng)域常規(guī)方法制得。
[0038] 較佳的片劑制備方法包括如下步驟：將蘋果多糖(寡糖、低聚糖）與質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% 玉米淀粉漿、硬脂酸鎂制成片劑。
[0039] 較佳的膠囊劑制備方法包括如下步驟：將蘋果多糖(寡糖、低聚糖）直接轉(zhuǎn)入囊殼 制成膠囊劑。
[0040] 較佳的顆粒劑制備方法包括如下步驟：將蘋果多糖(寡糖、低聚糖）加入糊精、乙 醇，制成顆粒劑。
[0041] 較佳的口服液制備方法包括如下步驟：將蘋果多糖(寡糖、低聚糖）溶于水，加入水 果味調(diào)味劑，制成口服液。
[0042] 其中，所述的蘋果多糖(寡糖、低聚糖）及其制劑的制備使用設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)設(shè) 備。
[0043] 實(shí)施例3 蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，所述蘋果多糖及其制 劑在預(yù)防或調(diào)節(jié)腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌治療的 保健品、特殊用途食品、普通食品中的應(yīng)用，所述蘋果多糖的添加量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5(Γ90%。
[0044] 本實(shí)施例中，所述食品包括特殊用途食品及普通食品，其中特殊用途食品是指為 滿足某些人群的生理需要或某些疾病患者的需要，按特殊配方而專門加工的食品，這類食 品的成分必須與現(xiàn)有類似性質(zhì)的普通食品的成分有顯著不同；普通食品是指非特殊用途食 品。
[0045] 所述蘋果多糖為多糖、低聚糖、寡糖中的一種或多種的混合物。
[0046] 所述的腸道菌群紊亂是指腸腔內(nèi)菌群的益生菌與有害菌比例失調(diào)而導(dǎo)致的結(jié)腸 功能紊亂，所述的肥胖是腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的肥胖，所述的胰島素抵抗是腸道菌群紊亂 所導(dǎo)致的胰島素抵抗。
[0047] 所述的潤(rùn)腸通便指防治大便干燥，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，防治便秘；所述的調(diào)節(jié)腸道菌群是 指調(diào)節(jié)腸道益生菌的豐度，降低有害菌的豐度，調(diào)節(jié)二者的豐度比例。
[0048] 本實(shí)施例中，所述的含有蘋果多糖(寡糖、低聚糖）的食品為本領(lǐng)域常規(guī)所述的食 品，市售可得或按照本領(lǐng)域常規(guī)方法由蘋果多糖(寡糖、低聚糖)原料提取獲得。所述在普通 食品中的應(yīng)用可以為含有蘋果多糖(寡糖、低聚糖）的餅干、糖果、酸奶、面包等，其配方包括 5(Γ90%的多糖(低聚糖、寡糖)，采用常規(guī)方法制備的餅干、糖果、酸奶、面包等等。
[0049] 效果實(shí)施例 實(shí)施例4昆明鼠100只，隨機(jī)分為10組，分別為生理鹽水組，蘋果多糖高中低劑量組， 蘋果低聚糖高中低劑量組，蘋果寡糖高中低劑量組。經(jīng)口灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天，末 次給藥后，將小鼠全部移入代謝籠中，經(jīng)口灌胃給予印度墨汁，6h后，收集糞便稱重；解剖 動(dòng)物，量取墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度，計(jì)算墨汁推進(jìn)率。結(jié)果見表1。
[0050] 表1蘋果多糖(寡糖、低聚糖）對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的推動(dòng)作用

【權(quán)利要求】
1. 蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，其特征在于：所述蘋果多糖及其制 劑在預(yù)防或治療腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌的藥品 中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述的蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，其特征在于： 所述蘋果多糖制成膠囊劑、或片劑、或顆粒劑、或口服液、或散劑；所述蘋果多糖單獨(dú)使用或 與其他成分配合使用，與其他成分配合使用時(shí)配方中蘋果多糖質(zhì)量含量為5(Γ90%。
3. 蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，其特征在于：所述蘋果多糖及其制 劑在預(yù)防或治療腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的便秘、肥胖、胰島素抵抗、炎性腸病、結(jié)腸癌的保健 品及食品中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求3所述的蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用途，其特征在于： 所述蘋果多糖的添加量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5(Γ90%。
5. 如權(quán)利要求1~4中的任意之一所述的蘋果多糖調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的用 途，其特征在于：所述的腸道菌群紊亂是指腸腔內(nèi)菌群的益生菌與有害菌比例失調(diào)而導(dǎo)致 的結(jié)腸功能紊亂，所述的肥胖是由于飲食導(dǎo)致腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的肥胖，所述的胰島素 抵抗是腸道菌群紊亂所導(dǎo)致的胰島素抵抗。
6. 如權(quán)利要求廣4中的任意之一所述的一種調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多 糖，其特征在于：所述蘋果多糖為多糖、低聚糖、寡糖中的一種或多種的混合物。
7. 用于調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及潤(rùn)腸通便的蘋果多糖的制備方法，依次包括如下步驟： 步驟1)取新鮮蘋果榨汁后的蘋果渣，用體積比為509Γ100%的酒精浸泡:Γ30天，料液 比為3:1，單位g/L ; 步驟2)步驟1)中的浸提液采用回流塔濃縮，收集回流液；蘋果渣采用無(wú)水乙醇回流 3~7次，料液比為4:1，單位g/L，每次2~8h，收集上清液；殘?jiān)栏芍镣耆稍铮儆米詠?lái)水 或純凈水回流31次，料液比為4:1，單位g/L，每次:Γ8小時(shí)，收集并合并三次收集的回流 液； 步驟3)回流液采用回流塔濃縮，獲得濃縮液即蘋果多糖提取液；蘋果多糖提取液用體 積比為7(Γ85%的乙醇沉淀，收集沉淀并干燥，得到蘋果粗多糖； 步驟4)步驟3)中的蘋果粗多糖用水溶解，添加蘋果粗多糖質(zhì)量29Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的乙 醇沉淀1飛次，收集沉淀并干燥，獲得分子量為300(Γ500000的蘋果低聚糖； 步驟5)步驟4)中的蘋果低聚糖用水溶解，添加蘋果低聚糖質(zhì)量19Γ10%的半乳糖苷酶， 25°C?50°C條件下孵育30mirT4h，酶解液采用回流塔濃縮，濃縮液用體積比為7(Γ85%的乙 醇沉淀1、次，通過(guò)SephadexG-200裝填充柱，柱長(zhǎng)lCT200cm，柱內(nèi)徑為5?50cm，以0. 1?0. 5 當(dāng)量的氯化鈉溶液洗脫，分段收集，獲得分子量為50(Γ3000的蘋果寡糖。
【文檔編號(hào)】A61P3/04GK104107188SQ201410343328
【公開日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】劉莉, 梅其炳, 王生, 黃曉星, 武琰濤, 梅林
申請(qǐng)人:西安山川醫(yī)藥科技有限公司