一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物。它是由紅豆杉粗提物及北沙參粗提物復(fù)配而成，二者的質(zhì)量比為3：1～1：4；所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物均為采用80％乙醇提取得到的提取物。本發(fā)明通過試驗(yàn)證明：紅豆杉粗提物及北沙參粗提物的混合物在40μg/mL對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)和肝癌細(xì)胞株(HCC21)的抑制率明顯高于兩者單劑各濃度的效果，協(xié)同增效明顯。同時(shí)對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)抑制效果以紅豆杉粗提物和北沙參粗提物比例1：2，對(duì)肝癌細(xì)胞株(HCC21)以1：3為最好。
【專利說明】一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種抗癌藥物，具體是一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，許多以前被認(rèn)為是嚴(yán)重疾病的傳染病已經(jīng)不再是危害人類的重要疾病，而環(huán)境污染等因素導(dǎo)致的惡性腫瘤疾病死亡人 數(shù)卻不斷增加，已經(jīng)成為僅次于心血管病的第二殺手。對(duì)惡性腫瘤的治療藥物很多，但天然化合物中以紅豆杉中的紫杉醇療效最好。但該化合物并不是對(duì)所有惡性腫瘤效果都很突出，且價(jià)格昂貴。目前，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌的治療，雖然對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效，但效果不甚理想。
[0003]紅豆杉(東北紅豆杉Taxus cuspidata ;俗稱紫杉,yew)植物分類歸于裸子植物亞門，松杉綱，紅豆杉目，紅豆杉科中紅豆杉族下的紅豆杉屬。紅豆杉科共5屬22種，我國有4屬(紅豆杉屬、白豆杉屬、穗花杉屬、榧樹屬)12種I變種及I栽培種。目前所見報(bào)道只在紅豆杉屬植物中含有紫杉醇，本屬共11種，我國有4種I變種，分別為西藏紅豆杉、云南紅豆杉型、紅豆杉、東北紅豆杉及南方紅豆杉。在這些植物中紫杉醇的含量依種屬、植物部位、生長環(huán)境、生長年限，采收季節(jié)、貯藏及加工方法的不同而有顯著差異。在目前發(fā)現(xiàn)的所有含紫杉醉的紅豆杉屬植物中仍以歐洲短葉紅豆一中含量最高(0.069% )，而最低含量只有
0.003%，約從38000棵紫杉樹中方可分離提純得到99%純度的紫杉醇約25kg，對(duì)于成樹:樹皮〉樹葉〉樹根〉樹干〉種子〉心材。
[0004]北沙參(GlehniaIittoralis)為傘形科(Umbelliferae)北沙參屬(Glehnia)的多年生草本植物，其干燥根為傳統(tǒng)中藥，俗稱北沙參，有養(yǎng)陰清肺、益胃生津之功效，用于肺熱燥咳，勞嗽痰血，熱病津傷口渴(國家藥典委員會(huì)，2005);北沙參的根及幼嫩的莖葉均可食用，已成為人們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｓ玫氖卟撕捅＝∈称分?，在日本、美國及東南亞地區(qū)備受青睞，是一種創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品；北沙參原為海灘沙生植物群落的建群種之一，海灘的濫用開發(fā)和對(duì)該植物的過度采挖，使其數(shù)量日趨減少，已經(jīng)處于瀕臨滅絕的境地，被列為中國珍稀瀕危保護(hù)植物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)我國因空氣污染加重而不斷攀升的肺癌進(jìn)行紅豆杉等研究，發(fā)現(xiàn)紅豆杉與北沙參粗提物混合制劑對(duì)肺癌和肝癌的抑制活性都比較高。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，其特征是，它是由紅豆杉粗提物及北沙參粗提物復(fù)配而成，二者的質(zhì)量比為3:1~1:4 ;所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物均為采用80%乙醇提取得到的提取物。
[0007]制備方法:取紅豆杉加入2-5倍質(zhì)量的80%乙醇在索氏提取器中提取5_8h，提取液蒸干后備用；北沙參粗提物的制備方法同現(xiàn)有技術(shù)；二者按上述比例復(fù)配后使用。[0008]本發(fā)明可以加入輔料制成不同的制劑如顆粒劑、片劑等使用。
[0009]優(yōu)選地，紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比為1:2~4。
[0010]優(yōu)選地，對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)抑制效果以紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比為1:2最佳。
[0011]優(yōu)選地，對(duì)肝癌細(xì)胞株(HCC21)抑制效果以紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比1:3最佳。
[0012]本發(fā)明采用MTT法觀察紅豆杉粗提物和北沙參粗提物，及二者的復(fù)配混合物，對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)、肝癌細(xì)胞株(HCC21)的體外抗腫瘤作用。結(jié)果表明:紅豆杉與北沙參的粗提物單品或二者的復(fù)配混合物對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)和肝癌細(xì)胞株(HCC21)在不同濃度時(shí)亦均有抑制效果，各濃度間差異顯著，濃度為在25-50ug/mL時(shí)，其抑制率明顯高于其它濃度。兩者混合制劑在40 μ g/mL對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)和肝癌細(xì)胞株(HCC21)的抑制率明顯高于兩者單劑各濃度的效果，協(xié)同增效明顯。同時(shí)對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)抑制效果以紅豆杉粗提物和北沙參粗提物比例1:2，對(duì)肝癌細(xì)胞株(HCC21)1:3為最好。
【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1
[0014]本發(fā)明采用MTT法觀察紅豆杉粗提物和北沙參粗提物，及二者的復(fù)配混合物，對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)、肝癌細(xì)胞株(HCC21)的體外抗腫瘤活性的藥理作用，試驗(yàn)過程及結(jié)果如下所示。 [0015]I材料及方法
[0016]1.1材料及細(xì)胞
[0017]東北紅豆杉(Taxus cuspidata)干葉由鄒平縣南洋紅豆杉產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司提供，北沙參干品由山東省萊陽市高格莊鄉(xiāng)胡城村提供。獲得的樣品粉碎后待用；腫瘤細(xì)胞:肺癌細(xì)胞株和肝癌細(xì)胞株來自于青島農(nóng)業(yè)大學(xué)。
[0018]1.2儀器與試劑
[0019]1.2.1 儀器
[0020]高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);高壓滅菌鍋(日本三洋SANYOMLS-3780);低速大容量離心機(jī)LXJ-1I B型離心機(jī)(飛鴿牌系列:上海金鵬分析儀器有限公司)；C02培養(yǎng)箱(美國Forma公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱101A-2型(江蘇東臺(tái)市電器廠)；酶聯(lián)免疫檢測儀(美國B1-RAD公司產(chǎn)品，Vers1n4.0)。
[0021]1.2.2 試劑
[0022]RPM1-1640培養(yǎng)液(Gibco產(chǎn)品)，0.25%胰蛋白酶(Amresco公司)，四甲基偶氮唑鹽(MTT, Amresco公司)，D-Hanks液無Ca2+、Mg2+新生小牛血清(北京兀亨圣馬生物技術(shù)有限公司)，10，000單位/ml青鏈霉素溶液(市售藥品)，無支原體胎牛血清(杭州四季青生物工程有限公司)，二甲基亞砜。
[0023]1.3實(shí)驗(yàn)方法
[0024]1.3.1紅豆杉和北沙參提取物的提取
[0025]稱取紅豆杉(東北紅豆杉Taxus cuspidata)和北沙參粉末各150g,用500ml的80%乙醇在索氏提取器中各提取6h，醇溶的液體在55°C用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)，干燥后備用。[0026]1.3.2體外實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的培養(yǎng)
[0027]L329細(xì)胞在5% C02，37°C條件下，用含10%小牛血清、青霉素(100 μ g/mL)和鏈霉素(100 μ g/mL)的RMPI1640培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長期。HCC21細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法同上。
[0028]1.3.3北沙參提取物對(duì)肺癌細(xì)胞株(L329)和肝癌細(xì)胞株(HCC21)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
[0029]紅豆杉和北沙參粉末分別經(jīng)乙醇索氏提取器處理后，各粗提物先用二甲基亞砜溶解，再用水配成各級(jí)濃度，分別設(shè)6個(gè)濃度，它們是200 μ g/mL>100 μ g/mL>50 μ g/mL、25μ g/mL、12.5μ g/mL、6.25 μ g/mL，并以水為對(duì)照。取對(duì)數(shù)生長期的L329細(xì)胞或HCC21細(xì)胞，胰蛋白酶消化后以I X 15個(gè)/mL密度埋96孔板，每孔150 μ L，埋板24h后各加藥50 μ L。給藥48h后，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加培養(yǎng)液150 μ L，MTT液20 μ L，37°C ,5% CO2飽濕繼續(xù)孵育4h后中止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液。每孔加入150 μ L的DMS0，振蕩lOmin。用酶標(biāo)儀在570nm處測吸光值(方法采用徐淑云，《藥理實(shí)驗(yàn)方法》，2002年出版)。各提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長抑制率按下列公式計(jì)算:
[0030]抑制率(％) = (A - Al)/AX 100%
[0031]A為對(duì)照組的吸光值，Al為供試樣品的吸光值。
[0032]2觀察結(jié)果
[0033]紅豆杉和北沙參粗提物對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞作用后的吸光值分別見表1和表2，對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長抑制率見 表3。
[0034]表1不同濃度的醇溶物對(duì)肺癌腫瘤細(xì)胞作用后的吸光值
[0035]
提取物不同濃度<^g/mL>
來源 200100502512.5 6,25 對(duì)照
紅豆杉提取物 1.312 1.291 1.211 1.225 1.243 1.279 1.596
北沙參提取物].483 1.429 1.2.31 1.248 1.364 1.415 1.596_^_I_I_I_I_I_I_
[0036]表2不同濃度的醇溶物對(duì)肝癌腫瘤細(xì)胞作用后的吸光值
[0037]
提取物不同濃度(pg/mL)
來源200100502512.5 6.25 對(duì)照
紅豆杉提取物1.451 1.387 1.478 1.496 1.583 1.604 1.714
北沙參提取物1.424 1.438 1.362 1.392 1,413 1.449 1.714
[0038]表3提取物及不同混劑對(duì)腫瘤的抑制效果
[0039]
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，其特征是，它是由紅豆杉粗提物及北沙參粗提物復(fù)配而成，二者的質(zhì)量比為3:1~1:4 ;所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物均為采用80%乙醇提取得到的提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，其特征是，所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比為1:2~4。
3.如權(quán)利要求2所述的一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，其特征是，所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比為1:2。
4.如權(quán)利要求2所述的一種具有抗腫瘤活性的植物粗提物組合物，其特征是，所述紅豆杉粗提物和北沙參粗提物的質(zhì)量比為1:3。
5.權(quán)利要求1所述的植物粗提物組合物在制備抗肝癌或抗肺癌的藥物方面的應(yīng)用。
6.權(quán)利要 求3所述的植物粗提物組合物在制備抗肺癌的藥物方面的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求4所述的植物粗提物組合物在制備抗肝癌的藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/13GK104027372SQ201410302096
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】牛兆穎, 牛贍光 申請(qǐng)人:牛兆穎