金錢草總黃酮在制備降低高尿酸血癥藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及金錢草總黃酮在制備降低高尿酸血癥藥物中的應用，金錢草總黃酮中總黃酮含量在60%以上，并且含有山柰酚7.0wt%~10.0wt%、槲皮素6.0wt%~9.0wt%、蘆丁5.0wt%~9.0wt%、表兒茶素7wt%~10wt%、橙皮苷7.0wt%~10wt%。本發(fā)明金錢草總黃酮不僅總黃酮含量高，成分明確，而且在低劑量條件下具有明顯降低高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸的作用，安全性高，是非常好的降低高尿酸，治療痛風藥物。此外，本發(fā)明的金錢草總黃酮制備工藝簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)和應用。
【專利說明】金錢草總黃鋼在制備降低高尿酸血癥藥物中的應用

【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種制備治療高尿酸血癥藥物的植物提取物總黃麗的制備方法及其 應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，由于人們壓力的增大W及對高熱量、高蛋白、高脂食物攝取的增加，使得 患有高尿酸血癥或由其引起的痛風癥狀的人數(shù)急劇增多，據(jù)報道目前約兩成的成年男性處 于高尿酸血癥的狀態(tài)。
[0003] -般而言，血中的尿酸值為7. Omg/化W上的狀態(tài)稱為高尿酸血癥。通常，單純的 高尿酸血癥狀態(tài)沒有自覺癥狀，但是如果長時間放任該狀態(tài)，則血中的尿酸鹽發(fā)生結(jié)晶，該 尿酸鹽蓄積于關(guān)節(jié)等中時，會引起伴有劇烈疼痛的痛風發(fā)作。上述癥狀如果進一步發(fā)展，貝U 會在皮下產(chǎn)生痛風結(jié)節(jié)或者在腎臟及尿路中蓄積尿酸結(jié)晶而容易產(chǎn)生尿路結(jié)石，若長期持 續(xù)則可W引起腎衰竭等腎疾病。因此，適當控制血中的尿酸值是預防、改善W痛風為代表的 高尿酸血癥的根本。
[0004] 目前，對血中尿酸的控制是通過兩種途徑實現(xiàn)的，一是抑制尿酸的生成；黃嘿嶺 氧化酶是次黃嘿嶺轉(zhuǎn)化為黃嘿嶺和黃嘿嶺轉(zhuǎn)化為尿酸所必需的酶，治療痛風的一條有效途 徑是抑制黃嘿嶺氧化酶（xanthine oxidase, XO)活性，從而抑制尿酸的形成；抑制尿酸生 成的藥物如別嘿嶺醇；二是促進尿酸的排泄，促進尿酸排泄的藥物如丙賴舒、苯漠馬龍等。 但上述藥物毒副作用大，例如別嘿嶺醇可引發(fā)變態(tài)反應（發(fā)生率10-15% )、超敏綜合癥 (27. 5%斑丘疹患者死亡）、骨髓抑制等嚴重毒副作用；丙賴舒、苯漠馬隆具有胃腸道反應、 腎絞痛及激發(fā)痛風急性發(fā)作等副作用，在一定程度上限制了該些藥物的臨床應用。因此，尋 找新型的高效低毒的抗痛風和高尿酸血癥藥物依然是目前藥學研究的一個熱點。
[0005] 金錢草為常用中藥。《中國藥典》2010年版一部收載本品為報春花科植物過路黃 (Lysimachia C虹istinae Hance)的干燥全草，具清利濕熱，通淋，消腫的功效，主要用于熱 淋，沙淋，尿濕作痛，黃痘尿赤，痛腫療瘡，毒蛇咬傷，肝膽結(jié)石，尿路結(jié)石，使用歷史悠久。
[0006] 金錢草是治療結(jié)石的臨床常用的中藥之一。臨床實驗和動物實驗證明其具有較好 利膽排石、利尿排石、防止尿結(jié)石等作用。同時還具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用。除了傳統(tǒng)的排石作 用之外，金錢草在臨床應用上還具有治療痛風的作用。南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院劉再朋教 授，從事中醫(yī)外科工作五十多年，在外科領域有很深的造詣，劉再朋教授根據(jù)多年臨床經(jīng) 驗，潛也研究的"痛風定痛湯"，利用金錢草等多味中藥臨床治療痛風病患者，取得一定的療 效[薛建輝劉再朋教授治療痛風性關(guān)節(jié)炎的經(jīng)驗中醫(yī)研究2004:17(3)47-49]。但是在臨 床應用中，金錢草都是跟其它植物共同應用，形成復方，并無法推斷金錢草在其中的作用W 及有效成分。
[0007] 魏紹煌[金錢草及其民間混用品種對高尿酸血癥小鼠的效用，藥物研究，2006， 15(10),10-11]等對金錢草及其民間混用品對高尿酸血癥小鼠的降尿酸作用進行了研究。 但是在魏的研究中，僅僅使用水提液進行藥效評估，沒有明確其活性成分，同時其藥效評估 劑量達到12. 5g/kg，遠遠超出成藥劑量，沒有可行性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題的克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種金錢草總黃麗在制 備降低高尿酸血癥藥物中的應用，該金錢草總黃麗中黃麗含量高，成分明確，在低劑量條件 下具有明顯降低高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸的作用，安全性高。
[0009] 為解決W上技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：
[0010] 金錢草總黃麗在制備降低高尿酸血癥藥物中的應用，該金錢草總黃麗中含有山 奈酷8. Owt %?9. Owt %、搬皮素7. Owt %?8. Owt %、蘆下7. Owt %?8. Owt %、表兒茶素 8. 5wt % ?9. Swt %、澄皮巧 8. Owt % ?9. Swt %。
[0011] 根據(jù)一個優(yōu)選方面，所述的金錢草總黃麗中表兒茶素的含量為9. Owt %? 9. 2wt%。
[0012] 根據(jù)又一優(yōu)選方面，所述的金錢草總黃麗中澄皮巧的含量為8. 5wt%?9. Owt%。
[0013] 在一個具體且優(yōu)選的實施方式中；所述的金錢草總黃麗中含有山奈酷8. 3wt%? 8. 5wt %、搬皮素 7. 3wt % ?7. 7wt %、蘆了 7. 2wt % ?7. 5wt %、表兒茶素 9. Owt % ? 9. 2wt%、澄皮巧 8. 5wt% ?9. Owt%。
[0014] 優(yōu)選地，所述的金錢草總黃麗通過如下步驟制得：
[0015] (1)、將金錢草干燥全草粉碎，用己醇水溶液室溫浸泡后，回流提取0. 5-1. 5小時 提取液濃縮至干，得金錢草粗提物，所述己醇水溶液中己醇的體積分數(shù)為20%?90% ;
[0016] (2)、將步驟（1)所得金錢草粗提物上吸附樹脂，金錢草粗提物吸附樹脂的質(zhì)量比 為1:10?30,依次用水和己醇水溶液進行梯度洗脫，收集己醇水溶液洗脫液，濃縮至干，干 燥即得所述金錢草總黃麗。
[0017] 進一步優(yōu)選地，步驟（1)中，所述己醇水溶液中己醇的體積分數(shù)為50%?70%。
[0018] 進一步優(yōu)選地，步驟（2)中，所用吸附樹脂為聚己帰型大孔吸附樹脂。進一步地， 所述吸附樹脂包括但不限于DlOl，AB-8或Diaion HP-20樹脂。
[0019] 優(yōu)選地，步驟（2)中，樹脂洗脫所用己醇水溶液中己醇的體積分數(shù)為10%?90%。
[0020] 根據(jù)一個具體方面；步驟（2)中，依次用水、30% v/v己醇水溶液，60% v/v己醇水 溶液進行梯度洗脫，每個梯度洗脫4-5個柱體積，流速為2-3個柱體積/小時，洗脫結(jié)束后， 收集60% v/v己醇水溶液洗脫液，濃縮至干，干燥即得所述金錢草總黃麗。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案；所述的金錢草總黃麗通過如下步驟制得：
[0022] (1)、將金錢草干燥全草粉碎，用70% v/v己醇水溶液室溫浸泡一天后，回流提取 50?70分鐘，濾出提取液，向濾渣中再加入70% v/v己醇水溶液，回流提取40?60分鐘， 過濾，合并兩次提取液，真空濃縮至干，得金錢草粗提物；
[0023] (2)、將步驟（1)所得金錢草粗提物溶解在水中，上Diaion HP-20大孔吸附樹脂， 金錢草粗提物與Diaion HP-20大孔吸附樹脂的質(zhì)量比為1:18?22,依次用水、30% v/v己 醇水溶液，60% v/v己醇水溶液進行梯度洗脫，每個梯度洗脫4-5個柱體積，流速為2-3個 柱體積/小時，洗脫結(jié)束后，收集60% v/v己醇水溶液洗脫液，濃縮至干，干燥即得金錢草總 黃麗。
[0024] 優(yōu)選地，步驟（1)中，所述70% v/v己醇與所述金錢草干燥全草的投料質(zhì)量比為 15?25:1，具體可W為例如20:1。
[0025] 由于W上技術(shù)方案的采用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢：
[0026] 本發(fā)明金錢草總黃麗不僅總黃麗含量高，成分明確，而且在低劑量條件下具有明 顯降低高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸的作用，安全性高，是非常好的降低高尿酸，治療痛風 藥物。此外，本發(fā)明的金錢草總黃麗制備工藝簡單。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027] 圖1為實施例3中HPLC檢測圖譜。

【具體實施方式】
[002引實施例1金錢草總黃麗的制備
[0029] (1)、取5公斤金錢草干燥全草，粉碎，用50升70% v/v己醇水溶液室溫浸泡一天 后，回流提取60分鐘，濾出提取液之后，向濾渣中再加入50升70% v/v己醇水溶液，回流提 取40分鐘，過濾。合并兩次提取液，真空濃縮至干，得到400g金錢草粗提物，得率為8 %。
[0030] (2)、取步驟（1)制備的金錢草粗提物50g，加水溶解，上Diaion HP-20大孔吸附樹 脂進行層析，提取物的質(zhì)量跟樹脂質(zhì)量之比為1 ;20。依次用水，30% v/v己醇水溶液，60% v/v己醇水溶液和95% v/v己醇水溶液進行洗脫，每個梯度洗脫4-5個柱體積，流速為2-3 個柱體積/小時。洗脫結(jié)束后，30% v/v己醇部位，60%己醇部位和95%己醇部位分別濃縮 至干，其中，30%己醇部位共9g，60%己醇部位共22g，95%己醇部位共3. 4g。
[0031] 實施例2金錢草粗提物和己醇洗脫部位總黃麗的測定
[0032] 對照品儲備液制備；精密稱取蘆下對照品20mg，置IOOml容量瓶中，加入60%己醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得蘆下儲備液（0. 2mg/mL)。
[0033] 標準曲線制備；用移液管分別吸取蘆下儲備液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.01111于6 個25mL容量瓶中，分別加入蒸觸水7. 0、6. 0、5. 0、4. 0、3. 0、2. OmU搖勻，加入5 %亞硝酸軸 1.0血，搖勻，放置6111111，加入10%硝酸鉛溶液1.0血，搖勻，放置6111111;再加4%氨氧化軸溶 液10血，加蒸觸水至定容，搖勻，顯色15min后，于SlOnm波長測其吸收度A。用最小二乘法 線性回歸，的溶液吸光度A與蘆了質(zhì)量濃度C(mg/ml)的回歸方程為：
[0034] A = 5. 1758C+0. 0032r = 0. 9996
[00巧]按照W上方法測定待測溶液中總黃麗吸光度A，由回歸方程即可求得質(zhì)量濃度。
[0036] 取實施例1所得金錢草粗提物和各個己醇部位，配成0. 2mg/ml溶液。取樣品溶液 ImU按照上述的制作方法，測定其吸光度，每個樣品做H個平行試驗，取平均值，計算樣品 中的黃麗含量，結(jié)果參見表1。
[0037] 表1金錢草粗提物和各個部位總黃麗含量
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 金錢草總黃酮在制備降低高尿酸血癥藥物中的應用，其特征在于：所述的金錢草總 黃酮中含有總黃酮在60%以上含有山柰酚8. Owt%?9. Owt%、槲皮素7. Owt%?8. Owt%、 蘆丁 7. Owt% ?8. Owt%、表兒茶素 8. 5wt% ?9. 5wt%、澄皮苷 8. Owt% ?9. 5wt%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于：所述的金錢草總黃酮中含有總黃酮在 60%以上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于：所述的金錢草總黃酮中含有山奈酚，槲皮 素，蘆丁，表兒茶素，橙皮苷等特征成分。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于：所述的金錢草總黃酮中含有山柰酚 7. Owt % ?10. Owt %、懈皮素 6. Owt % ?9. Owt %、蘆丁 5. Owt % ?9. Owt %、表兒茶素 7wt% ?10wt%、澄皮苷 7. Owt% ?10wt%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于：所述的金錢草總 黃酮通過如下步驟制得： (1) 、將金錢草干燥全草粉碎，用乙醇水溶液室溫浸泡后，回流提取0. 5-1. 5小時提取 液濃縮至干，得金錢草粗提物，所述乙醇水溶液中乙醇的體積分數(shù)為20%?90% ; (2) 、將步驟（1)所得金錢草粗提物上吸附樹脂，金錢草粗提物吸附樹脂的質(zhì)量比為 1:10?30,依次用水和乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集乙醇水溶液洗脫液，濃縮至干，干燥 即得所述金錢草總黃酮。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于：步驟（1)中，所述乙醇水溶液中乙醇的體 積分數(shù)為50 %?70%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于：步驟（2)中，所用吸附樹脂為聚乙烯型大 孔吸附樹脂。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應用，其特征在于：所述吸附樹脂為D101，AB-8或Diaion HP-20樹脂。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于：步驟⑵中，樹脂洗脫所用乙醇水溶液中 乙醇的體積分數(shù)為10 %?90%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于：步驟（2)中，依次用水、30% v/v乙醇水 溶液，60 % v/v乙醇水溶液進行梯度洗脫，每個梯度洗脫4-5個柱體積，流速為2-3個柱體 積/小時，洗脫結(jié)束后，收集60% v/v乙醇水溶液洗脫液，濃縮至干，干燥即得所述金錢草總 黃酮。
【文檔編號】A61K31/7048GK104224863SQ201410294947
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】溫堯林, 姚譞, 夏增華 申請人:蘇州凱祥生物科技有限公司, 上海中藥制藥技術(shù)有限公司