一種用于治療動脈粥狀硬化的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于治療動脈粥狀硬化的組合物，其特征在于含有檸檬醛為有效成分。所述檸檬醛來自來自檸檬香桃木、山蒼子、山雞椒、檸檬草、檸檬茶樹，檸檬醛的濃度為1～5ìg/ml。本發(fā)明的含有檸檬醛藥物組合物對脂多醣體刺激的人類主動脈平滑肌細(xì)胞之細(xì)胞增生具有不等的抑制效果，檸檬醛與其他黃酮類化合物相比較具有最佳活性能抑制由氧化型低密度脂蛋白引起之人類主動脈平滑肌細(xì)胞增生，對細(xì)胞不具毒性且可以抑制發(fā)炎反應(yīng)。
【專利說明】一種用于治療動脈粥狀硬化的組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種預(yù)防及治療動脈粥狀硬化的組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]心血管疾病是心臟及血管的癥候群，心血管疾病可分為冠狀動脈心臟病、腦血管疾病、周邊動脈阻塞疾病、風(fēng)濕性心臟病、先天性心臟病、深部靜脈栓塞和肺動脈栓塞。若發(fā)生冠狀動脈硬化，則可能引起狹心癥、心肌梗塞或猝死，若腦或頸動脈硬化就會導(dǎo)致腎性高血壓甚至尿毒癥，而周邊動脈硬化則導(dǎo)致動脈瘤或閉塞性動脈硬化癥。因此，動脈硬化與心血管疾病密不可分。
[0003]由于動脈粥狀硬化之病因為高血脂或凝血現(xiàn)象，例如脂多醣體活化細(xì)胞素TNF-?、IL-6S，進而刺激平滑肌細(xì)胞增生并增加黏附因子的產(chǎn)生。此外，脂多醣體會和內(nèi)皮細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上的TLR4區(qū)域相互作用，隨后活化NF-?Β和p44/p42有絲分裂活化促進劑的蛋白酶的路徑，因此脂多醣體所誘發(fā)的發(fā)炎反應(yīng)將導(dǎo)致動脈硬化。
[0004]動脈粥狀硬化屬于一種發(fā)炎反應(yīng)，受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞會導(dǎo)致血管內(nèi)皮的屏障和通透性改變，使低密度脂蛋白大量進入內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，并產(chǎn)生氧化型低密度脂蛋白，刺激內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌產(chǎn)生化學(xué)趨性物質(zhì)，其吸引單核球進入內(nèi)皮細(xì)胞下空間，轉(zhuǎn)化成巨噬細(xì)胞，將氧化型低密度脂蛋白吞噬而形成泡沫細(xì)胞。大量泡沫細(xì)胞的堆積使細(xì)胞素、生長因子及前列腺素增加，細(xì)胞素會刺激血管中層的平滑肌細(xì)胞增生并移行至內(nèi)皮層，分裂繁殖、產(chǎn)生膠原纖維而形成斑塊，吸引血小板等的粘黏、聚集，形成血栓、阻滯血流，臨床上呈現(xiàn)不穩(wěn)定心絞痛、急性心肌梗塞、中風(fēng)等急癥。
[0005]目前治療動脈粥狀硬化之藥物常為降血脂藥物或抗血栓癥藥物。
[0006]降血脂藥物分為4大類:膽酸結(jié)合樹脂、纖維酸衍生物、菸堿酸衍生物及史達(dá)汀類藥物。(I)膽酸結(jié)合樹脂阻止腸胃道中的膽酸被吸收，以增加肝臟代償性利用膽固醇制造膽酸，減少肝細(xì)胞中膽固醇的含量，但可能發(fā)生胃腸不適(腹瀉、便秘)等副作用。(2)纖維酸衍生物降低血中三酸甘油脂濃度，可能引發(fā)腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及肝功能指數(shù)上升等副作用。(3)菸堿酸衍生物可減少低密度脂蛋白、三酸甘油脂、膽固醇的濃度，并可增加高密度脂蛋白的濃度，但有胃腸不適、高尿酸、痛風(fēng)、紅疹、肝功能指數(shù)增加等副作用，若長期服用可能增加膽結(jié)石的機率。(4)史達(dá)汀類藥物作為效果最強及最常見的降膽固醇藥物，其抑制肝細(xì)胞中膽固醇合成的速率限制酶，進而減少血中的膽固醇含量，副作用則為肝功能指數(shù)上升、頭痛、惡心、疲倦等。
[0007]而抗血栓癥藥物分為3類:抗凝血藥、抗血小板藥及血栓溶解劑。抗凝血藥又分為4小類:維生素K拮抗劑、肝素及其衍生物、直接凝血酶抑制劑以及其他類抗凝血藥物。(I)維生素K拮抗劑包括殺鼠靈(Warfarin，曾為滅鼠藥)、雙香豆素等，其化學(xué)結(jié)構(gòu)類似維生素K，作用機制在于拮抗維生素K依賴性凝血因子I1、VI1、IX、X之活性反應(yīng)，但會產(chǎn)生血尿、胃腸道及腦內(nèi)出血等副作用。(2)肝素是由D-葡糖胺、L-艾杜糖醛酸及D-葡糖醛酸交替組成，其先與抗凝血第三因子結(jié)合，進而加速凝血酶之去活性作用，而達(dá)成抗凝血作用，其亦可與多種凝血因子IIa、Xa、XIa、XIIa結(jié)合，使之失去活性，然而將可能產(chǎn)生出血、過敏反應(yīng)及血小板缺乏癥等副作用。(3)直接凝血酶抑制劑包括水蛭素及比伐盧定等，其中水蛭素是來自水蛭唾腺且具有65個胺基酸的蛋白，其在止血作用與抑制血栓形成上扮演關(guān)鍵角色，雖然水蛭素為最強的天然凝血酶抑制劑，但其難以由水蛭中提煉而必須以重組生物技術(shù)制備。(4)其他類抗凝血藥物的范例包括雷馬曲班，其為血栓素受體抑制劑。
[0008]抗血小板藥物又分為5小類:C0X抑制劑、腺嘌呤核苷二磷酸受體抑制劑、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷酸再吸收抑制劑以及凝血脂抑制劑。
[0009]COX抑制劑中的阿斯匹靈(低劑量)可抑制血小板凝集及預(yù)防血栓生成，由于阿斯匹靈會減少胃部保護物質(zhì)的分泌，所以會產(chǎn)生腸胃不適、胃出血等副作用。腺嘌呤核苷二磷酸受體抑制劑中的保栓通(Clopidogrel)會產(chǎn)生胃出血之風(fēng)險。磷酸二酯酶抑制劑中的西洛他唑可抑制細(xì)胞內(nèi)磷酸二酯酶活性(特別對磷酸二酯酶III有選擇性)和阻礙cAMP的代謝，促使血小板和血管中的cAMP濃度增加,而有抗血小板凝集和血管擴張作用，但有頭痛、腹瀉、惡心、紅疹、血液異常等副作用。腺苷酸再吸收抑制劑中的潘生丁(Dipyridamole)可抑制血小板致活因子、膠原、腺嘌呤核苷二磷酸等所引起的血小板凝集作用，其副作用為眩暈、頭昏眼花、昏厥、面紅、頭痛、惡心、嘔吐、皮膚發(fā)疹、胃絞痛或虛弱等。當(dāng)潘生丁與肝素合併使用時，會增加出血之危險。凝血脂抑制劑中的Terutroban可阻斷凝血脂引起的血小板凝集反應(yīng)及血管收縮，促進內(nèi)皮功能及具有抗粥狀動脈硬化效果，然而卻具有出血性風(fēng)險。
[0010]血栓溶解劑的功效在于活化胞漿素、促進纖維蛋白溶解，適用于治療深部靜脈栓塞、肺栓塞、急性心肌梗塞以及急性動脈栓塞，但會造成出血及過敏反應(yīng)。
[0011]前述兩大類之治療動脈粥狀硬化藥物均有不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)及多種副作用產(chǎn)生，為了開發(fā)新的治療動脈粥狀硬 化藥物，并期能避免副作用產(chǎn)生，本申請發(fā)明人鑒于現(xiàn)有技術(shù)中的不足，經(jīng)過悉心試驗與研究，并且在鍥而不舍的精神下，終構(gòu)思出本申請發(fā)明，能夠克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，以下為本申請的簡要說明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明發(fā)現(xiàn)檸檬醛對脂多醣體刺激的人類主動脈平滑肌細(xì)胞之細(xì)胞增生具有不等的抑制效果，檸檬醛與其他黃酮類化合物相比較具有最佳活性能抑制由氧化型低密度脂蛋白引起之人類主動脈平滑肌細(xì)胞增生，對細(xì)胞不具毒性且可以抑制發(fā)炎反應(yīng)。此外，檸檬醛與伽瑪型過氧化體增殖劑活化受器配體(例如市售藥物羅格列酮)具有協(xié)同作用能抑制由氧化型低密度脂蛋白所誘導(dǎo)的細(xì)胞增生、細(xì)胞周期素Dl及細(xì)胞周期素D3表達(dá)、介白素-U及介白素-6的表達(dá)。
[0013]本發(fā)明的檸檬醛用于抑制p44/42絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化，從而進一步抑制介白素-6(IL-6)及/或介白素-1a (IL-1a)的表達(dá)。前述檸檬醛還可被用于活化伽瑪型過氧化體增殖劑活化受器(PPARa)，而進一步抑制IL-6及/或IL-1a的表達(dá)?；罨疨PARS另可進一步抑制細(xì)胞周期素DUcyclin Dl)及/及細(xì)胞周期素D3 (cyclin D3)的表達(dá)。
[0014]因此，本發(fā)明提供一種用于治療或預(yù)防動脈粥狀硬化之組合物，其特征在于含有檸檬醛。該組合物用于增加該PPARa之信使RNA (mRNA)的表達(dá)?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0015]圖1:檸檬醛抑制人類主動脈平滑肌細(xì)胞增生的活性結(jié)果
[0016]圖2:檸檬醛對氧化型低密度脂蛋白處理的平滑肌細(xì)胞的增生率影響
【具體實施方式】
[0017]本申請所提出的發(fā)明將可由以下的實施例說明，應(yīng)該充分理解，本發(fā)明的實施方式和具體實施例是為了讓本領(lǐng)域技術(shù)人員實施本發(fā)明而提出的參考，并非說本發(fā)明被限制于這些實施方式和實施例。在不超出本發(fā)明主旨范圍之內(nèi)，可對本發(fā)明的實施方式進行修改、變更，將都屬于本發(fā)明的范圍。
[0018]本發(fā)明所述的檸檬醛(英文:Citral)即“3，7_ 二甲基_2，6_辛二烯醛”，化學(xué)式C10H16O,是含有兩個雙鍵的不飽和鏈狀醛類單萜。
[0019]它有以下兩種2-雙鍵順反異構(gòu)體:
[0020]檸檬醛a (Genarial):又名香葉醛、櫳牛兒醛，是2位雙鍵的E-異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)化學(xué)式(I)。淡黃色液體，有強的 檸檬氣味，相對密度0.8898，沸點228°C，難溶于水，可以和乙醇、乙醚混溶。
[0021]
CH3
AU0
H3C CH3化學(xué)式(I)
[0022]檸檬醛b (Neral):又名橙花醛，是2位雙鍵的Z-異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)見化學(xué)式(2)。無色有甜味的液體，相對密度1.4900，沸點1030C (1599.8Pa)。
[0023]
X k 0
h3C CH3化學(xué)式⑵
[0024]通常情況下檸檬醛是以上兩者的混合物，為淡黃色有檸檬香味的油狀易揮發(fā)液體，難溶于水?？扇苡谝掖?、乙醚、丙二醇、甘油、礦物油等有機溶劑。相對密度
0.891 (25/25°C)，沸點228-229°C。存在于柑橘油、檸檬油、檸檬草油、山蒼子油、白檸檬油、馬鞭草油等植物精油中。
[0025]檸檬醛的化學(xué) 性質(zhì)較活潑，容易發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成香葉酸或香葉醇/橙花醇。在硫酸作用下能環(huán)化生成對異丙基甲苯。在堿中不穩(wěn)定，強堿作用下能樹脂化。
[0026]各植物精油中的檸檬醛含量為:檸檬香桃木(90-98 % )，山蒼子Listseacitrata(90 % ),山雞椒 Litsea cubeba(70-85 % )，梓樣草(65-85 % )，朽1 樣茶樹精油(70-80% )，丁香羅勒 Ocimum gratissimum(66.5% ),美國山胡椒 Lindera citriodora (~65%),苦橙葉精油(36%),檸檬馬鞭草(30-35 % )，史泰格尤加利(26%),香蜂草(11%),青檸(6-9% )，檸檬(2-5% )0
[0027]本發(fā)明所述的檸檬醛可以是上述檸檬醛a或檸檬醛b中的任意一種，也可以是兩者的混合物。本發(fā)明的檸檬醛可以使用上述植物精油，也可以通過化學(xué)合成的方法獲得，優(yōu)選使用含量在50%以上的精油混合物。
[0028]本發(fā)明所述的檸檬醛可溶于乙醇、甘油、乙醚、丙二醇、礦物油等有機溶劑。優(yōu)選溶于乙醇、甘油。更優(yōu)選溶于乙醇。
[0029]實驗例I
[0030]-檸檬醛抑制人類主動脈平滑肌細(xì)胞增生的活性-
[0031]為了分析檸檬醛是否抑制人類主動脈平滑肌細(xì)胞(簡稱“平滑肌細(xì)胞”)增生的活性(以下簡稱“抑制活性”)，以WST-1試劑測定平滑肌細(xì)胞的增生及細(xì)胞存活度。WST-1試劑是一種四唑鹽類，其在活細(xì)胞中可被粒腺體去氫酶切割為甲臜(formazan)。首先，將平滑肌細(xì)胞植入96孔盤之培養(yǎng)皿，培養(yǎng)到七成滿后，再將平滑肌細(xì)胞置換于含0.5%牛胚胎血清的DMEM培養(yǎng)液進行“同步化 24小時。在有或無加入檸檬醛化合物的情況下，以30ig/ml氧化型低密度脂蛋白(簡稱ox-LDL)刺激平滑肌細(xì)胞24小時。最后，加入WST-1試劑至細(xì)胞培養(yǎng)液，以ELISA分析儀檢測450nm波長下的吸光值來測定甲臜(formazan)的總量。以WST-1試劑測定平滑肌細(xì)胞的增生及細(xì)胞存活度的實驗將用于本發(fā)明，以下將不再重復(fù)地說明實驗流程。
[0032]圖1顯示來自不同植物精油或化學(xué)合成的檸檬醛均抑制由氧化型低密度脂蛋白(30ig/ml)在24小時內(nèi)引起的平滑肌細(xì)胞增生的活性。根據(jù)實驗結(jié)果顯示檸檬醛具有顯著的抑制活性，且對細(xì)胞沒有毒性。其中，
[0033]A:對照組
[0034]B:氧化型低密度脂蛋白
[0035]C:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(購自Sigma公司)
[0036]D:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(檸檬香桃木)
[0037]E:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(山蒼子)
[0038]F:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(山雞椒)
[0039]G:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(檸檬草)
[0040]H:氧化型低密度脂蛋白+檸檬醛(檸檬茶樹)
[0041]以上實驗組中所檸檬醛濃度為5ig/ml。
[0042]實驗例2
[0043]-檸檬醛對氧化型低密度脂蛋白處理的平滑肌細(xì)胞的增生率影響-
[0044]如圖2所示，經(jīng)30ig/ml氧化型低密度脂蛋白刺激后，約50%的平滑肌細(xì)胞增生。相對于只以氧化型低密度脂蛋白處理的實驗組，經(jīng)1、2.5及5ig/ml檸檬醛處理的細(xì)胞增生率顯著降低，并呈劑量依賴效應(yīng)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療動脈粥狀硬化的組合物，其特征在于含有檸檬醛為有效成分。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述檸檬醛來自:檸檬香桃木、山蒼子、山雞椒、朽1檬草、朽1檬茶樹。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述檸檬醛的濃度為I~5ig/ml。
4.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，還含有其它有效量的醫(yī)學(xué)上可接受的載劑。
【文檔編號】A61K31/11GK103976987SQ201410242854
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】古天津, 李玉芬 申請人:古天津