用于預防、診斷、和治療動脈粥樣硬化的以氧化磷脂為靶向配體的基于納米粒子的傳輸系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了基于納米顆粒的醫(yī)藥/營養(yǎng)輸送系統(tǒng)，所述輸送系統(tǒng)被涂覆了或整合了作為靶向配體的氧化磷脂。該類輸送系統(tǒng)能靶向特異性地導向巨噬細胞，該等巨噬細胞在血管壁中動脈粥樣硬化病變的發(fā)展中是決定性細胞，以顯著增加該輸送系統(tǒng)在動脈粥樣硬化的預防、診斷和治療方面的生物利用度和特異性。
【專利說明】用于預防、診斷、和治療動脈粥樣硬化的以氧化磷脂為靶向 配體的基于納米粒子的傳輸系統(tǒng)
[0001] 相關申請
[0002] 本專利申請的優(yōu)先權(quán)為美國臨時專利。
[0003] 該美國臨時專利申請?zhí)?1/775,420,申請日2013年3月8日，本申請通過引述將 該美國臨時專利申請全部內(nèi)容并入本申請。 發(fā)明領域
[0004] 本發(fā)明所公開的內(nèi)容一般而言與使用氧化磷脂作為靶向配體涂覆在基于納米顆 粒的藥物/營養(yǎng)輸送系統(tǒng)的領域。所述輸送系統(tǒng)可將巨噬細胞作為特定靶向一該等巨噬 細胞在血管壁中動脈粥樣硬化病變的發(fā)展中是決定性細胞，以顯著增加該輸送系統(tǒng)在動脈 粥樣硬化的預防、診斷和治療方面的生物利用度和特異性。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 動脈粥樣硬化是心血管疾病的主要病因，導致了超過一半以上的因心血管病死亡 的病例。膽固醇在血管壁的累積被稱為斑塊，這是在動脈粥樣硬化的發(fā)展的標志事件。動 脈粥樣硬化是一種漸進性疾病，以在動脈中的脂質(zhì)斑塊形成作為特征。巨噬細胞通過促 進膽固醇的積累，在主動脈壁增加炎癥反應起到動脈粥樣硬化病變的進展中起重要作用 (Kunjathoor et al.，2002;Ludewig and Laman, 2004)。在單核細胞趨化蛋白-1 (MCP-1， 趨化因子）及其受體引導單核細胞遷移進入血管內(nèi)膜之后，這些單核細胞在動脈壁的內(nèi)膜 層分化為巨噬細胞。這些巨噬細胞接收富含膽固醇的低密度脂蛋白（LDL)，導致承載膽固 醇的巨噬細胞(泡沫細胞）形成，這是動脈粥樣硬化病灶形成的早期特征。早在1979年， 諾貝爾獎得主Brown和Goldstein發(fā)現(xiàn)氧化LDL (氧化低密度脂蛋白）的攝取和降解率與 常住小鼠腹腔巨噬細胞的原生低密度脂蛋白相比高20倍（Brown et al.，1979;G〇ldStein et al.，1979。他們將氧化低密度脂蛋白結(jié)合位點命名為巨噬細胞清道夫受體，以體現(xiàn) 這些氧化低密度脂蛋白結(jié)合位點在清除修飾低密度脂蛋白的作用。從那時起，清道夫受 體已引起了巨大的研究關注。巨噬細胞清道夫受體AI、All和⑶36是參與富含膽固醇 氧化低密度脂蛋白的攝取過程的主要膜蛋白（de Winther et al·，2000; Kunjathoor et al.，2002)。在缺乏⑶36的小鼠中進行的研究顯示在主動脈病變的尺寸有非常顯著的 降低（76. 5%)，以及從這些小鼠中分離的腹腔巨噬細胞顯示在oxLDL的結(jié)合和氧化低密 度脂蛋白的攝取兩方面減少60%-80% (Febbraio et al.，1999)。這表明CD36介導的 氧化低密度脂蛋白的攝取在動脈粥樣硬化過程中泡沫細胞的形成和病灶發(fā)展是必需的 (Febbraio et al.，2000;Moore and Freeman, 2006)。CD36 以及與病變嚴重程度相關性 很好（Curtiss, 2009;Febbraio et al.，2000;Moore and Freeman, 2006)。心血管疾病因 為缺乏以便及早發(fā)現(xiàn)和有針對性進行預防和治療的技術而被稱為無聲殺手。靶向CD36是 對動脈粥樣硬化進行診斷和有針對性的預防和治療一種很有前途的途徑（Berliner et al. , 2009;Harb et al. , 2009;Lipinski et al. , 2009;Silverstein, 2009)〇
[0007] 目前，尚無專門針對對動脈粥樣硬化病變的技術和方法。因此，目前不能對動脈粥 樣硬化和相關疾病進行有效率的和早期診斷、預防和治療。
[0008] 因此，目前需要能改善動脈粥樣硬化和相關疾病的預防、診斷和治療的方法和組 合物。
[0009] 發(fā)明綜沭
[0010] 在一個方面，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物包含多個納米顆粒，這些納米顆 粒包含一種或多種氧化磷脂，這些氧化磷脂被封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米 顆粒的表面上，或整合到所述納米顆粒的結(jié)構(gòu)中。
[0011] 在一些實施方案中，這些納米顆粒選自脂質(zhì)體，polymersomes，微球，微結(jié)構(gòu)化脂 質(zhì)的載體，納米結(jié)構(gòu)化脂質(zhì)的載體，或其中組合。
[0012] 在一些實施方案中，所述一種或多種氧化磷脂選自1-棕櫚酰-2 -壬二酰-sn-甘 油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基_2 -壬二酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚?；?2-戊 二酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿（PGPC)，1-棕櫚酰-2-(5 -氧代戊酰)-sn-甘油基-3-磷 酸膽堿，1-棕櫚酰-2-(9-氧代壬酰)-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -乙酰-SN 甘油-3-磷酸膽堿，1-十八烷基_2 -乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2- 丁 酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十八烷基-2- 丁酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚 酰-2 -乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-2-十八烯基-乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿， 卜十六燒基-2-(homogamma亞麻酰)_sn_甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六燒基-2-花生四烯 酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六 燒基-2-二十二碳六烯醜_sn_甘油基-3憐酸膽喊，1-十八燒基_2_甲基_sn_甘油基_3_憐 酸膽堿，1-十六烷基-2- 丁烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿磷脂，溶血PAF C16,溶菌酶是 PAF C18,1-0-Γ -Z)-十六碳烯-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-1- (Z) -2-十六 碳烯-花生四烯酰基_sn_甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-Γ - (Z)十六碳烯-2-二十二碳 六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-1- (Z)-十六碳烯-2-油酰-sn-甘油基-3-磷 酸乙醇胺，1-0-Γ - (Z)的十六碳烯-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，和 1- 0-Γ - (Z) -2-十六碳烯二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，以及其中一種組 合。
[0013] 在一些實施方案中，所述一種或多種氧化磷脂選自2-lyso-PC的9-羥 基-10-十二碳烯雙酸酯（HDdiA-PC)，2-ly S〇-PC的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯 (H0diA-PC)，2-lyso-PC 的 9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯雙酸酯（H0DA-PC)，2-lyso-PC 的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H00A-PC);2-lys〇-PC的9-羥基-12-氧代-10-十二 碳烯酸酯（KODA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯（K00A-PC)，2-lyso-PC 的 9-酮基-10-十二碳烯酸酯（KDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-6-辛烯酸酯（K0diA-PC)， 2- lyso-PC的5-氧代戊酸酯（OV-PC)，2-lyso-PC的9-氧代-壬酸酯（0N-PC，），1-棕櫚 酰-2- (5-氧代戊酰)-磷脂酰膽堿（P0VPC)，以及它們的組合。在一些實施方案中，所述一 種或多種氧化磷脂包括K0diA-PC或KDdiA-PC。
[0014] 在一些實施方案中，所述納米顆粒僅包括一種或多種氧化的磷脂。所述一種或多 種氧化磷脂選自所述一種或多種氧化磷脂選自2-ly S〇-PC的9-羥基-10-十二碳烯雙酸酯 (HDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H0diA-PC)，2-lyso-PC 的 9-羥 基-12-氧代-10-十二碳烯雙酸酯（H0DA-PC)，2-lyso-PC的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二 酸酯（H00A-PC);2-lys〇-PC 的 9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯酸酯（KODA-PC)，2-lyso-PC 的5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯（KOOA-PC)，2-lyso-PC的9-酮基-10-十二碳烯酸酯 (KDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-6-辛烯酸酯（KOdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-氧代戊酸酯 (OV-PC)，2-lyso-PC的9-氧代-壬酸酯（0N-PC，），1-棕櫚酰-2- (5-氧代戊酰）-磷脂酰 膽堿（P0VPC)，以及它們的組合。
[0015] 在一些實施方案中，所述納米顆粒具有約10納米至約2500納米的平均線性尺寸。 [0016] 在一些實施方案中，所述納米顆粒包含一種或多種分子，選自白蛋白，葡聚糖，明 膠，聚乙二醇（PEG) (PEG)，聚（乙烯基吡咯烷酮)，透明質(zhì)酸，肝素，硫酸肝素，唾液酸，聚 (N-乙酰葡糖胺）（幾丁質(zhì))，脫乙酰殼多糖，聚（3-羥基戊酸酯)，聚（D，L-丙交酯-共-乙 交酯)，聚（1-丙交酯-共-乙交酯)，聚（3-羥基丁酸酯)，聚（4-羥基丁酸酯)，聚（3-羥基 丁酸酯-共-3-羥基戊酸酯)，聚原酸酯，聚酐，聚（乙醇酸)，聚（乙交酯)，聚（L-乳酸)，聚 (L-丙交酯)，聚（D，L-乳酸)，聚（D，L-丙交酯)，聚（L-丙交酯-共-D，L-丙交酯)，聚（己內(nèi) 酯),聚（L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（D，L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（乙交酯-共-己內(nèi) 酯)，聚(三亞甲基碳酸酯)，聚酯酰胺，聚（乙醇酸-共-三亞甲基碳酸酯)，共-聚（醚-酯） (例如PE0/PLA)，聚磷腈，纖維蛋白，纖維蛋白膠，纖維蛋白原，纖維素，淀粉，膠原蛋白和透 明質(zhì)酸，彈性蛋白和透明質(zhì)酸，聚氨酯，有機硅，聚酯，聚烯烴，聚異丁烯和乙烯-α -烯烴共 聚物，丙烯酸聚合物和共聚物以外的聚丙烯酸酯，乙烯基鹵化物聚合物和共聚物，聚氯乙 烯，聚乙烯醚，聚乙烯基甲基醚，聚偏二鹵乙烯，聚偏二氯乙烯，聚(偏二膦酸)，聚(偏二氟乙 烯-共-六氟丙烯)，聚丙烯腈，聚乙烯醇縮酮，聚乙烯基芳族化合物，聚苯乙烯，聚乙烯基 酯，聚乙酸乙烯酯，苯乙烯-丙烯腈共聚物，ABS樹脂，聚酰胺，尼龍66,聚己內(nèi)酰胺，聚碳 酸酯一包括基于酪氨酸的聚碳酸酯，聚甲醛，聚酰亞胺，聚醚，聚氨酯，人造絲，人造絲-三 乙酸酯，纖維素，乙酸纖維素，丁酸纖維素，乙酸丁酸纖維素，玻璃紙，硝酸纖維素，丙酸纖維 素，纖維素醚，羧甲基纖維素富勒烯，脂質(zhì)，載脂蛋白Α1，載脂蛋白Α2,其他載脂蛋白或其組 合。請注意，在本發(fā)明中，丙交酯與乳酸交酯相同；乙交酯與甘醇酸交酯相同。
[0017] 在一些實施方案中，所述納米顆粒包含一種或多種分子，選自明膠，白蛋白，右旋 糖，葡聚糖，一種高分子量的聚（乙二醇）或高分子量的聚（乙烯基吡咯烷酮)，透明質(zhì)酸，肝 素，硫酸肝素，唾液酸，殼聚糖，以及其中一種組合。
[0018] 在一些實施方案中，所述納米顆粒包含一種或多種生物可降解聚合物，所述聚合 物包括PLGA，聚（D，L-乳酸交酯-共-甘醇酸交酯)，聚（D，L-乳酸交酯)，聚（D，L-乳酸交 酯-共-乳乳酸交酯)，聚（L-乳酸交酯)，聚(甘醇酸交酯)，聚（L-乳酸交酯-共-甘醇酸交 酯)，聚（己內(nèi)酯)，聚(甘醇酸交酯-共-三亞甲基碳酸酯)，聚（3-羥基丁酸酯)，聚（3-羥基丁 酸酯-共-3-羥基戊酸酯)，聚（4-羥基丁)，聚(酯酰胺)，聚(酯-磺基酯酰胺)，聚(原酸酯） 或聚(酸酐)，以及其中一種組合。
[0019] 在一些實施方案中，所述納米顆粒是脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體含有磷脂，膽固醇，鞘脂， 神經(jīng)酰胺，或半抗原共軛脂質(zhì)。
[0020] 在一個方面，所述納米顆粒進一步包含一個額外的靶向配體，所述靶向配體顆粒 被封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆粒的結(jié) 構(gòu)中。所述額外的靶向配體還導向一個動脈粥樣硬化的病變部位。在一些實施例中，每個 納米顆粒均包括一個或多個氧化磷脂和額外的靶向配體。在一些實施例中，所述額外靶向 配體是能識別在或接近一個動脈粥樣硬化的病變部位的標的(例如，一種蛋白質(zhì)）的抗體。 例如，所述額外靶向配體為一種抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段對下述物質(zhì)有反應性， 選自氧化LDL，清道夫受體A (第一個被表征和克隆的OxLDL受體)，⑶36,⑶68,類凝集素氧 化低密度脂蛋白受體-1 (LOX-1)，SR-A1，SR-B1，和其中的一種組合。
[0021] 在一個方面，本發(fā)明提供的組合物進一步包含一種或多種生物活性劑，所述生物 活性劑被封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆 粒的結(jié)構(gòu)中。所述一種或多種生物活性劑被傳遞到或接近動脈粥樣硬化的病變部位。
[0022] 在一些實施方案中，所述一種或多種生物活性劑包括第一生物活性劑，所述第一 生物活性劑提供了一個動脈粥樣硬化的病變部位存在的標識。在一些實施方案中，所述標 識為一熒光信號，該熒光信號在所述第一生物活性劑結(jié)合到或接近動脈粥樣硬化的病變部 位時候發(fā)出。在一些實施方案中，所述一種或多種生物活性劑進一步包括：一個第二生物活 性劑，所述第二生物活性劑對動脈粥樣硬化的病變部位顯示治療效果。在一些實施方案中， 所述一種或多種生物活性劑進一步包括第一生物活性劑和第二活性劑。
[0023] 在一個方面，本發(fā)明提供的組合物進一步包含：一種助劑或藥學上相容的載體。
[0024] 在一個方面，本發(fā)明提供一種用以預防、診斷和/或治療患者的動脈粥樣硬化的 方法。該方法包括在或接近已知或可疑的動脈粥樣硬化的病變部位施用一種組合物的有效 量。該組合物包含多個納米顆粒，所述納米顆粒包含一個或多個氧化磷脂，所述氧化磷脂被 封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆粒的結(jié)構(gòu) 中。所述一個或多個氧化磷脂導向動脈粥樣硬化的病變部位。
[0025] 在一些實施方案中，所述施用步驟包括動脈內(nèi)或靜脈內(nèi)遞送納米顆粒。在一些實 施例中，動脈內(nèi)或靜脈內(nèi)遞送包括使用導管。在一些實施例中，動脈內(nèi)或靜脈內(nèi)遞送包括直 接注射。
[0026] 在一個方面，本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明所公開的組合物的方法，所述方法包含 將本發(fā)明中的組合物中的納米顆粒通過一種相轉(zhuǎn)化步驟制備。
[0027] 本領域技術人員將理解，本發(fā)明所公開的氧化磷脂的不同實施方案和納米顆粒的 不同實施方案可以與本發(fā)明所描述的任何方面結(jié)合使用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 本領域的技術人員將理解，下面所描述的附圖旨在闡明本發(fā)明。附圖不意以任何 方式限制本發(fā)明的范圍。
[0029] 本發(fā)明公開了方法和組合物，所述方法和組合物集合納米顆粒，所述納米顆粒有 診斷性的或者抗動脈粥樣硬化藥劑封包其內(nèi)，有氧化磷脂涂覆在其表面作為靶向配體以增 加其穩(wěn)定性的水平、細胞生物利用度，和導向主動脈內(nèi)膜的巨噬細胞，以達成診斷、防止和 逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化病變發(fā)展的目標。參考圖示及其說明可能有助于更好地理解本發(fā)明的原 理和操作。
[0030] 應當理解的是，本發(fā)明并不限于在下面的描述或?qū)嵤├募毠?jié)的應用，_本文使用 的措辭和術語僅為了說明和解釋本發(fā)明，不應被視為為限制性的。
[0031] 圖1說明含疏水性抗動脈粥樣硬化劑的納米顆粒組合物和結(jié)構(gòu)。
[0032] 圖2說明一個示例性實施例：A) -個含磷脂酰膽堿，膽固醇，殼聚糖，_EGCG的 1XPBS溶液的混合物，B)殼聚糖涂覆的EGCG所封包的脂質(zhì)體（CSLIPO-EGCG)在1 XPBS溶 液；C) CSLIPO-EGCG的掃描電子顯微鏡圖像；和D)使用布魯克海文ΒΙ-MAS粒度分析儀測 得的CSLIPO-EGCG的尺寸。
[0033] 圖3說明一種示范性的穩(wěn)定性分析結(jié)果，顯示在4°C (A)和25°C (B)條件下，0. 5mm 原生EGCG和等量的封包在脂質(zhì)體的EGCG (LIP0)和CSLIP，在1XPBS溶液中的穩(wěn)定性（pH 值7. 2。平均值在沒有共同上標時不同，P〈0. 05;
[0034] 圖4說明一種示范性分析的結(jié)果：細胞攝取1XPBS溶液的熒光圖像作為對照 組（A)，NBD-標記的LIP0 (B)，和NBD-標記的CSLIPO (C)，使用MCF7人乳腺癌細胞。 MCF7細胞在經(jīng)以上處理在在37°C培養(yǎng)1小時、2小時和4小時。細胞核被DAPI染成藍色 (λ ex=358nm, λ em=461nm),與 NBD 標記的脂質(zhì)體（λ ex=460nm, λ em=535nm)的綠色突光信號 合并。
[0035] 圖5說明一示范性分析的結(jié)果：MCF7細胞中的EGCG含量經(jīng)50μΜ和ΙΟΟμΜ的 LIP0-EGCG和CSLIPO-EGCG在37°C處理4小時。所示值是四個獨立實驗值的平均值，以堅 線表示標準偏差。所示桿在沒有共同上標時不同，P〈〇. 01。
[0036] 圖6說明一種示范性分析的結(jié)果：經(jīng)過2%醋酸雙氧鈾染色的脂質(zhì)納米顆粒的透 射電子顯微鏡（TEM)圖像。
[0037] 圖7說明一示范性分析的結(jié)果：納米封包的和原生EGCG (納米結(jié)構(gòu)化脂質(zhì)載體， NLC ;殼聚糖涂覆的NLC，CSNLC)在1XPBS溶液，pH值為1，3, 5和7. 4的的穩(wěn)定性分別顯示 在圖中 A，B，C 和 D，（N=3)。
[0038] 圖8說明一種示范性分析的結(jié)果：原生EGCG(NLC和CSNLC)在IX PBS溶液、pH7. 4 在4°C，22°C和37°C下的穩(wěn)定性分別顯示在圖A，B和C。
[0039] 圖9說明一示范性分析的結(jié)果：納米封包的和原生EGCG (NLC和CSNLC)在 RPMI1640培養(yǎng)基，37°C下的穩(wěn)定性，⑷RPMI1640培養(yǎng)基，不含SOD; (B) RPMI1640培養(yǎng)基，含 S0D5U/ml(n=3)。
[0040] 圖10說明一示范性分析的結(jié)果：納米封包的和原生EGCG (NLC和CSNLC)在 RPMI1640介質(zhì)在4°C或37°C下和包含或不包含S0D，與THP-1巨噬細胞一起培養(yǎng)的穩(wěn)定 性，（A)細胞 RPMI1640 培養(yǎng)基，4°C，無 S0D，（B)細胞 RPMI1640 培養(yǎng)基，4°C，有 S0D5U/ml ; C)細胞 RPMI1640 培養(yǎng)基，37°C，無 SOD ;D)細胞 RPMI1640 培養(yǎng)基，37°C，有 S0D5U/ml(n=3)。
[0041] 圖11說明一示范性分析的結(jié)果：在經(jīng)100 μ Μ原生的EGCG處理的THP-1源性巨噬 細胞的細胞EGCG含量，和EGCG涂覆的NLC (NLCE)和EGCG封包的CSNLC (CSNLCE)在完全 培養(yǎng)基中，包括SOD (5U/ml)，在4°C或37°C，并培養(yǎng)2小時或4小時。與原生EGCG相比， CS 增加了 EGCG 含量 * :Ρ〈0·05，# :Ρ〈0·01。與 NLCE 相比，CSNLCE 提高 EGCG 含量：Ρ〈0·01 (Ν=3)。
[0042] 圖12說明一示范性分析的結(jié)果：THP-1源性巨噬細胞經(jīng)5, 10,和20 μ Μ的 VNLC，VCSNLC，NLCE, CSNLCE, EGCG和1XPBS處理后的存活性。數(shù)據(jù)為平均值土標準差 (n=3)。
[0043] 圖13說明一示范性分析的結(jié)果：NLCE，CSNLCE，VNLC，VCSNLC，原生EGCG和1XPBS 對中從THP-1細胞分化來的巨噬細胞的膽固醇水平的影響。（A)，該巨噬細胞，用上述6種 處理不使用oxLDL處理18小時，（B)，該巨噬細胞首先饑餓8小時，然后與40毫克蛋白質(zhì) /毫升最低限度修飾的低密度脂蛋白（oxLDL) -起培養(yǎng)以及上述相同的6個處理18小時。 數(shù)據(jù)為平均數(shù)土標準差，n=3。*符號在圖板上表示與控制1XPBS，EGCG，VNLC和VCSNLC相 t匕，以P〈0. 05作為標準，有顯著不同；；符號#表示P〈0. 01。
[0044] 圖14說明一示范性分析的結(jié)果：在37 °C下，經(jīng)2_，4_，6_，18-，24小時培養(yǎng)后， NBD-標記的NLC和NBD-標記的CSNLC被細胞攝取的熒光顯微鏡圖像。（A) NCL (B) CSNLC 上部面板：NBD標記的納米顆粒(綠色)，下部面板：DAPI染色細胞核(藍色)。所有圖片均為 10 X光學放大倍率。
[0045] 圖15說明一示范性分析的結(jié)果：脂質(zhì)體結(jié)合THP-1源性巨噬細胞的結(jié)合測試。（A) 配體-脂質(zhì)體（30mol % KDdiA-PC機組成)，（B)控制-脂質(zhì)體(無 KDdiA-PC)，（C)IXPBS。脂 質(zhì)體以7-硝基-2-1，3-苯并惡二唑-4-基（NBD) -PE標記(相對于總脂質(zhì)的1. Omol % )作 為熒光染料（λ激發(fā)波長是460納米，λ發(fā)射的波長是535納米）（綠色)。細胞核被DAPI 染色（λ激發(fā)的波長是358納米，λ發(fā)射的波長是461納米）（藍色)。
[0046] 圖16說明一示范性分析的結(jié)果：KDdiA-PC-脂質(zhì)體在LDL受體缺失小鼠（一個著 名動脈粥樣硬化的動物模型）中導向動脈粥樣硬化。所述含有KDdiA-PC的脂質(zhì)體囊和控 制組脂質(zhì)體囊，用1，1' -雙十八烷基-3, 3, 3'，3' -四甲基吲哚三碳菁碘化物（DiR)近紅外 (NIR)熒光染料（λ激發(fā)的為730nm，發(fā)射的λ為790納米）標記，通過尾靜脈靜脈注射。 20小時后，獲得NIR圖像結(jié)合X射線圖像從左側(cè)（Α)和右側(cè)（Β)，或者通過切開腹部暴露主 動脈（C)以及從每只小鼠得到離體主動脈（D)，使用IVIS?Lumina XR成像系統(tǒng)。左側(cè)的小 鼠用含有KDdiA-PC的脂質(zhì)體注射，右側(cè)的小鼠用對照脂質(zhì)體注射，不含KDdiA-PC。
[0047] 圖17說明一示范性分析的結(jié)果：K0diA-PC增加脂質(zhì)體對巨噬細胞的結(jié)合親和力。 人單核細胞THP-1細胞在補充有10%胎牛血清和0. 05毫米的2-巰基乙醇的RPMI1640培 養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。所述細胞在37°C，95%濕度和5%的氣氛中培養(yǎng)。所述細胞通過在50ng/ 毫升的PMA培養(yǎng)72小時后分化成巨噬細胞。細胞通過培養(yǎng)它們與50毫微克/毫升的PMA72 小時分化成巨噬細胞。THP-1細胞源性巨噬細胞用7-硝基-2-l，3-苯并惡二唑-4-基 (NBD) -PC-標記的含靶向配體K0diA-PC的脂質(zhì)體或NBD-標記的不含K0diA-PC的脂質(zhì)體 處理2小時，在4°C的溫度下。NBD標記的脂質(zhì)體是綠色的（λ激發(fā)的波長是460納米，λ 發(fā)射的哦長是535納米)。細胞核用DAPI染色（λ激發(fā)的波長358納米，λ發(fā)射的波長是 461納米）（藍色)。與不含K0diA-PC的脂質(zhì)體相比，含K0diA-PC的脂質(zhì)體對巨噬細胞的結(jié) 合親和力有顯著提高，巨噬細胞對脂質(zhì)體的攝取也更高。
[0048] 圖18A-18D說明一示范性分析的結(jié)果：THP-1細胞源性巨噬細胞分別用帶有或不 帶有靶向配體（K0diA-PC)的NBD標記的脂質(zhì)體處理，并接受配體，DAPI，和CD36染色。18A) 顯示用不含K0diA-PC的脂質(zhì)體處理的細胞的相對熒光染色結(jié)果；18B)顯示用含K0diA-PC 的脂質(zhì)體處理的細胞的相對熒光染色結(jié)果；18C)顯示用不含K0diA-PC的脂質(zhì)體在抗 體-CD36的存在下處理的細胞的相對熒光染色結(jié)果；18D)顯示用含K0diA-PC的脂質(zhì)體在 抗體-CD36的存在下處理的細胞的相對熒光染色結(jié)果。
[0049] 圖19A和19B說明一示范性分析的結(jié)果：A)就⑶36和DAPI染色的存在與控制組 巨噬細胞和⑶36敲除巨噬細胞進行了比較；B)用K0diA-PC NBD標記的脂質(zhì)體對控制組巨 噬細胞和CD36敲除巨噬細胞的進行結(jié)合親和性的結(jié)合分析。
[0050] 圖20A-20F說明一示范性分析的結(jié)果：20A-20C表明，配體并沒有增加脂質(zhì)體對 3T3-L1前脂肪細胞（CD36的表達水平低的細胞）的細胞結(jié)合親和力。A)以無配體脂質(zhì)體處 理過的3T3-L1細胞；B)以攜帶KOdiA PC的脂質(zhì)體處理的3T3-L1細胞；和C)CD36在3T3-L1 前脂肪細胞的表達，經(jīng)由抗⑶36抗體標示。20D-20F顯示KOdiA-PC增加脂質(zhì)體對3T3-L1 脂肪細胞（⑶36的表達水平高的細胞)的結(jié)合親和力。D)以非靶向囊泡處理的3T3-L1脂肪 細胞；E)經(jīng)過以靶向囊泡處理的3T3-L1脂肪細胞；和F)⑶36在3T3-L1脂肪細胞的表達， 經(jīng)由抗⑶36抗體標示。
[0051] 圖21說明一示范性分析的結(jié)果：顯示以Brookhaven BI-90顆粒尺寸分析儀測量 的NLC-EGCG的顆粒尺寸和分布。所述顆粒的直徑尺寸為約60納米。
[0052] 圖22說明一示范性分析的結(jié)果：顯示攜帶K0diaA-PC的NLC-EGCG提高了細胞內(nèi) EGCG含量。
[0053] 圖23說明一示范性分析的結(jié)果，顯示K0diA-PC提高了 NLC-EGCG對巨噬細胞的結(jié) 合親合力。THP-1細胞源性巨噬細胞以NBD標示的攜帶或不攜帶K0diA-PC的NLC-EGCG在 PRMI1640培養(yǎng)基中在37°C處理2小時。含K0diA-PC的NLC-EGCG對巨噬細胞具有顯著更 高的結(jié)合親和力，并且，與不含K0diA-PC的NLC-EGCG相比，導致了 NLC-EGCG被巨噬細胞更 多攝取。
[0054] 圖24說明了一示范性分析的結(jié)果，顯示在在LDL受體缺失小鼠中，K0diA-PC增加 了納米載體對動脈粥樣硬化病灶的靶向特異性。雄性低密度脂蛋白受體缺陷（LDLr-/-)小 鼠（C57BL6背景)飼喂Harlan Teklad - -種導致動脈粥樣硬化的高脂飲食（TD. 88137)，含 有飽和脂肪21% (w/w)和0.15%膽固醇-從6周齡開始喂養(yǎng)24周。喂養(yǎng)這個高脂飲食 24周后，小鼠誘發(fā)在主動脈弓和腹動脈的動脈粥樣硬化病變。小鼠飼養(yǎng)在22?24°C，相對 濕度45%，每日10/14光/暗周期，光周期從06:00到16:00。食物和水隨意喂養(yǎng)。小鼠體 重在實驗的時候為40-45克。
[0055] 圖25說明一示范性分析的結(jié)果，顯示在LDL受體缺失小鼠中，相對于對照組無靶 向配體脂質(zhì)體（A)，含K0diA-PC的脂質(zhì)體納米載體導向動脈粥樣硬化病灶（白色斑塊）（B)。
[0056] 圖26說明一示范性分析的結(jié)果，顯示在除LDLr-/_小鼠中納米載體對動脈粥樣硬 化病灶的靶向特異性。這些是是橫截面的主動脈弓的有代表性的圖像，其中Cy7以藍色顯 示，自體熒光以綠色顯示，紅色的油滴表示動脈粥樣硬化病變(斑)。
[0057] 實施例詳細描沭
[0058] 定義
[0059] 非另有說明，本發(fā)明術語將根據(jù)相關領域的普通技術人員的對這些術語的常規(guī)用 法來理解。
[0060] 本發(fā)明所用術語中，術語"納米顆粒"、"納米載體"或"納米脂質(zhì)體"包括，但不限 于，脂質(zhì)體、聚合物囊泡、微球體、納米或微結(jié)構(gòu)化脂質(zhì)的載體，和高密度脂蛋白顆粒。納米 顆?？赏ㄟ^本領域中已知的任何方法來制造，包括但不限于常規(guī)的混合，制錠法，濺射法， 乳化，超聲處理，包埋，包囊，凍干，和基于相轉(zhuǎn)化的流程。在一些實施方案中，該納米顆粒包 括用于導向動脈粥樣硬化病變的氧化磷脂。在本文中，導向和靶向可以互用。"尺寸"、"粒 徑"及"大小"可以互用。"病區(qū)"、"病變"、"病灶"，可以互用。"封包"、"封裝"、"包裹"，可以 互用。"附著"、"粘附"可以互用。"整合到納米顆粒的結(jié)構(gòu)中"與"整入到納米顆粒的結(jié)構(gòu) 中"，可以互用。"靶向"、"導向"、"靶向?qū)?可以互用。"標識"、"標記"可以互用。
[0061] 在本發(fā)明中，術語"生物活性劑"包括任何可包含在含有氧化磷脂的納米粒子的任 何診斷，治療，預防和養(yǎng)分分子。在一些實施方案中，術語"生物活性劑"和"診斷和抗動脈粥 樣硬化劑"可互換使用，并且包括可用于動脈粥樣硬化的診斷，預防和治療的任何試劑。例 如，抗動脈粥樣硬化劑包括但不限于，膽固醇藥，抗血小板藥，β-阻斷劑的藥物，血管緊張 素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑，水丸劑(利尿劑）和用于為治療動脈粥樣硬化的目的控制特定風險 因素如糖尿病的藥物。診斷檢查包括但不限于驗血，心電圖，胸部X光，踝/肱指數(shù)，超聲心 動圖，超聲，計算機斷層掃描（CT)掃描，正電子發(fā)射斷層掃描和計算機斷層掃描（PET/CT)， 磁共振成像（MRI )，壓力測試，或血管造影。在一些實施例中，動脈粥樣硬化的診斷試劑包括 熒光染料。在一些實施方案中，抗動脈粥樣硬化劑包括兒茶素類。
[0062] 本發(fā)明所用術語中，術語"氧化磷脂"包括任何磷脂的氧化形式。已知合成的磷脂 的代表性例子包括但不限于，1-棕櫚酰-2-azelaoyl-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷 基-2-azelaoyl-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚酰基-2-戊二?；?sn-甘油基基-3-磷 酸膽堿（PGPC)，1-棕櫚酰-2- (5-〇xovaleroyl)-sn-甘油基-3-磷酸膽堿（P0VPC)和1-棕 櫚酰-2- (9_oxononanoyl)-sn-甘油基-3-磷酸膽堿。在有些實施例中，所述氧化磷脂含 KDdiA-PC或H0diA-PC。在有些實施例中，所述氧化磷脂含KDdiA-PC。在有些實施例中，所 述氧化磷脂含KDdiA-PC和H0diA-PC的混合物。
[0063] 在本發(fā)明所用術語中，術語"清道夫受體"包括任何能識別通過氧化或乙?；男?的低密度脂蛋白（LDL)的受體。它們被分為類A，B和C，包括但不限于一例如，那些位于內(nèi) 膜的巨噬細胞。示例性的清道夫受體包括但不限于清道夫受體A (第一個被表征和克隆的 氧化脂蛋白受體)，⑶36,⑶68,類凝集素氧化低密度脂蛋白受體-1 (L0X-1)，SR-A1，SR-B1 和等。
[0064] 動脒粥樣硬化心血管疾病和氣化磷脂
[0065] 動脈粥樣硬化心血管疾病在美國和其他發(fā)達國家是第一殺手。由于該疾病不能在 早期階段被檢測到，它也是一種無聲殺手。目前迫切需要開發(fā)一種方法或技術以在早期階 段對它進行檢測，并使用靶向輸送方法防治該疾病。
[0066] 動脈粥樣硬化性血管疾病的發(fā)生是血清脂蛋白在動脈壁沉積和保留的結(jié)果。在病 灶的巨噬細胞已經(jīng)被展示表達超過6種在結(jié)構(gòu)上不同的清道夫受體，以攝取促進膽固醇的 細胞攝取積累的低密度脂蛋白的修飾形式(低密度脂蛋白）。因為承載膽固醇的巨噬細胞泡 沫細胞是脂肪紋一最早的粥樣硬化病變一的主要成分，通過這些途徑的脂質(zhì)攝取長期以 來被認為是在動脈粥樣硬化的發(fā)病機制的一必要的性的、始發(fā)性的事件。目前已知清道夫 受體在無菌炎癥和感染中發(fā)揮重要作用。其調(diào)節(jié)和信號轉(zhuǎn)導以及這些途徑對在調(diào)節(jié)動脈壁 上的脂質(zhì)積聚平衡和炎癥方面的潛在影響，對該疾病的診斷和治療的目的很重要。
[0067] 巨噬細胞在動脈粥樣硬化的發(fā)展起到重要的作用。在攝取富含膽固醇的oxLDL 后，更多膽固醇將在巨噬細胞累積，這是所謂的泡沫細胞。在泡沫細胞死亡之后，在動脈壁 上的膽固醇和其他脂質(zhì)體的沉積形成斑塊。這些泡沫細胞還可以釋放許多炎癥因子以放大 局部炎癥反應和招募更巨噬細胞進入血管壁，這可能導致更多的泡沫細胞，以及更多、更大 的粥樣硬化病變。巨噬細胞使用清道夫受體攝取oxLDL。巨噬細胞清道夫受體⑶36是參與 攝取富含膽固醇的修飾脂蛋白一如oxLDL-的主要膜蛋白。CD36與病灶的嚴重程度相關 性很好。
[0068] 氧化磷脂具有對⑶36的oxLDL結(jié)合位點高結(jié)合親和力，并參與由⑶36介導的內(nèi) 膜巨噬細胞對顆粒的認知及攝取。因此，氧化磷脂可提高納米顆粒靶向特異性。氧化磷脂 包含HDdiA-PC和H0diA-PC，即2-溶血磷脂酰膽堿（2-lyso-PC)的9-羥基-10-十二碳 烯雙酸和5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯；H0DA-PC和H00A-PC，即2-lyso-PC的9-羥 基-12-氧代-10-十二碳烯酸和5-羥基-8-氧代-6-辛烯酸酯；K0DA-PC和K00A-PC， 即2-lyso-PC的9-酮基-12-氧代-10-十二碳烯酸和5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯； KDdiA-PC和K0diA-PC，，即2-lyso-PC的9-酮基-10-十二碳烯雙酸和5-酮基-6-辛烯二 酸酯；0V-PC和0N-PC，即2-lyso-PC的5-氧代戊酸和9-氧代-壬酸酯；P0VPC，即1-棕櫚 酰-2- (5-oxovaleroyl)-磷脂酰膽堿，等等。
[0069] 動脈粥樣硬化心血管疾病的一些非限制性實例是冠狀動脈心臟疾病，心肌梗死， 急性冠脈綜合征，心絞痛，心肌缺血，中風，腦血管炎，腦出血。
[0070] 動脒粥樣硬化的診斷、預防和治療
[0071] 在一個方面，本發(fā)明提供了一種納米顆粒，這些納米顆粒包含一種或多種氧化磷 月旨，這些氧化磷脂被封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所 述納米顆粒的結(jié)構(gòu)中。所述氧化磷脂通過結(jié)合巨噬細胞內(nèi)清道夫受體，導向動脈粥樣硬化 病變部位。
[0072] 在一個方面，涂覆了氧化磷脂或其變體(如KDdiA-PC)的納米顆粒被用于在動脈粥 樣硬化的診斷、預防和治療方面的，針對動脈粥樣硬化病變的診斷性的、預防性的、治療性 的和養(yǎng)分等生物活性及的靶向輸送。
[0073] 在一些實施例中，所述氧化磷脂和變體形成納米顆粒。
[0074] 納米粒子技術在動脈粥樣硬化心血管疾病的診斷和治療方面，具備優(yōu)勢，因為大 多數(shù)生物過程，包括動脈粥樣硬化，都發(fā)生在納米層面。基于納米顆粒的輸送系統(tǒng)已被用于 有效地保護和遞送難溶性藥物。較小的納米顆粒被有效地導入組織并延長循環(huán)時間。這些 納米顆?？梢杂胁煌男螤詈徒M成。但它們必須具有磷脂表面，或類似的結(jié)構(gòu)，從而可以使 氧化磷脂合并到納米顆粒的表面磷脂層。親水和疏水的治療性化合物都可以被封包或整合 到納米顆粒中。納米顆?？商岣咴\斷性或者抗動脈粥樣硬化化合物的吸收，保護化合物以 使其不會過早降解，延長化合物的循環(huán)時間，顯示出在靶細胞(或器官）相對于正常細胞(或 器官)的高差分攝取效率，較低的毒性一通過防止化合物與生物環(huán)境過早相互作用，提高細 胞內(nèi)滲透，并提高治療效果。
[0075] 在一些實施例中，所述納米顆粒包括脂質(zhì)體，聚合物囊泡，微球體，微結(jié)構(gòu)化脂質(zhì) 的載體，納米結(jié)構(gòu)化的脂質(zhì)載體，或它們的組合。
[0076] 任何合適的分子，例如水溶性聚合物，可生物降解的聚合物，共聚物，都可用于形 成本發(fā)明所述的納米顆粒。任何本領域已知的方法都可以用來形成、封包、整合、和/或以 本發(fā)明所描述的氧化磷脂修改納米粒子。
[0077] 在一些實施例中，形成本發(fā)明所述納米顆粒的一種或多種分子包含白蛋白，葡聚 糖，明膠，聚乙二醇（PEG) (PEG)，聚（乙烯基吡咯烷酮)，透明質(zhì)酸，肝素，硫酸肝素，唾液酸， 聚（N-乙酰葡糖胺)(幾丁質(zhì))，脫乙酰殼多糖，聚（3-羥基戊酸酯)，聚（D，L-丙交酯-共-乙 交酯)，聚（1-丙交酯-共-乙交酯)，聚（3-羥基丁酸酯)，聚（4-羥基丁酸酯)，聚（3-羥基 丁酸酯-共-3-羥基戊酸酯)，聚原酸酯，聚酐，聚（乙醇酸)，聚（乙交酯)，聚（L-乳酸)，聚 α-丙交酯)，聚（D，L-乳酸)，聚（D，L-丙交酯)，聚α-丙交酯-共-D，L-丙交酯)，聚（己內(nèi) 酯),聚（L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（D，L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（乙交酯-共-己內(nèi) 酯)，聚(三亞甲基碳酸酯)，聚酯酰胺，聚（乙醇酸-共-三亞甲基碳酸酯)，共-聚（醚-酯） (例如PEO/PLA)，聚磷腈，纖維蛋白，纖維蛋白膠，纖維蛋白原，纖維素，淀粉，膠原蛋白和透 明質(zhì)酸，彈性蛋白和透明質(zhì)酸，聚氨酯，有機硅，聚酯，聚烯烴，聚異丁烯和乙烯-α-烯烴共 聚物，丙烯酸聚合物和共聚物以外的聚丙烯酸酯，乙烯基鹵化物聚合物和共聚物，聚氯乙 烯，聚乙烯醚，聚乙烯基甲基醚，聚偏二鹵乙烯，聚偏二氯乙烯，聚(偏二膦酸)，聚(偏二氟乙 烯-共-六氟丙烯)，聚丙烯腈，聚乙烯醇縮酮，聚乙烯基芳族化合物，聚苯乙烯，聚乙烯基 酯，聚乙酸乙烯酯，苯乙烯-丙烯腈共聚物，ABS樹脂，聚酰胺，尼龍66,聚己內(nèi)酰胺，聚碳 酸酯一包括基于酪氨酸的聚碳酸酯，聚甲醛，聚酰亞胺，聚醚，聚氨酯，人造絲，人造絲-三 乙酸酯，纖維素，乙酸纖維素，丁酸纖維素，乙酸丁酸纖維素，玻璃紙，硝酸纖維素，丙酸纖維 素，纖維素醚，羧甲基纖維素富勒烯，脂質(zhì)，載脂蛋白Α1，載脂蛋白Α2,其他載脂蛋白或其組 合。請注意，在本發(fā)明中，丙交酯與乳酸交酯相同；乙交酯與甘醇酸交酯相同。
[0078] 在有些實施例中，形成本發(fā)明所述納米顆粒的一種或多種分子包含可生物降解聚 合物，比如PLGA，聚（D，L-丙交酯-共-乙交酯)，聚（D，L-丙交酯)，聚（D，L-丙交酯-共-丙 交酯)，聚（L-丙交酯)，聚（乙交酯)，聚（L-丙交酯-共-乙交酯)，聚（己內(nèi)酯)，聚（乙交 酯-共-三亞甲基碳酸酯)，聚（3-羥基丁酸酯)，聚（3-羥基丁酸酯-共-3-羥基戊酸酯)， 聚（4-羥基丁)，聚(酯酰胺)，聚(酯-多硫酸酯酰胺)，聚(原酸酯）或聚(酸酐酐)。
[0079] 本發(fā)明所述納米顆?？梢杂腥魏纬叽绾蜆?gòu)型。例如，所述納米顆粒具有約5納米 至約5000納米的平均線性尺寸。在有些實施例中，該納米顆粒的平均線性尺寸為10納米 或更小,20納米或更小，30納米或更小，40納米或更小，50納米或更小，60納米或更小，70 納米或更小，80納米或更小，90納米或更小，100納米或更小，110納米或更小，120納米或更 小，130納米或更小，140納米或更小，150納米或更小，160納米或更小，170納米或更小，180 納米或更小，200納米或更小，210納米或更小，220納米或更小，230納米或更小，240納米或 更小，250納米或更小，300納米或更小，350納米或更小，400納米或更小，450納米或更小， 500納米或更小，550納米或更小，600納米或更小，650納米或更小，700納米或更小，800納 米或更小，900納米或更小，1000納米或更小，1100納米或更小，1200納米或更小，1400納米 或更小，1600納米或更小，1800納米或更小，2000納米或更小，2500納米或更小，3000納米 或更小,3500納米或更小，4000納米或更小，或5000納米或更小。
[0080] 在有些實施例中，一個更大的納米顆粒在其中包含一個或多個更小的納米顆粒。 例如，所述小納米顆粒由一種或多種生物活性劑（比如藥物)形成。作為替代，所述一個或多 個生物活性劑被封包在所述小納米顆粒之內(nèi)、附著在所述小納米顆粒的表面上、或者整合 到所述小納米顆粒的結(jié)構(gòu)中。
[0081] 在一個方面，本發(fā)明的包含氧化磷脂的納米顆粒進一步包含一種或多種額外的、 針對動脈粥樣硬化病變區(qū)的靶向配體。這些額外的靶向配體包含但不僅限于，例如，氧化低 密度脂蛋白的抗體(第一個被表征和克隆的OxLDL受體)，CD36, CD68,類凝集素氧化低密度 脂蛋白受體-1 (L0X-1)，SR-A1，SR-B1，和其中的一種組合。
[0082] 在一個方面，本發(fā)明的包含氧化磷脂的納米顆粒是多功能納米輸送系統(tǒng)，可同時 封包和/或整合診斷性的、預防性的和治療的制劑在其中一個納米顆粒輸送系統(tǒng)或多個納 米顆粒輸送系統(tǒng)，以達成對動脈粥樣硬化更有效的預防、診斷和治療。
[0083] 在有些實施例中，所述納米顆粒包含一種標識劑，單獨或與其他活性劑組合。該標 識試劑可以是任何可以提供一個標識以表明動脈粥樣硬化病變部位的存在的試劑。在有些 實施例中，所述標識是光信號，比如具有某特定波長的光，或者發(fā)出某特定顏色的光。這類 標識劑包含但不僅限于，熒光染料，熒光蛋白（例如，綠色，黃色或紅色熒光蛋白），放射性標 記物，生物標記物，一種可與在或接近動脈粥樣硬化病變部位的生物標記物結(jié)合的試劑，抗 體，一種第二抗體，以及成像試劑。
[0084] 在有些實施例中，所述成像試劑可在一個病人或動物在進行實時成像分析之前用 本發(fā)明所述納米顆粒輸送到一個病人或動物體內(nèi)的動脈粥樣硬化病變部位。
[0085] 在一些實施例中，所描述的氧化磷脂可直接與上述額外的靶向配體和/或標記試 劑綴合；請見，例如，本發(fā)明所描述的熒光氧化磷脂。
[0086] 納米顆粒，用于輸送生物活性劑的時候，具備許多優(yōu)勢。納米粒子可以提高現(xiàn)有的 診斷和抗動脈粥樣硬化劑的靶標特異性。許多診斷和抗動脈粥樣硬化劑僅具低水平的靶向 特異性。正常組織有一個正常、完整的血管系統(tǒng)；然而，病變組織有滲漏性血管。納米顆粒 的小尺寸使他們能夠進入病變組織，如動脈粥樣硬化病變。將靶向配體(例如，KDdiA-PC)整 合到納米顆粒的表面上，還極大地提高了納米顆粒對內(nèi)膜巨噬細胞的靶特異性。許多診斷 和抗動脈粥樣硬化劑具有低水平的溶解性、穩(wěn)定性和生物利用度。還有一個有利方面是，納 米粒子有一個疏水性核心，以容納更多的疏水劑，以增加它們在生理溶液包括血液和淋巴 中的溶解度。當不穩(wěn)定的藥物被封包入納米顆粒之內(nèi)，其穩(wěn)定性也得到改善。這些被封包 的試劑似乎某種程度上密封到所述納米顆粒中，不可降解或通過外部的代謝酶代謝。進一 步而言，所述納米顆粒涂覆了一層殼聚糖，以提高他們的細胞內(nèi)生物利用度。另外，增加的 穩(wěn)定性、溶解度和循環(huán)時間可以增加生物利用度。
[0087] 在有些實施例中，所述納米顆粒包含，所有的或一部分下述組分：脂類(如甘油三 酸酯)，磷脂，α-生育酚乙酸酯，多糖(如脫乙酰殼多糖)，聚（乙二醇）（PEG)，表面活性劑和 助表面活性劑(如聚乙二醇15-羥基硬脂酸)，鹽(如氯化鈉）和水。診斷性的和抗動脈粥樣 硬化劑、以及任何其它化合物，都可以被封包或整合到納米顆粒之中。
[0088] 在有些實施例中，多層面封包也有可能，可以延長生物活性劑的活性。例如，一中 治療劑可以首先封包入更小的納米顆粒中，之后他們被進一步封包入更大的納米顆粒。外 層/較大的納米顆粒的降解使藥物從內(nèi)部/較小的納米顆粒中釋放；從而使藥物在延長的 時間期間被遞送。一個本領域技術人員可以理解、也能夠操縱納米顆粒的兩個群體的大小、 厚度、和分子組分，使得延長的輸送的時間長度可得以控制和改性。
[0089] 在有些實施例中，本發(fā)明所公開的組合物包含涂覆殼聚糖-一種細胞攝取增強 劑一的納米顆粒，以增加細胞生物利用度；在其表面整合PEG，以維持顆粒的整體性和穩(wěn)定 性及延長這些納米載體的循環(huán)，和使用KDdiA-PC作為靶向配體，以增加針對主動脈內(nèi)膜巨 噬細胞的靶向特異性。
[0090] 在一個方面，所述包含氧化磷脂的納米顆粒被用于作為靶向納米輸送系統(tǒng)，以診 斷動脈粥樣硬化。診斷染料/試劑被封包或并入納米顆粒之上/之內(nèi)，以在任何階段檢測 動脈粥樣硬化，該診斷關聯(lián)到染料/試劑在動脈壁上的強度。
[0091] 在一個方面，所述包含氧化磷脂的納米顆粒被用于作為靶向納米輸送系統(tǒng)，以防 治和治療動脈粥樣硬化。預防劑和治療劑被封包或并入納米顆粒之上/之內(nèi)。納米顆粒的 穩(wěn)定性，溶解性，生物利用度，靶向特異性，以及功能效率，都得到改善。他們可防止膽固醇 在巨噬細胞內(nèi)累積，以及阻止泡沫細胞形成。
[0092] 在一個方面，所述包含氧化磷脂的納米顆粒被用于作為靶向納米輸送系統(tǒng)，以防 治和治療一種炎性疾病、一種自身免疫性疾病，和其它免疫介導的疾病。
[0093] 在一個方面，所述包含氧化磷脂的納米顆粒可被用于法醫(yī)分析。
[0094] 鉬合物輸送
[0095] 在一些實施例中，包含涂覆氧化磷脂(如KDdiA-PC)的納米顆粒被用于作為靶向配 體，涂覆于基于納米顆粒的藥物/養(yǎng)分載體上，以達成診斷、治療、和/或養(yǎng)分針對動脈粥樣 硬化病變的靶向遞送，用以診斷、防止、和治療動脈粥樣硬化。
[0096] 在一些實施例中，包含納米顆粒的組合物通過動脈或靜脈輸送被輸送到患有或懷 疑有動脈粥樣硬化病變的病人體內(nèi)。
[0097] 在一些實施例中，本發(fā)明的組合物以一單次劑量的方式輸送(到病人體內(nèi)）。在 有些實施例中，本發(fā)明的組合物以一種多次劑量的方式在一段延長的時間輸送(到病人體 內(nèi))。
[0098] 在一些實施例中，本發(fā)明的組合物進一步一種輔助劑和/或藥學上相容的載體。
[0099] 氣化磷脂
[0100] 在一個方面，本發(fā)明提供了整合入納米顆粒的氧化磷脂及其變體。氧化磷脂在動 物的動脈粥樣硬化病變中富集（Podrez et al.，2002a;Podrez et al.，2002b)。他們是將 oxLDL結(jié)合到內(nèi)膜巨噬細胞上的⑶36的主要配體。
[0101] 在一些實施例中，本發(fā)明所公開的氧化磷脂包含溶血磷脂酰膽堿的一種酯，比如 1- 溶血磷脂酰膽堿（l-lyS〇 PC)的一種酯或者2-溶血磷脂酰膽堿（2-lys0 PC)的一種酯。
[0102] 在一些實施例中，本發(fā)明公開的氧化磷脂包含2-lyso-PC的9-羥基-10-十二 碳烯雙酸酯（HDdiA-PC)，2-lyso-PC的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H0diA-PC)， 2- lyso-PC 的 9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯雙酸酯（H0DA-PC)，2-lyso-PC 的 5-羥 基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H00A-PC) ;2-lys〇-PC的9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯 酸酯（KODA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯（K00A-PC)，2-lyso-PC 的 9-酮基-10-十二碳烯酸酯（KDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-6-辛烯酸酯（K0diA-PC)， 2-lyso-PC的5-氧代戊酸酯（OV-PC)，2-lyso-PC的9-氧代-壬酸酯（0N-PC，），1-棕櫚 酰-2- (5-氧代戊酰）-磷脂酰膽堿（P0VPC)，以及它們的組合等等。
[0103] 在一些實施例中，本發(fā)明公開的氧化磷脂包含但不僅限于，1-棕櫚酰_2 -壬二 酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -壬二酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚 ?；?2-戊二?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿（PGPC)，1-棕櫚酰-2-(5 -氧代戊酰)-sn-甘 油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚酰-2- (9-氧代壬酰）-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷 基-2-乙酰-SN甘油-3-磷酸膽堿，1-十八烷基-2-乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿， 1-十六烷基-2- 丁酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十八烷基-2- 丁酰-sn-甘油基-3-磷 酸膽堿，1-棕櫚酰-2 -乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-2-十八烯基-乙酰-sn-甘油 基-3-磷酸膽堿，1-十六燒基-2- (homogamma亞麻酰)_sn_甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六 烷基-2-花生四烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -棕櫚酰-sn-甘油 基-3-磷酸膽堿，1-十六燒基-2-二十二碳六烯酰_sn_甘油基-3磷酸膽堿，1-十八燒 基-2-甲基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2- 丁烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿 磷脂，溶血PAF C16,溶菌酶是PAF C18,1-0-Γ -Z)-十六碳烯-2-油酰-sn-甘油基-3-磷 酸膽堿，1-0-1- (Z)-2-十六碳烯-花生四烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-Γ - (Z) 十六碳烯_2_二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-1- (Z)-十六碳烯-2-油 酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1-0-Γ - (Z)的十六碳烯-2-花生四烯?；?sn-甘油 基-3-磷酸乙醇胺，和1-0-Γ - (Z)-2-十六碳烯基二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸 乙醇胺。一個本領域技術人員可理解到，磷酸膽堿是磷脂酰膽堿合成中的中間體。在一些 實施方案中，術語磷酸膽堿和術語磷脂酰膽堿可互換使用。
[0104] 在一些實施方案中，本發(fā)明使用氧化磷脂的截短形。氧化磷脂的截短形也可以 有與完好氧化磷脂一樣對巨噬細胞的⑶36受體相同的高結(jié)合親和力。KDdiA-PC已從 oxLDL 中分離出、并被鑒定（Boullier et al.，2001;Boullier et al.，2000;Podrez et al·，2002a; Podrez et al·，2002b; Watson et al·，1997)。KDdiA-PC 賦予 CD36 的結(jié)合親和 力比任何過氧化氫的磷脂類都更強有力，也可能是oxLDL的更重要的結(jié)構(gòu)性和功能性的決 定因素 （Berliner et al.，1997;Boullier et al.，2000;Leitinger et al.，1999;Watson et al. , 1997) 〇
[0105] 在一些實施例中，本發(fā)明公開的氧化磷脂包含熒光氧化磷脂。在一些實施例中， 所述氧化磷脂包含1-棕櫚酰-2-sn-甘油基戊二?；?3-磷酸-N- (3-[4, 4-二氟-4-硼 烷-30-￡1-二氮雜-8-茚]-丙?；?乙醇胺（8001?￥^^^^)，1-棕櫚酰-2-(5-氧代 戊酰）-sn-甘油基-3-磷酸-N- (3_[4, 4-二氟-4-嵌段-0RA-3 α，4 α -二氮雜-均苯 并二茚]-丙?；?乙醇胺（B0DIPY-P0VPE)，1-棕櫚酰-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷 酸-N-(3-[4, 4-二氟-4-硼-3 α，4 α -二氮雜-s-茚]-丙?；?-乙醇胺（B0DIPY-P0PE)， 或它們的組合。
[0106] 氧化磷脂的其他例子可參加，例如，美國專利號7, 973, 023 (Harats等)，美國專利 號7, 906, 674 (Hermetter等)，在此每一專利都以引述的方式，全文引入本專利申請。
[0107] 氣化磷脂的合成
[0108] 在一方面，本發(fā)明公開了合成氧化磷脂及其變體的方法。所述氧化磷脂及變體被 整合入納米顆粒中。
[0109] 此前，KDdiA-PC從2-Lyso-PC和8-(2-呋喃基）辛酸合成，8-(2-呋喃基）辛酸可 以很方便地從可從1，8-辛二醇以5個步驟合成。經(jīng)過縮合和2階段氧化，再經(jīng)過簡單的硅 膠色譜純化，即可得到純的KDdiA-PC (Sun et al，2003)。
[0110] 在一些實施例中，所述氧化磷脂及其變體(如KDdiA-PC)按照少許改進的文獻方 法合成。例如，以1，8-辛二醇為原料，經(jīng)過8步驟，再經(jīng)過制備性薄層色譜純化，得到純的 KDdiA-PC。所有的分析數(shù)據(jù)和文獻報道均吻合(例一)。
[0111] 由于大量的抗動脈粥樣硬化劑和診斷劑僅具低水平的生物利用度和靶向特異性， 目前有一關鍵性的需求，即設計改造載體以提高這些抗動脈粥樣硬化劑和診斷劑的細胞生 物利用度和靶向特異性，以預防、診斷和治療疾病。
[0112] 本發(fā)明的細節(jié)已經(jīng)在上描述，在不脫離在所附權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的范圍對 本發(fā)明進行修改、變化和等同實施例等，將是顯而易見的。
[0113] 實Μ
[0114] 下述非限制性實施例用來進一步說明在此公開的本發(fā)明的實施例。那些本領域技 術人員應能理解這些下述實例中所公開的技術代表那些已被發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的實踐中可良 好操作，并因此可被認為構(gòu)成本發(fā)明的實踐模式的例子。但是，本領域技術人員應能根據(jù)本 發(fā)明所公開的信息，認知到本發(fā)明公開的具體實施例可有許多變更，并獲得相似或類似結(jié) 果，而不背離本發(fā)明的范圍。
[0115] 實例一
[0116] KDdiA-PC 的合成
[0117] KDdiA_PC的一個示范件的整體反應方案如下所示。
[0118]

【權(quán)利要求】
1. 一種組合物，包含：多個納米顆粒，所述納米顆粒包含一種或多種氧化磷脂，所述氧 化磷脂封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆粒 的結(jié)構(gòu)中，其中所述一個或多個氧化磷脂靶向?qū)虬袆用}粥樣硬化病灶部位。
2. 權(quán)利要求1的組合物，其中所述納米顆粒選自脂質(zhì)體，聚合物囊泡，微球體，微結(jié)構(gòu) 化脂質(zhì)的載體，納米結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)載體，高密度脂蛋白和它們的一種組合。
3. 權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述一種或多種氧化磷脂選自1-棕櫚酰-2 -壬二 酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -壬二酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚 酰基-2-戊二?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿（PGPC)，1-棕櫚酰-2-(5 -氧代戊酰)-sn-甘 油基-3-磷酸膽堿，1-棕櫚酰-2- (9-氧代壬酰）-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷 基-2-乙酰-SN甘油-3-磷酸膽堿，1-十八烷基-2-乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿， 1- 十六烷基-2- 丁酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十八烷基-2- 丁酰-sn-甘油基-3-磷 酸膽堿，1-棕櫚酰-2 -乙酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-2-十八烯基-乙酰-sn-甘油 基-3-磷酸膽堿，1-十六燒基-2- (homogamma亞麻酰)_sn_甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六 烷基-2-花生四烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2 -棕櫚酰-sn-甘油 基-3-磷酸膽堿，1-十六燒基-2-二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3磷酸膽堿，1-十八燒 基-2-甲基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-十六烷基-2- 丁烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿 磷脂，溶血PAF C16,溶菌酶是PAF C18,1-0-Γ -Z)-十六碳烯-2-油酰-sn-甘油基-3-磷 酸膽堿，1-0-1- (Z)-2-十六碳烯-花生四烯?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-Γ - (Z) 十六碳烯_2_二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿，1-0-1- (Z)-十六碳烯-2-油 酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1-0-Γ - (Z)的十六碳烯-2-花生四烯?；?sn-甘油 基-3-磷酸乙醇胺，和1-0-Γ - (Z)-2-十六碳烯二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙 醇胺，以及其中一種組合。
4. 權(quán)利1-3中任一組合物，其中所述一種或多種氧化磷脂選自2-lyso-PC的9-輕 基-10-十二碳烯雙酸酯（HDdiA-PC)，2-lyso-PC的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯 (H0diA-PC)，2-lyso-PC 的 9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯雙酸酯（H0DA-PC)，2-lyso-PC 的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H00A-PC);2-lys〇-PC的9-羥基-12-氧代-10-十二 碳烯酸酯（KODA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯（K00A-PC)，2-lyso-PC 的 9-酮基-10-十二碳烯酸酯（KDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-6-辛烯酸酯（K0diA-PC)， 2- lyso-PC的5-氧代戊酸酯（OV-PC)，2-lyso-PC的9-氧代-壬酸酯（0N-PC，），1-棕櫚 酰-2- (5-氧代戊酰）-磷脂酰膽堿（P0VPC)，以及它們的組合。
5. 權(quán)利要求1-4中任一組合物，其中所述一種或多種氧化磷脂包含KDdiA-PC。
6. 權(quán)利要求1-5中任一組合物，其中所述一納米顆粒由一種或多種氧化磷脂構(gòu)成，其 中所述一種或多種氧化磷脂選自2-lyso-PC的9-羥基-10-十二碳烯雙酸酯（HDdiA-PC)， 2-lyso-PC 的 5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯（H0diA-PC)，2-lyso-PC 的 9-羥基-12-氧 代-10-十二碳烯雙酸酯（H0DA-PC)，2-lyso-PC的5-羥基-8-氧代-6-辛烯二酸酯 (H00A-PC) ;2-lys〇-PC 的 9-羥基-12-氧代-10-十二碳烯酸酯（K0DA-PC)，2-lyso-PC 的5-酮基-8-氧代-6-辛烯酸酯（K00A-PC)，2-lyso-PC的9-酮基-10-十二碳烯酸酯 (KDdiA-PC)，2-lyso-PC 的 5-酮基-6-辛烯酸酯（K0diA-PC)，2-lyso-PC 的 5-氧代戊酸酯 (0V-PC)，2-lyso-PC的9-氧代-壬酸酯（0N-PC，），1-棕櫚酰-2- (5-氧代戊酰）-磷脂酰 膽堿（POVPC)，以及它們的組合。
7. 權(quán)利要求1-8中任一組合物，其中所述納米顆粒包含一種或多種分子，選自白蛋白， 葡聚糖，明膠，聚乙二醇（PEG)，聚（乙烯基吡咯烷酮)，透明質(zhì)酸，肝素，硫酸肝素，唾液酸，聚 (N-乙酰葡糖胺)(幾丁質(zhì))，脫乙酰殼多糖，聚（3-羥基戊酸酯)，聚（D，L-丙交酯-共-乙交 酯)，聚（1-丙交酯-共-乙交酯)，聚（3-羥基丁酸酯)，聚（4-羥基丁酸酯)，聚（3-羥基丁酸 酯-共-3-羥基戊酸酯)，聚原酸酯，聚酐，聚（乙醇酸)，聚（乙交酯)，聚（L-乳酸)，聚（L-丙 交酯),聚（D，L-乳酸)，聚（D，L-丙交酯)，聚（L-丙交酯-共-D，L-丙交酯)，聚（己內(nèi)酯)，聚 (L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（D，L-丙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚（乙交酯-共-己內(nèi)酯)，聚(三 亞甲基碳酸酯)，聚酯酰胺，聚（乙醇酸-共-三亞甲基碳酸酯)，共-聚(醚-酯）（例如PE0/ PLA)，聚磷腈，纖維蛋白，纖維蛋白膠，纖維蛋白原，纖維素，淀粉，膠原蛋白和透明質(zhì)酸，彈 性蛋白和透明質(zhì)酸，聚氨酯，有機硅，聚酯，聚烯烴，聚異丁烯和乙烯-α-烯烴共聚物，丙烯 酸聚合物和共聚物以外的聚丙烯酸酯，乙烯基鹵化物聚合物和共聚物，聚氯乙烯，聚乙烯 醚，聚乙烯基甲基醚，聚偏二鹵乙烯，聚偏二氯乙烯，聚(偏二膦酸)，聚(偏二氟乙烯-共-六 氟丙烯)，聚丙烯腈，聚乙烯醇縮酮，聚乙烯基芳族化合物，聚苯乙烯，聚乙烯基酯，聚乙酸乙 烯酯，苯乙烯-丙烯腈共聚物，ABS樹脂，聚酰胺，尼龍66,聚己內(nèi)酰胺，聚碳酸酯一包括 基于酪氨酸的聚碳酸酯，聚甲醛，聚酰亞胺，聚醚，聚氨酯，人造絲，人造絲-三乙酸酯，纖維 素，乙酸纖維素，丁酸纖維素，乙酸丁酸纖維素，玻璃紙，硝酸纖維素，丙酸纖維素，纖維素 醚，羧甲基纖維素富勒烯，脂質(zhì)，載脂蛋白Α1，載脂蛋白Α2,其他載脂蛋白或其組合。
8. 權(quán)利要求1-7中任一組合物，其中所述納米顆粒包含： 一種或多種分子，選自選自明膠，白蛋白，右旋糖，葡聚糖，一種高分子量的聚（乙二醇） 或高分子量的聚（乙烯基吡咯烷酮)，透明質(zhì)酸，肝素，硫酸肝素，唾液酸，殼聚糖，以及其中 一種組合； 一種或多種分子，選自PLGA，聚（D，L-乳酸交酯-共-甘醇酸交酯)，聚（D，L-乳酸交 酯)，聚（D，L-乳酸交酯-共-乳乳酸交酯)，聚（L-乳酸交酯)，聚(甘醇酸交酯)，聚（L-乳酸 交酯-共-甘醇酸交酯)，聚（己內(nèi)酯)，聚（甘醇酸交酯-共-三亞甲基碳酸酯)，聚（3-羥基 丁酸酯)，聚（3-羥基丁酸酯-共-3-羥基戊酸酯)，聚（4-羥基丁)，聚(酯酰胺)，聚(酯-磺 基酯酰胺)，聚(原酸酯)或聚(酸酐)，以及其中一種組合；或者其中所述納米顆粒為脂質(zhì)體， 包含磷脂，膽固醇，鞘脂，神經(jīng)酰胺，植物固醇，膽固醇或半抗原共軛脂質(zhì)。
9. 權(quán)利要求1的組合物，其中所述納米顆粒進一步包含：一種額外的靶向配體，所述靶 向配體被封包于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆 粒的結(jié)構(gòu)中，其中所述一種靶向配體也靶向?qū)騽用}粥樣硬化病灶部位。
10. 權(quán)利要求8的組合物，其中每一個所述納米顆粒同時包含所述一種或多種氧化磷 脂和所述額外靶向配體，其中所述額外的靶向配體是一種抗體或抗體片段，所述抗體或抗 體片段識別一種位于或接近動脈粥樣硬化病變部位的蛋白質(zhì)，其中所述抗體或抗體片段下 述分子具反應性，所述分子選自氧化LDL，清道夫受體Α (第一個被表征和克隆的OxLDL受 體)，⑶36，⑶68，類凝集素氧化低密度脂蛋白受體-1 (L0X-1)，SR-A1，SR-B1，和其中的一種 組合。
11. 權(quán)利要求1的組合物，進一步包含一種或多中生物活性劑，所述生物活性劑被封包 于所述納米顆粒之內(nèi)，附著在所述納米顆粒的表面上，或整合到所述納米顆粒的結(jié)構(gòu)中，其 中所述一種或多種生物活性劑被被靶向?qū)蛞粍用}粥樣硬化病灶部位或其附近。
12. 權(quán)利要求11的組合物，其中所述一種或多種生物活性劑包含：一種第一生物活性 齊U，所述第一生物活性劑為動脈粥樣硬化病變部位的存在提供了一種標識。
13. 權(quán)利要求11或12的組合物，其中所述一種或多種生物活性劑進一步包含：一種第 二生物活性劑，所述第二生物活性劑對所述動脈粥樣硬化病變部位的顯示一種醫(yī)療效果。
14. 權(quán)利要求12或13的組合物，其中所述標識為在第一生物活性劑結(jié)合到或接近動脈 粥樣硬化病變部位時發(fā)射的一種熒光信號。
15. -種制備權(quán)利要求1-14中任一組物的方法，所述組合物的納米顆粒經(jīng)過一種相轉(zhuǎn) 化步驟合成。
【文檔編號】A61K47/24GK104107432SQ201410083633
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月8日
【發(fā)明者】王庶, 李桂根, 范朝陽 申請人:王庶, 李桂根, 范朝陽