治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法
【專利摘要】一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟主要是：A、配制濃度為0.5～2.5g/L的甘露糖化殼聚糖溶液，并調(diào)PH值至3.5-5.5；B、配制濃度為0.5～4.5g/L的唑來(lái)磷酸溶液，并調(diào)PH值至7.2-7.6；C、向甘露糖化殼聚糖溶液中滴入唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:3～12，攪拌15～30分鐘；然后反應(yīng)液放入透析袋，再在蒸餾水中進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，將透析袋中的液體冷凍真空干燥，即得。該法的制備流程簡(jiǎn)單、藥物成本低，制得的藥物對(duì)惡性腫瘤具有良好的靶向性、活性成分含量高、療效好。
【專利說(shuō)明】治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，惡性腫瘤的治療效果不佳。醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、材料學(xué)等等各專業(yè)領(lǐng)域，均在開(kāi)發(fā)各種治療新藥，以期提高治療效果。納米材料的開(kāi)發(fā)是其中一個(gè)方面，近年來(lái)，殼聚糖由于其無(wú)毒、生物可降解和生物相容性，在作為基因以及藥物載體上備受關(guān)注。它作為自然界中唯一帶正電的直鏈多糖，能作為負(fù)電荷物質(zhì)的吸附核心，形成納米級(jí)微粒，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)其藥物負(fù)載功能。通常使用離子交聯(lián)法，即:殼聚糖上的氨基陽(yáng)離子與三聚磷酸鈉的磷酸基陰離子通過(guò)靜電吸引進(jìn)行分子內(nèi)或分子間交聯(lián)，而形成納米顆粒；并在離子交聯(lián)過(guò)程中加入抗腫瘤藥物而形成負(fù)載藥物的納米顆粒，在體內(nèi)隨著殼聚糖與三聚磷酸鈉交聯(lián)物的降解，負(fù)載的抗腫瘤藥物釋放而發(fā)生良好的緩釋抗腫瘤作用。
[0003]但這種具有緩釋作用的抗腫瘤納米顆粒存在如下幾個(gè)問(wèn)題:1、殼聚糖與三聚磷酸鈉交聯(lián)物納米材料對(duì)腫瘤的靶向性差，納米粒在體內(nèi)不能較好的到達(dá)腫瘤部位發(fā)揮作用；
2、納米粒需要另外攜帶治療藥物(如化學(xué)藥品)才能發(fā)揮抗腫瘤治療效果，納米粒負(fù)載的藥物量有限、包封率低，藥物中抗腫瘤活性成分含量低，療效差；3、納米粒負(fù)載的抗癌藥物在實(shí)際應(yīng)用的各個(gè)環(huán)節(jié)(如體外溶解、體內(nèi)循環(huán))會(huì)有不斷脫落丟失的情況，使得納米粒的實(shí)際治療效果進(jìn)一步下降。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，該法的制備流程簡(jiǎn)單、藥物成本低，制得的納米顆粒藥物對(duì)惡性腫瘤具有良好的靶向性、活性成分含量高、療效高，病人服藥的順從性好。
[0005]本發(fā)明實(shí)現(xiàn)其發(fā)明目的所采用的技術(shù)方案為，一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是:
[0006]A、將甘露糖化殼聚糖5~25g溶于IOL蒸餾水中，再加入50~200mL冰乙酸，并以300-500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至3.5~
5.5，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液；
[0007]B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為0.5~4.5g/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.2-7.6 ；
[0008]C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以200-400轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:3~12，滴完后繼續(xù)攪拌15~30分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在-80°C的溫度下冷凍真空干燥，即得。
[0009]本發(fā)明方法的機(jī)理為:
[0010]甘露糖化殼聚糖分子中含有大量的-NH2，甘露糖化殼聚糖在酸性溶液中質(zhì)子化形成帶正電的氨基(-NH3+),并溶解。唑來(lái)膦酸分子上有多個(gè)羥基(-0H)，堿化后形成負(fù)電基團(tuán)(-O—)，與殼聚糖分子內(nèi)大量的正電基團(tuán)(-NH3+)形成交聯(lián)，使唑來(lái)膦酸分子被甘露糖化殼聚糖分子包裹形成納米粒。該納米?？箍赡艿哪[瘤機(jī)理為:腫瘤細(xì)胞及其周圍的腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞(TAM)大量表達(dá)甘露糖受體，納米粒藥物表面的甘露糖結(jié)合到甘露糖受體上，實(shí)現(xiàn)納米粒藥物的靶向性。隨后，腫瘤及巨噬細(xì)胞內(nèi)吞納米粒，納米粒表面包裹的甘露糖化殼聚糖分子膜降解釋放出內(nèi)部的唑來(lái)膦酸，唑來(lái)膦酸誘導(dǎo)腫瘤及巨噬細(xì)胞凋亡，從而殺滅腫瘤細(xì)胞及腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞，破壞了腫瘤細(xì)胞賴以生存的微環(huán)境，起到控制腫瘤的作用。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0012]一、與現(xiàn)有的通過(guò)殼聚糖與三聚磷酸鈉交聯(lián)制備納米顆粒，再在交聯(lián)過(guò)程中負(fù)載藥物發(fā)揮抗腫瘤治療作用相比，本發(fā)明直接采用甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)膦酸進(jìn)行離子交聯(lián)直接制得納米藥物顆粒，該納米藥物顆粒的交聯(lián)成分(唑來(lái)膦酸)本身即可發(fā)揮抗腫瘤，不用再另外負(fù)載藥物，從而簡(jiǎn)化了制備流程，降低了藥物成本；制得的納米藥物顆粒徑的活性成分含量高，療效高，病人服藥的順從性好。
[0013]二、制得的納米藥物顆粒徑在幾十到1000納米之間可控。腫瘤細(xì)胞及其周圍的腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞(TAM)大量表達(dá)甘露糖受體，納米級(jí)顆粒表面的甘露糖化殼聚糖中的甘露糖能結(jié)合到甘露糖受體上，實(shí)現(xiàn)納米粒藥物的靶向性，可引導(dǎo)納米粒到達(dá)腫瘤部位，被腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞吞噬后，在局部及以腫瘤細(xì)胞內(nèi)釋放出唑來(lái)膦酸，唑來(lái)膦酸發(fā)揮細(xì)胞殺滅作用，從而實(shí)現(xiàn)靶向性的抗癌效果，進(jìn)一步提高了藥物的抗腫瘤效果。
[0014]動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明本發(fā)明的納米顆粒藥物有明顯的抗腫瘤作用。
[0015]上述步驟A中的甘露糖化殼聚糖由以下方法制得:
[0016]Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液，
[0017]A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液；
[0018]A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入1-10倍體積的殼聚糖溶液中，以300-500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)；
[0019]A4、將攪拌后的溶液放入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速10000-13000rmp，15-20分鐘的離心分離；
[0020]A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速10000-13000rmp，15_20分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥24小時(shí)至48小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
[0021]采用以上方法使甘露吡喃異硫氰酸苯酯與殼聚糖的-NH2枝接，從而能使甘露糖穩(wěn)定的鍵合在殼聚糖分子上，得到性能更好、更穩(wěn)定的甘露糖化殼聚糖。
[0022]下面結(jié)合附圖和具體的實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1是本發(fā)明實(shí)施例一制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。[0024]圖2是本發(fā)明實(shí)施例二制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。
[0025]圖3是本發(fā)明實(shí)施例三制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。
[0026]圖4是本發(fā)明實(shí)施例四制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]實(shí)施例一
[0028]一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是:
[0029]A、將甘露糖化殼聚糖5g溶于IOL蒸餾水中，再加入50mL冰乙酸，并以300轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至5.5，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液；
[0030]B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為0.5g/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.2 ；
[0031]C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以200轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:12，滴完后繼續(xù)攪拌30分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在-80°C的溫度下冷凍真空干燥 ，即得。
[0032]本例的步驟A中的甘露糖化殼聚糖由以下方法制得:
[0033]Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液，
[0034]A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液；
[0035]A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入10倍體積的殼聚糖溶液中，以300轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)；
[0036]A4、將攪拌后的溶液放入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速lOOOOrmp，15分鐘的離心分離；
[0037]A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速lOOOOrmp，15分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥24小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
[0038]圖1是本發(fā)明實(shí)施例一制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。圖1說(shuō)明本例制得的藥物顆粒的大小分布不均勻，納米粒徑為200~800nm，形態(tài)為多面體。
[0039]實(shí)施例二
[0040]一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是:
[0041]A、將甘露糖化殼聚糖IOg溶于10L蒸餾水中，再加入IOOmL冰乙酸，并以300轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至4.5，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液；
[0042]B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為lg/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.5 ；[0043]C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以300轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:8，滴完后繼續(xù)攪拌15分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在_80°C的溫度下冷凍真空干燥，即得。
[0044]本例的步驟A中的甘露糖化殼聚糖由以下方法制得:
[0045]Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液，
[0046]A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液；
[0047]A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入3倍體積的殼聚糖溶液中，以350轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)；
[0048]A4、將攪拌后的溶液放入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速12000rmp，20分鐘的離心分離；
[0049]A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速12000rmp，15分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥48小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
[0050]圖2是實(shí)施例二制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。圖2反應(yīng)形成納米顆粒，顆粒大小分布欠均勻，納米粒徑最大40~450nm,形態(tài)為類球形。
[0051]實(shí)施例三
[0052]一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是:
[0053]A、將甘露糖化殼聚糖20g溶于IOL蒸餾水中，再加入150mL冰乙酸，并以350轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至4.0，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液；
[0054]B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為3.0g/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.6 ；
[0055]C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以400轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:4，滴完后繼續(xù)攪拌20分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在_80°C的溫度下冷凍真空干燥，即得。
[0056]本例的步驟A中的甘露糖化殼聚糖由以下方法制得:
[0057]Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液，
[0058]A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液；
[0059]A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入I倍體積的殼聚糖溶液中，以450轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)；
[0060]A4、將攪拌后的溶液 放入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速lOOOOrmp，18分鐘的離心分離；[0061]A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速13000rmp，18分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥40小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
[0062]圖3是實(shí)施例三制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。圖3說(shuō)明本例制得的藥物顆粒的粒徑分布均勻，納米粒徑大小在50nm左右，形態(tài)為類球形。
[0063]實(shí)施例四
[0064]一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是:
[0065]A、將甘露糖化殼聚糖25g溶于IOL蒸餾水中，再加入200mL冰乙酸，并以500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至3.5，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液；
[0066]B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為4.5g/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.5 ；
[0067]C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以400轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:3，滴完后繼續(xù)攪拌30分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在_80°C的溫度下冷凍真空干燥，即得。
[0068]本例的步驟A中的 甘露糖化殼聚糖由以下方法制得:
[0069]Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液，
[0070]A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液；
[0071]A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入5倍體積的殼聚糖溶液中，以500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)；
[0072]A4、將攪拌后的溶液放入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速13000rmp，20分鐘的離心分離；
[0073]A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速13000rmp，20分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥48小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
[0074]圖4是實(shí)施例三制得的藥物顆粒的掃描電鏡圖。圖4說(shuō)明本例制得的藥物顆粒的粒徑分布均勻，粒徑大小在75nm左右，形態(tài)為類球形。
[0075]動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0076]體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8，將2X IO7個(gè)/mL人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-8)懸液
0.2mL接種于BALB/c小鼠皮下，共60只，建立動(dòng)物腫瘤模型，分為A組、B組、Cl組、C2組、C3組、C4組，每組10只。
[0077]A組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含甘露糖化殼聚糖0.1mg的溶液
0.lmL，共 4 次；
[0078]B組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含唑來(lái)膦酸0.1mg的溶液0.1mL,共4次。[0079]Cl組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含實(shí)施例1的藥物顆粒0.1mg的溶液0.lmL，共4次；
[0080]C2組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含實(shí)施例2的藥物顆粒0.1mg的溶液0.lmL，共4次；
[0081]C3組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含實(shí)施例3的藥物顆粒0.1mg的溶液0.lmL，共4次。
[0082]C4組:接種癌細(xì)胞后14天，每周經(jīng)尾靜脈注射含實(shí)施例4的藥物顆粒0.1mg的溶液0.lmL，共4次。
[0083]各組實(shí)驗(yàn)鼠的死亡率(接種癌細(xì)胞6周后)分別為:A組為80%，B組90%，Cl組為60%、C2 組為 50%, C3 組為 30%, C4 組為 40%。
[0084]B組死亡率高的原因是唑來(lái)膦酸雖然具有抗腫瘤作用，但由于唑來(lái)膦酸不具有靶向性，注入體內(nèi)的唑來(lái)膦酸基本不能到達(dá)腫瘤部位，而無(wú)法發(fā)生作用。
[0085]與A、B兩組相比，Cl、C2、C3和C4組死亡率明顯更低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。表明本發(fā)明的藥物顆粒具有顯著的抗腫瘤作用。
【權(quán)利要求】
1.一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其步驟是: A、將甘露糖化殼聚糖5~25g溶于IOL蒸餾水中，再加入50~200mL冰乙酸，并以300-500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌12小時(shí)；然后滴入氫氧化鈉溶液將溶液的PH值調(diào)至3.5~5.5，最后在0.45um的過(guò)濾器中過(guò)濾，得到甘露糖化殼聚糖溶液； B、將唑來(lái)磷酸溶于蒸餾水中配制成濃度為0.5~4.5g/L的唑來(lái)磷酸溶液，再滴加氫氧化鈉溶液將唑來(lái)磷酸溶液的PH值調(diào)至7.2-7.6 ； C、將A步得到的甘露糖化殼聚糖溶液，以200-400轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌，在攪拌的過(guò)程中，滴入B步的唑來(lái)磷酸溶液；滴入的唑來(lái)磷酸與甘露糖化殼聚糖的質(zhì)量比為1:3~12，滴完后繼續(xù)攪拌15~30分鐘；然后將反應(yīng)液放入透析袋，透析袋在蒸餾水中以100轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行攪拌透析；每隔4小時(shí)換一次蒸餾水，透析48小時(shí)后，取出透析袋中的液體，在_80°C的溫度下冷凍真空干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求所述的一種治療惡性腫瘤的甘露糖化殼聚糖與唑來(lái)磷酸復(fù)合物納米顆粒藥物的制備方法，其特征是，所述步驟A中的甘露糖化殼聚糖由以下方法制得: Al、配制濃度為2g/L的甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液， A2、將40g殼聚糖溶于IL蒸餾水中，并加入IOmL的冰乙酸配制成殼聚糖濃度為40g/L的殼聚糖溶液； A3、將甘露吡喃異硫氰酸苯的二甲基亞砜溶液加入1-10倍體積的殼聚糖溶液中，以300-500轉(zhuǎn)/分的速度，攪拌24小時(shí)； A4、將攪拌后的溶液放 入20倍體積的異丙醇中，進(jìn)行轉(zhuǎn)速10000-13000rmp，15-20分鐘的離心分離； A5、將沉淀析出的球狀顆粒，再用異丙醇溶解成溶液，再進(jìn)行轉(zhuǎn)速10000-13000rmp，15-20分鐘的離心分離；在重復(fù)此操作三次，最后將沉淀析出的球狀顆粒，放入真空干燥箱中干燥24小時(shí)至48小時(shí)即得甘露糖化殼聚糖。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103800289SQ201410068077
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月26日
【發(fā)明者】蔣鷗, 魯雄, 孟凡智, 王振銘, 吳道全 申請(qǐng)人:蔣鷗